Name: Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Öğrenin fare kardiyomiyositlerini izole etmek için güvenilir ve verimli bir teknik. Bu yöntem, iskemik süreyi sınırlayarak yüksek verimli hücre elde edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri R01 HL114940 (Biesiadecki), R01 AG060542 (Ziolo) ve T32 HL134616 (Sturgill ve Salyer) tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışmada gerçekleştirilen tüm prosedürler, Ohio State Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından NIH kurallarına uygun olarak onaylanmıştır.
1. Çözelti hazırlama
NOT: Tampon konsantrasyonları için lütfen Tablo 2'ye bakınız.
<ol><li>Ön izolasyon (miyosit izolasyonundan 2 hafta öncesine kadar)<ol><li>Perfüzyon tampon bazı: 1 L ultra saf 18.2 MΩ · cm H2O. 0.22 μm steril filtrasyondan önce pH 7.4'e ayarlayın. İzolasyon gününe kadar 4 °C'de saklayınız.</li>
		<li>Temizleme tamponu: 1 L ultra saf 18,2 MΩ·cm H2 O'da 1 L temizleme tamponu (NaCl, KCl, NaH2PO 4, HEPES, Glikoz, EDTA ve BDM) hazırlayın 0,22 μm steril filtrasyondanönce pH7,4'e ayarlayın. İzolasyon gününe kadar 4 °C'de saklayınız.</li>
		<li>100 mM CaCl 2 stok çözeltisi: 1,11 g CaCl 2'yi tartın ve 100 mL ultra saf 18,2 MΩ · cmH2O. İzolasyon gününe kadar oda sıcaklığında saklayın.</li>
		<li>Liberaz alikotları: 5 mg sindirim enzimini 5 mL steril, RNaz içermeyen suda çözün. 0.8 mL alikot hazırlayın ve izolasyon gününe kadar -20 ° C'de saklayın.</li>
		<li>Bulaşıkları lamine edin: Steril, cam tabanlı 30 mL Petri kaplarına 100 μL 40 μg/mL fare laminin uygulayın. 30 dakika bekletin ve fazla laminin çıkarın. Laminini 30 dakika boyunca oda sıcaklığında UV inkübasyonlu bir Petri kabına yerleştirin. İzolasyon gününe kadar 4 ° C'de saklayın (lamine Petri tabakları 2 haftaya kadar kullanılabilir).</li>
		<li>DMEM ortamı: Bir biyogüvenlik kabininde, 46 mL DMEM'e 2,5 mL FBS, 0,5 mL Penisilin-Streptomisin (50 U/mL-50 μg) ve 1 mL 500 mM BDM ekleyin. İzolasyon gününe kadar 4 ° C'de saklayın (medya 2 haftaya kadar kullanılabilir).</li>
		<li>M199 ortamı: 1 L ultra saf 18,2 MΩ·cm H2 O. Steril filtrasyondan önce pH 7,4'e ayarlayın (0,22 μm filtre). İzolasyon gününe kadar 4 °C'de saklayınız.</li>
		<li>500 mM BDM stoğu: 10 mL ultra saf 18,2 MΩ·cmH2O'ya 0,5 g BDM ekleyin.</li>
		<li>Stabilize edici platform oluşturma: Luer stopcock'a vidalanan iğnenin tabanı etrafındaki kalıp oyun hamuru. Kalbi içerecek ve iğnenin ventrikül enjeksiyonu için uygun yükseklikte olmasını sağlayacak Petri kabına kalıplayın (çanağın tabanının ~ 5 mm üstünde).</li>
	</ol></li>
	<li>İzolasyon günü<ol><li>Perfüzyon tamponu: İzolasyon gününde, 9.5 mg MgCl2 ila 100 mL perfüzyon tampon tabanı ekleyin. 30 mL tamamlanmış perfüzyon tamponunu çıkarmadan önce tamamen karışmaya bırakın ve vidalı kapak kapağı (sindirim tamponu) olan temiz, geniş ağızlı, 100 mL'lik bir cam şişeye yerleştirin. NOT: Bu ilaveler, ilaveleri pH'ı ihmal edilebilir şekilde değiştirdiği için izolasyon gününde ek pH ayarlamaları yapılmadan yapılabilir.<ol><li>12 mL perfüzyon tamponunu çıkarın ve yan tarafa koyun (durdurma tamponu). Kalan 58 mL perfüzyon tamponunu, vidalı kapak kapaklı temiz, geniş ağızlı, 100 mL'lik başka bir cam şişeye dökün. Kalan perfüzyon tamponunu izolasyon boyunca 37 °C'de saklayın.</li>
		</ol></li>
		<li>Sindirim tamponu: 25 μM'lik son konsantrasyon için 7,5 μL 100 mM CaCl2 ila 30 mL perfüzyon tamponu ekleyin. İzolasyondan hemen önce, 26 μg / mL'lik nihai bir konsantrasyon için sindirim tamponuna 770 μL Liberaz ekleyin.</li>
		<li>Durdurma tamponu: 240 mg BSA'yı 12 mL perfüzyon tamponunda çözün. İzolasyon boyunca 37 °C'de saklayın.</li>
		<li>Temizleme tamponu: 3 mL'lik bir temizleme tamponu şırıngası hazırlayın ve kabarcıkların iğnesini temizleyin. İzolasyona kadar buz üzerinde saklayın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Manifold hazırlığı
<ol><li>Sıcaklık kontrollü manifoldu yeni hazırlanmış perfüzyon tamponu ile temizleyin ve kabarcık kalmamasına dikkat edin. Bir Luer kilit konektörü kullanarak, 27 G iğneye vidalayın ve kabarcıkları temizleyin. Başarılı bir izolasyon için temizlenmiş bir manifold gereklidir.</li>
</ol>3. Hayvan hazırlama
<ol><li>İzolasyondan hemen önce fareye intraperitoneal olarak vücut ağırlığına göre 100 mg / kg ketamin ve 20 mg / kg ksilazin enjekte edin. Bu prosedürde 4 aylık bir erkek C57Bl/6 fare kullanılmıştır.</li>
	<li>Gerekirse, sedasyonu teşvik etmek için fareyi ısıtılmış bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin. Farenin kollarını çadırlayın ve kuyruğun uzuvlarını ve tabanını mavi bir laboratuvar bezine bantlayın. Ayak parmağı sıkışma refleksinin çekilmesiyle hayvanın tamamen anestezi altına alındığından emin olun. Ameliyat alanının etrafına steril bir örtü uygulayın.</li>
</ol>4. Kardiyomiyosit izolasyon prosedürü
<ol><li>Farenin sternumunu açığa çıkarın ve orta hatta yanal olarak, kaburgalardan ve aksilladan proksimal olarak kesin. Diyaframı nazikçe tamamen kesin, kalbi önlemek için sığ kesimler sağlayın. Sternumu bir hemostatla sıkıştırın ve göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için kaburgaları geriye doğru katlayın.</li>
	<li>Perikadı kalpten yavaşça çıkarın ve hemen kalbe distal olan inferior vena kavadan tamamen kesin. 3 mL buz gibi soğuk temizleme tamponunu 1 dakika boyunca kalbin sağ ventrikülüne hızlı bir şekilde enjekte etmek için 27 G iğneli 3 mL'lik bir şırınga kullanın.</li>
	<li>Cımbız kullanarak kalbi yavaşça tutun ve aortun mümkün olduğunca çoğunu açığa çıkararak vücuttan çekin. Bir hemostat kullanarak, yükselen aortu kelepçeleyin, atriyumu sıkıştırmamaya dikkat edin ve kalbi göğüsten çıkarın.</li>
	<li>Kelepçeli kalbi, yaklaşık 10 mL ılık perfüzyon tamponu ile bir polipropilen Petri kabının kapağına hızlı bir şekilde aktarın. Kelepçeli kalbi destek platformuna yerleştirin ve 5 dakika boyunca sol ventriküle 10 mL sıcaklık kontrollü 37 °C perfüzyon tamponu enjekte etmek için manifolda bağlı stabilize edilmiş bir 27 G iğne kullanın.</li>
	<li>Kelepçeli kalbi ve destek platformunu yaklaşık 5 mL sindirim tamponuna sahip bir Petri kabına aktarın. Giriş şırıngalarını, 25 mL sindirim tamponuna sahip 50 mL'lik bir şırınga için değiştirin.</li>
	<li>Enjeksiyondan önce herhangi bir kabarcığın manifoldunu ve kalan perfüzyon tamponunu temizleyin. İğneyi dikkatlice sol ventrikül tepesindeki aynı iğne pozisyonuna yerleştirin.</li>
	<li>Sıcaklık kontrollü 37 °C sindirim tamponunu 50 mL'lik bir şırınga kullanarak 15 dakika boyunca sol ventriküle enjekte etmek için bir perfüzyon pompası kullanın. Çözeltinin sıcaklığını, iğnenin sonunda 37 ° C'lik çözeltiyi çıkarmak için önceden kalibre edilmiş bir su ceketi ile kontrol edin.</li>
	<li>Ventrikülleri atriyumdan çıkarın ve 10 mL'lik bir behere aktarın. Beherin içine 3 mL sindirim tamponu ekleyin ve keskin makas kullanarak ventrikülleri büyük parçalar halinde kesin. Beheri alüminyum folyo ile örtün ve 5 dakika boyunca 37 ° C'ye ısıtılmış sallanan bir su banyosuna yerleştirin.</li>
	<li>Süpernatanı atın, herhangi bir doku parçasını çıkarmaktan kaçınmaya dikkat edin. Doku parçalarını 3 mL sindirim tamponunda tekrar askıya alın ve yaklaşık 4 dakika boyunca veya homojen bir karışım elde edilene kadar tritüre edin.</li>
	<li>Hücreleri 70 μm'lik bir naylon hücre süzgecinden 50 mL'lik bir polipropilen tüpe filtreleyin.</li>
	<li>Filtreyi 14 mL'lik yuvarlak tabanlı bir polipropilen tüpe geri koyun ve 100 rpm'de 1 dakika boyunca santrifüj. Supernatantı atın ve peleti 3 mL durdurma tamponunda tekrar askıya alın.</li>
	<li>1,8 mM'lik nihai bir CaCl 2 konsantrasyonu için askıya alınmış hücrelere 54 μL 100 mM CaCl2 stoğu ekleyin. Bu adım, hücre verimini artırmak için kademeli olarak da gerçekleştirilebilir.</li>
	<li>Ölü hücreler içeren süpernatantı çıkarmadan önce canlı hücrelerin 10 dakika boyunca yerçekimi ile yerleşmesine izin verin. Peletin depolama çözeltisinde yeniden askıya alınması (200 μM CaCl2 ile perfüzyon çözeltisi). Bu hücreler artık fonksiyonel deneyler (yani kalsiyum görüntüleme / kasılma, yama kelepçesi, vb.), Kültür vb. İçin kullanılabilir. NOT: Hücreler ayrıca laboratuar veya deneye bağımlı çözeltilerde yeniden askıya alınabilir.</li>
</ol>5. Hücre kültürü
<ol><li>Hücreleri bir hemositometre kullanarak veya ızgaralı bir kapak fişi kullanarak bir alan görünümü sayımı ile sayın. Miyositler çok büyük olduğundan, hemositometre kullanarak saymak her zaman doğru değildir. Bu, izolasyondan yaklaşık kaç hücre elde edildiğine dair bir fikir edinmek için kullanılır.</li>
	<li>DMEM ortamı ile hücreleri ~ 25.000 hücre / mL'ye seyreltin. Her bir kuyucuğa 1 mL hücre çözeltisi ekleyin.</li>
	<li>2 saat boyunca 37 ° C,% 95O2,% 5 CO2'de inkübe edin.</li>
	<li>DMEM ortamını her bir kuyucuktan nazikçe aspire edin ve 2 mL M199 ortamı ekleyin.</li>
	<li>37 ° C'de,% 95 O 2,% 5 CO2'de 24 saate kadar inkübe edin.</li>
</ol>

<ol><li>Ziolo, M. T., Dollinger, S. J., Wahler, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocytes+isolated+from+rejecting+transplanted+rat+hearts+exhibit+reduced+basal+shortening+which+is+reversible+by+aminoguanidine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Myocytes isolated from rejecting transplanted rat hearts exhibit reduced basal shortening which is reversible by aminoguanidine.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 30 (5), 1009-1017 (1998).</li>
<li>Ziolo, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocytes+isolated+from+rejecting+transplanted+rat+hearts+exhibit+a+nitric+oxide-mediated+reduction+in+the+calcium+current%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Myocytes isolated from rejecting transplanted rat hearts exhibit a nitric oxide-mediated reduction in the calcium current.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 33 (9), 1691-1699 (2001).</li>
<li>Traynham, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diesterified+nitrone+rescues+nitroso-redox+levels+and+increases+myocyte+contraction+via+increased+SR+Ca%282%2B%29+handling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Diesterified nitrone rescues nitroso-redox levels and increases myocyte contraction via increased SR Ca(2+) handling.</a> PLoS One. 7 (12), 52005(2012).</li>
<li>Nixon, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+troponin+I+Ser-150+and+Ser-23%2F24+phosphorylation+sustains+thin+filament+Ca%282%2B%29+sensitivity+and+accelerates+deactivation+in+an+acidic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Combined troponin I Ser-150 and Ser-23/24 phosphorylation sustains thin filament Ca(2+) sensitivity and accelerates deactivation in an acidic environment.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 177-185 (2014).</li>
<li>Swager, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Claudin-5+levels+are+reduced+from+multiple+cell+types+in+human+failing+hearts+and+are+associated+with+mislocalization+of+ephrin-B1%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Claudin-5 levels are reduced from multiple cell types in human failing hearts and are associated with mislocalization of ephrin-B1.</a> Cardiovascular Pathology. 24 (3), 160-167 (2015).</li>
<li>Pinckard, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+endocrine+role+for+the+BAT-released+lipokine+12%2C13-diHOME+to+mediate+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A novel endocrine role for the BAT-released lipokine 12,13-diHOME to mediate cardiac function.</a> Circulation. 143 (2), 145-159 (2021).</li>
<li>Roof, S. R., Shannon, T. R., Janssen, P. M., Ziolo, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+increased+systolic+Ca2%2B+and+phospholamban+phosphorylation+during+beta-adrenergic+stimulation+on+Ca2%2B+transient+kinetics+in+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of increased systolic Ca2+ and phospholamban phosphorylation during beta-adrenergic stimulation on Ca2+ transient kinetics in cardiac myocytes.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (4), 1570-1578 (2011).</li>
<li>Harris, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+3%27-sialyllactose+in+breast+milk+is+a+critical+mediator+to+improve+metabolic+health+and+cardiac+function+in+mouse+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced 3'-sialyllactose in breast milk is a critical mediator to improve metabolic health and cardiac function in mouse offspring.</a> Nature Metabolism. 2 (8), 678-687 (2020).</li>
<li>Roof, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXL-1020%2C+a+novel+nitroxyl+%28HNO%29+prodrug%2C+is+more+effective+than+milrinone+in+models+of+diastolic+dysfunction-a+cardiovascular+therapeutic%3A+an+efficacy+and+safety+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">CXL-1020, a novel nitroxyl (HNO) prodrug, is more effective than milrinone in models of diastolic dysfunction-a cardiovascular therapeutic: an efficacy and safety study in the rat.</a> Frontiers in Physiology. 8, 894(2017).</li>
<li>Milani-Nejad, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+and+large+animal+models+in+cardiac+contraction+research%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages.</a> Pharmacology and Therapeutics. 141 (3), 235-249 (2014).</li>
<li>Harary, I., Farley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+studies+of+single+isolated+beating+heart+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vitro studies of single isolated beating heart cells.</a> Science. 131 (3414), 1674-1675 (1960).</li>
<li>Kono, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+collagenases+and+other+proteolytic+enzymes+in+the+dispersal+of+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Roles of collagenases and other proteolytic enzymes in the dispersal of animal tissues.</a> Biochimica Biophysica Acta. 178 (2), 397-400 (1969).</li>
<li>Baker, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+apparatus+for+mammalian+heart+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">An improved apparatus for mammalian heart perfusion.</a> The Journal of Physiology. 115 (1), 30-32 (1951).</li>
<li>Powell, T., Twist, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+technique+for+the+isolation+and+purification+of+adult+cardiac+muscle+cells+having+respiratory+control+and+a+tolerance+to+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">A rapid technique for the isolation and purification of adult cardiac muscle cells having respiratory control and a tolerance to calcium.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 72 (1), 327-333 (1976).</li>
<li>Motayagheni, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Langendorff+technique+for+mouse+heart+cannulation%3A+Improved+heart+quality+and+decreased+risk+of+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Modified Langendorff technique for mouse heart cannulation: Improved heart quality and decreased risk of ischemia.</a> MethodsX. 4, 508-512 (2017).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+procedure+for+isolating+adult+mouse+cardiomyocytes+for+epicardial+activation+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">An improved procedure for isolating adult mouse cardiomyocytes for epicardial activation mapping.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 25 (24), 11257-11263 (2021).</li>
<li>Jian, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cannulation+methods+for+cardiomyocytes+isolation+from+heart+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo cannulation methods for cardiomyocytes isolation from heart disease models.</a> PLoS One. 11 (8), 0160605(2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified%2C+Langendorff-free+method+for+concomitant+isolation+of+viable+cardiac+myocytes+and+nonmyocytes+from+the+adult+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A simplified, Langendorff-free method for concomitant isolation of viable cardiac myocytes and nonmyocytes from the adult mouse heart.</a> Circulation Research. 119 (8), 909-920 (2016).</li>
<li>Weldrick, J. J., Abdul-Ghani, M., Megeney, L. A., Burgon, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+efficient+method+for+the+isolation+of+postnatal+murine+cardiac+myocyte+and+fibroblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">A rapid and efficient method for the isolation of postnatal murine cardiac myocyte and fibroblast cells.</a> Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 96 (5), 535-539 (2018).</li>
<li>Myachina, T. A., Butova, X. A., Khohlova, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+Langendorff-free+method+for+isolation+of+cadiomyocytes+from+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22AIP+Conference+Proceedings%22%5BJournal%5D)">A modified Langendorff-free method for isolation of cadiomyocytes from adult rat heart.</a> AIP Conference Proceedings. 2174 (1), 020140(2019).</li>
<li>Omatsu-Kanbe, M., Yoshioka, K., Fukunaga, R., Sagawa, H., Matsuura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+antegrade+perfusion+method+for+isolating+viable+single+cardiomyocytes+from+neonatal+to+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">A simple antegrade perfusion method for isolating viable single cardiomyocytes from neonatal to aged mice.</a> Physiological Reports. 6 (9), 13688(2018).</li>
<li>Omatsu-Kanbe, M., Fukunaga, R., Mi, X., Matsuura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+antegrade+perfusion+method+for+cardiomyocyte+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An antegrade perfusion method for cardiomyocyte isolation from mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (171), e61866(2021).</li>
<li>Bers, D. M., Patton, C. W., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+the+preparation+of+Ca2%2B+buffers%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A practical guide to the preparation of Ca2+ buffers.</a> Methods in Cell Biology. 99, 126(1994).</li>
<li>Grosso, D. S., Frangakis, C. J., Carlson, E. C., Bressler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+myocytes+from+the+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Preparative+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of myocytes from the adult rat heart.</a> Preparative Biochemistry. 7 (5), 383-401 (1977).</li>
<li>Thum, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butadione+Monoxime+increases+the+viability+and+yield+of+adult+cardiomyocytes+in+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Butadione Monoxime increases the viability and yield of adult cardiomyocytes in primary cultures.</a> Cardiovascular Toxicology. 1 (1), 61-72 (2001).</li>
<li>Wolska, B. M., Solaro, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+isolation+of+adult+mouse+cardiac+myocytes+for+studies+of+contraction+and+microfluorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Method for isolation of adult mouse cardiac myocytes for studies of contraction and microfluorimetry.</a> American Journal of Physiology. 271 (3), 1250-1255 (1996).</li>
</ol>

İfşa edilecek çıkar çatışması yok.

Langendorff içermeyen kardiyomiyosit izolasyon tekniğimizin temel avantajı, Langendorff cihazına kanülasyon gerektirmeyerek hipoksi ve iskemik zamanı sınırlamasıdır. Kalbin çıkarılması, temizlenmesi ve asılması birkaç dakika süren ve genellikle miyositte iskemik hasara neden olan klasik Langendorff tekniklerine alternatif olarak, yöntemimiz buz gibi soğuk bir temizleme çözeltisi ile kanın in vivo temizlenmesini içerir. Buz gibi soğuk temizleme tamponu, etilendiamintetraasetik asit (EDTA) içerir, kalsiyu...

On yıllar boyunca, kardiyak biyoloji literatüründe önemli bir fikir, moleküler etki mekanizmasıdır. Güvenilir çalışmaların yayınlanması için etki mekanizması kurulmalıdır. Moleküler mekanizmayı belirlemek için iyi kurulmuş bir strateji, güvenilir verilere ulaşmak için yüksek kaliteli kardiyomiyositler gerektiren izole kardiyomiyosit çalışmalarıdır. Kardiyomiyositler üzerinde etki mekanizmasını belirlemek için yapılan hücresel ve moleküler deneyler kasılma1, elektrofizyoloji2, kalsiyum (Ca2+) döngüsü3, miyofilamanCa2+ duyarlılığı4, hücre iskeleti5, metabolizma6, hormonların etkileri7, sinyal molekülleri8, ilaç çalışmaları9 araştırmak için altın standarttır ve saire. Fare, genetik manipülasyonun kolaylığı, küçük boyutu, nispeten kısa ömrü, düşük maliyeti vb.10 nedeniyle çoğu kardiyak biyoloji deneyi için tercih edilen tür haline gelmiştir. Bununla birlikte, yüksek kaliteli fare kardiyomiyositlerinin güvenilir izolasyonu, mevcut tekniklerle önemsiz değildir.
Laboratuvarlar neredeyse 70 yıldır kardiyomiyositleri izole ediyor11. Kardiyomiyositleri izole etmek için hemen hemen tüm teknikler, kalbin çeşitli enzimler (kollajenaz, proteaz, tripsin vb.) Erken dönemlerde (1950'ler-1960'lar), kalbin çıkarılmasını, çok daha küçük parçalara ayrılmasını ve kollajenaz / proteaz / tripsin12 ile çözelti içinde inkübe edilmesini içeren yığın yöntemi kullanılmıştır. 1970'lerde laboratuvarlar, koroner arter perfüzyonuna dayalı bir izolasyon tekniği (Langendorff cihazı aracılığıyla enzim ile retrograd perfüzyon) kullanarak kardiyomiyositleri izole eden iyileştirilmiş "Langendorff" yöntemi13'ü uyguladı; Bu teknik, bugün sahada miyosit izolasyonunun baskın yöntemi olmaya devam etmektedir, ~ 50 yıl sonra14,15,16. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, hipoksi süresini ve iskemik hasarı sınırlamak için kalbin in vivo olarak kanüle edilmesine kaymıştır ve bu da üstün kardiyomiyosit izolasyonları (daha iyi verim ve daha yüksek kalite) ile sonuçlanmıştır17. Son zamanlarda, bu in vivo, Langendorff içermeyen kalp perfüzyonları 18,19,20,21,22 performans göstermeye dönüşmüştür. Langendorff-free kardiyomiyosit izolasyon tekniğini Ackers-Johnson ve ark.18 tekniğine dayanarak geliştirdik ve önceki birçok izolasyon tekniğinden çeşitli bileşenleri uyarladık. Bu önemli uyarlamalar, buz gibi soğuk bir temizleme tamponunun enjeksiyonunu ve iğneyi stabilize etmek için destekleyici bir platformun dahil edilmesini içerir ve bu da kalbin manipülasyonunun azaltılmasına izin verir. Bu teknikte ayrıca ayrıntılı olarak açıklanan, enjekte edilen tamponların sıcaklık kontrolüdür (37 ° C), bu da daha önce yayınlandığı gibi daha az EDTA perfüzyonu nedeniyle in vivo enjeksiyon ve sindirim arasındaki süreyi azaltmıştır18. Kalbin manipülasyonunu azaltarak ve dolayısıyla delinme yeri boyutunu en aza indirerek, koroner arterlerin tam ve sürekli perfüzyonu elde edilir. Ayrıca tekniği ikincil bir yığın yöntemi sindirimi, enjekte edilen temizleme tamponundaki EDTA miktarı ile rafine ettik ve pH'ı değiştirdik. Tarif ettiğimiz teknik daha güvenilir, daha verimlidir ve Langendorff aparatının kullanımına kıyasla kapsamlı bir eğitim/uygulama gerektirmez (Tablo 1).

<table><tbody><tr><td>10 cc Bd Luer-Lok Şırınga</td><td>Fisher Sci</td><td>14-827-52</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pyrex Düşük Formlu Beher</td><td>Cole-Palmer</td><td>UX-34502-01</td><td></td></tr><tr><td>100 mL polipropilen kapaklı cam medya saklama şişesi</td><td>DWK Yaşam Bilimleri</td><td>UX-34523-00</td><td></td></tr><tr><td>14 mL Kapaklı Yuvarlak Tabanlı Polipropilen Test Tüpleri</td><td>Fisher Sci</td><td>14-959-11B</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Bütandion Monoksim</td><td>Sigma</td><td>B0753</td><td>>98%</td></tr><tr><td>3 cc BD Luer-Lok Şırınga</td><td>Fisher Sci</td><td>14-823-435</td><td></td></tr><tr><td>35 mm cam alt tabaklar</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-1.0-20-C</td><td></td></tr><tr><td>50 mL BD İğnesiz Şırınga</td><td>Fisher Sci</td><td>13-689-8</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konik Santrifüj Tüpleri</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-22999-84</td><td></td></tr><tr><td>%95 O2 %5 CO2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AIMS Uzay Jeli Isıtma Yastığı</td><td>Fisher Sci</td><td>14-370-223</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide 27 G X 1/2" Hipodermik İğneler</td><td>Becton Dickinson</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Sigma</td><td>A3803</td><td>Isı şoku fraksiyonu, liyofilize toz, esasen yağ asidi içermez, %>98</td></tr> <tr><td>Kalsiyum Klorür dihidrat</td><td>Sigma</td><td>C7902</td><td>>99%</td></tr> <tr><td>D - (+) - Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td>Hücre kültürü için uygun,% >99,5</td></tr> <tr><td>DMEM</td><td>Fisher Sci</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Sci</td><td>AAA1071336</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 100 mm TC ile işlenmiş Hücre Kültürü Kabı</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>R& D Sistemleri (Biyo-teknik)</td> <td>S11195</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Isotemp Isıtmalı Daldırma Sirkülatörleri</td><td>Fisher Sci</td><td>13-874-432</td><td></td></tr><tr><td>Hartman Sivrisinek Hemostatik Forseps</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>15921</td><td></td></tr><tr><td>Hausser Scientific Hy-Lite Sayma Odası Seti</td><td>Fisher Sci</td><td>02-671-11</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H4034</td><td>>99.5%</td></tr><tr><td>Etiketleme Bandı</td><td>Fisher Sci</td><td>15-901-10R</td><td></td></tr><tr><td>Legato 100 Şırınga Pompası</td><td>kdScientific</td><td>788100</td><td></td></tr><tr><td>L-glutatyon</td><td>Fisher Sci</td><td>ICN19467980</td><td></td></tr><tr><td>Liberaz TH Araştırma Sınıfı</td><td>Sigma</td><td>5401135001</td><td>Yüksek termoliz konsantrasyonu</td></tr><tr><td>M199</td><td>Fisher Sci</td><td>MT10060CV</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür</td><td>Invitrogen</td><td>AM9530G</td><td></td></tr><tr><td>Fare Laminin</td><td>Corning</td><td>354232</td><td></td></tr><tr><td>Kalem / Strep</td><td>Fisher Sci</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>>99</td></tr>% <tr><td>Hassas Dijital Pistonlu Su Banyosu</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>TSCIR19</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td>Hücre için uygun kültür</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>>99%</td></tr> <tr><td>Sodyum fosfat monobazik</td><td>Sigma</td><td>S5011</td><td>>99%</td></tr> <tr><td>Steril Hücre Süzgeci 70 ve mikro; m</td><td>Fisher Sci</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Öğrenci İnce Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>VWR Emici Alt Pedler</td><td>Fisher Sci NC9481815</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

A Simple and Effective Method to Consistently Isolate Mouse Cardiomyocytes

Yüksek kaliteli kardiyomiyositler veren tekrarlanabilir ancak teknik olarak basit yöntemlere duyulan ihtiyaç, kalp biyolojisindeki araştırmalar için gereklidir. Kardiyomiyositler üzerinde yapılan hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler (örneğin, kasılma, elektrofizyoloji, kalsiyum döngüsü, vb.) hastalığın mekanizmalarını belirlemek için altın standarttır. Fare, fonksiyonel deneyler için tercih edilen türdür ve açıklanan teknik, özellikle fare kardiyomiyositlerinin izolasyonu içindir. Langendorff aparatı gerektiren önceki yöntemler, aort kanülasyonu için yüksek düzeyde eğitim ve hassasiyet gerektirir ve sıklıkla iskemi ile sonuçlanır. Alan, basit, tekrarlanabilir ve fizyolojik veri toplama ve kültür için uygulanabilir miyositler veren Langendorff'suz izolasyon yöntemlerine doğru kaymaktadır. Bu yöntemler aort kanülasyonuna kıyasla iskemi süresini büyük ölçüde azaltır ve güvenilir bir şekilde elde edilen kardiyomiyositlerle sonuçlanır. Langendorff'suz yönteme adaptasyonumuz, buz gibi soğuk temizleme çözeltisi ile ilk perfüzyonu, perfüzyon sırasında sabit bir iğne sağlayan stabilize edici bir platformun kullanımını ve fonksiyonel ölçümlerde ve kültürde kullanılmak üzere güvenilir bir şekilde elde edilen kardiyomiyositleri sağlamak için ek sindirim adımlarını içerir. Bu yöntemin uygulanması basit ve hızlıdır ve çok az teknik beceri gerektirir.

Bir izolasyonun başarısını belirlerken incelenmesi gereken birkaç unsur vardır. İlk olarak, kardiyomiyositler, Şekil 1'de izole edilen hücreler gibi membran lekeleri olmadan çubuk şeklinde olmalıdır. Tipik bir izolasyon, çubuk şeklindeki miyositlerin ~% 80'ini verecektir. İzolasyon% 50'den daha az çubuk şeklindeki hücreler verirse, başarısız bir izolasyon olarak kabul edilir ve kardiyomiyositler kullanılmaz. Son olarak, kardiyomiyositler sessiz olmalıdır. Spontan kontraksiyon miyositleri Ca2...

Kardiyolojide hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için altın standart kardiyomiyositlerdir. Bu makalede, fare kardiyomiyositlerini izole etmek için Langendorff dışı tekniğe yapılan uyarlamalar açıklanmaktadır.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and ...

Bu teknik daha güvenilir ve verimlidir ve en yaygın kullanılan Langendorff aparat tekniklerine kıyasla kapsamlı bir uygulama veya eğitim gerektirmez. Bu tekniğin temel avantajı, ilk perfüzyon in vivo olarak gerçekleştiği için iskemik zamanı sınırlamasıdır. Bu tekniği uygularken, manifolddaki kabarcıklardan kaçınmak ve sindirim sırasında kalbin aşırı hareketinden kaçınmak önemlidir, bunlar verimi düşürebilir.Bu tekniği gösteren, Dr. Mark Ziolo'nun laboratuvarında yüksek lisans öğrencisi olan Sarah Sturgill olacak. Yeni hazırlanmış perfüzyon tamponunu kullanarak sıcaklık kontrollü manifoldun temizlenmesiyle başlayın. Bunu yapmak için, 27 gauge'lik bir iğneye vidalayın ve bir luer kilit konektörü kullanarak kabarcıkları temizleyin.Hiçbir kabarcık kalmadığından emin olun. Kardiyomiyositi izole etmek için, tamamen anestezi uygulanan farenin sternumunu ve orta hatta yanal olarak maruz bırakın, kaburgalardan ve aksilladan proksimal olarak kesin. Daha sonra diyaframı kesin ve kalbi önlemek için sığ kesimler sağlayın.Sternumu bir hemostatla sıkıştırın ve göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için kaburgaları geriye doğru katlayın. İnferior vena kava'yı hemen kalbe distal kesmeden önce perikardı kalpten yavaşça çıkarın. 27 gauge'lik bir iğne kullanarak bir dakika boyunca kalbin sağ ventrikülüne üç mililitre buz gibi soğuk temizleme tamponu enjekte edin.Ardından, cımbız kullanarak kalbi tutun. Vücuttan uzağa çekin ve aortun mümkün olduğunca çoğunu açığa çıkarın. Daha sonra yükselen aortu bir hemostat kullanarak kelepçeleyin ve kalbi eksize edin.Kelepçeli kalbi hızlı bir şekilde 10 mililitre sıcak perfüzyon tamponu içeren bir polipropilen Petri kabının kapağına aktarın. Kelepçeli kalbi destek platformuna yerleştirin ve manifolda bağlı stabilize edilmiş 27 gauge iğne kullanarak beş dakika boyunca sol ventriküle 37 santigrat derecede 10 mililitre sıcaklık kontrollü perfüzyon tamponu enjekte edin. Ardından, kelepçeli kalbi ve destek platformunu yaklaşık beş mililitre sindirim tamponuna sahip bir Petri kabına aktarın.Giriş şırıngalarını, 25 mililitre sindirim tamponu içeren 50 mililitrelik bir şırınga için değiştirin. Enjeksiyondan önce herhangi bir kabarcığın manifoldunu ve kalan perfüzyon tamponunu temizleyin. İğneyi dikkatlice sol ventrikül tepesindeki aynı iğne pozisyonuna yerleştirin.Bir perfüzyon pompası yardımıyla, 50 mililitrelik bir şırınga kullanarak 15 dakika boyunca sol ventriküle 37 santigrat derece sindirim tamponu enjekte edin. Çözeltinin sıcaklığını, 37 santigrat derece çözeltiyi çıkarmak için kalibre edilmiş bir su ceketi ile kontrol edin. Ventrikülleri 10 mililitrelik bir behere aktarmadan önce atriyumdan çıkarın.Beherin içine üç mililitre sindirim tamponu ekleyin ve ventrikülleri keskin makas kullanarak büyük parçalar halinde kesin. Beheri alüminyum folyo ile örtün ve beş dakika boyunca 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtılmış sallanan bir su banyosuna yerleştirin. Süpernatanı attıktan sonra, doku parçalarını üç mililitre sindirim tamponunda yeniden askıya alın ve yaklaşık dört dakika boyunca veya homojen bir karışım elde edilene kadar tritüre edin.İşiniz bittiğinde, hücreleri 70 mikrometrelik naylon hücre süzgeci kullanarak 50 mililitrelik bir polipropilen tüpe filtreleyin. Naylon hücre süzgecini üç mililitre sindirim tamponu ile yıkayın. Filtratı 14 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir polipropilen tüpe geri koyun ve santrifüj edin.Peletleri üç mililitre durdurma tamponunda yeniden askıya almadan önce süpernatantı atın. Hücre süspansiyonuna, nihai kalsiyum klorür konsantrasyonunu 1.8 milimolar yapmak için 54 mikrolitre 100 milimolar kalsiyum klorür stoğu ekleyin. Canlı hücrelerin 10 dakika boyunca yerleşmesine izin verin ve ölü hücreler içeren süpernatantı çıkarın.Pelet bir depolama çözeltisinde yeniden askıya alındıktan sonra, hücreler fonksiyonel deneyler ve kültürler için kullanılabilir. İzole hücrelerin parlak alan mikroskop görüntüleri, fare kardiyomiyositlerinin izolasyonunun, membran lekeleri veya yuvarlak kenarları olmayan çubuk şeklinde sessiz hücreler ürettiğini göstermiştir. Hücreler, izolasyon tekniğinin başarısını belirleyen yaklaşık% 80 verim ve yüksek sağkalım oranları göstermiştir.Başarılı bir izolasyon için, kabarcıkları manifolddan çıkarmak ve iğneyi kalpteki aynı deliğe sokmak en önemlisidir. İzole edildikten sonra, kardiyomiyositler hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için kullanılabilir.

a-simple-effective-method-to-consistently-isolate-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Birincil fare kardiyomyosit kültürleri miyofibriler organizasyon ve fonksiyon soruşturma için önemli araçlardan biridir. Aşağıdaki protokol neonatal fare kalpleri birincil kardiyomiyositlerde izolasyonunu ve kültür açıklar. Elde edilen kültürler, daha sonra kardiyomiyosit biyomekanik, biyokimyasal ve hücre-biyolojik tahlillerin çeşitli için kullanılabilmektedir.

İzolasyon ve Kültür Yenidoğan Fare kardiyomiyositlerin

Burada bir perfüzyon Langendorff sistemi kullanılarak erişkin fare cardiomyoctyes izolasyonunu tarif eder. Elde edilen hücreler, + toleranslı elektriksel olarak hareketsiz Ca2 ve kültürlenmiş ve adeno-veya gen ekspresyonunu değiştirmek için lentivirüsler ile transfekte edilmiş olabilir. Bunların işlevi de MMSYS sistemi ve yama kelepçe teknikler kullanılarak analiz edilebilir.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare Cardiomyoctyes Fonksiyonel Karakterizasyonu

Yabani tip ve mutant farelerden alınan bireysel kardiyomiyositler, kasılmalarını ve kalsiyum geçişlerini incelemek için kalpten izole edilebilir. Bu, hücresel disfonksiyonun herhangi bir nedenden dolayı kalp disfonksiyonuna katkısının karakterizasyonuna izin verir.

Fare kardiyomiyositlerde İzolasyon ve Fizyolojik Analizi

Biz yetişkin fare kardiyomiyositlerin izolasyonu için güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, genetik olarak tadil edilmiş farelerin çeşitli fonksiyonel yetişkin kardiyomiyositlerde kültürü için tutarlı bir sonuç elde edilir.

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Bu protokol, yüksek verim, saflık ve canlılığa sahip yetişkin fare kardiyomiyositlerinin tekrarlanabilir izolasyonu ve uzun süreli kültürü için adım adım bir yöntemi açıklar.

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde İletimi

Bu protokol, bir öbek sindirim yaklaşımı kullanarak yetişkin fare kalbi tek atriyal kardiyomiyositler izole etmek için kullanılır. Bu yaklaşım, yama kelepçe çalışmalarında atriyal miyosit elektrofizyolojisini karakterize etmek için kullanılabilecek sağ veya sol atriyal miyositleri izole etmek için kullanılır.

Yetişkin fareler atriyal Miyoksit izolasyonu

Burada, yetişkin fare ve sıçan kardiyomiyositlerinin izolasyon, transfeksiyon ve uzun vadeli kültürü için bir protokol sıyoruz.

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Miyositlerin ve miyosit olmayanların tek bir yetişkin fare kalbinin hem atria hem de ventriküllerinden eşzamanlı izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, yüksek oranda uygulanabilir kardiyak miyositlerin ve miyosit olmayanların tutarlı verimini sağlar ve fenotipleme ve in vitro analiz için en uygun hücreye özgü kültür koşullarını detaylandırmaz.

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

Antegrad perfüzyon tekniği ile yüksek kaliteli bireysel fare kalp hücrelerini izole etmek için basit bire yöntemi geliştirdik. Bu yöntem Langendorff içermez ve kardiyak fibroblastlar veya progenitörler gibi ventrikül ve atriyal miyositleri veya interstisyel hücreleri izole etmek için yararlıdır.

Farelerden Kardiyomiyosit İzolasyonu için Antegrad Perfüzyon Yöntemi

Fare modelleri, aritmogenezin temel mekanizmalarının incelenmesine izin verir. Bu amaçla, yama-kelepçe ölçümleri yapmak için yüksek kaliteli kardiyomiyositler gereklidir. Burada, kalsiyum geçicilerinin ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümlerine izin veren retrograd enzim bazlı Langendorff perfüzyonu yoluyla murin atriyal ve ventriküler miyositleri izole etmek için bir yöntem tanımlanmıştır.

Ca2+ geçici ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümleri için yüksek kaliteli murin atriyal ve ventriküler miyositlerin izolasyonu

Bu protokol, yetişkin farelerden atriyal ve ventrikül miyositlerinin eşzamanlı izolasyonu için aort kanülasyonunun derinliğini de içeren Langendorff yönteminin modifikasyonlarını açıklar.

Yetişkin Farelerden Atriyal ve Ventrikül Miyositlerinin Eşzamanlı İzolasyonu için Langendorff Yönteminin Modifikasyonları

Öğrenin fare kardiyomiyositlerini izole etmek için güvenilir ve verimli bir teknik. Bu yöntem, iskemik süreyi sınırlayarak yüksek verimli hücre elde edilmesini sağlar.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Daha fazla video keşfet