Arabidopsis thaliana'daki Kloroplast Hareketini Araştırmak için Yaprak İletiminde Değişiklikleri Kullanma

Bu yöntem, türlere, çevreye ve mutasyonlara bağlı olarak yaprakların farklı derecelerde ışık emilimini etkileyen kloroplast hareketi için bir proxy olarak yaprakların ışık iletimindeki değişiklikleri ölçer. Bu uygun fiyatlı ev yapımı cihaz, kloroplast hareketlerindeki dinamik değişiklikleri basit ve yarı otomatik bir şekilde ölçmeyi mümkün kılar. Veriler mikroskopi çalışmalarını tamamlar.

Talimatları yakından takip etmek ve cihazı dikkatli bir şekilde tedavi etmek önemlidir. Başlamak için, iletim cihazını kararlı bir güç kaynağına bağlayın ve cihazı sıfırlamak için cihazın güç anahtarına basın. Ardından, iPad'i kararlı bir güç kaynağına bağlayın.

Ekranı etkinleştirmek için ana ekran düğmesine basın ve giriş yapmak için şifreyi girin. Ayarlar simgesine ve ardından ekran ve parlaklık simgesine basın. Ardından, otomatik kilite basın ve programın herhangi bir kesinti olmadan çalışması için ekranın kalıcı olarak açık kalmasını sağlamak için asla seçmeyin.

Ardından ana ekrana dönmek için ana ekran düğmesine basın. Tüm uygulamaları kapattıktan sonra LeafSensor uygulamasını bulup açın ve metin ve beyaz alanları gösteren bilgileri yeşil ekrana girin. Bağlı sözcük ekranın alt kısmında, uygulamanın iletim cihazıyla iletişim kurduğunu gösteren bir şekilde görüldüğünden emin olun.

Adafruit NOT Found iletisi görüntülenirse, cihazın takılı olup olmadığını kontrol edin ve cihazdaki başlat düğmesine tekrar basın. Herhangi bir yaprak olmadan açık yaprak klipsleriyle kısa bir test çalışmasının koşullarını ayarlamak için uygulama sayfasındaki ilk dört alanı doldurun. Deneme adının verildiği alana deneme adını vererek başlayın, ardından ışık yoğunluğu sayısı adlı alana sayıyı yazarak denemede kaç farklı mavi ışık yoğunluğu kullanılacağını seçin, ardından 0 ile 3.000 arasında bir tamsayı seçerek kullanılacak mavi ışık yoğunluklarını yazın ve her yoğunluğu virgülle bir sonrakinden mavi yoğunluklar adlı alana ayırın.

Mavi süre adlı alana her mavi ışık yoğunluğu için süreyi yazın. Ekranın orta bölümünde Denemeyi Başlat'a basın. Ekranın alt kısmında, Denemeyi Başlat iletisine sahip sekiz tire görünecektir.

İlk veriler görünene kadar denemenin çalışmasına izin verin. İlk iki dakika BOYUNCA LED'den ışık yayılmamasını sağladıktan sonra, iki dakika boyunca zayıf mavi ışığın emisyonu ve ardından iki dakika daha güçlü mavi ışık salınımını gözlemleyin. Ayrıca, bu sıra boyunca dakikada bir kez LED'den kısa bir süre yayılan yoğun kırmızı ışığı gözlemleyin.

Uygulama sayfasının sol alt tarafında Deneme Tamamlandı mesajıyla belirtilen Bitmiş Deneme durumunu kontrol edin, ardından ana ekran düğmesine iki kez basın. Uygulamadan çekin ve tekrar açın. Cihazı yapraklarla çalıştırmaya hazırlamak için açma/kapa düğmesine basarak cihazı sıfırlayın.

Karanlıkta, sadece çok düşük beyaz veya yeşil ışık kullanarak, LED'i örtmek için koyu renkli bitkiden bir geniş yaprak seçin. Bir yaprak klipsinin uzunluğuna sahip filtre ataç şeridini hazırlayın. Ardından LED'in kaplanmasını önlemek için filtre kağıt şeridinin üst kısmında bir delik açın.

LED'i tutan yaprak klipsi kısmına nemlendirilmiş bir filtre kağıdı yerleştirin. Koyu renkli yaprak klipsini Petri kabından çıkarın ve ardından yaprağı yaprak klipsinin ıslak filtre kağıdının üstüne yerleştirin ve adaxial yaprak yüzeyinin LED'e dönük olduğundan emin olun. Ardından diğer yaprak klipsi kısmını üstüne bir fotoğraf transistörü ile yerleştirin.

Gerekirse, iki yaprak klipsi parçasını bir arada tutmak için bir lastik bant kullanın. Yaprak klipsini ilgili tekneye yerleştirin ve bir pipet kullanarak rezervuarları suyla doldurun, yaprak veya en azından filtre kağıdının çalışma sırasında yaprakların susuz kalmasını önlemek için suya dokunmasını sağlayın. iPad'de LeafSensor uygulamasını ayarlayın ve deneme adı adlı alana EXPLORA1 yazın.

Işık yoğunluğu sayısı adlı alana 10 yazın. Ardından numaraları mavi yoğunluklar ve mavi süre adlı alana girin. Denemeyi Başlat'a basın.

İlk dakikadan sonra, görünen çıktı değerlerini gözlemleyin. Değerler uzaksa, yaprakların yaprak klipslerine doğru yerleştirilmiş olup olmadığını kontrol edin. Çalıştırma tamamlandığında, veriler otomatik olarak kaydedilir.

Ekranı dik konumda döndürdükten sonra, ekranda kaydetme ve yardımcı programlar olmak üzere iki seçenek görünecektir. Yardımcı Programlar'a basın ve kaydedilen dosyalar listesinden EXPLORA1 dosyasını seçin. Dosya listesinin altında, EXPLORA1 artık seçili denemede görünecektir.

Ardından, E-posta'ya basın. Bir e-posta adresi girin, EXPLORA1 dosyası iletiye otomatik olarak eklenir ve Gönder'e basın. Yüzde iletim verileri, Arabidopsis thaliana iletiminin düşük ışık yoğunluklarında azaldığını gösteren zamana göre çizilirken, ışık yoğunlukları daha da arttığında kaçınma tepkisi tetiklendi.

19 saatlik uzun koşular sırasında vahşi tip ve mutant Arabidopsis thaliana yapraklarının ortalama yüzde iletim değerleri gösterilmiştir. Yapraklar hem vahşi tip hem de phot2 mutantlarında düşük mavi ışığa maruz kaldığında, iletimdeki ilk hızlı düşüşü yavaş bir azalma izledi ve bu da kloroplastların birikim yanıtına geçtiğini gösteriyordu. Vahşi tip ile karşılaştırıldığında, phot1 daha az bir birikim yanıtı gösterdi.

Mavi ışık yoğunluğu 11 saat sonra adım adım arttığında, bulaşma yüzdesi artar ve kloroplastlar kaçınma tepkisine geçer. Delta T olarak da adlandırılan koyu değere göre yüzde iletimdeki değişim dereceleri tam mavi ışık yoğunluklarına bağlıydı. Negatif değerler yaprakların bir birikim yanıtı gösterdiğini gösterirken, pozitif değerler kaçınma yanıtını gösterir.

İletimdeki değişim hızı, ışık arttığında iletimdeki değişimin eğimi olarak hesaplanır. Temsili örnekte, mavi ışık yoğunluğu arttıkça kaçınma tetiklendiğinde ilk yanıtlar sırasında iletim hızı değişti. Karakteristik olmayan bir mutant veya türdeki iletim değişikliklerini araştırırken, iletim değerlerinin ve kloroplast pozisyonlarının bir mikroskopi çalışmasıyla nasıl ilişkili olduğunu doğrulayın.