Biliopankreatik Kanala Sodyum Taurocholate Retrograd Enjeksiyonu Kullanılarak Fare Şiddetli Akut Pankreatit Modelinin Kurulması
1 Nisan 2022
Burada şiddetli akut pankreatit fare modeli açıklanmıştır. Burada sunulan prosedür çok hızlı, basit ve erişilebilirdir, böylece akut pankreatitteki moleküler mekanizmaların ve farklı terapötik müdahalelerin uygun bir şekilde incelenmesine izin verir.
Bu videonun genel amacı, biliopankreatik kanala sodyum taurocholate retrograd enjeksiyonu yoluyla akut pankreatit fare modeli oluşturmaktır. Hayvanları içeren tüm deneyler Soochow Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylandı. Tüm cerrahi işlemler tam anestezi altında yapıldı.
Analjezikler, önceki literatürler tarafından kanıtlanan ve Soochow Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylanan hastalığın doğal seyrine müdahale etmemek için kullanılmadı. Ameliyattan 8 ila 12 saat önce fareyi hızlı bir şekilde oruç tut. %5 sodyum taurokolat çözelti filtrelerini 0,22 mikro filtre ile hazırlayın.
Cerrahi aletleri ve malzemeleri, mantoları, makası, bıçak tutucuyu, iğne tutucuyu, hemostatik klipsi, damar kelepçelerini ve steril perdeleri de dahil olmak üzere otoklavlayın. Mikro şırınga ışınlama yoluyla sterilize edildi. Fare ile, kilogram başına 50 miligram dozajda% 1 pentobarbital sodyum çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu ile genel bir anesteziye neden olabilir.
Fareyi bantla ışınlanmış köpük düz bir plaka üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Bir farenin kürkünü, xiphoid işlem seviyesinden, sol ve sağ tarafları ön aksiller çizgiye paralel olarak, bilateral ön üst iliyak omurganın bağlantı çizgisine kadar bir depilasyon kremi ile çıkarın. Cildi% 0.5 iodophor ile iki ila üç kez silin ve her seferinde bir ila iki dakika kurumaya bırakın.
Fareyi steril perdelerle örtün. Açık cilt tabakasını kesin ve ardından deri altı olarak açın. Yaklaşık iki ila üç santimetre uzunluğunda ortanca karın kesiği yapın.
Duodenumu mide boyunca soldan sağa doğru bulun. Pankreası, biliopankreatik kanalı ve duodenal papillayı açığa çıkarmak için cerrahi tokmaklar ve dezenfektanla ıslatılmış pamuklu çubuk kullanarak duodenumu yavaşça dışarı ve sol tarafa çekin. 8-0 kullan papillanın etrafındaki duodenum ve pankreas arasındaki bağlantıdan geçmek için dikişler, duodenumu sabitlemek için dikişi fare gövdesinin sol tarafına çekin.
Cildi ve karaciğerin alt kenarını yavaşça kenara çekin. Ortak hepatik kanalı kelepçeleyin. Mikroenjektörü distal biliopankreatik kanala geriye dönük olarak delin.
İğne ucunu duodenal papillanın yakınına bir kelepçe ile sabitleyin. Biliopankreatik kanala dakikada 5 mikrolitre hızında 10 mikrolitre% 5 sodyum taurocholate aşıleyin. Sabit bir basınç elde etmek için biliopankreatik kanalı 5 dakika kapalı tutun.
Kelepçeleri çıkarın. Mikroenjektörü çıkarın, diğer kelepçeyi çıkarın ve dikişi sabitleyin. Duodenumu orijinal anatomik konuma getirin ve kanamayı kontrol edin.
Yarayı 6-0 dikişle kapatın. Steril örtünün çıkarın. Kesiği% 0.5 iodophor ile dezenfekte edin.
Hayvanları 37 santigrat derecelik bir termal ped üzerinde anesteziden kurtarın. Sıvı takviyesi için 0.8 mililitre %0.9 salin deri altından yönetin. Ameliyattan sonra 24 saat, aynı doz ve enjeksiyon rotasını kullanarak fareyi pentobarbital sodyum ile uyuşturun.
Tüm kanı abdominal aorttan toplayın ve serumu serolojik test için izole etmek için 15 dakika boyunca 1,500 x g'da döndürün. Histoloji değerlendirmesi için pankreası ve akciğer dokularını toplayın. Pankreası 24 saat boyunca% 4 paraformaldehit çözeltisine daldırın.
Bir dizi alkol konsantrasyonunda susuz kalsın ve parafin içine gömün. 5 mikro kalın pankreas dokusu bölümleri hazırlamak için bir mikrotom kullanın. Pankreasın histolojik değerlendirmesi için H&E lekeleme gerçekleştirin.
Fareler hafif hareketsizdi ve ameliyat öncesi ile karşılaştırıldığında operasyon sonrası 24 saatte kilo verdi. Operasyon sonrası 72 saatte kontrol ve SAP farelerinin sağkalım oranları sırasıyla %100 ve %72,7 idi. Pankreas bölümlerinden elde edilen H&E boyama sonuçlarına göre, kontrol farelerinde önemli bir değişiklik bulunmazken SAP farelerinde pankreas dokusunun pulpal nekrozu gözlenebilirdi.
Ayrıca SAP farelerinde kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde artmış amilaz, lipaz, pankreas ve akciğer MPO aktivitesi bulunmuştur. Ayrıca ALT, AST, BUN ve kreatinin dahil olmak üzere karaciğer ve böbrek indekslerinde önemli ölçüde yüksek seviyeler bulunmuştur. Sodyum taurocholate'nin biliopankreatik kanala retrograd enjeksiyonu kullanılarak, farelerde şiddetli akut pankreatit indüklenebilir.
Başarılı delinmeyi sağlamak için biliopankreatik kanalın iyi pozlaması. Delinme sırasında, biliopankreatik kanalın delinmesini önlemek için uygun açıyı ve kuvveti sağlayın. Burada descried TC indüklenmiş SAP modeli şiddetli akut pankreatit ile ilgili mekanizmaları incelemek için uygun bir modeldir.
Daha ucuz reaktifler kullanan ekonomik bir modeldir ve bu video acemi cerrahın daha hızlı eğitülmesine yardımcı olur.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, sodyum taurokolatın retrograd enjeksiyonu yoluyla şiddetli akut pankreatiti incelemek için hızlı ve erişilebilir bir fare modelini tanımlamaktadır. Bu model, akut pankreatitteki moleküler mekanizmaların ve terapötik müdahalelerin araştırılmasına olanak sağlar.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Biyoloji
- Patofizyoloji
Arka Plan
- Akut pankreatit, incelenmesi için etkili modeller gerektiren ciddi bir durumdur.
- Mevcut modeller karmaşık ve zaman alıcı olabilir.
- Bu çalışma, farelerde akut pankreatit indükleme sürecini basitleştirmeyi amaçlamaktadır.
- Hastalık mekanizmalarının anlaşılması, daha iyi terapötik stratejilerin geliştirilmesini sağlayabilir.
Çalışmanın Amacı
- Şiddetli akut pankreatizitin güvenilir bir fare modelini oluşturmak.
- Hastalık mekanizmalarının ve tedavi seçeneklerinin incelenmesini kolaylaştırmak.
- Kolayca temin edilebilen reaktifleri kullanarak maliyet etkin bir yöntem sunmak.
Kullanılan Yöntemler
- Biliyopankreatik kanala sodyum taurokolatın retrograd enjeksiyonu.
- Hayvan prosedürlerinin Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylanması.
- Pankreatit indüklemek için anestezi ve cerrahi tekniklerin kullanımı.
- Ameliyat sonrası pankreas dokularının histolojik değerlendirmesi.
Temel Sonuçlar
- Farelerde şiddetli akut pankreatit başarıyla indüklenmiştir.
- Histolojik analizler pankreas dokularında nekroz olduğunu göstermiştir.
- Kontrol ve SAP fareleri arasında serum enzim seviyelerinde anlamlı farklılıklar tespit edilmiştir.
- Model, yüksek sağkalım oranları ve tekrarlanabilirlik sergilemiştir.
Sonuçlar
- Tanımlanan model, şiddetli akut pankreatit çalışmalarında etkilidir.
- Yeni cerrahların prosedür konusunda hızlı bir şekilde eğitilmesine olanak tanır.
- Bu yaklaşım, terapötik müdahalelere yönelik araştırmaları geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önem
Şiddetli akut pankreatizitin güvenilir preklinik modellerinin oluşturulması, erken ilaç keşif sürecinde hedef doğrulaması ve mekanistik risk azaltma çalışmaları için kritik öneme sahiptir. Bu retrograd sodyum taurokolat enjeksiyon modeli, patofizyolojik yolları incelemek ve terapötik adayları değerlendirmek için tekrarlanabilir ve maliyet etkin bir sistem sunar. Modelin erişilebilirliği, pankreatizite odaklı Ar-Ge süreçlerinde yüksek kapasiteli tarama hazırlığını ve translasyonel biyobelirteç uyumunu desteklemektedir.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Nicelendirilebilir pankreatik nekroz ve enzim biyobelirteç yükselmesi yoluyla terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: SAP indüksiyonunda ölçülebilir histopatolojik ve serolojik çıktılar aracılığıyla fonksiyonel hedef doğrulamasını destekler.
- Öngörücü Değer: Öncü madde optimizasyonu için insanla ilişkili SAP patofizyolojisini modelleyerek preklinik risk azaltımını kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Analiz hazırlığı ve bileşik tarama kaskadları için standartlaştırılmış hastalıkla ilgili sistemler oluşturur.
- Operasyonel Değer: Kontrollü biliyopankreatik kanal enjeksiyonu aracılığıyla tutarlı SAP indüksiyonu sağlayarak analiz tekrarlanabilirliğini garanti eder.
- Ölçeklenebilirlik: Düşük reaktif maliyeti ve cerrahi basitliği sayesinde, platformun birden fazla bileşik değerlendirme döngüsü boyunca yeniden kullanımına olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Histopatoloji ve serum biyobelirteçlerini kullanarak, keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar hastalıkla ilgili sistem sürekliliği sağlar.
- Operasyonel Değer: Korelatif serum amilaz, lipaz, ALT, AST, BUN ve kreatinin yükselmeleri aracılığıyla riske göre ayarlanmış ilerleme kararlarını destekler.
- Translasyonel Biyobelirteç Uyumu: Aday terapötiklerin klinik olarak anlamlı pankreas ve organ hasarı belirteçlerine karşı değerlendirilmesine olanak tanır.
İş Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model; hipotez testi, yolak açıklığa kavuşturma ve ön aday belirleme aşamaları öncesinde biyolojik risklerin azaltılmasını sağlayarak erken keşif iş akışlarına entegre olur.
- Keşif Biyolojisi: Nicelendirilebilir doku nekrozu ve inflamatuar belirteç okumaları aracılığıyla SAP yolaklarının mekanistik sorgulamasını destekler.
- Tarama: Standardize retrograd enjeksiyon ve postoperatif serum/doku toplama yoluyla analize hazır, tekrarlanabilir çıktılar sağlar.
- Analizler: Koşulların karşılaştırmalı analizi için serum enzim seviyeleri ve histoloji skorları dahil olmak üzere kantitatif bağımlı değişkenler üretir.
- Translasyonel Araştırma: Klinik SAP tablolarını yansıtan organ hasarı biyobelirteçleri (ALT, AST, BUN, kreatinin) aracılığıyla preklinik süreklilikle bağlantı kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Düşük maliyetli reaktifler, minimum cerrahi karmaşıklık ve yüksek model tekrarlanabilirliği sayesinde yeniden kullanılabilir bir kapasite olarak işlev görür.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: SAP patofizyolojisinin mekanistik risk azaltımı ve hedef etkileşimi doğrulaması yoluyla öngörücü güven sağlar.
- Operasyonel Değer: Basit mikroşırınga tekniği ve tanımlanmış infüzyon parametreleri aracılığıyla standardizasyon, tekrarlanabilirlik ve ölçeklenebilirlik sağlar.
- Stratejik Değer: Erken patofizyolojik modelleme yoluyla geç evre biyolojik riskleri azaltarak go/no-go kararlarını iyileştirir.
- Portföy Etkisi: Go/no-go kriterleri için serum biyobelirteç eşikleri ve histoloji skorlaması kullanarak riskle uyumlu önceliklendirme sağlar.
Uygulama Hususları
- Mikrocerrahi, anestezi uygulaması ve ameliyat sonrası hayvan izleme konularında uzmanlık gerektirir.
- Kanal erişimi için steril cerrahi enstrümantasyona, mikroşırıngaya ve kontrollü infüzyon pompasına bağımlıdır.
- Cerrahi teknik, ameliyat sonrası zamanlama ve serum/doku toplama protokollerinin ekipler arası standartlaştırılmasını gerektirir.
- Adaptasyon hususları arasında fare suşları arasındaki model değişkenliği ve sodyum taurokolata verilen cinsiyete özgü yanıtlar yer alır.
- Pratik sınırlamalar arasında sağkalım oranı değişkenliği ve model tutarlılığını korumak için ameliyat sonrası sıvı takviyesi gereksinimi bulunur.
