Name: Parkinson Hastalığının Sıçan Modelinde Levodopa Kaynaklı Diskinezilerin İndüksiyonu ve Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Öğrenin Parkinson hastalığı sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezilerin indüksiyonunu ve kapsamlı değerlendirmesini. Bu yöntem, anormal istemsiz hareketlerin şiddetini ve sıklığını nicelendirerek tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Parkinson hastalığı olan herkesin mücadelelerini ve her gün gösterdikleri güç ve esnekliği, özellikle de KSC'nin sevgili babası Mark Steece'yi kabul etmek istiyoruz. Burada temsil edilen çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü (NS090107, NS110398) ve Parkinson Hastalığı Vakfı Uluslararası Araştırma Hibe Programı, şimdi Parkinson Vakfı tarafından desteklenmiştir. Molly VanderWerp'e mükemmel editoryal yardımı için de teşekkür ederiz.

Burada sunulan hayvanlar, kurumsal yönergelere uygun olarak muhafaza edilmiş ve işlenmiştir. Tüm hayvan prosedürleri, Michigan State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından federal ve eyalet düzenlemelerine uygun olarak onaylanmıştır.
1. 6-OHDA lezyon durumunun ilaçsız doğrulanması
<ol><li>Postüral Kuyruk askısı testi11,12,13 NOT: Deneysel deneklerde (örneğin, erkek veya dişi, yetişkin Sprague Dawley veya Fisher 344 sıçanları) 6-OHDA lezyon indüksiyonundan en az 1 hafta sonra lezyon durumunu değerlendirin (lezyonla ilgili ayrıntılar için bkz. 9,10,35).<ol>
<li>Sıçanı kafesinin yaklaşık 6 cm yukarısında, kuyruğun tabanında sıkıca tutarak ~ 5 s boyunca askıya alın.</li>
		<li>Vücut çarpıtma yönünü, lezyonlu tarafa karşı kontralateral olarak bükülen başarılı bir şekilde lezyonlu bir hayvan için ve - her iki yönde de bükülme veya bükülme olmaması için + olarak kaydedin.</li>
		<li>NOT: Bu testler isteğe bağlıdır ancak önerilir. Ek ilaçsız test seçenekleri/varyasyonları için 14,15,16,17'ye bakınız.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Adım ayarı sürükleme testi (16'dan uyarlanmıştır) NOT: Deneysel deneklerde (örneğin, erkek veya dişi, yetişkin Sprague Dawley veya Fisher 344 sıçanları) tek taraflı 6-OHDA lezyon indüksiyonundan en az 1 hafta sonra lezyon durumunu değerlendirin.<ol>
<li>Sıçanı kuyruğunun tabanından tutun, arka ayakları yüzeyden ~ 6 cm yükseltin; düz, pürüzsüz ama kaygan olmayan bir yüzeyde, ~75 cm, 5-10 sn üzerinde geriye doğru sürükleyin.</li>
		<li>Tekrarlanan üç test boyunca her bir ön pençenin dokunma / adım ayarlama hareketlerinin sayısını gözlemleyin ve kaydedin.</li>
		<li>0-2 ön pençe musluğu, lezyonlu tarafa karşı kontralateral olarak gözlendiğinde, ön pençe ipsilateralinden lezyonlu tarafa hızlı vurma (~ 10 musluk) ile birlikte başarılı tek taraflı lezyon için deneği + olarak puanlayın (örneğin, sol tarafta tek taraflı olarak lezyonlu hayvanlar, kontralateral sağ ön pençe ile dokunma açığı (0-2 musluk) gösterir).</li>
		<li>Tersine, eksik veya bilinmeyen lezyon durumunu belirtmek için her iki ön pençeden orta ila hızlı dokunma (5-10 musluk) olarak puan alın. NOT: Endişeli bir hayvan, başarılı bir şekilde lezyona uğramış olsa bile hızlı dokunma / adım ayarı gösterebilir. Bundan şüpheleniliyorsa, sıçanı ev kafesine geri yerleştirin ve ≥30 dakika sonra tekrar test edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Reaktiflerin ve malzemelerin hazırlanması
<ol><li>L-3,4-dihidroksifenilalanin metil ester hidroklorür (levodopa veya L-DOPA) ve benserazid hidroklorür, periferik bir dekarboksilaz inhibitörü (bakınız Malzeme Tablosu) dozunu, derecelendirme sıklığını ve araştırma sorusu12,18,19,20 için uygun olan deneysel zaman çizelgesini belirleyin (Şekil 1). NOT: Belirli bir tedavinin mevcut LID'yi azaltıp azaltamayacağını veya LID indüksiyonunu önleyip önleyemeyeceğini sormaktan herhangi bir sayıda soruyu aramak için araştırma soruları sorulabilir. Ayrıca, terapötik etkinliğin levodopa dozuna bağlı olup olmadığını veya LID ekspresyonunun ve / veya terapötik etkinliğin deneğin cinsiyetine, türüne ve yaşına bağlı olarak değişip değişmediğini de araştırabilirler.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig1v3.jpg"> Şekil 1: Tedavi zaman çizelgesi örneği. Örnek L-DOPA doz yükseltme zaman çizelgesi toplam uzunluğu 12 haftadır, 8 haftalık L-DOPA enjeksiyonları 6-OHDA lezyonundan 3 hafta sonra ve deneysel tedaviden 4 hafta sonra başlar. Bu örnekte, L-DOPA, reçete edilen her L-DOPA dozunda (3, 6, 9 ve 12 mg / kg) 2 hafta boyunca, her gün yaklaşık olarak aynı saatte haftada 5x (Pazartesi-Cuma) deri altından enjekte edilir. Davranışsal LID derecelendirmeleri, her L-DOPA dozaj seviyesinin 1, 6 ve 10. günlerinde gerçekleşir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="2"><li>Çalışma sırasında devam eden ağırlık değişikliklerine dayanarak uygun ilaç miktarını hesaplamak için sıçanları haftalık olarak tartın. NOT: LID + sıçanlarında artan aktivite nedeniyle, uzun süreli L-DOPA tedavileri ile kilo kaybı potansiyeli vardır. Kilo kaybı meydana gelirse, sıçanlara L-DOPA enjeksiyonlarını takiben besleyici olarak eksiksiz, son derece lezzetli muameleler (bakınız Malzeme Tablosu) sağlayın.</li>
	<li>Her haftalık konsantrasyon için gerekli olan L-DOPA ve benserazid miktarını hesaplayın, enjeksiyonun her günü için liyofilize alikotları tartın ve tedavi gününe kadar cam kehribar şişelerde -20 ° C'de 1-2 hafta boyunca kombinasyon halinde saklayın. NOT: Hedef doz 12 mg / kg veya 12 mg L-DOPA / 1000 g vücut ağırlığıdır. 1 cc/kg sıçan ağırlığı enjeksiyon hacminde 12 mg L-DOPA/kg vücut ağırlığı kullanılarak haftanın her günü için gerekli olan L-DOPA ve salin miktarının belirlenmesine yönelik hesaplamalara örnek Ek Dosya 1'de verilmiştir.</li>
</ol>3. Oda ve kafes kurulumu
<ol><li>L-DOPA tedavisinin ilk gününde, 6-OHDA lezyon cerrahisinden 3-4 hafta sonra, sıçanları IACUC onaylı zenginleştirme de dahil olmak üzere tek bir konuta aktarın.</li>
	<li>Davranışsal değerlendirmelere akran müdahalesini önlemek için çalışma boyunca tek konutta tutun.</li>
	<li>LID derecelendirme günlerinde, ev kafeslerini, sıçanın optimum şekilde görüntülenmesi için yaklaşık 45° açıyla döndürülmüş çelik bir tel rafa yerleştirin (Şekil 2A). Kimlik etiketlerini (Şekil 2B) yukarı doğru çevirin ve davranışsal değerlendirmelere müdahale edilmesini önlemek için su şişelerini, yiyecek raflarını ve kafesteki her türlü zenginleştirmeyi (Şekil 2C) çıkarın.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig02.jpg"> Şekil 2: Büyük ölçekli sıçan deneylerinin LID derecelendirmeleri için kurulan kafes örneği. (A) Her hayvanın optimum şekilde görüntülenmesini sağlayan büyük metal raflar kullanılarak LID derecelendirmesi için birden fazla kafes ayarlanabilir. Kafesler, kimlik kartları yukarı doğru çevrilmiş (B), yiyecek, su şişeleri, yuvalama malzemeleri ve diskinetik davranışları (C) incelerken sıçanın görsel belirsizliğini ve sıçana dikkat dağıtıcı şeyleri sınırlamak için diğer zenginleştirmeler çıkarılarak 45 ° 'lik bir açıyla dağıtılmalıdır. Metal rafların, puanlayıcının sıçanı kafesin önünde veya arkasında gerektiği gibi incelemesine izin vermek için herhangi bir duvardan birkaç metre uzakta olması gerekir. Zenginleştirme aparatlarını (örneğin, C-kırmızı sıçan inziva evleri) geldikleri aynı kafese koymak için bireysel hayvan kimlikleriyle etiketlemek önemlidir. Bu, deney deneklerine stresi arttırmamak için farklı cinsiyetteki hayvanları kullanırken özellikle önemlidir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. Levodopa enjeksiyonları ve diskinezi derecesi
<ol><li>L-DOPA'nın deri altı enjeksiyonları21,22<ol>
<li>Günlük L-DOPA enjeksiyonundan hemen önce, amber şişedeki önceden tartılmış liyofilize L-DOPA ve benserazid karışımına uygun miktarda steril salin ekleyin ve 10 s boyunca iyice çalkalayın (adım 2.3). NOT: Hedef enjeksiyon hacmi 1 mL/1000 g vücut ağırlığıdır (mL başına 12 mg L-DOPA ile). Steril salinin hacmi, çalışma başına hayvan sayısına bağlı olacaktır.</li>
		<li>Tek tek şırıngaları (örneğin, 26 G iğne ile 1,0 veya 0,5 mL) her hayvan için gerekli hacimle (1 mL/kg sıçan ağırlığı) doldurun ve her şırıngayı ayrı hayvan tanımlamasıyla etiketleyin. NOT: Doldurulmuş şırıngaları enjeksiyon zamanına kadar steril torbalarda ışıktan koruyun. L-DOPA, sulu bir ortamda oksijen ve ışık varlığında hızla oksitlenir23,24,25,26.</li>
		<li>İlk kafesi enjeksiyon tezgahına getirin.</li>
		<li>Sıçanı kafesinden çıkarın ve enjeksiyon yüzeyine yerleştirin.</li>
		<li>Baş ve omuzları, baskın olmayan elin avucuyla sıçanın üzerinde durduğu yüzeye karşı yavaşça kısıtlayın.</li>
		<li>Nazikçe kürek kemiğinin üzerinde yatan sırttaki deriyi baskın olmayan elin baş parmağı ve işaret parmağı ile ovun, baskın el ile L-DOPA hacmini parmakların arasındaki / altındaki deri altı boşluğuna enjekte edin, kas içi enjeksiyonu önlemek için iğneyi vücuda mümkün olduğunca paralel tutun. NOT: Sıçanlar enjeksiyondan önce uyuşturulmaz.</li>
		<li>Kullanılan her bir şırıngayı keskin bir kaba atın.</li>
		<li>Sıçanı bireysel kafesine yerleştirin ve derecelendirmeler tamamlanana kadar davranışsal değerlendirmelere müdahale etmekten kaçınmak için LID derecelendirme günleri dışında besleyici olarak eksiksiz muameleler ekleyin.</li>
		<li>İstenilen derecelendirme süresine ve derecelendirme günlerinde çalışmadaki sıçan sayısına bağlı olarak zamanlayıcıyı 1-2 dakika olarak ayarlayın. Bir sonraki kafesi alın ve zamanlayıcı gösterdiğinde bir sonraki sıçanı enjekte edin.</li>
		<li>Bunu tekrarlayın, tüm sıçanlar enjekte edilene kadar her 1-2 dakikada bir sıçan enjekte edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Levodopa kaynaklı diskinezi derecesi enjeksiyon sonrası<ol>
<li>Distonik ve hiperkinetik diskinezi hareketlerinin yoğunluğunu (Tablo 1) ve sıklığını (Tablo 2), LID davranışının ilk başlangıcını, tepe davranışını ve düşüş aşamasını içermesi gereken istenen sayıda zaman noktasında derecelendirin (LID derecelendirme günlük sayfası örneği için Ek Dosya 2'ye bakın).</li>
		<li>Erkek ve dişi yetişkin Sprague Dawley veya Fisher 344 sıçanları ve N = 40 sıçan örneklem büyüklüğü için, ilk L-DOPA enjeksiyonundan 20 dakika sonra diskinezi derecelendirmelerine başlayın ve daha sonra sıçanların% 90-100'ünde LID davranışlarının ne zaman kesildiğine bağlı olarak, enjeksiyondan sonra 220 veya 270 dakikaya kadar 50 dakikalık aralıklarla başlayın.</li>
		<li>1 dakikalık derecelendirme aralıkları kullanıyorsanız, 1 dakikalık bir zamanlayıcı ayarlayın. İlk sıçanı bir dakika boyunca derecelendirin. Bir sonraki sıçana geçin ve 1 dakika boyunca derecelendirin. Tüm sıçanlar boyunca devam edin, 1 dakikalık aralıklarla derecelendirin.</li>
		<li>Kafesin yanına görünür bir şekilde yerleştirilmiş bir zamanlayıcı bulundurun, böylece derecelendirme süresi boyunca herhangi bir davranışın sıklığını tahmin ederken (Tablo 2) LID davranış yoğunluğu (Tablo 1) gözlemlenebilir.</li>
		<li>İlk zaman noktası için derecelendirmeler tamamlandıktan sonra, bir sonraki zaman noktasında (örneğin; enjeksiyon sonrası 70 dakika) ilk sıçanla tekrar başlayın ve tüm zaman noktaları tamamlanana kadar istenen aralıkta (örneğin, her 50 dakikada bir) devam edin. NOT: L-DOPA enjeksiyonu ve LID derecelendirme görevlerinin çakışması nedeniyle, derecelendirme günlerinde biri enjeksiyon ve diğeri davranışsal derecelendirmeler için olmak üzere iki kişiye ihtiyaç vardır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması ilan edilmedi.

Burada, nigrostriatal DA sisteminin tek taraflı 6-OHDA lezyonunu takiben parkinson sıçan modelinde LID'lerin tekrarlanabilir indüksiyonu ve derecelendirilmesi için ayrıntılar sunulmuştur. Bir zamanlar kemirgenlerin LID geliştirmediği ve rotasyonel asimetrinin sıçanlarda LID'nin analoğu olabileceği düşünülürken, sıçan ve fare modelleri son yirmi yılda karakterize edilmiştir ve LID araştırması için iyi kabul görmüş bir araçtır15,32,33,34<sup...

Levodopa'nın (L-DOPA) PD 1,2'li bireyler için bir tedavi olarak ilk kez tanıtılmasından bu yana 50 yıldan fazla bir süre geçmesine rağmen, parkinson motor semptomları için en etkili tedavi olmaya devam etmektedir. PD ile ilişkili klinik motor semptomlar, substantia nigra (SN) pars compacta'daki dopamin (DA) nöronlarının kaybından kaynaklanır ve bu da striatumdaki mevcut dopaminde dramatik bir azalmaya neden olur. L-DOPA, striatal DA seviyelerini etkili bir şekilde geri yükler ve hastalığın erken dönemlerinde motor fayda sağlar 3,4. Fırsatsız olarak, uzun süreli tedavi ile, PD'li bireylerin çoğunda, günlük yaşam aktivitelerini sıklıkla önemli ölçüde etkileyen kore, distoni ve atetoz dahil olmak üzere L-DOPA ile indüklenen diskineziler (LID) gelişecektir 5,6,7.
Kemirgenlerde LID'nin çeşitli davranışsal modelleri mevcut olsa da, LID'lerin modellenmesi ve davranışsal değerlendirmesindeki farklılıklar, sonuçların laboratuvarlar arasında tekrarlanabilirliğini ve klinik öncesi PD araştırmaları için bu deneysel araçların güvenilirliğini sorgulamıştır. Bir klinik hareket bozukluğu uzmanı8 ile birlikte geliştirilen mevcut protokol, LID indüksiyonu ve derecelendirmesi için basit bir yöntemdir ve 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ile indüklenen tek taraflı nigral lezyon 9,10 kullanan bir sıçan PD modelinde kullanım için uygundur. Burada sağlanan LID derecelendirme ölçeği, çeşitli bireysel vücut kısımlarındaki diskinetik davranışın hem yoğunluğu hem de sıklığı için puanlamayı içerir. Deneylerin iş akışı optimizasyonu ve parkinson ve diskinetik hayvanların uygun bakımı ve kullanımı ile ilgili bilgiler de sağlanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 100 Dakika Dijital Zamanlayıcı</td><td>Zımba</td><td>1111764</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Compass CX Kompakt Ölçekli</td><td>Ohaus</td><td>30428202</td><td></td></tr><tr><td>5- (2-aminoetil) -1,2,4-benzentriol, monohidrobromür</td><td>Cayman Chemicals</td><td>25330</td><td>6-OHDA, kemirgenlerde dopaminerjik lezyonları ve parkinson semptomlarını indüklemek için kullanılan katekolaminerjik bir nörotoksindir.</td></tr><tr><td>Allentown kafesleri</td><td>Allentown, LLC</td><td>Rat900</td><td>Allentown kafesleri, fareleri her yönden görme yeteneği sağlar.</td></tr><tr><td>Kalıcı Olarak Takılan İğneli BD Alerjist Tepsileri</td><td>BD</td><td>BD 305540</td><td>Deri altı L-DOPA enjeksiyonları için</td></tr><tr><td>Benserazid hidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7283</td><td>Benserazid, PD'nin kemirgen modellerinde diskinezi indüklemek için L-DOPA ile birlikte kullanılan periferik bir dekarboksilaz inhibitörüdür.</td></tr><tr><td>Cam kehribar parıldama şişeleri</td><td>Thermo Scientific</td><td>B7921</td><td>L-DOPA / benserazidin -20 ° C'de saklanması için kullanılır; Steril tuzlu su ile karıştırılana kadar C.</td></tr><tr><td>L-3,4-Dihidroksifenilalanin metil ester hidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1507</td><td>L-3,4-Dihidroksifenilalanin metil ester, aşağıdakilerin öncüsüdür&nbsp; Kan-beyin bariyerini geçen L-DOPAVE kemirgenlerde parkinson semptomlarını tedavi etmek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Paper Mate Sharpwriter Mekanik Kalemler</td><td>Zımba</td><td>107250</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen besleyici olarak eksiksiz zenginleştirme davranır</td><td>Bio-Serv</td><td>F05478</td><td></td></tr><tr><td>Kapaklı Yuvarlak Buz Kovası, 2,5 L</td><td>Corning</td><td>432129</td><td></td></tr><tr><td>Standart Plastik Pano</td><td>Zımba</td><td>1227770</td><td></td></tr><tr><td>Çelik kablolu 6 'uzun hareketli raf üniteleri</td><td>Uline</td><td>H9488</td><td>Genişlik / Yükseklik, deney başına ihtiyaca / sıçan sayısına göre ayarlanabilir</td></tr><tr><td>Steril Salin% 0.9</td> <td>Covidien / Argyle</td><td>1020</td><td>Deri altı enjeksiyonlardan önce L-DOPA / benserazid ile karıştırmak için.</td></tr></tbody></table>

parkinson hastalığının sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezilerin İndüksiyonu ve değerlendirilmesi

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

Levodopa (L-DOPA), Parkinson hastalığı (PD) motor semptomlarını tedavi etmek için kullanılan altın standart tedavi olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, L-DOPA ile indüklenen diskineziler (LID'ler) olarak bilinen istenmeyen istemsiz hareketler, bu dopamin öncülünün uzun süreli kullanımı ile gelişir. LID insidansının tedaviden sonraki 10-15 yıl içinde PD'li bireylerin yaklaşık% 90'ına yükseldiği tahmin edilmektedir. Bu hastalığın mekanizmalarını anlamak ve hem yeni hem de etkili anti-diskinezi tedavileri geliştirmek, terapötik müdahalelerin klinik öncesi testleri için tutarlı ve doğru modelleme gerektirir. Burada PD'nin sıçan modelinde 6-OHDA ile indüklenen nigral lezyonu takiben LID'lerin güvenilir indüksiyonu ve kapsamlı derecelendirmesi için ayrıntılı bir yöntem sunulmuştur. Sıçanlarda güvenilir LID değerlendirmesi, PD'li bireyler için bu yaygın tedaviye bağlı yükü azaltmaya veya ortadan kaldırmaya odaklanan yeni tedavileri test etmek için laboratuvarlarda kolayca kullanılabilecek güçlü bir araç sağlar.

Parkinson sıçanlarındaki LID'ler, distonik, hiperkinetik ve stereotipik davranışlar da dahil olmak üzere bir dizi anormal istemsiz hareket (AIM) olarak ortaya çıkabilir. Bu tür davranışlar için LID derecelendirme kriterleri burada hem yoğunluğu (Tablo 1) hem de frekansı (Tablo 2) içerecek şekilde sunulmuştur. Bu, her sıçan için, her derecelendirme zaman noktasında bu davranışlara katılmak için harcanan zamanın kalitesini (yoğunluğunu) ve miktarını (sıklık) yansıtan genel bir LID önem pua...

Bu makalede, Parkinson hastalığının sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezileri indükleme ve değerlendirme yöntemleri açıklanmaktadır. Protokol, hem distonik hem de hiperkinetik olan bir dizi diskinetik davranışın yoğunluğu ve sıklığı hakkında ayrıntılı bilgi sunarak, bu karşılanmamış tıbbi ihtiyacı hedefleyen tedavileri test etmek için güvenilir bir araç sağlar.

Parkinson Hastalığının Sıçan Modelinde Levodopa Kaynaklı Diskinezilerin İndüksiyonu ve Değerlendirilmesi

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...

Protokolümüz, Parkinson hastalığının bir sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezinin güvenilir bir indüksiyonu ve kapsamlı bir şekilde derecelendirilmesi için ayrıntılı bir yöntem sağlar. Diskinezi derecelendirme skalamızın temel avantajı, hem belirli bir anormal istemsiz hareketin yoğunluğunun hem de bu davranışı sergilemek için harcanan zamanın miktarının ölçülmesine izin vermesidir. Levodopa kaynaklı diskinezinin güvenilir hayvan modelleri, Parkinson hastalığı olan bireylerde yan etkiyi azaltmak veya ortadan kaldırmak için etkili tedaviler bulmanın nihai hedefini gerçekleştirmede kritik öneme sahiptir.Ağırlık değişikliklerine göre uygun ilaç miktarını hesaplamak için fareleri haftalık olarak tartarak deney hazırlığına başlayın. Sıçanlara besleyici olarak eksiksiz ve son derece lezzetli muameleler sağlayın. L-DOPA tedavisinin ilk gününde, sıçanları kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi onaylı zenginleştirme ile sağlanan tek konutlara aktarın.Ve davranışsal değerlendirmelere akran müdahalesini önlemek için sıçanları çalışma boyunca tek bir yuvada tutun. Diskinezi derecelendirme günlerinde, davranışsal değerlendirmelere müdahale etmemek için su şişelerini, yiyecek raflarını ve kafesteki zenginleştirmeyi çıkarın ve kafesleri yaklaşık 45 derecelik bir açıyla çelik tel rafa yerleştirin, ardından tanımlama etiketlerini yukarı doğru çevirin. L-DOPA enjeksiyonundan önce, kehribar şişedeki önceden tartılmış liyofilize L-DOPA ve benserazid karışımına uygun miktarda steril salin ekleyin ve 10 saniye boyunca iyice çalkalayın.Hazırlıktan hemen sonra, her hayvan için L-DOPA-Benserazide karışımının gerekli hacmini, 26 gauge iğne ile monte edilmiş ayrı ayrı şırıngalara doldurun ve her bir şırıngayı ayrı bir hayvan tanımlaması ile etiketleyin. İlk kafesi enjeksiyon tezgahına getirdikten sonra, enjeksiyon yüzeyine yerleştirmek için sıçanı kafesinden çıkarın. Sıçanın başını ve omuzlarını avuç içi ile yüzeye karşı dizginlemek için baskın olmayan eli kullanın ve kürek kemiğinin üzerinde baş parmak ve işaret parmağı ile sırttaki cildi fırçalayın.L-DOPA hacmini parmaklar arasındaki deri altı boşluğuna enjekte etmek için baskın eli kullanın ve kas içi enjeksiyonu önlemek için iğneyi vücuda paralel tutun. Enjeksiyondan sonra, sıçanı kafese taşıyın. Daha sonra, zamanlayıcıyı bir ila iki dakika boyunca ayarlayın ve tüm sıçanlar enjekte edilene kadar her bir ila iki dakikada bir sıçan enjekte etme prosedürünü tekrarlayın.Değerlendirme gününde, derecelendirme süresi boyunca herhangi bir davranışın sıklığını tahmin ederken, levodopa kaynaklı diskinezi veya LID davranış yoğunluğunu gözlemlemek için kafesin yanına bir zamanlayıcı yerleştirin. Distonik ve hiperkinetik diskinezi hareketlerinin yoğunluğunu ve sıklığını, LID davranışının ilk başlangıcı, pik davranışı ve istenen sayıda zaman noktasında düşüş fazı dahil olmak üzere derecelendirin. Bir dakikalık derecelendirme aralıkları kullanıyorsanız, ilk sıçanı derecelendirmek için bir dakika için bir zamanlayıcı ayarlayın ve derecelendirmeye bir dakikalık aralıklarla tüm sıçanlar boyunca devam edin.Parkinson sıçanlarında anormal istemsiz davranışlar için LID derecesi, davranışların yoğunluğunu ve sıklığını içerecek şekilde kategorize edildi. Sıçanlarda distonik, hiperkinetik ve stereotipik davranışlar da dahil olmak üzere bir dizi anormal istemsiz hareket gözlenmiştir. Temsili analiz, tüm deneysel zaman çizelgesi ve dozaj programı boyunca pik doz LID olarak sunulan verilerin bir örneğini sunar.Pik doz LID, grup ortalama LID skorunun en yüksek olduğu bir zaman olarak tanımlandı. Ek olarak, LID derecelendirme verileri, her bir günlük derecelendirme süresi boyunca, farklı L-DPOA konsantrasyonlarında, gruplar birleştirilerek ve bireysel hayvanlar olarak çizilerek incelenmiştir. Davranışsal olarak değerlendirilen deneklerden alınan postmortem doku, levodopa kaynaklı diskinezilerle ilişkili moleküler mekanizmaları ve terapötik müdahalelerin bu moleküler mekanizmalar üzerindeki etkisini araştırmak için kullanılabilir.Levodopa kaynaklı diskinezinin hayvan modelleri, bu davranışsal hastalığın altında yattığı düşünülen çeşitli mekanizmaların aydınlatılmasında yararlı olmuştur. Bu anlayış, çeşitli hedeflerin klinik öncesi ve klinik değerlendirmesine yol açmıştır.

induction-assessment-levodopa-induced-dyskinesias-rat-model-parkinson

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Parkinson hastalığı, deneysel 6-OH-dopamin tarafından tetiklenen olabilir striatum, dopaminerjik innervasyon kaybına neden olur. Biz stereotaksik lezyon gerçekleştirmek ve farelerde apomorfin bağlı dönme davranışı nasıl izleneceğini açıklar. Bu model, Parkinson hastalığı için yeni tedavilerin test etmek için faydalı ve güvenilir.

Parkinson Hastalığı için murin Model: 6-OH Dopamin Lezyon Davranış Testi

Bir protokol unilateral 6-OHDA lezyonlar, farelerde medyal önbeyin demet gerçekleştirmek için tarif edilmektedir. Bu yöntem, striatal dopamin ve 90,63&gt;% 95 kaybı gösteren hayatta kalan hayvanların% 89 ile düşük mortalite oranı (% 13.3) ±% -4,02, lezyonun tarafa doğru ipsiversive dönme önyargı vardır.

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

Dopamin değiştirme farmakoterapi L-DOPA ile Parkinson hastalığının en yaygın olarak kullanılan semptomatik tedavi, anormal istemsiz hareketleri olarak adlandırılan diskinezi dahil olmak üzere, yan etkileri ile...

Parkinson Hastalığında nöropeptitler MALDI Görüntüleme Kütle Spektrometresi

Bu video, bir dopamin dönüşüm inhibitörü ile birlikte levodopa uygulayarak bir Parkinson sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezileri indükleme sürecini göstermektedir. Tekrarlanan enjeksiyonlar beyin nöronlarını aşırı uyararak motor disfonksiyona neden olur.

Parkinson Hastalığının Bir Sıçan Modelinde Levodopa ile İndüklenen Diskinezilerin İndüksiyonu

Genel olarak Parkinson hastalığı, hareket bozuklukları, hassas ve güvenilir bir davranış testleri yeni potansiyel terapötikler test etmek için gereklidir. Burada, nigrostriatal sistemine zarar derecelerine ve klinik öncesi çalışmalar için yararlı duyarlı olan fareler için duyu testler yönetilebilir bir pil açıklanmaktadır.

Parkinson Hastalığı Fare Modeller Duyusal Motor Fonksiyon Değerlendirilmesi

Biz bir fare modeli için Parkinson hastaligi MPTP ve davranışsal değerlendirme motor işlevleri ölçmek için silindir ve açık alan testleri kullanarak kullanarak kurulması tanımlamak. O zaman bir örnek olarak PD ilaçların çalışmada bu modeli uygulamak nasıl göstermek için L-DOPA kullanın.

Bir fare MPTP kaynaklı Parkinson hastalığı modelinde kendiliğinden hareket davranış değerlendirme

Osmotik pompalara bağlı bazal ganglia ve serebelluma kanüllerin implantasyonu yoluyla farmakolojik DYT/PARK-ATP1A3 distoni fare modeli oluşturmak için bir protokol salıyoruz. Distopya benzeri hareketlerin indüksiyonunu bir motor meydan okuma uygulaması ve fenotipin davranışsal skorlama sistemleri ile karakterizasyonu ile tanımlarız.

DYT/PARK-ATP1A3 Distonisi Için Semptomatik, Farmakolojik Fare Modeli Kurmak için Osmotik Pompaların İmplantasyonu ve StresIn İndüksiyonu

Burada, MouseWalker aparatının sıçanların artan boyutuna ve ağırlığına uyum sağlayacak şekilde yeniden tasarlanmasıyla inşa edilen RatWalker sistemini tanımlıyoruz. Bu sistem, yürüyüş parametrelerini izlemek ve ölçmek için hayal kırıklığına uğramış toplam dahili yansıma (FTIR), yüksek hızlı video yakalama ve açık erişimli analiz yazılımı kullanır.

Parkinson Hastalığının Genetik Sıçan Modelinde Yürüme Analizi için RatWalker Sisteminin Uygulanması

6-hidroksidopamin (6-OHDA) modeli, Parkinson Hastalığının anlaşılmasını ilerletmek için on yıllardır kullanılmaktadır. Bu protokolde, medial ön beyin demetine 6-OHDA enjekte ederek, motor eksiklikleri değerlendirerek ve basamaklama testini kullanarak lezyonları tahmin ederek sıçanda tek taraflı nigrostriatal lezyonların nasıl gerçekleştirileceğini gösteriyoruz.

Parkinson Hastalığının 6-hidroksidopamin Sıçan Modeli

L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin kemirgen modelleri, L-DOPA'nın tekrarlanan uygulaması nedeniyle ortaya çıkan belirtileri hafifletmek veya gelişimi hafifletmek için terapötik müdahaleleri tanımlamak için paha biçilmez araçlardır. Bu protokol, Parkinson hastalığının tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçan modelinde diskinetik benzeri hareketlerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir.

Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi

Öğrenin Parkinson hastalığı sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezilerin indüksiyonunu ve kapsamlı değerlendirmesini. Bu yöntem, anormal istemsiz hareketlerin şiddetini ve sıklığını nicelendirerek tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

Parkinson Hastalığının Sıçan Modelinde Levodopa Kaynaklı Diskinezilerin İndüksiyonu ve Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet