Name: Preklinik Bir Baş Ağrısı Modeli Olarak Farelerde Dural Stimülasyon ve Periorbital von Frey Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Öğrenin farelerde dural stimülasyon ve periorbital von Frey testi ile migren benzeri davranışları incelemeyi. Bu yöntem, dura mater üzerine minimal invaziv madde uygulaması ve yüz hipersensitivitesi ölçümü sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NS104200 ve NS072204 to GD) tarafından desteklenmiştir.

Tüm prosedürler, Dallas'taki Teksas Üniversitesi'ndeki kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin önceden onayı ile gerçekleştirildi. Bu çalışmada 6-8 haftalık ICR (CD-1) (30-35 g) ve C57/BL6 (25-30 g) fareler kullanıldı.
1. Dural demlik
<ol><li>Ticari olarak temin edilebilen bir iç kanülü değiştirerek fare infüzörlerini ve tek taraflı enjeksiyonlar için infüzer'ı, ayarlanabilir ve iç çapı (I.D.) 0,18 mm ve dış çapı (O.D.) 0,35 mm olan 28 G kılavuz kanülün içine yerleştirilen/altına yerleştirilen/uzatılan metalik olmayan kaynaşmış silika plastik kapakla değiştirin (Şekil 1A).</li>
	<li>İnfüze üzerindeki kaynaşmış silika plastik kapağı 0,6 mm uzunluğa ayarlamak için bir kumpas veya başka bir ölçüm cihazı kullanın; demlik ucundan silika plastik kapağın kenarına kadar ölçülür.<ol>
<li>Plastik kapağı ayarlarken demliği bükmemeye veya donuklaştırmamaya dikkat edin.</li>
		<li>Daha önce dural enjeksiyonlar için kullanılmamış diğer fare suşları için, uzunluğu 0,6 mm'ye ayarlayarak ve mürekkep veya boya ile pilot enjeksiyonlar yaparak, demlik uzunluğunu, boyanın beyinde veya kafatasında değil, yalnızca dura materde olduğu gözlemlenene kadar ayarlayarak optimum demlik uzunluğunu belirleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ayarlanan demlik makinesinin uzun ucunu (veya 0,6 mm olarak ölçülmeyen ucunu) plastik boruya (pompa borusu, 2 stop, ID, 0,19 mm, uzunluk 406 mm) takın.<ol>
<li>5 μL'lik bir hacmi tutmak için yeterli hat olduğundan emin olmak için boruyu minimum 8 inç uzunluğa kesin.</li>
		<li>Borunun metal kısmı ve demlik üzerinde bulunan plastik tıpanın üstünü kapladığından emin olun. Bu, hava kabarcıklarının hatta birikmesini önlemeye yardımcı olacaktır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Borunun diğer ucunu 10 μL'lik bir cam mikroşırıngaya (gaz geçirmez; çimentolu iğne; 10 mm projeksiyonlu 21 G) takın, tekrar şırınganın metal kısmı üzerinde sıkı bir sızdırmazlık olduğundan emin olun (Şekil 1A).</li>
	<li>Hat bağlandıktan sonra, şırıngayı 5 μL fosfat tamponlu salin (PBS), sentetik geçiş sıvısı (SIF) veya hava kabarcıklarının oluşmasını önlemek için tercih edilen diğer araçlarla doldurun.<ol>
<li>Çizgide hava kabarcıkları gözlenirse, kabarcıklar dağılana kadar hattı araçla doldurun. NOT: Şırıngayı hatta takmadan önce araçla doldurmak ve ardından bağlandıktan sonra sıvıyı hattan itmek yardımcı olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hat aracın 5 μL'si ile doldurulduktan ve verimli bir şekilde çalıştıktan sonra, ilacın / çözeltinin 5 μL'sini Hamilton şırıngasına yükleyin (bu tekniği öğreniyor veya uyguluyorsanız ilaca / çözeltiye alternatif olarak mürekkep veya boya kullanılabilir).<ol>
<li>Dura üzerine uygulanan tüm araç çözeltilerinin pH 7.4'te tutulduğundan ve 310 ozmolaliteye kadar ölçüldüğünden emin olun. Bu, asit algılayan iyon kanallarının ve dura içindeki diğer ozmosentisit kanalların potansiyel aktivasyonunu azaltır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beyne sızmaya neden olmayan farelerde test edilen maksimum hacim kabaca 10 μL'dir. Bu hacimli enjeksiyonlardan sonraki davranışsal etkiler test edilmemiştir. Bu nedenle, çözeltinin sadece 5 μL'sini dura üzerine uygulayın. NOT: Bu gözlemler, 6-8 haftalık CD1/ICR farelerinin fare suşlarına/yaşlarına/ağırlıklarına dayanmaktadır.</li>
</ol>2. Dural enjeksiyonları
<ol><li>Şırınga hazırlandıktan ve ilaç yüklendikten sonra, bir fareyi karnına düz bir şekilde yerleştirin ve burun konisi yoluyla 0.5-1 L / dak'lık bir oksijen akış hızına sahip% 3'lük kısa bir izofluran altında anestezi uygulayın.<ol>
<li>Fare artık bir tutam refleksi göstermedikten sonra, anesteziyi ayarlayın ve% 1.5'lik bir izofluranda sürdürün.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anestezi uygulandıktan sonra, gözlere steril oftalmik merhem uygulayın ve hayvanın kafasını tıraş edin, ardından cildi povidon-iyot ve etanol ile dezenfekte edin. Bunu takiben, başarılı bir enjeksiyon için elverişli bir pozisyona geçin.</li>
	<li>Hayvanın kafasını sabitlemek için bir elinizi kullanın ve demleyiciyi diğer elinizle tutun.</li>
	<li>Sagital ve lambdoidal sütürlerin farenin kafatası üzerindeki birleşme noktasını dikkatlice araştırın ve bulun (Şekil 1B, C).<ol>
<li>Bu gizli kavşağı deriden bulmak için, kafatasının topografik özelliklerini kullanın ve demlik ile birleşmenin genel konumunu nazikçe araştırın.</li>
		<li>İnfüzörü kafatası boyunca yeniden konumlandırarak ve tam yeri hissederek kavşağın konumunu doğrulayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dikiş yerleştirildikten ve demleyici yerine oturduğunda, demleyiciyi deriden delene ve plastik tıpaya kadar kavşağa düşene kadar çok yavaş ve nazikçe ileri geri sallayın. NOT: İnfüze makinesinin 0,6 mm'lik ucunun tamamını bağlantıya yerleştirdiğinizden emin olun.</li>
	<li>Doğruluğu doğrulamak için, enjeksiyon çözeltisi olarak mürekkep veya boya kullanın ve fareyi ötenazi yapın ve kafasını açın.<ol>
<li>Dura mater içindeki boyayı görselleştirmek için kafatası kapağını çıkarın (Şekil 1C). NOT: Beyinde veya kafatasının dış kısmında boya gözlenmemelidir. Benzer şekilde, herhangi bir deneydeki fareler, enjeksiyonun doğruluğunu doğrulamak ve dura materin bütünlüğünün zarar görmediğinden emin olmak için ölüm sonrası kontrol edilmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Enjeksiyonu takiben, fareyi anesteziden çıkarın, bilincini yeniden kazanmasını bekleyin ve ardından kafesine geri dönün veya istenen tahlillere başlamak için bir test odasına yerleştirin. NOT: Herhangi bir davranış deneyi yapmadan önce farenin anesteziden en az 30 dakika iyileşmesine izin verin.</li>
</ol>3. Periorbital von Frey
<ol><li>Çalışmaya yaklaşık 16-20 fareden oluşan bir kohort ile başlayın.</li>
	<li>Alışkanlıktan bir gün önce, her fareyi en az 5 dakika boyunca tutun.</li>
	<li>İşlemden yaklaşık 24 saat sonra, fareleri test odası koşullarına ve von Frey test cihazına alıştırın (Şekil 2A). NOT: Akrilik test cihazı, yaklaşık 3 inç x 3,5 inç x 5 inç (G x Y x D) olan kapaklı ayrı bölmelerden oluşur ve 19 G kare galvanizli çelik örgü telinde 0,25 ile bağlanmış alüminyum standlarla desteklenir.<ol>
<li>Fareleri, kokusuz ve polietilen veya parafin mumu içermeyen yatay olarak yerleştirilmiş 4 oz'luk beyaz bir kağıt kabın içine yerleştirin. NOT: Bu tip bardaklar tercih edilir, çünkü yutulduğunda farelerde gastrointestinal rahatsızlığı azaltır (Şekil 2B).</li>
	</ol></li>
	<li>Hayvanlar kendi odalarındayken, hayvanları sakinleştirmek ve hayvanlara gereksiz stresi önlemek için her farenin ayrı odasına normal chow diyetinin bir peletini yerleştirin. Bunu herhangi bir von Frey davranış testinden önce 3 gün boyunca yapın.<ol>
<li>Farelerin odaya her girdiğinde yiyeceğe erişimin olduğundan emin olun.</li>
		<li>Her hayvanı numaralandırın ve test rafındaki aynı alana atayın. Her hayvanın test ortamına alışmasını sağlamak için fareyi test süresinin her günü aynı kaba yerleştirin. NOT: Fareler bardakları kemirecek ve daha sonra bardakları yok edecektir. Böyle bir durumda, bardağı değiştirin ve karşılık gelen fare numarasıyla etiketleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>İlk 3 günlük alışkanlığı takiben, fareleri bireysel odalarına yerleştirin.<ol>
<li>Farelerin sakinleşmesine izin vermek ve daha sonra test edilmesi daha kolay olması için hayvanların herhangi bir von Frey testinden önce test odasına ve odalara en az 1 saat alışmasına izin verin.</li>
	</ol></li>
	<li>Test günü odaya alıştıktan sonra, bir fareyi fincanının içindeyken ilgili odasından çıkarın.<ol>
<li>Bardağı yatay konumda tutun, böylece ağırlıklarını eşit olarak dağıtmaya yardımcı olmak için fare hem ön pençelerde hem de arka pençelerde olur. NOT: Eşit olmayan ağırlık dağılımı hayvanların tepkilerini değiştirebilir ve hatta hayvanların yanıt vermesini engelleyebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Bardağı farenin içindeyken, emici pedin üzerindeki test rafının altındaki masanın üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Periorbital von Frey testi için, 0.07 g von Frey filamentini doğrudan yüzün ortasına ve gözlerin arasına yerleştirin.</li>
	<li>Von Frey saçının "C" şeklinde bir formasyona bükülmesine neden olmak için filament üzerine yeterli basınç uygulayın.<ol>
<li>Bölge ile teması en az 3 sn ancak en fazla 5 sn veya fare başını çekene ve pençesiyle filamente kaydırana kadar sürdürün. NOT: Eğer filament kayarsa veya filamentin ucundan daha fazlası test sırasında hayvana dokunursa, herhangi bir yanıt sayılmamalıdır. Bu tepkiler, farklı mekanoreseptörler tarafından aktive edilen fırçaya yanıt olarak olabilir ve bu nedenle doğru sonuçları yansıtmayabilir.</li>
		<li>Von Frey filamentlerini Dixon "yukarı-aşağı" yöntemi 22,23'e göre uygulayın.<ol>
<li>Başlangıçta, 0.07 g ağırlığa sahip von Frey filamentini uygulayın. Bu çalışmada mümkün olan en düşük filament ve test edilen en yüksek filament, sırasıyla 0.008 g ve 0.6 g ağırlığa sahip filamentlerdir.</li>
			<li>Bu testi yapmak için 0,008 g, 0,02 g, 0,04 g, 0,07 g, 0,16 g, 0,4 g ve 0,6 g ağırlığındaki filamentleri kullanın.</li>
			<li>Bu yöntemde, bir hayvan filamente bir tepki göstermezse, bir sonraki yüksek gram ağırlığının filamentini uygulayın.</li>
			<li>Fare bir filamente yanıt veriyorsa, farenin o filamente yanıt verdiğini düşünün. Bu durumda, bir sonraki düşük gram ağırlığın filamentini uygulayın.</li>
			<li>İlk yanıttan sonra hayvan 4 kez test edilene veya hayvanın tahlilde test edilen herhangi bir filamente yanıt vermediği belirlenene kadar bu kalıbı tekrarlayın. NOT: Koldan veya bilekten kaynaklanan herhangi bir ek basınç uygulamaktan kaçının. Filamentin uygulanmasını uygulamak için bir ölçek kullanılabilir.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>4. Temel para çekme eşiklerinin test edilmesi
<ol><li>Bir deneye dahil edilmeden önce, farelerin 0.5-0.6 g arasında bir temel çekilme eşiğine ulaştığından emin olun.<ol>
<li>Bir fare, adım 3.9.2.2'de belirtilen seride test edilen herhangi bir filamente (0,07 g, 0,16 g, 0,4 g ve 0,6 g) yanıt vermezse taban çizgisine ulaşır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temel geri çekilme eşikleri oluştururken fareleri günlük olarak test edin.<ol>
<li>Test, hayvanların test koşullarına ve von Frey filamentlerinin basıncına alışmalarını sağlar.</li>
		<li>Testin üçüncü gününden sonra fareler hala aşırı derecede aşırı duyarlıysa, tekrar test etmeden önce 1 veya 2 gün beklemeyi deneyin. NOT: Test günleri arasında çok fazla zaman olması, hayvanın periorbital bölgedeki filamentin ağırlığına uyum sağlayamamasına ve böylece hedeflenen geri çekilme eşiğine ulaşmamasına neden olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hangi hayvanların bir deney için dahil edilme kriterlerini karşılamadığını belirlemeden önce fareleri yaklaşık 7 gün boyunca test edin. NOT: Farelerin yaklaşık% 70'i hedeflenen temel seviyeye ulaşacaktır.<ol>
<li>Dural stimülasyondan önce, 0,5-0,6 gram veya daha yüksek bir temel değere ulaşmamış fareyi hariç tutmak için taban çizgisi verilerini analiz edin.</li>
		<li>Dışlamadan sonra, kalan her fareyi rastgele bir test grubuna atayın. Bunu, bir bardaktan çizim yaparak veya sayıları bir gruba rastgele sıralamak için bir elektronik tabloya bir komut dosyası yazarak elde edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Von Frey sonuçlarının analizi
<ol><li>Yanıtlar dizisi elde edildikten sonra, delta, k değeri, %50 eşiği ve daha önce yayınlanan yöntemlere göre gram cinsinden geri çekilme eşiğini belirleyin24.</li>
	<li>Bu formülü kullanarak para çekme eşiğini hesaplayın WT = 10 (x * F + B), burada WT = çekme eşiği, F = Chaplan yöntemiyle hesaplanan pençe çekme eşiği ve B = kütüğün doğrusal regresyonu (bükme kuvveti) = x * Filament sayısı + B.</li>
	<li>Verileri %50 geri çekilme eşiği veya gram cinsinden ortalama para çekme eşiği olarak çizin.</li>
</ol>

<ol><li>GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+incidence%2C+prevalence%2C+and+years+lived+with+disability+for+328+diseases+and+injuries+for+195+countries%2C+1990-2016%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).</li>
<li>Woldeamanuel, Y. W., Cowan, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine+affects+1+in+10+people+worldwide+featuring+recent+rise%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+community-based+studies+involving+6+million+participants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Migraine affects 1 in 10 people worldwide featuring recent rise: A systematic review and meta-analysis of community-based studies involving 6 million participants.</a> Journal of the Neurological Sciences. 372, 307-315 (2017).</li>
<li>Burch, R. C., Loder, S., Loder, E., Smitherman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+and+burden+of+migraine+and+severe+headache+in+the+United+States%3A+updated+statistics+from+government+health+surveillance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Headache%22%5BJournal%5D)">The prevalence and burden of migraine and severe headache in the United States: updated statistics from government health surveillance studies.</a> Headache. 55 (1), 21-34 (2015).</li>
<li>Ashina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Migraine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1866-1876 (2020).</li>
<li>Ashina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%3A+integrated+approaches+to+clinical+management+and+emerging+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Migraine: integrated approaches to clinical management and emerging treatments.</a> Lancet. 397 (10283), 1505-1518 (2021).</li>
<li>Jacobs, B., Dussor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+contributions+to+migraine%3A+Moving+beyond+vasodilation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurovascular contributions to migraine: Moving beyond vasodilation.</a> Neuroscience. 338, 130-144 (2016).</li>
<li>Koyuncu Irmak, D., Kilinc, E., Tore, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shared+Fate+of+Meningeal+Mast+Cells+and+Sensory+Neurons+in+Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Shared Fate of Meningeal Mast Cells and Sensory Neurons in Migraine.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 136(2019).</li>
<li>Levy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine+pain%2C+meningeal+inflammation%2C+and+mast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain+and+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Migraine pain, meningeal inflammation, and mast cells.</a> Current Pain and Headache Reports. 13 (3), 237-240 (2009).</li>
<li>Levy, D., Labastida-Ramirez, A., MaassenVanDenBrink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+meningeal+and+cerebral+vascular+function+underlying+migraine+headache%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Current understanding of meningeal and cerebral vascular function underlying migraine headache.</a> Cephalalgia. 39 (13), 1606-1622 (2019).</li>
<li>Phebus, L. A., Johnson, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+inflammation+model+of+migraine+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dural inflammation model of migraine pain.</a> Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 9, Unit 9.1 (2001).</li>
<li>Fried, N. T., Maxwell, C. R., Elliott, M. B., Oshinsky, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+disruption+of+the+blood-brain+barrier+following+repeated+inflammatory+dural+stimulation+in+a+rat+model+of+chronic+trigeminal+allodynia%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Region-specific disruption of the blood-brain barrier following repeated inflammatory dural stimulation in a rat model of chronic trigeminal allodynia.</a> Cephalalgia. 38 (4), 674-689 (2018).</li>
<li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+calcitonin+gene-related+peptide+produces+female-specific+responses+in+rodent+migraine+models%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dural calcitonin gene-related peptide produces female-specific responses in rodent migraine models.</a> The Journal of Neuroscience. 39 (22), 4323-4331 (2019).</li>
<li>Burgos-Vega, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+dural+stimulation+in+mice%3A+A+novel+preclinical+model+of+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Non-invasive dural stimulation in mice: A novel preclinical model of migraine.</a> Cephalalgia. 39 (1), 123-134 (2019).</li>
<li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meningeal+CGRP-Prolactin+interaction+evokes+female-specific+migraine+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Meningeal CGRP-Prolactin interaction evokes female-specific migraine behavior.</a> Annals of Neurology. 89 (6), 1129-1144 (2021).</li>
<li>Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+used+to+evaluate+pain+behaviors+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Methods used to evaluate pain behaviors in rodents.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284(2017).</li>
<li>Lipton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+allodynia+in+the+migraine+population%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cutaneous allodynia in the migraine population.</a> Annals of Neurology. 63 (2), 148-158 (2008).</li>
<li>Goadsby, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%2C+allodynia%2C+sensitisation+and+all+of+that%5BTitle%5D)+AND+%22European+Neurology%22%5BJournal%5D)">Migraine, allodynia, sensitisation and all of that.</a> European Neurology. 53, Suppl 1 10-16 (2005).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nature Methods. 7 (6), 447-449 (2010).</li>
<li>Mogil, J. S., Pang, D. S. J., Silva Dutra, G. G., Chambers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+and+use+of+facial+grimace+scales+for+pain+measurement+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The development and use of facial grimace scales for pain measurement in animals.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 116, 480-493 (2020).</li>
<li>Vuralli, D., Wattiez, A. S., Russo, A. F., Bolay, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+cognitive+animal+models+in+headache+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Headache+and+Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral and cognitive animal models in headache research.</a> The Journal of Headache and Pain. 20 (1), 11(2019).</li>
<li>Mason, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+migraine-like+photophobic+behavior+in+mice+by+both+peripheral+and+central+CGRP+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction of migraine-like photophobic behavior in mice by both peripheral and central CGRP mechanisms.</a> The journal of Neuroscience. 37 (1), 204-216 (2017).</li>
<li>Dixon, W. J., Mood, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+obtaining+and+analyzing+sensitivity+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">A method for obtaining and analyzing sensitivity data.</a> The Journal of the American Statistical Association. 43 (241), 109-126 (1948).</li>
<li>Dixon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+up-and-down+method+for+small+samples%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">The up-and-down method for small samples.</a> The Journal of the American Statistical Association. 60, (1965).</li>
<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Molecular Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Ramachandran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+inflammation+and+its+role+in+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">Neurogenic inflammation and its role in migraine.</a> Seminars in Immunopathology. 40 (3), 301-314 (2018).</li>
<li>Edvinsson, L., Haanes, K. A., Warfvinge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+inflammation+have+a+role+in+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Does inflammation have a role in migraine.</a> Nature Reviews Neurology. 15 (8), 483-490 (2019).</li>
<li>Stokely, M. E., Orr, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+effects+of+calvarial+damage+on+dural+mast+cells%2C+pial+vascular+permeability%2C+and+cerebral+cortical+histamine+levels+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Acute effects of calvarial damage on dural mast cells, pial vascular permeability, and cerebral cortical histamine levels in rats and mice.</a> Journal of Neurotrauma. 25 (1), 52-61 (2008).</li>
<li>Theoharides, T. C., Donelan, J., Kandere-Grzybowska, K., Konstantinidou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+migraine+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in migraine pathophysiology.</a> Brain Research Reviews. 49 (1), 65-76 (2005).</li>
<li>Conti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+in+migraine%3A+Role+of+mast+cells+and+pro-inflammatory+and+anti-inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Progression in migraine: Role of mast cells and pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines.</a> European Journal of Pharmacology. 844, 87-94 (2019).</li>
<li>Rea, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripherally+administered+calcitonin+gene-related+peptide+induces+spontaneous+pain+in+mice%3A+implications+for+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripherally administered calcitonin gene-related peptide induces spontaneous pain in mice: implications for migraine.</a> Pain. 159 (11), 2306-2317 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Dura'daki lokal nosiseptif sistemdeki uyumsuz değişiklikler, doku hasarı olmamasına rağmen migren ataklarının baş ağrısı fazına önemli bir katkıda bulunur25,26. Burada çalışma, duranın minimal invaziv stimülasyonunun yüz dokunsal aşırı duyarlılığını indükleyebileceği bir yöntem sunmaktadır. Dural nosiseptör aktivasyonunda rol oynayan mekanizmaların ve olayların kafatasına ve dokulara zarar vermeden aydınlatılması, migren mekanizmalarını klinik öncesi bir modelde ...

Migren ağrısı dünya çapında önemli bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir. Dünya Sağlık Örgütü, onu dünyadaki en yaygın altıncı hastalık olarak sıralamakta, Dünya nüfusunun% 15'inden biraz daha azını etkilemektedir1 ve toplum üzerinde önemli bir sosyoekonomik yüke neden olmaktadır 2,3. Tedavi seçenekleri ve etkinlikleri yetersiz kalmıştır ve sadece semptomatik rahatlama sağlar ve migren oluşumunun altında yatan patofizyolojik olayları önemli ölçüde değiştirmez 4,5. Tedavi başarısının olmaması, migrenin patolojisi tam olarak anlaşılamayan ve sınırlı sayıda terapötik hedefe yol açan çok faktörlü bir bozukluk olmasından kaynaklanmaktadır. Migren, hayvan modellerinde tam olarak yakalanması da zordur, özellikle migren tanısının, aura, baş ağrısı, fotofobi ve allodinya gibi migren ayırt edici özellikleri ile deneyimlerini tanımlayan hastalarla sözlü iletişime dayanarak yapıldığı göz önüne alındığında. Bununla birlikte, migren tedavilerindeki son gelişmelerin şu anda klinik öncesi modeller tarafından iyi doğrulanmış birçok nörolojik durum için tedavilerden daha iyi performans gösterdiğini belirtmek önemlidir. Örneğin, kalsitonin geni ile ilişkili peptidi veya reseptörünü hedef alan monoklonal antikorlar ve küçük moleküller, migren hastalarının yaşam kalitesini iyileştirmede çok başarılı olmuştur ve migrenin klinik yönetimini potansiyel olarak dönüştürebilir. Bu bozukluğu anlamada ilerleme kaydedilmiş olsa da, henüz açıklığa kavuşturulması gereken çok şey olmaya devam ediyor.
Preklinik hayvan modellerine ve insan çalışmalarına dayanarak, migren baş ağrılarının, trigeminal ve üst servikal dorsal kök ganglionları 6,7,8,9,10 yoluyla sinyal veren meninkslerdeki nosiseptif liflerin anormal aktivasyonu ile başlatıldığı yaygın olarak kabul edilmektedir. Bu teoriye rağmen, birçok çalışma hala migrende altta yatan katkıda bulunan mekanizmaları anlamak için sistemik ilaç uygulamasını kullanmaktadır. İlaçların sistemik dozlanması anlayışımızı önemli ölçüde güçlendirmiş olsa da, bu bulgular hedef doku içindeki lokal eylemlerin migrende rol oynayıp oynamadığını doğrudan değerlendirmemektedir. Tersine, birkaç çalışma durayı uyarmak için bir yaklaşım benimsemiştir; Bununla birlikte, bu deneyler invaziv bir kraniyotomi yoluyla kanül implantasyonu ve uzatılmış iyileşme süreleri11,12 gerektirir. Bu sınırlamalar nedeniyle, kraniyotomi eksikliğinin cerrahi sonrası iyileşmeyi ortadan kaldırdığı ve uyanık hayvanlarda derhal test edilmesine izin verdiği durayı lokal olarak uyarmak için minimal invaziv bir yaklaşım geliştirdik12,13,14. Bu enjeksiyonlar hafif izofluran anestezisi altında gerçekleştirilir ve farelerde sagital ve lambdoid sütürlerin birleşme noktasında uygulanır.
Kemirgenlerde nosiseptif davranışsal yanıtları değerlendirmek için çeşitli yaklaşımlar geliştirilmiştir15. Kutanöz allodinya, migren hastalarının yaklaşık% 80'inde16,17 bildirilmiştir ve kemirgenlerde kullanım için potansiyel bir translasyonel son noktayı temsil etmektedir. Preklinik modellerde, von Frey filamentlerinin kemirgen pençesinin plantar bölgesine uygulanması, klinik öncesi migren modellerinde ağrı davranışlarını değerlendirmek için kullanılmıştır. Bu yaklaşımın birincil sınırlaması, sefalik bölgeyi test etmemesidir. Yüz buruşma skorlaması, ağrı uyaranlarının indüklenmesinden sonra yüz ifadelerini analiz ederek kemirgenlerde ağrı davranışlarını yakalamak için kullanılmıştır18,19. Bununla birlikte, sınırlamaları sadece akut uyaranlara verilen yanıtları yakalamayı ve kronik orofasiyal ağrı koşullarını içermez. Yüz bakımı ve azalmış yetiştirme de migrenin klinik öncesi modellerinde davranışsal yanıtların çıktıları olarak kabul edilir20,21. İlkinin sınırlamaları, ağrı tepkilerini normal rutin tımar ve kaşıntı gibi diğer duyumlardan ayırt etmede zorluğu içerir. İkincisi durumunda, yetiştirme davranışları tipik olarak kemirgenlerin yeni ortamlara girmesinden sonra hızla azalır. Bu davranışsal sonlanım noktalarının her biri, ağrı koşullarına katkıda bulunan çeşitli mekanizmaların anlaşılmasında değerli olmasına rağmen, migren gibi ağrı bozukluklarının klinik öncesi modellerinin, özellikle sefalik aşırı duyarlılık yanıtlarını yakalayan son noktaları içermesi için kritik bir ihtiyaç vardır. Dural stimülasyonu takiben periorbital derinin dokunsal aşırı duyarlılığının değerlendirilmesi, duyusal semptomların ağırlıklı olarak sefalik olduğu migrenlere katkıda bulunan mekanizmalar hakkında daha iyi bir fikir verebilecek bir yöntemdir. Burada, klinik öncesi bir migren modeli olarak fare durasına madde uygulamak için bir yöntem açıklıyoruz. Dural uygulamayı takiben, Dixon yukarı-aşağı yönteminde uygulanan kalibre edilmiş von Frey filamentlerini kullanarak periorbital dokunsal aşırı duyarlılığı test etmek için ayrıntılı bir yöntem de sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>4 oz Sıcak Kağıt Bardaklar</td><td>Seçim Kağıt Şirketi</td><td>5004W</td><td>https://www.webstaurantstore.com/choice-4-oz-white-poly-paper-hot-cup-case/5004W.html</td></tr><tr><td>Emici Alt Pedler</td><td>Fisherbrand</td><td>14-206-65</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-absorbent-underpads-8/p-306048</td></tr><tr><td>C313I/SPC Dahili 28 G kanül</td><td>P1 Teknolojileri (eski adıyla Plastics One)</td><td>8IC313ISPCXC</td><td>İç çap 18 mm, Dış Çap 35 mm</td></tr><tr><td>Gaz Geçirmez Model 1701 SN Şırıngalar</td><td>Hamilton</td><td>80008</td><td>https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80008</td></tr><tr><td>Ismatec Pompa Borusu, 0,19 mm</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-96460-10</td><td>https://www.coleparmer.com/i/ismatec-pump-tubing-2-stop-tygon-s3-e-lab-0-19-mm-id-12-pk/9646010</td></tr><tr><td>Tavuk telli stand</td><td>Özel</td><td></td><td>Galvanizli çelik tavuk teli boyutları 0,25 inçtir. x 19 gauge</td></tr><tr><td>Test Rafı, bireysel&nbsp; Odalar</td><td>Özel</td><td></td><td>Her oda, fareyi içermek için her fare ve kapaklar arasında bir bölmeye sahip olmalıdır. Odalar ayrıca 4 oz'luk bir kağıt bardak tutacak kadar büyük olmalıdır.</td></tr><tr><td>von Frey Filamentler Dokunma</td><td>testi/Çalmak</td><td>58011</td><td>https://www.stoeltingco.com/touch-test.html</td></tr></tbody></table>

preklinik bir baş ağrısı modeli olarak farelerde dural stimülasyon ve periorbital von frey testi

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Dura mater, araknoid ve pia mater'den oluşan kraniyal meninkslerin öncelikle sinir sistemi için yapısal fonksiyonlara hizmet ettiği düşünülmektedir. Örneğin, beyni kafatasından korurlar ve korteksin vasküler ve nöronal beslemesini demirlerler / düzenlerler. Bununla birlikte, meninksler, migren sırasında yaşanan ağrının lokal steril inflamasyona ve ardından lokal nosiseptif afferentlerin aktivasyonuna atfedildiği migren gibi sinir sistemi bozukluklarında da rol oynar. Meninkslerdeki tabakalardan dura mater, migrenlerin patofizyolojisinde özellikle ilgi çekicidir. Yüksek oranda vaskülarize olur, lokal nosiseptif nöronları barındırır ve bağışıklık hücreleri gibi çeşitli yerleşik hücrelere ev sahipliği yapar. Lokal meningeal mikroortamdaki ince değişiklikler, dural perivasküler nosiseptörlerin aktivasyonuna ve sensitizasyonuna yol açarak migren ağrısına yol açabilir. Çalışmalar, dural afferentlerin in vivo elektrofizyoloji, görüntüleme teknikleri veya davranışsal modeller kullanılarak nasıl aktive edildiğini / hassaslaştığını ele almaya çalışmıştır, ancak bunlar genellikle çok invaziv ameliyatlar gerektirir. Bu protokol, farelerde dura mater üzerindeki bileşiklerin nispeten invaziv olmayan bir şekilde uygulanması için bir yöntem ve dural stimülasyonu takiben periorbital von Frey testini kullanarak baş ağrısı benzeri dokunsal duyarlılığı ölçmek için uygun bir yöntem sunmaktadır. Bu yöntem, dura ve kafatasının bütünlüğünü korur ve kaynaşmamış sagital ve lambdoid sütürlerin birleşme noktasında 0.65 mm'lik modifiye edilmiş bir kanül yoluyla maddeler enjekte ederek invaziv tekniklerden kaynaklanan kafa karıştırıcı etkileri azaltır. Bu klinik öncesi model, araştırmacıların çok çeşitli dural uyaranları ve nosiseptör aktivasyonu, bağışıklık hücresi aktivasyonu, vasküler değişiklikler ve ağrı davranışları gibi migrenin patolojik ilerlemesindeki rollerini araştırmalarına izin verirken, kafatası ve meninkslere yaralanmayan koşulları koruyarak izin verecektir.

Bu enjeksiyon yöntemi, uyaranları farelerin durasına uygulamak için kullanılır, böylece daha sonra davranışsal testler yapılabilir. Bu modelle ölçülen en yaygın davranışsal çıktı, von Frey12,13,14 ile değerlendirilen kutanöz yüz aşırı duyarlılığıdır. Burada, bu modelin migren patolojisine cinsiyete özgü potansiyel katkıları değerlendirmek için nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz (Şekil 3).
<p...

Migrenin en önemli belirtisi şiddetli baş ağrısıdır ve bunun meninksleri innerve eden duyusal nöronlar tarafından aracılık ettiği varsayılmaktadır. Burada, yüz aşırı duyarlılığını bir çıktı olarak kullanırken, maddeleri duraya minimal invaziv bir şekilde lokal olarak uygulamak için bir yöntem sunuyoruz.

Preklinik Bir Baş Ağrısı Modeli Olarak Farelerde Dural Stimülasyon ve Periorbital von Frey Testi

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Meninkslerde doku hasarı olmadığında baş ağrısına katkıda bulunan hangi olaylar meydana gelir? Sıçanlarda dural stimülasyon modellerinin önceki kullanımından farklı olarak, genetiği değiştirilmiş farelerin kapsamlı kataloğunun kullanılmasına izin verir. Birincil mücadele, kafatasını enjektörle palpe ederek lambdoidal ve sagital sütürlerin kesişimini bulmak olacaktır.Başlamak için, piyasada satılan bir iç kanülü değiştirerek fare demleyicilerini oluşturun ve ayarlanabilir ve 28 gauge kılavuz kanülüne yerleştirilen kaynaşmış bir silika plastik kapakla demleyin. Demlik üzerindeki kaynaşmış silika plastik kapağı, demleyiciyi bükmeden ayarlamak için bir kumpas kullanın. Demlikayı, demlik ucundan silika plastik kapağın kenarına kadar ölçülen 6 milimetre uzunluğa ayarlayın.Diğer fare suşları için pilot enjeksiyonlar yapın ve uzunluğu dura mater'e tam olarak enjekte edecek şekilde ayarlayın. Ardından, beş mikrolitre hacmini tutmak için demlik makinenin uzun ucunu sekiz inç veya daha fazla plastik boruya takın. Hava kabarcıklarının hatta birikmesini önlemek için metal parçanın ve demlik üzerinde bulunan plastik tıpanın üst kısmının tam olarak kaplanmasını sağlarken tüpü yerleştirin.Daha son

dural-stimulation-periorbital-von-frey-testing-mice-as-preclinical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare beyninin işitsel uyaranları işleyen belirli bir bölgesindeki nöronal aktivitenin çalışmasını göstermektedir. Teknik, inhibe edici bir nörotransmisyon blokerinin uygulanmasını ve ilacın lokalize beyin bölgesine uygulanmasından önce ve sonra işitsel uyaranlara nöronal tepkilerin karşılaştırılmasını içerir.

İnhibitör Nörotransmitter Bloker Varlığında Uyanık Bir Farede İşitsel Nöronal Tepkilerin İncelenmesi

Bu çalışmada yazarlar, ilk kez, yeni bir rapor, 3D-Sürükleyici ve in vivo olarak bir hastanın beyninin μ-opioid sisteminde kendiliğinden bir migren krizi etkisinden dolayı etkileşimli nöronavigasyon (3D-IIN).

3D-nöronavigasyon<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Spontan migren sırasında Hasta Beyin sayesinde

Kemirgenler migren semptomlarını bildiremezler. Burada, migrenli hastalarda en yaygın ve rahatsız edici semptomlardan biri olan ışıktan kaçınmayı ölçmek için yönetilebilir bir test paradigmasını (açık / karanlık ve açık alan testleri) açıklıyoruz.

Farelerde Işıktan Kaçınma Kullanarak Migren Benzeri Davranışların İncelenmesi

Bu protokol, ex vivo kalsitonin genine bağlı peptid (CGRP) salınım modelini ve farmakolojik ajanların kemirgenlerde trigeminovasküler sistemden salınan CGRP miktarı üzerindeki etkisini ölçme stratejisini açıklamaktadır.

Eski Vivo Kemirgenlerde Trigeminovasküler Sistemden Kalsitonin Geni ile İlgili Peptitin Salınımı

Beyin elektriksel alan ölçümleri ve ilgili bir biyobelirteç-serebral kan akışı açısından ekstrakraniyal stimülasyon için doz-yanıt eğrilerini değerlendirmek için bir protokol tanımladık. Bu protokol beyne invaziv elektrot yerleştirilmesini içerdiğinden, kontrollü solunum yerine spontan solunum tercih edilerek genel anestezi gerekir.

Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi

Farelerde distal infraorbital sinirin kronik daralma yaralanması, devam eden ağrı ve allodinin belirtileri olan dokunsal stimülasyona (von Frey saç stimülasyonuna aşırı duyarlılık) yanıt olarak spontan davranışta (artmış yüz bakım aktivitesi) ve nosifensif davranışta değişikliklere neden olur ve trigeminal nöropatik ağrı için bir model görevi görür.

Trigeminal Nöropatik Ağrıyı İncelemek İçin Farelerde Distal İnfraorbital Sinirin (DIoN-CCI) Kronik Daralma Hasarı

Bu protokol, kapalı kafa travması (CHI) yöntemiyle indüklenen tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının (rmTBI) modifiye edilmiş bir fare modelini sunar. Yaklaşım, meninkslere maruz kalmanın yaygın olarak neden olduğu iltihabı azaltmak için inceltilmiş bir kafatası penceresi ve sıvı perküsyonunun yanı sıra kemirgenlerde rmTBI modellemesinde gelişmiş tekrarlanabilirlik ve doğruluk içerir.

İnceltilmiş kafatası penceresi ve sıvı perküsyonu içeren tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının modifiye edilmiş fare modeli

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

Bu protokol, zaman kilitlemeden nörofizyolojik önlemlere uyumlu bir şekilde kemirgenlerde otomatik göz şaşılığının zaman içinde izlenmesi için bir yöntem sağlar. Bu protokolün, migren gibi ağrı bozukluklarının mekanizmalarını inceleyen araştırmacılar için yararlı olması beklenmektedir.

Fare Ağrısı Çalışmalarında Zaman Senkronizasyonu Davranışı ve Beyin Dinamikleri için Otomatik Bir Şaşılık Yöntemi

Bu makalede, TMS ve fMRI beyin stimülasyonu varsayılan ağ üzerinde etkilerini incelemek için kombinasyonu ile ilgili metodoloji ve düşünceler inceleyin.

Varsayılan Modu Ağ inceleyin Transkraniyal Manyetik Uyarım ve fMRI birleştiren

Öğrenin farelerde dural stimülasyon ve periorbital von Frey testi ile migren benzeri davranışları incelemeyi. Bu yöntem, dura mater üzerine minimal invaziv madde uygulaması ve yüz hipersensitivitesi ölçümü sağlar.

Preklinik Bir Baş Ağrısı Modeli Olarak Farelerde Dural Stimülasyon ve Periorbital von Frey Testi

Daha fazla video keşfet