Name: Küçük Molekül Bileşiklerinin Hızlı ve Nicel Tespiti için Yanal Akış İmmünokromatografik Şeridinin Geliştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Keşfedin koloidal altın sentezi ve immünokromatografik şerit montajı için detaylı protokol. Kloroaurik asit ve sodyum sitrat kullanarak hızlı tanı testleri geliştirin. Bu yöntem araştırmacılara güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, merkezi bölümlere bağlı yüksek öğrenim kurumlarının Temel Araştırma Fonları için Özel Fonlar tarafından desteklenmiştir. Pekin Çin Tıbbı Üniversitesi Klasik Reçete Temel Araştırma Ekibinin desteğini takdir ediyoruz.

Bu çalışmada yapılan tüm prosedürler Pekin Çin Tıp Üniversitesi Etik İnceleme Komitesi tarafından onaylanmıştır (onay numarası 2017BZYYL00120).
1. Kolloidal Altının Hazırlanması ve Karakterizasyonu
NOT: Kolloidal altın sentezi için, kolloidal altın damarın iç duvarına kolayca adsorbe edildiği ve safsızlıklar nedeniyle çökeltmeye eğilimli olduğu için kolloidal altının sentezi ve depolanması için damar iyice temizlenmeli ve aside batırılmalıdır (40 mL damıtılmış su, 360 mL konsantre sülfürik asit, 20 g potasyum dikromat) veya yüzey geçişi işlemine tabi tutulmalıdır. Kolloidal altını sentezlemek için sitrik asit azaltma yöntemi kullanılmıştır.
<ol><li>Manyetik karıştırıcıyı açın ve şişeyi (250 mL) karıştırıcıya yerleştirin.</li>
	<li>Sırasıyla% 4 altın klorür asit çözeltisi ve% 1 sodyum sitrat çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>Yuvarlak bir alt şişeye 120 mL damıtılmış su ekleyin ve termostatik manyetik karıştırıcıda kaynamaya ısıtın.</li>
	<li>Kaynamaya devam edin ve hızlı bir şekilde% 4 kloroaurik asit 0,5 mL ve% 1 sodyum sitrat 5 mL ekleyin.</li>
	<li>Çözeltinin rengine uyun. Soluk sarı kloroaurik asit çözeltisi birkaç dakika içinde şarabı kırmızıya çevirir.</li>
	<li>Çözelti renksizden şeffaf şarap kırmızısına dönüşene kadar 10 dakika ısıtmaya devam edin.</li>
	<li>Termostatik manyetik mikserin gücünü kapatın, oda sıcaklığına soğutun ve karışımı temiz bir şişeye taşıyın. 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Ultraviyole spektroskopi ve TEM görüntüleme ile AuNP'lerin boyutunu ve morfolojisini belirleyin. NOT: Sitrat sodyum ve kloroaurik asit oranı değiştirilerek çeşitli uygulamalar için farklı boyutlarda kolloid altın parçacıkları elde edilebilir.</li>
</ol>2. AuNPs-mAb Konjuge Sentezi
NOT: Antikorlar elektrostatik adsorpsiyon ile kolloidal altına bağlanınce, proteinlerin ve kolloidal altının yüzeyindeki yükler bağlayıcı yoğunluğu doğrudan etkiler; bu nedenle, tampon pH değeri antikor-kolloidal altın konjuge stabilitesini etkileyen önemli bir faktördür. SSD ve anti-SSD mAb'ler bu protokolde örnek olarak kullanılır.
<ol><li>Kavrama pH'ının değerlendirilmesi<ol>
<li>Sekiz tüpe 100 μL NaCl çözeltisi (%10 m/v) ekleyin.</li>
		<li>AuNP çözümlerini pH 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ve 12'de 0,1 M K 2 CO3ileayarlayın.</li>
		<li>NaCl içeren sekiz tüpe 100 μL kolloidal altın çözeltisi (pH ayarlı 5-12) ekleyin.</li>
		<li>Karıştırmadan sonra çözeltilerin birkaç dakika bekletin. Her tüp çözeltisinin renk değişimini gözlemleyin ve kırmızı kalan tüpü kaydedin.</li>
		<li>AuNP-mAb konjugelerini hazırlamak için optimum pH değeri olarak en az K2CO3 ilavesi ve kararlı çözelti rengi ile pH değerini seçin. NOT: Prob AuNP'ler tarafından yok edilebileceğinden pH ölçer kullanmayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Antikor miktarının değerlendirilmesi<ol>
<li>Sekiz tüpe 100 μL NaCl çözeltisi (%10 m/v) ekleyin.</li>
		<li>Her tüpe optimum pH ile 100 μL kolloidal altın çözeltisi ekleyin.</li>
		<li>Yukarıda belirtilen sekiz tüpe monoklonal antikor çözeltilerini (protein konsantrasyonu 0.1 mg/mL-3.2 mg/mL) ekleyin.</li>
		<li>Karıştırmadan sonra çözeltilerin birkaç dakika bekletin. Her tüp çözeltisinin renk değişimini gözlemleyin ve kırmızı kalan tüpü kaydedin.</li>
		<li>AuNP-mAb konjugelerini hazırlamak için optimum mAb miktarı olarak en düşük mAb konsantrasyonuna ve kararlı çözelti rengine sahip antikor miktarını seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Resüspenzyon tamponunu hazırlayın: 1 M Tris-HCl (pH 8.8), %1 (w/v) BSA, %0.5 (v/v) Ara 20 ve %1 (v/v) PEG 20000 ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
	<li>AuNP-mAb konjuge sentezi<ol>
<li>10 mL kolloidal altın çözeltisi alın ve çözeltiyi en uygun pH değerine ayarlamak için0,1 M K2CO 3 kullanın.</li>
		<li>SSD mAb'leri uygun konsantrasyonlarda yavaşça ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika çalkalayın.</li>
		<li>Karışımı 83 x g 'da (1.000 rpm) 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin. Safsızlıklar veya çökelmiş kolloidal altın içeren çökelticiyi çıkarın.</li>
		<li>Karışımı 4 °C'de 30 dakika boyunca 8.330 x g'da (10.000 rpm) santrifüjleyin. Üstnatantı atın ve çökelti kolloidal altın-mAb konjugesidir.</li>
		<li>Yağışı dağıtmak için resüspenzyon tamponunu ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Şeridin Montajı
NOT: Daha sonraki akış immünoassayları için, membran malzemesinin seçimi ve ön işlem, araştırılması gereken testi doğrudan etkileyecektir. İmmünromatografik şerit bir örnek ped, bir konjuge ped, bir nitroselüloz (NC) membran, bir emici ped ve bir PVC levhadan oluşur (Şekil 1). Membran malzemesi stereomikroskop ile kontrol edilmeli ve inhomogeneity ortadan kaldırılması için değerlendirilmelidir.
<ol><li>NC membranını, kartın emme ucunun kenarından 2 cm uzaklıktaki bir PVC tahtaya yapıştırın.</li>
	<li>NC zarına (üst kenardan 2 cm) damla yönünde (1 mm genişliğinde) SSD-BSA (2 mg/mL) ekleyin ve NC zarına (alt kenardan 2 cm ayrı) keçi anti-mouse IgG (1 mm genişliğinde) damla yönünde ekleyin. Eklenen protein miktarını kontrol edin.</li>
	<li>Emici pedi NC membran üzerindeki PVC levhaya takın ve NC membranıyla 2 mm örtün.</li>
	<li>Cam elyaf membranı AuNPs-mAb konjuge çözeltisine batırın. Islak zarı 37 °C'de bir inkübatörde kurulayın.</li>
	<li>Cam elyaf membranını 5 cm uzunluğunda ve 2 cm genişliğinde kırpın ve konjuge ped olarak kullanın.</li>
	<li>Önceden tedavi edilmiş konjuge pedi NC zarın altına yapıştırın. NC membran ile örtünme uzunluğu 0,1 cm olmalıdır. NOT: Cam elyaf membran, proteinleri bağlama ve serbest bırakma konusunda güçlü bir yetebeye sahiptir.</li>
	<li>Füzyon 3 membranı 1,8 cm uzunluğunda ve 3,5 cm genişliğinde kırpın ve örnek ped olarak kullanın.</li>
	<li>Örnek pedi PVC tahtaya yapıştırın ve konjuge ped ile 2 mm örtüştürün.</li>
	<li>Monte edilen kağıt tahtayı bir kesme makinesi kullanarak 3,5 mm genişliğinde şeritler halinde kesin ve toplu laminasyon sistemi kullanarak sıkıştırın.</li>
	<li>Son olarak, test şeritlerini kabuğun içine yerleştirin, kurutucu içeren alüminyum bir folyo torbaya kapatın ve ışıktan uzak saklayın. ICS'ler şimdi toplandı. NOT: Yukarıdaki laboratuvar prosedürüdür. Üretimde altın püskürtme ekipmanları ve çapraz zar aletleri altın püskürtmek ve T ve C hatlarını yapmak için kullanılır.</li>
</ol>4. Nicel Algılama
<ol><li>Kromatografi işlemini gözlemlemek için numune deliğine 50 μL numune çözeltisi bırakın. NOT: Emici ped tarafından yönlendirilen kılcal etkinin bir sonucu olarak, numune çözeltisi şeridin diğer ucuna taşınır. Numune çözeltisi konjuge pedine ulaştığında, numunedeki SSD (antijen), ped üzerine önceden yüklenmiş AuNPs-mAb ile reaksiyona sokar. Çözelti taşındığında ve T hattına ulaştığında, SSD'siz AuNPs-mAb, T-line'da kırmızı bir renk olarak gösterilen SSD-BSA (antijen taşıyıcı protein konjuge) tarafından seçici olarak yakalanabilir. Daha sonra, çözüm, AuNPs-mAb'nin bölgedeki keçi fare karşıtı IgG tarafından yakalandığı C çizgisine taşınır, böylece C çizgisinde kırmızı bir renk olarak görünür.</li>
	<li>Şeritleri taşınabilir bir şerit okuyucu ile analiz edin. Makine, test hattının kontrol hattına (T/C) oranını sağlayabilir.</li>
	<li>ICS testinin özgüllüğünü, hassasiyetini, tekrarlanabilirliğini ve kararlılığını değerlendirin. NOT: Nitel algılama altında, bir kırmızı çizgi pozitif bir sonucu (kontrol çizgisi) gösterir. İki kırmızı çizgi negatif bir sonucu gösterir (test ve kontrol çizgileri). Denetim satırı yoksa, test geçersiz kabul edilir.</li>
</ol>

<ol><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane-based+lateral+flow+immunochromatographic+strip+with+nanoparticles+as+reporters+for+detection%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review.</a> Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).</li>
<li>Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immune+chromatographic+assay+for+rapid+and+simultaneous+detection+of+levonorgestrel+and+methylprednisolone+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Chemical+Letters%22%5BJournal%5D)">An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples.</a> Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).</li>
<li>Lai, J. J., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+lateral-flow+immunoassay+%28LFIA%29+diagnostics+via+biomarker+enrichment+for+mHealth%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth.</a> Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).</li>
<li>Zhang, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+colloidal+gold-based+lateral-flow+immunoassay+for+the+rapid+simultaneous+detection+of+clenbuterol+and+ractopamine+in+swine+urine%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+%26+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine.</a> Analytical & Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).</li>
<li>Kranthi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+colloidal-gold+based+lateral-flow+immunoassay+kit+for+%27quality-control%27+assessment+of+pyrethroid+and+endosulfan+formulations+in+a+novel+single+strip+format%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Protection%22%5BJournal%5D)">Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format.</a> Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).</li>
<li>Qian, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+an+immunochromatographic+strip+for+rapid+detection+of+capsid+protein+antigen+p27+of+avian+leukosis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus.</a> Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).</li>
<li>Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same. US Patent. , US20040184954A1 (2003).</li>
<li>Miočević, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Lateral+Flow+Assays+for+Salivary+Biomarker+Assessment%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review.</a> Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).</li>
<li>Lisa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+based+dipstick+immunoassay+for+the+rapid+detection+of+dichlorodiphenyltrichloroethane%3A+an+organochlorine+pesticide%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide.</a> Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+Antibody-Europium+Conjugate-Based+Lateral+Flow+Time-Resolved+Fluoroimmunoassay+for+Quantitative+Determination+of+T-2+Toxin+in+Cereals+and+Feed%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed.</a> Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+synthesis+of+high-quality+CuInZnxS2%2Bx+core%2Fshell+nanocrystals+and+their+application+for+detection+of+C-reactive+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).</li>
<li>Xiang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+double+antibody+sandwich-lateral+flow+immunoassay+for+the+rapid+and+simple+detection+of+hepatitis+C+virus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus.</a> International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantum+dot-based+immunochromatography+test+strip+for+rapid%2C+quantitative+and+sensitive+detection+of+alpha+fetoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein.</a> Biosensors & Bioelectronics. 30 (1), 145(2011).</li>
<li>Song, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+fluorescent+lateral-flow+immunoassay+for+hepatitis+B+virus+genotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping.</a> Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantum+dot-based+lateral-flow+immunoassay+for+rapid+detection+of+rhein+using+specific+egg+yolk+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Lateral-Flow+Immunoassay+for+the+Quantum+Dot-based+Detection+of+GsRerarin%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin.</a> Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+Clinical+Application+of+a+Rapid+IgM-IgG+Combined+Antibody+Test+for+SARS-CoV-2+Infection+Diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Virology%22%5BJournal%5D)">Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis.</a> Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).</li>
<li>Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+application+value+analysis+of+the+2019-coronary+virus+disease+was+analyzed+by+the+whole+blood+Sars-COV+2+specific+antibody+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Science+Edition%22%5BJournal%5D)">The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection.</a> Natural Science Edition. 42, (2020).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Monoclonal+Antibodies+Against+Natural+Products%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products.</a> Journal of Visualized Experiments. , e57116(2019).</li>
<li>Sai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+Enzyme-Linked+Immunosorbent+Assay+and+Immunoaffinity+Column+Chromatography+for+Saikosaponin+d+Using+an+Anti-Saikosaponin+d+Monoclonal+Antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody.</a> Planta Medica. 82, 432-439 (2016).</li>
<li>Yue, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Highly+Sensitive+Immunochromatographic+Strip+Test+for+Rapid+and+Quantitative+Detection+of+Saikosaponin+d%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d.</a> Molecules. 23 (2), 338(2018).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Lateral-Flow+Immunoassay+for+the+Quantum+Dot-based+Detection+of+Puerarin%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin.</a> Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantum+dot-based+lateral-flow+immunoassay+for+rapid+detection+of+rhein+using+specific+egg+yolk+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu çalışmada, mAb'lerin doğal ürün türevi küçük moleküllere karşı hazırlanması için bir protokol sunuyoruz. Prosedürde dikkat gereken temel adımlar ve konular özetlenmiştir ve örnek olarak küçük molekül SSD'yi kullanarak bu protokolün yararını gösterdik. Örnek spektrumlar, TEM görüntüleri, nicel sonuçlar ve metodolojik araştırmalar temsili verilerde gösterilmiştir. Bu nedenle, burada sunulan kolloidal altın üretimi, AuNP-mAb konjugasyon ve şerit montaj stratejisinin hedef molekülü hızlı bir şekilde tespit etmek için kull...

Membran bazlı yanal akış immünokromatografik şeritler (ICSs) düşük maliyetli ve hızlı algılama için kullanışlı araçlardır. Taşıyıcı olarak nitroselüloz membran ve immün kromatografi hızlı tanı reaktiflerinin belirteçleri olarak kolloidal altın en sık kullanılan POCT (bakım noktası testi) yöntemidir ve projenin test kapsamı daha geniştir. Hamilelik sırasında izlemedeki orijinal uygulamalarından, kan pıhtılaşma durumu 1,2, miyokard yaralanması3, veteriner hekimlik4, pestisit kalıntıları5, bulaşıcı hastalıklar6ve ilaç konsantrasyonlarını izlemek için kullanımları genişletilmiştir. İdrar, tükürük, tam kan, serum ve diğer vücut sıvıları dahil olmak üzere daha fazla örnek türü değerlendirilebilir7,8,9.
Son yıllarda, hassas ve doğru, güvenilir ve spesifik olan HPLC, UPLC, LC-MS ve ELISA dahil olmak üzere bozuklukların tanısında biyobelirteçleri tespit etmek için çok sayıda yeni tahlil geliştirilmiştir. Bununla birlikte, bu yöntemler sofistike enstrümantasyon, karmaşık ön işleme ve zaman alıcı tedaviler gerektirir9. Bu nedenle, tıbbi aktif bileşiklerin kendi kendine ve gerçek zamanlı tespiti için daha hızlı ve kullanışlı bir bakım noktası tanı stratejisi geliştirmek acildir10,11.
ICS'lerin popülaritesi, özellikle yaygın testler için, profesyonellere veya ayrıntılı enstrümantal kurulumlara ihtiyaç duydukları için kullanım kolaylığından kaynaklanır12. Başka bir deyişle, özel eğitimi olmayan kişiler şeritleri veya kendi kendine testleri çalıştırabilir13. Testin sonuçları 5 dakika içinde elde edilebilir, bu da saha incelemeleri için kullanılabileceği anlamına gelir14. Ayrıca, hesaplamalarımıza göre, şeritlerin maliyeti 1 RMB15'ten düşük olabilir , bu da testlerin16. Bu nedenle, ICS nispeten doğru, basit ve ucuz bir tek kullanımlık cihazdır. Kolloidal altın17,18 bazlı ICS'ler hızlı COVID-19 tespitinde de uygulanmaktadır.
ICS prensibi sandviç ICS ve rekabetçi ICS olarak ayrılabilir. Şekil 1A, esas olarak tümör belirteçleri, enflamatuar faktörler ve insan koryonik gonadotropin (HCG, erken gebelik antijeni) dahil olmak üzere proteinler gibi makromoleküler maddeleri tespit etmek için kullanılan sandviç ICS'nin şematik bir diyagramıdır. Bu yöntemde antijenin farklı epitoplarını hedefleyen eşleştirilmiş antikorlar kullanılır ve yakalama antikorı test hattı olarak NC membranında kurutulur. Etiketli antikor konjuge ped üzerinde kurutulur ve kontrol hattı olarak ikincil antikor kullanılır.
Şekil 1B, esas olarak küçük molekül maddeleri tespit etmek için kullanılan rekabetçi ICS'nin şematik bir diyagramıdır (MWCO &lt; 2000 Da). Kaplama antijeni test hattı olarak NC membran üzerine sabitlenir ve etiketli antikor konjuge ped üzerinde kurutulur. Algılama sırasında, numune ve etiketli antikor kılcal etki altında algılama hattından akar ve kaplanmış antijen, numunedeki serbest antijeni rekabetçi bir şekilde bağlar ve algılama hattında kırmızı bir renk geliştirir.
Son zamanlarda, doğal ürünlere karşı monoklonal antikor üretimi prosedürünü tanımladık19. Bu çalışmada, hızlı ve yerinde tespit için hazırlanan anti-SSD mA20'ye dayanan yeni bir yanal akış immünoassay geliştirdik. Sonuçlar, immünokromatografi testinin doğal ürün türevi bileşikleri tespit etmek için vazgeçilmez ve kullanışlı bir araç olduğunu göstermektedir.
<img alt="Yanal akış immünoassay diyagramı; etiketli antikorlar, test çizgileri ile numune işlemeyi gösterir." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62754/62754fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1 İmmünromatografi testinin şematik şeması (A) Sandviç immünokromatografik test şeritleri. (B) Dolaylı rekabetçi immün kromatografik test şeritleri. Bu rakam Zhang ve ark.,201821. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62754/62754fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>Kloroaurik asit çözeltisi (HAuCl4)</td> <td>Tianjin Fu Chen Kimyasal Reaktifler Fabrikası</td><td>JY-SJ102</td><td></td></tr><tr><td>sığır serum albümini</td><td>AMRESCO</td><td>332</td><td></td></tr><tr><td>santrifüj tüpü 15 mL</td><td>Corning</td><td>430645</td><td></td></tr><tr><td>santrifüj tüpü 50 mL</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>ELISA plakaları, 96 kuyulu</td><td>NUNC</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Sinopharm</td><td>H5072</td><td></td></tr><tr><td>Cam elyaf membranlar</td><td>Jieyi</td><td>XQ-Y6</td><td></td></tr><tr><td>keçi anti-fare IgG antikoru</td><td>applygen</td><td>C1308</td><td></td></tr><tr><td>Nitroselüloz membranlar</td><td>Millipore</td><td>millipore 180</td><td></td></tr><tr><td>ovalbumin</td><td>Pekin BIODEE</td><td>5008-25g</td><td></td></tr><tr><td>PEG20000</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td>RNBC6325</tr><tr><td>Pipet 10mL</td><td>COSTAR</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 25mL</td><td>FALCON</td><td>357525</td><td></td></tr><tr><td>yarı sert PVC levhalar</td><td>Jieyi</td><td>JY-C104</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sitrat</td><td>Pekin Kimyasal İşler</td><td>C1034</td><td></td></tr><tr><td>sodyum periyodat</td><td>Sinopharm Kimyasal</td><td>BW-G0008</td><td></td></tr><tr><td>Sülfo-GMBS</td><td>Perbiyo Bilimi Almanya</td><td>22324</td><td></td></tr><tr><td>TipOne İpuçları 1.000 & L</td><td>Starlab</td><td>S1111-2021</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN 20</td><td>Solarbio</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

küçük molekül bileşiklerinin hızlı ve nicel tespiti için yanal akış İmmünokromatografik Şeridinin geliştirilmesi

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

Membran bazlı lateral akış immünokromatografik şeritler (ICSs) düşük maliyetli kendi kendine tanı için yararlı araçlardır ve toksin, fizyolojik indeks ve klinik biyobelirteç tespitine verimli bir şekilde uygulanmıştır. Bu protokolde, hızlı, hassas ve nicel yanal akışlı bir immünoassay geliştirme adımlarının ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz (AuNP'leri bir işaretleyici olarak ve mAb'leri prob olarak kullanarak). Prosedür kolloidal altının hazırlanmasını ve karakterizasyonunu, AuNP-mAb konjugesinin sentezini, immünromatografik şeridin montajını ve tahlil metodolojik incelemesini açıklar. Sonuçlar, son şeritlerin, fizyolojik ve biyolojik endekslerin hızlı ve hassas analizinde alternatif bir araç sağlayabilecek küçük bir molekülün hızlı ve rahat kendi kendine teşhisi için daha fazla kullanılabileceğini göstermiştir.

Kolloidal altının karakterizasyonu Hazırlanan kolloidal altın çözeltileri bordo kırmızıydı. AuNP'lerin morfolojisini ve şeklini belirlemek için TEM analizleri kullanılmıştır (Şekil 2A-D). Şekil 2A ve Şekil 2B, parçacıkların polihedral şekilli ve düzgün bir şekilde dağıtıldığını ortaya koymaktadır. AuNP'lerin ortalama çapı yaklaşık 14 nm(Şekil 2C) olarak bulunmuştur. ...

Küçük Molekül Bileşiklerinin Hızlı ve Nicel Tespiti için Yanal Akış İmmünokromatografik Şeridinin Geliştirilmesi

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...

Prosedür kolloidal altının hazırlanmasını ve immünromatografik şeritlerin montajını açıklar. İlk olarak kolloidal altının sentezi için kloroaurik asit ve sodyum sitrat kullanılmıştır. Sodyum sitrat kloroaurik asit çözeltisine eklendi ve uygun parçacık boyutuna sahip kolloidal altın elde etmek için kaynatıldı.Sentez, kolloidal altın antikor konjuge. Santrifüjlemeden sonra kolloidal altın parçacıkları uygun çözeltide çözündü ve daha sonra kolloidal altın çözeltisi elde etmek için yeniden canlandı. Konjuge pedi hazırlamak için cam elyaf membranı konjugasyona batırın.Yapay antijen ve ikincil antikorları NC membranında T hattı ve C hattı olarak bırakın. NC membranını, emici membranı, numune yastığını ve cam elyaf membranı sırasıyla PVC levhaya takın. Monte edilmiş kağıt tahtayı 3,5 milimetre genişliğinde şerit halinde kesin.Sırasıyla tam yüzde altın klorür asit çözeltisi ve% 1 sodyum sitrat çözeltisi konfect. Manyetik karıştırıcıyı açın ve şişeyi bir karıştırıcıya yerleştirin. Yuvarlak tabanlı bir şişeye 120 mililitre damıtılmış su ekleyin ve termostatik manyetik karıştırıcıda kaynamaya ısıtın.Kaynamaya devam edin ve hızlı bir şekilde 0,5 mililitre tam yüzde kloroaurik asit ve beş mililitre% 1 sodyum sitrat ekleyin. Beş ila 10 dakika ısıtmaya devam edin. Çözeltinin renginin soluk sarıdan şarap kırmızısına değiştiğini gözlemleyin.Termostatik manyetik mikserin gücünü kapatın, oda sıcaklığına soğutun ve karışımı temiz bir şişeye yerleştirin. 4 santigratta depola. Altın nanopartiküller Tyndall etkisini gösterir.Altın nanopartiküllerin büyüklüğü ve morfolojisi ultraviyole spektroskopisi ve iletim elektron mikroskop görüntülemesi ile belirlendi. Sekiz tüpe 100 mikrolitre sodyum klorür çözeltisi ekleyin. Kolloidal altın çözeltilerini litre potasyum karbonat başına 0,1 mol kullanarak pH 5 ila 12'ye ayarlayın.Sodyum klorür içeren sekiz tüpe 100 mikrolitre kolloidal altın çözeltisi ekleyin. Karıştırmadan birkaç dakika sonra posta için bekletin. Her tüp çözeltisinin renk değişimini gözlemleyin ve kırmızı kalan tüpü kaydedin.Konjuge hazırlamak için optimum pH değeri olarak en düşük miktarda ilave potasyum karbonat ve kararlı bir çözelti rengi ile pH değerini seçin. Aynı yaklaşıma adapte oldu. Renk değişimini gözlemledi ve kırmızı kalan tüpü kaydetti.En düşük mAB konsantrasyonuna ve optimum mAB miktarı olarak kararlı bir çözelti rengine sahip antikor miktarını seçin. 10 mililitre kolloidal altın çözeltisi alın ve çözeltiyi en uygun pH değerine ayarlamak için litre potasyum karbonat başına 0,1 mol kullanın. SSd mAB'leri uygun konsantrasyonda yavaşça ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika çalkalayın.Karışımı 2000 RPM'de dört santigratta 20 dakika santrifüjleyin. Çökelmiş kolloidal altının safsızlıklarını içeren çökeltme kısmını çıkarın. Karışımı 10.000 RPM'de 40 dakika santrifüjleyin.Üstnatant atın. Çökelti kolloidal altın mAB konjugedir. Tris hidroklorik asit, BSA, Ara 20 ve PEG 20.000 ekleyin, ardından resüspenzyon tamponunu hazırlamak için iyice karıştırın.Resüspensyon tamponunu ekleyin ve çökelticiyi ayırın. Cam selüloz membran, polyester selüloz membran ve PVC levha dahil olmak üzere membran malzeme şeridi. Membran malzemesi, inhomogeneity kurtulmak için steril mikroskop ile izlemek ve değerlendirmek gerekir.İlk olarak, NC membranını pvc tahtaya, tahtanın bölüm ucunun kenarından iki santimetre yerleştirin. İkincisi, test hattı olarak üst kenardan iki santimetrede NC membranına mililitre başına iki miligram düşürün ve kontrol hattı olarak alt kenardan iki santimetre uzaklıktaki NC membranında mililitre altın fare karşıtı IgG başına 1,5 miligram bırakın. Emici pedi NC membran üzerindeki PVC levhaya takın ve NC membranıyla iki milimetre örtün.Cam elyaf membranını beş santimetre uzunluğunda ve iki santimetre genişliğinde kırpın ve konjuge ped olarak kullanın. Cam elyaf membranı altın nanopartiküller mAB konjuge çözeltisine batırın. Altın nanopartiküller mAB emilimi yapmak için bir süre ıslatın.Geniş zarı inkübatörde 37 derecede kurutun. Önceden tedavi edilmiş konjuge pedi NC membran altına yapıştırın ve NC membran ile örtüşen uzunluk 0,1 santimetre olmalıdır. Fusion3 membranını 1,8 santimetre uzunluğunda ve 3,5 santimetre genişliğinde kırpın ve örnek ped olarak kullanın.Ardından, örnek pedi PVC tahtaya yerleştirin ve konjuge ped ile iki milimetre örtüştürun. Kağıt tahtayı bir kesme makinesi kullanarak 3,5 milimetre genişliğinde şeritler halinde kesin ve bir parti laminasyon sistemi kullanarak sıkıştırın. Son olarak, test şeritlerini kabuğun içine yerleştirin.Onları kurutucu ve mağazayı ışıktan uzak bir şekilde içeren alüminyum bir folyo torbaya kapatın. ICS şimdi toplandı. Kromatografi sürecini gözlemlemek için numune deliğine 50 mikrolitre numune çözeltisi bırakın.Ardından, şeritleri taşınabilir bir şerit okuyucu kullanarak analiz edin. Makine, test hattının kontrol hattına oranını sağlayabilir. ICS testinin özgüllüğünü, hassasiyetini, tekrarlanabilirliğini ve kararlılığını değerlendirin.Hazırlanan kolloidal altın çözeltileri okundu. İletim elektron mikroskobu analizleri, parçacıkların polihedral şeklinde olduğunu ve 14 nanometre ortalama çapı ile eşit olarak dağıtıldığını ortaya koydu. Yüksek çözünürlüklü iletim elektron mikroskop görüntüleri, 0.117 nanometre altın nanopartikül aralığı ile sürekli bir saçak deseni gösterdi.Ultraviyole görünür emilim, sitrat sodyum ve kloroaurik asit oranını değiştirerek farklı boyutlarda kolloidal altın parçacıkları elde edilebileceğini gösterdi. Nicel deneyde, saikosaponin D test sonuçlarının bulunduğu şeritler taşınabilir bir ICS okuyucu kullanılarak tarandı. Saikosaponin D konsantrasyonlarını her konsantrasyonda karşılık gelen emilime bağlayarak standart bir eğri hesapladık.Metodolojik incelemeden sonra, yöntem küçük molekül bileşiklerinin nicel ve yarı nitel tespiti için uygulanabilir. Bu prosedür kolloidal altının hazırlanmasını, altın nanopartiküller mAB konjuge sentezini, şeridin montajını ve metodolojik incelemeyi içerir. Bu çalışma, küçük molekülün hızlı ve nicel tespitinde kullanılmak üzere immünromatografik şeridin geliştirilmesi için ayrıntılı bir protokol sağlar.Bu videoyu izledikten sonra umarım immünromatografik şeridin hazırlanması için iyi bir anlayışa sahipsinizdir. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneyleriniz için iyi şanslar.

development-lateral-flow-immunochromatographic-strip-for-rapid

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Damlacık tabanlı mikroakışkan platformları kHz oranları ucuza pikolitrelik, kendi kendine bölümlere damarları oluşturmak mümkün olduğundan yüksek kapasiteli deney için umut vaat eden adaylardır. Hızlı, hassas ve yüksek çözünürlüklü floresans spektroskopik yöntemleri ile entegrasyon sayesinde, bu sistemler içinde üretilen bilgilerin büyük miktarda verimli, ayıklanır, harnessed ve kullanılan olabilir.

Mikroakışkan damlacık platformları için Floresan algılama yöntemleri

Entegre mikroakışkan termoplastik çip bir moleküler tanı olarak kullanılmak üzere geliştirilmiştir. Çip nükleik asit ekstraksiyon, ters transkriptaz ve PCR gerçekleştirir. Imalatı ve yonga çalıştırmak için yöntemler tarif edilmiştir.

Mikroakışkan Chip İmalat ve İnfluenza Algılama Yöntemi

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Bu protokol, deniz memelilerinin miyoglobine güçlü bir şekilde reaktif olan iki IgG sınıfı monoklonal antikorun (mAb) gelişimini açıklar. Bu mAb'ler, deniz memelilerinin Mb'sini fok ve diğer hayvanlardan ayırt etmek için sandviç formatına dayalı bir kolloidal altın immünokromatografik test şeridi üzerine uygulanır.

Deniz Memelileri Miyoglobin Tespiti için bir Kolloidal Altın merkezli İmmunokromatografik Testi Strip Gelişimi

Birden fazla tahlil ihtiyacı için basit üretim yaklaşımlarını araştırmak için, pamuklu malzemeden yapılmış sıvı emici bir kanal sistemi oluşturduk. Bu cihaz, nitrit, toplam protein ve ürobilinojenin klinik idrar tahlili için çoklu bir algılama platformu oluşturmak ve yanal akış tabanlı biyomedikal cihazları yaygın olarak etkileyen kontaminasyon sorunlarını çözmek için kullanıldı.

Pamuk Analitik Cihazlar imalatı

Bir mikrosıvısal Biyoalgılayıcı platform tasarlanmıştır ve çeşitli analitlerin hızlı ve hassas miktar için düşük maliyetli kuru film fotorezist teknolojisi kullanılarak imal edilmiştir. Bu tek kullanımlık sistem-küçük parça-immobilize enzim bağlı deneyleri elektrokimyasal göstergesi için stop-akış tekniği yoluyla sağlar.

Kuru zar elektrokimyasal mikrosıvısal Biyoalgılayıcı fotorezist tabanlı Platform: Cihaz imalat, On-chip tahlil hazırlama ve sistemin çalışması

Burada açıklamak için geliştirme ve insan örneklerinde tüm IFN-α türlerinden Ultra-duyarlı algılama sağlayan bir tek molekül dizi dijital ELISA yöntemi, doğrulama iletişim kuralı mevcut.

Geliştirme ve doğrulama vericiyi bir tek molekül dijital enzim bağlı Immunosorbent Assay insan Interferon-α için dizi

Mikroakışkanlar, tanısal testlerin geliştirilmesi için güçlü bir araçtır. Bununla birlikte, pahalı ekipman ve malzemelerin yanı sıra zahmetli imalat ve taşıma teknikleri de sıklıkla gereklidir. Burada, manyetik mikro ve nanopartikül bazlı immünotahliller için akrilik bir mikroakışkan cihazın üretim protokolünü düşük maliyetli ve kullanımı kolay bir ortamda detaylandırıyoruz.

Manyetik Nanopartikül Bazlı İmmünoassaylar için Kademeli Bir Kısıtlama ile Mikroakışkan Akrilik Cihazın Bilgisayar Sayısal Kontrol Mikrofrezelenmesi

Acil dang humması tanı ihtiyaçlarını ele alarak, burada klinik serum/kan örneklerinde Dang NS1 antijen konsantrasyonunu ölçmek için akıllı telefon uygulamasına entegre bir Dang NS1 Kağıt Tabanlı Analitik Cihazı (DEN-NS1-PAD) tanıtıyoruz. Bu yenilik, kaynakları sınırlı olanlar da dahil olmak üzere çeşitli sağlık hizmeti ortamlarında klinik karar vermeye yardımcı olarak dang humması yönetimini geliştirir.

Dang NS1 Antijeninin Kolorimetrik ve Kantitatif Tespiti için Akıllı Telefon Uygulaması ile Birleştirilmiş Taşınabilir Kağıt Tabanlı İmmünoassay

Bu protokol, tümörle ilişkili proteaz aktivitelerinin ex vivo analizi yoluyla bakım noktası kanser teşhisini mümkün kılan bir CRISPR-Cas aracılı, multianalit sentetik idrar biyobelirteç testini açıklar.

Taşınabilir Teşhis için CRISPR-Cas Aracılı Multianalit Sentetik İdrar Biyobelirteç Testi

Burada, kuantum nokta nanoboncukların (QDNB) hazırlanması ve QDNB bazlı yanal akış immünoassay şeritleri kullanılarak hastalık biyobelirteçlerinin tespiti için bir protokol açıklıyoruz. Test sonuçları, UV ışığı aydınlatması altında kalitatif olarak değerlendirilebilir ve 15 dakika içinde bir floresan şerit okuyucu kullanılarak kantitatif olarak ölçülebilir.

Kuantum Noktaları Nano Boncuklara Dayalı Floresan Yanal Akış İmmünoassay

Keşfedin koloidal altın sentezi ve immünokromatografik şerit montajı için detaylı protokol. Kloroaurik asit ve sodyum sitrat kullanarak hızlı tanı testleri geliştirin. Bu yöntem araştırmacılara güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sunar.

Küçük Molekül Bileşiklerinin Hızlı ve Nicel Tespiti için Yanal Akış İmmünokromatografik Şeridinin Geliştirilmesi

Daha fazla video keşfet