Küçük Molekül Bileşiklerinin Hızlı ve Nicel Tespiti için Yanal Akış İmmünokromatografik Şeridinin Geliştirilmesi

Prosedür kolloidal altının hazırlanmasını ve immünromatografik şeritlerin montajını açıklar. İlk olarak kolloidal altının sentezi için kloroaurik asit ve sodyum sitrat kullanılmıştır. Sodyum sitrat kloroaurik asit çözeltisine eklendi ve uygun parçacık boyutuna sahip kolloidal altın elde etmek için kaynatıldı.

Sentez, kolloidal altın antikor konjuge. Santrifüjlemeden sonra kolloidal altın parçacıkları uygun çözeltide çözündü ve daha sonra kolloidal altın çözeltisi elde etmek için yeniden canlandı. Konjuge pedi hazırlamak için cam elyaf membranı konjugasyona batırın.

Yapay antijen ve ikincil antikorları NC membranında T hattı ve C hattı olarak bırakın. NC membranını, emici membranı, numune yastığını ve cam elyaf membranı sırasıyla PVC levhaya takın. Monte edilmiş kağıt tahtayı 3,5 milimetre genişliğinde şerit halinde kesin.

Sırasıyla tam yüzde altın klorür asit çözeltisi ve% 1 sodyum sitrat çözeltisi konfect. Manyetik karıştırıcıyı açın ve şişeyi bir karıştırıcıya yerleştirin. Yuvarlak tabanlı bir şişeye 120 mililitre damıtılmış su ekleyin ve termostatik manyetik karıştırıcıda kaynamaya ısıtın.

Kaynamaya devam edin ve hızlı bir şekilde 0,5 mililitre tam yüzde kloroaurik asit ve beş mililitre% 1 sodyum sitrat ekleyin. Beş ila 10 dakika ısıtmaya devam edin. Çözeltinin renginin soluk sarıdan şarap kırmızısına değiştiğini gözlemleyin.

Termostatik manyetik mikserin gücünü kapatın, oda sıcaklığına soğutun ve karışımı temiz bir şişeye yerleştirin. 4 santigratta depola. Altın nanopartiküller Tyndall etkisini gösterir.

Altın nanopartiküllerin büyüklüğü ve morfolojisi ultraviyole spektroskopisi ve iletim elektron mikroskop görüntülemesi ile belirlendi. Sekiz tüpe 100 mikrolitre sodyum klorür çözeltisi ekleyin. Kolloidal altın çözeltilerini litre potasyum karbonat başına 0,1 mol kullanarak pH 5 ila 12'ye ayarlayın.

Sodyum klorür içeren sekiz tüpe 100 mikrolitre kolloidal altın çözeltisi ekleyin. Karıştırmadan birkaç dakika sonra posta için bekletin. Her tüp çözeltisinin renk değişimini gözlemleyin ve kırmızı kalan tüpü kaydedin.

Konjuge hazırlamak için optimum pH değeri olarak en düşük miktarda ilave potasyum karbonat ve kararlı bir çözelti rengi ile pH değerini seçin. Aynı yaklaşıma adapte oldu. Renk değişimini gözlemledi ve kırmızı kalan tüpü kaydetti.

En düşük mAB konsantrasyonuna ve optimum mAB miktarı olarak kararlı bir çözelti rengine sahip antikor miktarını seçin. 10 mililitre kolloidal altın çözeltisi alın ve çözeltiyi en uygun pH değerine ayarlamak için litre potasyum karbonat başına 0,1 mol kullanın. SSd mAB'leri uygun konsantrasyonda yavaşça ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika çalkalayın.

Karışımı 2000 RPM'de dört santigratta 20 dakika santrifüjleyin. Çökelmiş kolloidal altının safsızlıklarını içeren çökeltme kısmını çıkarın. Karışımı 10.000 RPM'de 40 dakika santrifüjleyin.

Üstnatant atın. Çökelti kolloidal altın mAB konjugedir. Tris hidroklorik asit, BSA, Ara 20 ve PEG 20.000 ekleyin, ardından resüspenzyon tamponunu hazırlamak için iyice karıştırın.

Resüspensyon tamponunu ekleyin ve çökelticiyi ayırın. Cam selüloz membran, polyester selüloz membran ve PVC levha dahil olmak üzere membran malzeme şeridi. Membran malzemesi, inhomogeneity kurtulmak için steril mikroskop ile izlemek ve değerlendirmek gerekir.

İlk olarak, NC membranını pvc tahtaya, tahtanın bölüm ucunun kenarından iki santimetre yerleştirin. İkincisi, test hattı olarak üst kenardan iki santimetrede NC membranına mililitre başına iki miligram düşürün ve kontrol hattı olarak alt kenardan iki santimetre uzaklıktaki NC membranında mililitre altın fare karşıtı IgG başına 1,5 miligram bırakın. Emici pedi NC membran üzerindeki PVC levhaya takın ve NC membranıyla iki milimetre örtün.

Cam elyaf membranını beş santimetre uzunluğunda ve iki santimetre genişliğinde kırpın ve konjuge ped olarak kullanın. Cam elyaf membranı altın nanopartiküller mAB konjuge çözeltisine batırın. Altın nanopartiküller mAB emilimi yapmak için bir süre ıslatın.

Geniş zarı inkübatörde 37 derecede kurutun. Önceden tedavi edilmiş konjuge pedi NC membran altına yapıştırın ve NC membran ile örtüşen uzunluk 0,1 santimetre olmalıdır. Fusion3 membranını 1,8 santimetre uzunluğunda ve 3,5 santimetre genişliğinde kırpın ve örnek ped olarak kullanın.

Ardından, örnek pedi PVC tahtaya yerleştirin ve konjuge ped ile iki milimetre örtüştürun. Kağıt tahtayı bir kesme makinesi kullanarak 3,5 milimetre genişliğinde şeritler halinde kesin ve bir parti laminasyon sistemi kullanarak sıkıştırın. Son olarak, test şeritlerini kabuğun içine yerleştirin.

Onları kurutucu ve mağazayı ışıktan uzak bir şekilde içeren alüminyum bir folyo torbaya kapatın. ICS şimdi toplandı. Kromatografi sürecini gözlemlemek için numune deliğine 50 mikrolitre numune çözeltisi bırakın.

Ardından, şeritleri taşınabilir bir şerit okuyucu kullanarak analiz edin. Makine, test hattının kontrol hattına oranını sağlayabilir. ICS testinin özgüllüğünü, hassasiyetini, tekrarlanabilirliğini ve kararlılığını değerlendirin.

Hazırlanan kolloidal altın çözeltileri okundu. İletim elektron mikroskobu analizleri, parçacıkların polihedral şeklinde olduğunu ve 14 nanometre ortalama çapı ile eşit olarak dağıtıldığını ortaya koydu. Yüksek çözünürlüklü iletim elektron mikroskop görüntüleri, 0.117 nanometre altın nanopartikül aralığı ile sürekli bir saçak deseni gösterdi.

Ultraviyole görünür emilim, sitrat sodyum ve kloroaurik asit oranını değiştirerek farklı boyutlarda kolloidal altın parçacıkları elde edilebileceğini gösterdi. Nicel deneyde, saikosaponin D test sonuçlarının bulunduğu şeritler taşınabilir bir ICS okuyucu kullanılarak tarandı. Saikosaponin D konsantrasyonlarını her konsantrasyonda karşılık gelen emilime bağlayarak standart bir eğri hesapladık.

Metodolojik incelemeden sonra, yöntem küçük molekül bileşiklerinin nicel ve yarı nitel tespiti için uygulanabilir. Bu prosedür kolloidal altının hazırlanmasını, altın nanopartiküller mAB konjuge sentezini, şeridin montajını ve metodolojik incelemeyi içerir. Bu çalışma, küçük molekülün hızlı ve nicel tespitinde kullanılmak üzere immünromatografik şeridin geliştirilmesi için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Bu videoyu izledikten sonra umarım immünromatografik şeridin hazırlanması için iyi bir anlayışa sahipsinizdir. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneyleriniz için iyi şanslar.