Epilepsinin Fare Modellerinde Isıya Bağlı Nöbetler İçin Davranışsal Bir Ekran

Yöntemin amacı, fare modellerinde hipertermi veya ısıya bağlı nöbetleri taramaktır. Protokol, yüksek vücut sıcaklığının nöbetlere yol açıp açmadığını belirlemek için vücut sıcaklığının sürekli izlenmesi ile özel olarak inşa edilmiş bir odanın kullanımını açıklar.

GEFS+mutasyonlar hastalarda ateşli nöbetlere neden olur. GEFS + farelerde hipotermiye bağlı nöbetleri inceleme yeteneği, spesifik mutasyonlar ve nöbet profili arasındaki ilişkiyi incelememizi sağlar. Dijital sıcaklık kontrolörü, ısıtma kutusundaki sıcaklık gradyanının tekrarlanabilir bir şekilde ayarlanmasına yardımcı olur.

Böylece, fare vücut ısısı yavaş ve sabit bir oranda arttırılabilir. Bu protokol, ateşli nöbetleri azaltmak veya ortadan kaldırmak için kullanılabilecek ilaçlar veya diyet kısıtlamaları gibi potansiyel tedavileri tanımlamak için kullanılabilir. Rektal sıcaklık probunu yaralanmadan fareye yerleştirmek için, fareyi kısaca uyuşturmanızı ve rektal probun ucunu yağlamanızı öneririz.

Fare ısı odasını güç açma düğmesiyle açarak başlayın ve ardından ısı açma düğmesine basın. Dijital sıcaklık kontrol cihazındaki tuş takımını kullanarak, ısı odasının sıcaklığını 50 santigrat dereceye ayarlayın. Isı odasının zeminini koçan yataklarıyla hizalayın.

Isı odasının önüne bir video kayıt kamerası takın. 140 milimetre çapında bir Petri kabını kalın kağıt mendil tabakalarıyla hizalayın ve soğutma yastığı olarak kullanılmak üzere buzun üzerine yerleştirin. Tarama testi için, farenin vücut ağırlığının 15 gram veya daha fazla olduğundan emin olun.

Prosedüre başlamadan önce, farenin bir ayak parmağı sıkışmasıyla tamamen uyuşturulduğunu doğrulayın. Rektal sıcaklık probunun metal ucunu bir yağlayıcı ile kaplayın ve yavaşça fareye yerleştirin. Rektal probu farenin kuyruğuna bantla sabitleyin.

Fareyi koçanı yataklarıyla kaplı yeni bir kurtarma kafesine yerleştirin. Bir zamanlayıcı başlatın ve çekirdek vücut sıcaklığını izlerken fareyi beş dakika boyunca gözlemleyin, fare anesteziden tamamen iyileşene ve sıcaklık 35 ila 36 santigrat derecede stabilize olana kadar. Beş dakikanın sonunda, farenin vücut sıcaklığını sıfır dakikadaki ilk vücut sıcaklığı olarak not edin.

Deney denemesini başlatmak için fareyi hızlı bir şekilde önceden ısıtılmış fare ısı odasının zeminine aktarın. Fare önceden ısıtılmış fare odasına yerleştirildikten sonra, kamerayı ve kronometreyi başlatın, ısı odasının sıcaklığını düzenli aralıklarla artırın, böylece farenin vücut sıcaklığı dakikada 25, 2,5 santigrat derece oranında artar. Deney süresince farenin vücut sıcaklığını bir dakikalık aralıklarla kaydetmeye başlayın.

9,5 dakikada, ısı odasının sıcaklığını 10. dakikada 55 santigrat derecede stabilize etmek için ısı odasının sıcaklığını 55 santigrat dereceye ayarlayın. Benzer şekilde, ısı odasının 20. dakikaya kadar 60 santigrat dereceye kadar sabit bir sıcaklığını elde edin. Her nöbet tarama denemesi 30 dakika sürer.

Fare bir nöbet geçirirse, nöbet sırasında farenin vücut sıcaklığını nöbet eşiği sıcaklığı olarak kaydedin. Fare tarafından görüntülenen nöbet davranışı özelliklerini not alın, ardından fareyi odadan hızlıca alın ve soğutma pedine yerleştirin. Bir fare 30 dakikalık gözlem süresi içinde ısıya bağlı nöbetler yaşamazsa veya farenin vücut ısısı 44 santigrat dereceye ulaşırsa, fareyi soğutma yastığının üzerine yerleştirin.

Farenin vücut ısısı 36 ila 37 santigrat dereceye düştüğünde, fareyi bir kurtarma kafesine aktarın. Rektal probu fareden çıkarmak için, fare kuyruğu ile rektal prob teli arasındaki bandı dikkatlice kesin. Rektal probun metal ucunu %70 etanol ile silin ve temizleyin.

Ev kafesine geri döndürmeden önce iyileşene kadar fareyi gözlemleyin. Farenin durumunu izlemeye devam edin. Deneme denemesinin sonunu işaretleyin.

Fare ısı odasının sıcaklığını 50 santigrat dereceye sıfırlayın ve bir sonraki tahlilden önce dengelenmesine izin verin. Isı nöbeti testinde, farelerin ortalama vücut ısısı, ısıtma protokolü kullanılarak her dakika kaydedildi ve vücut ısısının zaman içindeki değişim hızı değerlendirildi. İlgili genetik arka planlarda, heterozigot mutant ve vahşi tip fareler arasında vücut ısısı değişim oranında bir fark yoktu.

Farelerin deney ve kontrol grupları, vücut ısısında periyodik bir artışa maruz kaldıklarında farklı davranışlar sergilediler. 129X1 veya B6NJ genetik geçmişinden gelen tüm heterozigot mutant fareler, ısıya bağlı nöbetler sergiledi. 129X1 zenginleştirilmiş arka plandaki vahşi tip farelerin hiçbiri nöbet geçirmezken, nöbete duyarlı B6NJ arka planındaki farelerin sadece üçte biri nöbet gösterdi.

129X1 mutant farelerin ortalama nöbet eşiği sıcaklığı, B6NJ farelerde görülen ortalama nöbet eşiği sıcaklığından anlamlı olarak farklı değildi. Isıya bağlı nöbetler gösteren B6NJ vahşi tip farelerin üçte biri, B6NJ heterozigot mutant farelerden önemli ölçüde daha yüksek bir nöbet eşiği sıcaklığına sahipti. Nöbetlerin şiddeti, modifiye Racine ölçeği kullanılarak ölçüldü.

129X1 zenginleştirilmiş arka planda heterozigot mutant farelerin maksimum Racine skoru, B6NJ genetik arka planındaki heterozigot mutant farelerden anlamlı olarak farklı değildi. Isıtma protokolünü ayarlarken, lütfen fare vücut sıcaklığının dakikada 25 santigrat dereceden daha hızlı bir oranda artmadığından emin olun, aksi takdirde hayvanın sağlığına zararlı olabilir. Isıtma protokolünü eşzamanlı EEG kayıtlarıyla birleştirmek çok havalı olurdu, bu da farklı beyin aktivitesi kalıplarını farklı nöbet davranışı türleriyle ilişkilendirmemize izin verirdi.