Name: Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Keşfedin Parkinson hastalığında 6-OHDA sıçan modeli kullanarak L-DOPA kaynaklı diskinezilerin değerlendirilmesini. Bu yöntem, antidiskinetik tedaviler geliştirmek için güvenilir bir preklinik araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma São Paulo Araştırma Vakfı (FAPESP, hibe 2017/00003-0) tarafından desteklenmiştir. Yüksek Öğretim Personelinin İyileştirilmesi için Koordinasyon (CAPES) için minnettarız. Dr. Anthony R. West, Dr. Heinz Steiner ve Dr. Kuei Y. Tseng'e destek ve mentorluk için teşekkür ederiz.

Tüm deneyler Ribeirão Preto'nun Felsefe, Fen Bilimleri ve Mektupları Fakültesi Etik Kurulu'na (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5) uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. 6-OHDA lezyonu
<ol><li>Deneylerin başında (6 hafta) 200-250 g ağırlığındaki Sprague-Dawley erkek sıçanlarını kullanın. Hayvanları (kafes başına 2-3) standart laboratuvar koşullarında (12:12 saat aydınlık / karanlık döngüsü, saat 06:00'da ışıklar yanar, sıcaklık kontrollü tesisler (22-24 ° C), yiyecek ve su mevcut ad libitum ile barındırın. NOT: Şiddetli 6-OHDA lezyonlu sıçanların nasıl üretileceğine dair tam bir açıklama başka bir yerde açıklanmıştır42.</li>
	<li>Herhangi bir deneysel prosedürün başlangıcından önce hayvanları uygun şekilde alıştırın.</li>
	<li>Ameliyattan 30 dakika önce norepinefrin taşıyıcı inhibitörü imipraminin (20 mg / kg,% 0.9 salin çözeltisi içinde çözülmüş) uygulayın (intraperitoneal olarak, i.p.) NOT: Imipramin uygulaması, dopaminerjik nöronlar için 6-OHDA seçiciliğini artıracaktır.</li>
	<li>Ketamin / ksilazin (70/10 mg / kg) intraperitoneal olarak uygulanır.</li>
	<li>Hayvanın ayak parmağı sıkışmasına tepki eksikliği nedeniyle derinlemesine uyuşturulduğundan ve bir ısıtma yastığının üstündeki stereotaksik aparatta eğilimli bir konumda konumlandırıldığından emin olun.</li>
	<li>Baştaki kürkü çıkarın ve iyot bazlı bir ovma ve alkol arasında geçiş yaparak cerrahi bölgeyi 3 kez dezenfekte edin.</li>
	<li>Mikroenjeksiyonun gerçekleşeceği bölgede bir kesi (yaklaşık 1 cm) yapmak için bir neşter kullanın.</li>
	<li>Kafatası bölgesini pamuklu çubuklarla temizleyin ve Bregma ve Lambda'nın açığa çıktığından emin olun.</li>
	<li>MFB stereotaksik koordinatlarının bregma43,44,45'ten alındığından emin olun: -4,3 mm ön, 1,6 mm lateral (sağ taraf) ve 8,3 mm ventral (dura materden).</li>
	<li>6-OHDA'yı 50 μL Hamilton cam şırınga kullanarak sağ medial ön beyin demetinde (MFB) tek taraflı olarak 0.4 μL / dak oranında (% 0.1 askorbik asit içeren 4 μL tuzlu su çözeltisinde 10 μg) uygulayın.</li>
	<li>Ameliyatın sonunda, kafa derisi kesisini dikin ve hayvanı ılık (~ 37 ° C) steril% 0.9 tuzlu su çözeltisi (~ 10 mL / kg, s.c.) ile yeniden sulandırın.</li>
	<li>Hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın ve ısıtılmış bir kurtarma kafesine yerleştirin. Bilinç yeniden kazanılana kadar izleyin.</li>
	<li>Dopaminerjik lezyonun etkinliğini,46,47 basamak testi kullanarak lezyondan 4 hafta sonra değerlendirin. NOT: Bu testte, lezyona karşı ön ayaklı akinezi, lezyonun tersi olan ön pençe ile ayarlama adımlarının sayısı ile değerlendirilir. Kontralateral ön ayakla üç veya daha az ayarlama adımı sunan sıçanlar, varsayılan ciddi 6-OHDA lezyonlu sıçanlar48 olarak çalışmaya dahil edilmiştir.</li>
</ol>2. L-DOPA kronik tedavisi
<ol><li>Kronik tedaviye 6-OHDA lezyonundan 4 hafta sonra Pazartesi günü başlayın. NOT: AIM'ler 3 hafta boyunca haftada 3 gün üst üste (Çarşamba, Perşembe ve Cuma) videoya kaydedileceğinden, tedaviye Pazartesi günü başlanması önerilir.</li>
	<li>Sıçanlara taze hazırlanmış L-DOPA (deri altı (s.c.), 1 mL / kg yoluyla) artı benserazid hidroklorür (sırasıyla 5 mg / kg ve 12.5 mg / kg) ile 3 hafta boyunca, pazartesiden cumaya günde bir keztedavi edin 45. NOT: Bir kez kurulduktan sonra, AIM'ler L-DOPA'nın her bir uygulamasında ortaya çıkacaktır. Bu nedenle, 3 haftalık indüksiyon periyodundan sonra haftada 2-4 kez L-DOPA uygulaması, AIM48'in stabil bir ekspresyonunu korumak için yeterlidir.</li>
</ol>3. AIM'lerin kaydedilmesi ve puanlanması
<ol><li>Saat 09:00 ile 17:00 arasında deneyler yapın. Araştırmacının sıçanların kimliğinden ve farmakolojik tedavisinden tamamen habersiz olduğundan emin olun.</li>
	<li>Sıçanı dikkatlice şeffaf bir silindirin içine (20 cm çap x 40 cm boyunda) koyun ve en az 15 dakika boyunca iklimlendirilmesine izin verin. Zeminin yatak malzemesi ile kaplandığından emin olun. Aynalar silindirin arkasına yerleştirilmelidir, böylece deneyci hayvanı mümkün olan tüm açılardan gözlemleyebilir. NOT: Deney başına birden fazla sıçan varsa, her sıçan için bir silindir kullanın. Seanslar arasında hayvanların manipülasyonu davranışsal analize müdahale edebilir.</li>
	<li>Yüksek çözünürlüklü bir video kamerayı eksenel, uzuv ve orolingual AIM'lerin görüntülenmesini destekleyecek şekilde konumlandırın. Bu deneysel koşullar altında dönme davranışı mevcut olduğundan, silindirin arkasındaki aynalar AIM'lerin 360 ° 'lik bir açıyla izlenmesine izin verecektir. Bir tripod kullanın veya fotoğraf makinesini doğrudan tezgaha sabitleyin. NOT: Orolingual AIM'lerin puanlanması zor olabilir, özellikle de rotasyonel davranış insidansı yüksekse. Hayvanların 15° açıyla bulunduğu uçağın biraz altına yerleştirilmiş kamera ile video çekmek, bu hareket alt tipinin gözlemlenmesine yardımcı olacaktır.</li>
	<li>Hayvanı silindirden yavaşça çıkarın ve L-DOPA'yı uygulayın (12.5 mg / kg benserazid ile birlikte 5 mg / kg, s.c.).</li>
	<li>Hayvanı tekrar silindire koyun ve L-DOPA enjeksiyonundan sonra ANIM'leri izlemek için bir zamanlayıcı başlatın. L-DOPA enjeksiyonundan sonra 180 dakika boyunca AIM kaydetmek için bir video kamera kullanın. Analiz, hayvanın doğrudan gözlemlenmesiyle yapılabilmesine rağmen, çevrimdışı puanlama tercih edilir. NOT: ANIM'lerin L-DOPA uygulamasından sonra kesin zamanlarda puanlanabilmesi için zamanlayıcının da videoya kaydedildiğinden emin olun.</li>
	<li>IM'leri başlangıçta açıklandığı gibi 30 dakikalık aralıklarla L-DOPA enjeksiyonu sonrası 180 dakikaya kadar (tanımlar için Tablo 1'e bakınız)20,23 olarak puanlayın. Puanlar 1-2 dakikalık dönemler boyunca verilmeli ve eksenel, uzuv veya orolingual olarak sınıflandırılmalıdır (Şekil 1).</li>
	<li>Her AIM'yi dikkatlice gözlemleyin ve ciddiyet ve genlik için puanları özniteliklendirin. Talimatlar için Tablo 1'i kullanın. Yetiştirme, koklama, tımar etme ve kemirme gibi normal davranışları derecelendirmeye dahil etmeyin. Toplam altı gözlem periyodu (30, 60, 90, 120, 150 ve 180 dakika) olacaktır.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>ALT</td>
		</tr><tr><td>Eksenel: baş, boyun ve gövde burulması</td>
		</tr><tr><td>Uzuv: hem distal hem de proksimal ön ayağın istemsiz hareketleri</td>
		</tr><tr><td>Orolingual: orofasiyal kasların istemsiz hareketleri</td>
		</tr><tr><td>ŞİDDET</td>
		</tr><tr><td>0: Yok</td>
		</tr><tr><td>1: Ara sıra (kesintilerle, gözlem süresinin yarısından daha azında mevcut)</td>
		</tr><tr><td>2: Sık sık (kesintilerle birlikte, ancak gözlem süresinin yarısından fazlasında mevcut)</td>
		</tr><tr><td>3: Sürekli ancak dış duyusal uyaranlar tarafından kesintiye uğratılmış</td>
		</tr><tr><td>4: Sürekli ve dış duyusal uyaranlar tarafından kesilmez</td>
		</tr><tr><td>BOLLUK</td>
		</tr><tr><td>Eksenel</td>
		</tr><tr><td>1: Baş ve boynun yaklaşık 30 ° açıyla burulması</td>
		</tr><tr><td>2: Baş ve boynun yaklaşık 30 ° &lt; açıda ≤ 60 ° 'de burulması</td>
		</tr><tr><td>3: Baş, boyun ve üst gövdenin yaklaşık 60 ° &lt; açısında ≤ 90 ° 'de burulması</td>
		</tr><tr><td>4: Baş, boyun ve gövdenin 90 ° &gt; açıyla burulması, genellikle sıçanın dengesini kaybetmesine neden olur.</td>
		</tr><tr><td>Uzuv</td>
		</tr><tr><td>1: Distal ön ayağın küçük istemsiz hareketleri</td>
		</tr><tr><td>2: Hem distal hem de proksimal ön ayağın translokasyonuna neden olan düşük genlikli hareketler</td>
		</tr><tr><td>3: Omuz kasları da dahil olmak üzere tüm uzuvların istemsiz hareketleri</td>
		</tr><tr><td>4: Güçlü uzuv ve omuz hareketleri, genellikle balizme benzer</td>
		</tr><tr><td>Orolingual</td>
		</tr><tr><td>1: Orofasiyal kasların küçük istemsiz hareketleri</td>
		</tr><tr><td>2: Dil çıkıntısı ile yüksek genlikli orofasiyal hareketler</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: AIMS tanımı ve derecelendirme kriterleri.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62924/62924fig01.jpg"> Şekil 1: Her bir AIM alt türünü gösteren fotoğraf dizisi. (A'dan A'ya'ya) Farklı açılarda distonik benzeri hareketleri gösteren eksenel AIM (A: 30° açı, A': 30° &lt; açı ≤ 60°, A": 90° &lt; ≤ açı ve A'": 90° açı &gt;). (B'den B'ye) Distal (B ve B') ve tüm ön ayağın (omuz, B dahil) istemsiz hareketlerini gösteren uzuv AIM (siyah oklar). (C) Dil çıkıntısı ile yüksek genlikli orolingual AIM (kırmızı ok). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62924/62924fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. Veri analizi
<ol><li>Eksenel, uzuv veya orolingual AIM alt tiplerini, daha önce açıklandığı gibi L-DOPA uygulamasından sonra her gözlem periyodu (yani altı gözlem periyodu) için şiddet ve genlik puanlarını çarparak hesaplayın20. Bir hayvanın bir test oturumunda biriktirebileceği teorik maksimum puan 240'tır (gözlem periyodu başına maksimum puan 40'tır, ayrıntılar için Tablo 1'e bakınız).</li>
	<li>3 haftalık kronik L-DOPA uygulaması boyunca Çarşamba, Perşembe ve Cuma günleri kaydedilen altı gözlem periyodunun tümü için AIM puanlarını çizin (Şekil 2). AIM'ler, her bir hayvanın her puanlama gününde (Şekil 3) veya her haftada (Şekil 4) 3 haftalık kronik L-DOPA uygulaması boyunca maksimum puanını belirtmek için toplanabilir.</li>
	<li>İstatistiksel analiz yaklaşımını seçmeden önce verilerin normale yakın bir dağılıma sahip olup olmadığını doğrulayın. NOT: AIM'lerin derecelendirme ölçekleri sıralı verilerden oluşur ve parametrik olmayan istatistiklerle analiz edilebilir. Parametrik testler, tekrarlanan test oturumlarını takiben deney grupları arasında AIM puanlarını karşılaştırırken yaygın olarak kullanılmaktadır40.</li>
</ol>

Yazarların çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol, MFB'de 6-OHDA'nın tek taraflı mikroenjeksiyonu ile indüklenen PD'nin sıçan modelinde AIM'lerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir. Düşük dozlarda L-DOPA'nın (5 mg / kg, 12.5 mg / kg benserazid ile birlikte) kronik günlük uygulaması, 3 haftalık tedavi boyunca AIM'lerin gelişimini sağlamıştır. Temporal analiz, AIM'lerde önemli bir artış olduğunu ortaya koydu ve L-DOPA uygulamasından 30 ila 90 dakika sonra pik doz diskinezi gözlendi. AIM'ler eksenel, uzuv ve orolingual kasları etkileyen ...

Dopamin öncüsü L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), Parkinson hastalığının (PD) motor semptomları için en etkili tedaviyi temsil eder1. L-DOPA tedavisi PD ile ilişkili motor semptomları iyileştirebilir, ancak zamanla etkinliğini kaybeder. "Aşınma dalgalanması" veya "doz sonu bozulması" gibi motor dalgalanmalar, klinik olarak tek L-DOPA dozlarının etkisinin süresinin kısaltılması olarak kendini gösterir2. Diğer durumlarda, klinik bulgular yavaş büküm hareketleri ve anormal duruşlardan (distoni)3 oluşur ve dopamin seviyeleri düşük olduğunda ortaya çıkar (dönem dışı distoni)4. Öte yandan, L-DOPA kaynaklı diskineziler (LID'ler), plazmadaki ve beyindeki dopamin seviyeleri yüksek olduğunda ortaya çıkar5.
LID'ler, koreiform, distonik ve balistik6 hareketleri gibi motor komplikasyonları içeren zayıflatıcı yan etkiler üretir. Bir kez kurulduktan sonra, LID'ler her L-DOPA uygulamasından sonra ortaya çıkar. 5 yıl boyunca L-DOPA tedavisi gören PD hastalarının %40-50'sinde motor komplikasyonlar ortaya çıkar ve insidansı7 yıl içinde artar. PD hastalarında LID'lerin gelişiminde rol oynayan patofizyolojik mekanizmalar henüz tam olarak aydınlatılamamış olsa da, dopaminerjik denervasyonun derecesi, pulsatil L-DOPA uygulaması, striatal proteinlerde ve genlerde aşağı akış değişiklikleri ve dopamin dışı verici sistemlerdeki anormallikler bu istenmeyen yan etkilerin gelişimine katkıda bulunan faktörlerdir 6,8,9,10.
Nörotoksin 6-hidroksidopamin (6-OHDA),11,12,13,14 kemirgenlerinde PD'yi incelemek için iyi karakterize edilmiş bir araçtır. 6-OHDA kan-beyin bariyerini geçmediğinden, doğrudan nigrostriatal yola enjekte edilmelidir. 6-OHDA'ya bağlı dopaminerjik tükenme konsantrasyon ve bölgeye bağımlıdır15. Medial ön beyin demetinde (MFB) 6-OHDA'nın tek taraflı uygulanması, kemirgenlerde ciddi (>% 90) nigrostriatal hasara neden olabilir16,17,18,19. L-DOPA'nın tek taraflı olarak şiddetli 6-OHDA lezyonlu kemirgenlere kronik olarak uygulanması, anormal istemsiz hareketler (AIM'ler) adı verilen diskinetik benzeri hareketlerin ortaya çıkmasına neden olur. Kemirgenlerdeki diskinetik benzeri hareketler, PD hastalarında LID'lerle ilgili benzer moleküler, fonksiyonel ve farmakolojik mekanizmaları paylaşır5. Bu nedenle, 6-OHDA lezyonlu sıçanlar20 ve fareler21, LID'leri incelemek için değerli klinik öncesi modellerdir. L-DOPA'nın terapötik dozları (5-20 mg / kg) ile kronik olarak (7-21 gün) tedavi edildiğinde, tek taraflı olarak 6-OHDA lezyonlu sıçanlar ve fareler, lezyonun tersiyatında ön ayak, gövde ve orofasiyal kasları etkileyen AIM'lerin kademeli olarak geliştiğini göstermektedir 17,18,19,20,22,23,24 . Bu hareketler PD hastalarında L-DOPA ile indüklenen pik doz diskinezilere benzer bir zaman diliminde sunulur25 ve hiperkinetik hareketler ve distoni5 ile karakterizedir. AIM'ler genellikle şiddetlerine (örneğin, belirli bir AIM mevcut olduğunda) ve genliklerine (örneğin, her hareketin genliği ile karakterize edilir) göre puanlanır5,23,25.
6-OHDA lezyonlu LID kemirgen modelleri yüz geçerliliği sunar (yani, modelin insan durumuna benzeyen çeşitli özellikleri vardır)5,11,26,27,28. Kemirgen AIM'ler, PD hastalarında görülenlere benzer şekilde, hiperkinetik (ön ayak ve orolingual) ve distonik (aksiyel) hareketler29 olarak görülür ve pik doz diskineziyi taklit eder. Moleküler ve fonksiyonel düzeyde, kemirgen modelleri, PD hastaları 5 ile FosB / ΔFosB 19,26,30,31,32,33 ve serotonin taşıyıcısının (SERT) 34,35 upregülasyonu gibi birçok patolojik özelliği paylaşır. . Prediktif geçerlilik ile ilgili olarak, PD hastalarında LID'leri azaltan ilaçlar (örneğin, N-metil-D-aspartat (NMDA) reseptör antagonisti amantadin), kemirgen modelinde antidiskinezik etkinlik gösterir 22,36,37,38,39.
Kemirgen AIM derecelendirme ölçeği, baş, boyun ve gövdeyi etkileyen AIM'leri (eksenel AIM'ler), hiperkinetik ön ayak hareketlerini (uzuv AIM'leri) ve diskinetik benzeri orolingual hareketleri (orolingual AIM'ler) içeren dört AIM alt tipine dayanarak oluşturulmuştur. Kontralateral rotasyon (lokomotif AIM'ler) tek taraflı lezyonlu kemirgenlerde 20,22,23,25,40 da mevcut olmasına rağmen, LIDs 22,37,41'in spesifik bir ölçüsünü temsil etmeyebileceğinden diskinetik benzeri bir hareket olarak puanlanmamıştır.
Burada, PD'nin şiddetli (>%90) tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçan modelinde diskinetik benzeri hareketlerin (eksenel, uzuv ve orolingual AIM'ler) nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini açıklayacağız. Protokolümüzü önceki literatüre ve laboratuvar uzmanlığımıza dayanarak düzenledik.

<table><tbody><tr><td>6-hidroksidopamin hidrobromür</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>H6507</td><td>Katekolaminerjik terminallerin dejenerasyonuna neden olan nörotoksin</td></tr><tr><td>Benzerazid hidroklorür</td><td>Sigma</td><td>B7283</td><td>Periferik dopa-dekarboksilaz inhibitörü</td></tr><tr><td>Kamera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI)&nbsp; 2.8mm B</td><td>HIKVISION</td><td>DS-2CE16C0T-IRP</td><td>Tüm davranışları kaydetmek için kullanılan</td></tr><tr><td>kamera İmidramin hidroklorür</td><td>Alfa Aesar</td><td>J63723</td><td>Noradrenerjik nöronları 6-OHDA'dan korumak için kullanılan norepinefrin taşıyıcı inhibitör (NET)</td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür</td><td>Ceva Hayvan Sağlığı</td><td></td><td>Cerrahi müdahale için</td></tr><tr><td>anestezi L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA) metil ester (hidroklorür)</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>16149</td><td>Dopamin öncü</td></tr><tr><td>Aynaları</td><td></td><td></td><td>Deneyler sırasında hayvanların davranışlarını her yönden gözlemlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>İğneler 0,30 x 13 mm</td><td>PrecisionGlide</td><td></td><td>İlaç enjekte etmek için kullanılan iğneler</td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Samtec</td><td></td><td>Tuz</td></tr><tr><td>Şırıngaları 1 ml Steril</td><td>BD Plastipak</td><td></td><td>İlaç enjekte etmek için kullanılan şırıngalar</td></tr><tr><td>Şeffaf silindirler</td><td></td><td></td><td>Deneyler sırasında hayvan davranışlarını kaydetmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Ksilazin hidroklorür</td><td>Ceva Hayvan Sağlığı</td><td></td><td>Cerrahi müdahale için yatıştırıcı, analjezik ve kas gevşetici</td></tr></tbody></table>

parkinson hastalığının tek taraflı 6-ohda-lezyonlu sıçan modelinde l-dopa-İndüklenen diskinezilerin değerlendirilmesi

Rating L-DOPA-Induced Dyskinesias in the Unilaterally 6-OHDA-Lesioned Rat Model of Parkinson's Disease

L-DOPA ile indüklenen diskineziler (LID'ler), Parkinson hastalığı (PD) olan hastalara uzun süreli L-DOPA uygulamasından kaynaklanan motor komplikasyonları ifade eder. Klinikte en sık gözlenen patern, koreiform, distonik ve balistik hareketlerin klinik belirtilerinden oluşan pik doz diskinezidir. PD'nin 6-hidroksidopamin (6-OHDA) sıçan modeli, LID'lerin çeşitli özelliklerini taklit eder. Tekrarlanan L-DOPA uygulamasından sonra, 6-OHDA lezyonlu sıçanlar diskinetik benzeri hareketler sergiler (örneğin, anormal istemsiz hareketler, AIM'ler). Bu protokol, nigrostriatal yolakta% 90-95 dopaminerjik tükenme ile 6-OHDA lezyonlu sıçanlarda AIM'lerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir. Tekrarlanan L-DOPA uygulaması (3 hafta) (5 mg / kg, 12.5 mg / kg benserazid ile birlikte) AIM'lerin gelişimini indükleyebilir. Zaman seyri analizi, AIM'lerde 30-90 dakikada (pik doz diskinezi) önemli bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. LID'lerin kemirgen modelleri, etkili antidiskinetik müdahaleleri tanımlamak için önemli bir klinik öncesi araçtır.

Sıçanlarda gözlenen AIM kalıpları, insanlarda ve insan olmayan primatlarda gözlemlenenlere kıyasla daha basit ve sınırlı olmasına rağmen, bu model kronik L-DOPA uygulaması tarafından indüklenen hem hiperkinetik hem de distonik benzeri hareketleri yeniden üretir. Burada, 3 hafta boyunca (Pazartesi-Cuma) kronik olarak L-DOPA (12.5 mg / kg benserazid ile birlikte 5 mg / kg) ile tedavi edilen tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçanlardan oluşan bir gruptan (n = 10) toplanan veriler sunulmaktadır. Şekil 2, Şeki...

L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin kemirgen modelleri, L-DOPA'nın tekrarlanan uygulaması nedeniyle ortaya çıkan belirtileri hafifletmek veya gelişimi hafifletmek için terapötik müdahaleleri tanımlamak için paha biçilmez araçlardır. Bu protokol, Parkinson hastalığının tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçan modelinde diskinetik benzeri hareketlerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir.

Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi

L-DOPA-induced dyskinesias (LIDs) refer to motor complications that arise from prolonged L-DOPA administration to patients with Parkinson's disease (PD). ...

Parkinson hastalığının 6-hidroksidopamin sıçan modelinde L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin derecelendirilmesi, etkili antidiskinetik müdahaleleri tanımlamak için önemli bir klinik öncesi araçtır. Bu model nispeten basittir, düşük maliyet sunar ve klinikte olanlarla benzerlikler gösterir. Prosedür, laboratuvarda doktora öğrencisi olan Danilo Leandro Ribeiro tarafından gösterilecek.Deneye 200 ila 250 gram ağırlığındaki Sprague-Dawley erkek sıçanlarıyla başlayın. Standart laboratuvar koşullarında kafes başına iki ila üç hayvanı, yiyecek ve su mevcut ad libitum ile barındırın. Ameliyattan önce, norepinefrin taşıyıcı inhibitörü imipramin'i intraperitoneal olarak sıçana uygulayın.Anesteziyi ayak parmağı sıkışmasına yanıt vermeyerek doğruladıktan sonra, sıçanı ısıtma yastığının üstündeki stereotaksik aparattaki eğilimli bir pozisyonda konumlandırın. Sıçan konumlandırıldıktan sonra, mikroenjeksiyonun gerçekleşeceği bölgede bir santimetre uzunluğunda bir kesi yapmak için bir neşter kullanın. Ardından, kafatası bölgesini pamuklu çubuklarla temizleyin ve bregma ve lambda'nın açığa çıktığından emin olun.Medial ön beyin demetini veya MFB'yi, stereotaksik koordinatları bregma'dan 4.3 milimetr

rating-l-dopa-induced-dyskinesias-unilaterally-6-ohda-lesioned-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Parkinson hastalığı, deneysel 6-OH-dopamin tarafından tetiklenen olabilir striatum, dopaminerjik innervasyon kaybına neden olur. Biz stereotaksik lezyon gerçekleştirmek ve farelerde apomorfin bağlı dönme davranışı nasıl izleneceğini açıklar. Bu model, Parkinson hastalığı için yeni tedavilerin test etmek için faydalı ve güvenilir.

Parkinson Hastalığı için murin Model: 6-OH Dopamin Lezyon Davranış Testi

Bir protokol unilateral 6-OHDA lezyonlar, farelerde medyal önbeyin demet gerçekleştirmek için tarif edilmektedir. Bu yöntem, striatal dopamin ve 90,63&gt;% 95 kaybı gösteren hayatta kalan hayvanların% 89 ile düşük mortalite oranı (% 13.3) ±% -4,02, lezyonun tarafa doğru ipsiversive dönme önyargı vardır.

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

Bu video, bir dopamin dönüşüm inhibitörü ile birlikte levodopa uygulayarak bir Parkinson sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezileri indükleme sürecini göstermektedir. Tekrarlanan enjeksiyonlar beyin nöronlarını aşırı uyararak motor disfonksiyona neden olur.

Parkinson Hastalığının Bir Sıçan Modelinde Levodopa ile İndüklenen Diskinezilerin İndüksiyonu

6-hidroksidopamin (6-OHDA) modeli, Parkinson Hastalığının anlaşılmasını ilerletmek için on yıllardır kullanılmaktadır. Bu protokolde, medial ön beyin demetine 6-OHDA enjekte ederek, motor eksiklikleri değerlendirerek ve basamaklama testini kullanarak lezyonları tahmin ederek sıçanda tek taraflı nigrostriatal lezyonların nasıl gerçekleştirileceğini gösteriyoruz.

Parkinson Hastalığının 6-hidroksidopamin Sıçan Modeli

Bu makalede, Parkinson hastalığının sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezileri indükleme ve değerlendirme yöntemleri açıklanmaktadır. Protokol, hem distonik hem de hiperkinetik olan bir dizi diskinetik davranışın yoğunluğu ve sıklığı hakkında ayrıntılı bilgi sunarak, bu karşılanmamış tıbbi ihtiyacı hedefleyen tedavileri test etmek için güvenilir bir araç sağlar.

Parkinson Hastalığının Sıçan Modelinde Levodopa Kaynaklı Diskinezilerin İndüksiyonu ve Değerlendirilmesi

Ole Isacson bir özlü, Parkinson Kullanıcı hastalığı genel, nedenleri, tedavi stratejileri ve Parkinson araştırma gelişmeler verir.

Ole Isacson: Parkinson Hastalığı İçin Yeni Tedaviler

Yetenekli ulaşan ölçekli gıda hareket için üç noktalı bir skala ile değerlendirilir, her biri kompozit ulaşabileceği bir ön ayakları ile hareket böler. Derecelendirme ölçeği normal bir sıçan için açıklanan ve nörolojik motor bozukluklar değerlendirmek doğru uygulanabilir.

Sıçan ulaşmak Nitelikli ön ayakları Yapısı: Hareket Ölçeği

Bu video C. elegans dopaminerjik nöron nörodejenerasyon, Parkinson hastalığı için bir model olarak değerlendirmek için nasıl kullanılacağını göstermektedir. Ayrıca, genetik ekranlar ya dejenerasyon geliştirmek veya nöroprotektif faktörleri tanımlamak için kullanılır.

Potansiyel Parkinson Hastalığı Genler Doğrulama için C. elegans Dopamin Nöron Dejenerasyonu Testi Uygulama

Bir moleküler marker olarak γH2AX oluşumu kullanarak DNA çift iplikli çizgiler Niceleme radyasyon biyoloji paha biçilmez bir araç haline gelmiştir. Burada hücreler radyasyona maruz kaldıktan sonra γH2AX odakları ölçümü için immünofloresan testinin kullanımını göstermek.

İyonlaştırıcı Radyasyon Cevabı γH2AX Foci Kantitasyonu

DNA çift iplikli tatili yanıt Ser-139 H2AX fosforilasyon aşağıdaki formu γH2AX odakları, mikroskobik analiz radyasyon biyoloji paha biçilmez bir araç haline gelmiştir. Burada çekirdeğin içinde radyasyona bağlı γH2AX oluşumu uzamsal dağılımını değerlendirmek için, aktif transkripsiyonu ökromatin bir epigenetik işaretleyici olarak mono-metil histon H3 lizin 4 antikor kullanılır.

Radyasyondan aşağıdaki γH2AX Mekansal Dağılımı Değerlendirilmesi

Keşfedin Parkinson hastalığında 6-OHDA sıçan modeli kullanarak L-DOPA kaynaklı diskinezilerin değerlendirilmesini. Bu yöntem, antidiskinetik tedaviler geliştirmek için güvenilir bir preklinik araç sunar.

Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet