Farelerde Miyokard Enfarktüsünün İndüksiyonu için Değiştirilmiş Basit Bir Yöntem
3 Aralık 2021
Yeterli anestezi altında, fare kalbi interkostal boşluktan dışsallaştırıldı ve miyokard enfarktüsü, çoğu laboratuvarda kolayca bulunabilen malzemeler kullanılarak sol ön inen arteri (LAD) bağlayarak başarılı bir şekilde indüklendi.
Bu rapor, farelerde miyokard enfarktüsünün indüksiyonu için benzersiz bir yaklaşım sunmaktadır. Mevcut yöntem kolaydır, zaman kazandırır ve çoğu laboratuvarda kolayca bulunan cerrahi tüpleri ve ekipmanları kullanır. Miyokard enfarktüsü modellerinin oluşturulması, MI sonrası yeniden şekillenmenin geçmiş mekanizmalarını ve yeni terapötiklerin varyasyonunu araştırmak için bir öncül sağlar.
Tüy dökücü kremi fare göğsüne uygulayın ve bir dakika bekleyin. Ardından tüy dökücü kremi ve saçı ıslak gazlı bezle nazikçe silin. Fareyi sırtüstü pozisyonda bir ameliyat platformuna sabitleyin.
Cerrahi alanı metinde anlatıldığı gibi dezenfekte edin. Ardından dezenfekte edilmiş alanın etrafına steril bir örtü yerleştirin. Ksifoid ve koltuk altını birbirine bağlayan çizgi boyunca 0,5 santimetrelik bir cilt kesimi yapın ve pektoral majör ve pektoral minör kasları forseps kullanarak kör bir şekilde ayırın.
Mikro Sivrisinek hemostatı kullanarak dördüncü interkostal boşluğu açın. Sol elin işaret parmağı ile kalbi dördüncü interkostal boşluğa doğru iterek dışsallaştırın. Kalbi sol elinizle sabitleyin ve sol ön inen dalı orijinden üç milimetre uzakta 6/0'lık bir dikişle bağlayın.
Kalbi hızlı bir şekilde göğüs boşluğuna geri yerleştirin. Göğüs boşluğuna hafifçe bastırarak havayı göğüs boşluğundan boşaltın. Ameliyat sonrası ağrı yönetimi için, ameliyattan sonra yetmiş iki saate kadar her dört ila altı saatte bir deri altına buprenorfin enjekte edin.
Anesteziden kurtulmak için fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Ötenazi yapılan fareyi sırtüstü pozisyonda ameliyat platformuna sabitleyin. Üst karın bölgesinde yaklaşık üç ila dört santimetrelik bir ventral kesi yapın.
Kaburgaları göğüs boşluğunun her iki tarafından kesin ve ardından diyaframı çıkarın. İntraventriküler enjeksiyon yoluyla kalbi 10 mililitre soğuk dört santigrat derece 1X PBS ile perfüze edin. Daha sonra aort kökünü keserek kalbi toplayın ve hemen eksi 80 santigrat derecede saklayın.
Donmuş kalbi jilet kullanarak buz üzerinde bir milimetre kalınlığında bölümler halinde dilimleyin. Hazırlanan kalp dilimlerini, 10 ila 15 dakika boyunca 37 santigrat derecede bir 1X PBS içinde çözülmüş% 1 TTC çözeltisinde inkübe edin. Ardından bir dijital kamera kullanarak dilimlerin fotoğrafını çekin.
Koroner arter ligasyonunu takiben, TTC boyama analizi, miyokard enfarktüsünün başarılı bir şekilde indüklendiğini ve MI sonrası skar boyutunda zamansal değişiklikler olduğunu gösterdi. Sağkalım analizi sonuçları, erkek ve dişi C57BL / 6J farelerinde MI'dan sonraki yedi gün içinde açık mortalite gösterdi. Ventriküler rüptür, MI sonrası ölümün yaygın bir nedeniydi.
MI sonrası ekokardiyografik değerlendirme, kontraktil disfonksiyon ve ventriküler yeniden şekillenmenin başarılı bir şekilde indüklendiğini gösterdi. Kalbi dışsallaştırmaya çalışırken, önce göğüs boşluğuna basmayın ve direncimizi takip ederek, ağırlıklı övgüye karşı yönü ayarlama ihtiyacını gösterir. Bu prosedürü takiben, kalp hastalığı konularında gen terapilerinin veya hücre tedavilerinin etkinliğini test etmek için viral vektörlerin veya hücrelerin intramiyokardiyal enjeksiyonu yapılabilir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, kolayca erişilebilen cerrahi malzemeler kullanılarak farelerde miyokard enfarktüsü indükleme yöntemi sunmaktadır. Bu teknik, MI sonrası yeniden şekillenmenin çalışılmasına ve yeni terapötiklerin değerlendirilmesine olanak tanır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Kardiyovasküler araştırma
- Miyokard enfarktüsü modelleri
- Hayvan çalışmalarında cerrahi teknikler
Arka Plan
- Miyokard enfarktüsü, kardiyovasküler araştırmalarda kritik bir çalışma alanıdır.
- MI sonrası yeniden şekillenmeyi (remodeling) anlamak, yeni tedavilerin geliştirilmesi için temel teşkil eder.
- Mevcut yöntemler karmaşık olabilir veya özel ekipman gerektirebilir.
- Bu çalışma, yaygın laboratuvar malzemelerini kullanarak süreci basitleştirmeyi amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Farelerde güvenilir bir miyokard enfarktüsü modeli oluşturmak.
- MI sonrası kardiyak yeniden şekillenme üzerine yapılan araştırmaları kolaylaştırmak.
- Kalp hastalıklarında gen ve hücre tedavilerinin test edilmesine olanak sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Cerrahi hazırlık için epilasyon kreminin uygulanması.
- Kalbin interkostal aralık üzerinden dışarı çıkarılması.
- Sol ön inen arterin ligasyonu.
- Postoperatif bakım ve miyokard enfarktüsünün değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Miyokard enfarktüsünün başarılı bir şekilde indüklendiği TTC boyaması ile doğrulandı.
- MI sonrası yedi gün boyunca mortalite oranları gözlemlendi.
- Kontraktil disfonksiyon ve ventriküler yeniden şekillenme belgelendi.
- Yöntem, sonraki terapötik müdahalelere olanak tanır.
Sonuçlar
- Tanımlanan yöntem, farelerde MI indüklemek için verimli ve tekrarlanabilirdir.
- Kardiyak tedaviler üzerine yapılacak daha ileri araştırmalar için bir platform sağlar.
- Gelecekteki çalışmalar, çeşitli müdahaleleri araştırmak için bu modeli temel alabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Alanları
Güçlü in vivo miyokard enfarktüsü (MI) modelleri, kardiyak terapötiklerin preklinik değerlendirmesi ve MI sonrası yeniden yapılanmanın mekanistik çalışmaları için gereklidir. Bu optimize edilmiş koroner arter ligasyonu protokolü, farelerde tekrarlanabilir MI indüksiyonuna olanak tanıyarak translasyonel araştırmaları ve erken evre terapötik hipotez testlerini destekler. Yöntemin erişilebilirliği ve verimliliği, keşif ve preklinik Ar-Ge portföylerinde daha geniş çapta benimsenmesini kolaylaştırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Kardiyak hasar yolaklarının ve MI sonrası yeniden şekillenme mekanizmalarının incelenmesine olanak tanır.
- Terapötik hedeflerin, hastalıkla ilişkili in vivo bir bağlamda fonksiyonel validasyonunu destekler.
- Kardiyak onarımı hedefleyen aday müdahaleler için mekanistik risk azaltmayı kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- MI sonrası gen veya hücre tedavilerinin etkinliğini değerlendirmek için standartlaştırılmış bir platform sağlar.
- Kantitatif değerlendirme için tekrarlanabilir enfarkt boyutu ve kontraktil disfonksiyon sunar.
- Güçlü sonuçlar elde etmek için görüntüleme ve histolojik analizlerle alt süreç entegrasyonuna olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Ventriküler yeniden şekillenme ve sağkalım analizi gibi hastalıkla ilgili sonlanım noktalarıyla uyumludur.
- Mekanistik keşiften preklinik terapötik doğrulamaya kadar olan sürekliliği destekler.
- Müdahale zamanlamasının ve MI sonrası sonuçlar üzerindeki etkisinin değerlendirilmesine olanak tanır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu MI indüksiyon protokolü, erken keşif ve preklinik doğrulama arasındaki ara aşamaya uyum sağlayarak, fizyolojik olarak ilgili bir modelde hipotez odaklı çalışmalara ve aday taramalarına olanak tanır.
- Keşif Biyolojisi: Kardiyak hasar ve onarım mekanizmaları üzerine hipotez testlerini kolaylaştırır.
- Tarama: Karşılaştırmalı etkinlik çalışmaları için tekrarlanabilir enfarkt indüksiyonu sağlar.
- Analitikler: Enfarkt boyutu, kontraktil fonksiyon ve sağkalımın kantitatif ölçümünü destekler.
- Translasyonel Araştırma: Mekanistik içgörüleri in vivo preklinik terapötik değerlendirme ile ilişkilendirir.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Çeşitli kardiyak araştırma programları için ölçeklenebilir ve erişilebilir bir model sunar.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Hedef doğrulaması ve mekanistik çalışmalardaki öngörü güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: MI indüksiyonunu standartlaştırarak teknik değişkenliği ve eğitim yükünü azaltır.
- Stratejik Değer: Kardiyak terapötik adaylar için karar verme (devam/dur) süreçlerini hızlandırır.
- Portföy Etkisi: MI sonrası remodeling'i hedefleyen müdahalelerin risk ayarlı önceliklendirmesini sağlar.
Uygulama Hususları
- Cerrahi yetkinlik ve fare kalp anatomisine aşinalık gerektirir.
- Temel cerrahi aletlere ve ameliyat sonrası bakım altyapısına erişim gereklidir.
- Çok merkezli çalışmalarda tekrarlanabilirlik için ekipler arası standardizasyon gerektirir.
- İntervansiyon çalışmaları için ligasyon sonrası gen veya hücre tedavisi uygulamalarına uyarlanabilir.
- Veri bütünlüğü için mortalite ve teknik değişkenlik izlenmeli ve raporlanmalıdır.
