Name: Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Anofel Sivrisineklerinde Plasmodium Sporozoitlerin Tespiti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Öğrenin, Anopheles sivrisineklerinde Plasmodium sporozoitlerini tespit etmek için sandwich ELISA yöntemini. Bu teknik, yüksek duyarlılıkla malarya bulaş araştırmalarında büyük ölçekli taramalar yapmayı kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Eğitim ve rehberlik için MVRU'dan Bay Kirakorn Kiatibutr'a teşekkür ederiz. Ayrıca, Şekil 2'nin hazırlanmasındaki teknik yardımı için MVRU'dan Bayan Pinyapat Kongngen'e teşekkür ederiz. Bu çalışma, Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü ve Ulusal Sağlık Enstitüsü (U19 AI089672) tarafından sağlanan bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Reaktiflerin hazırlanması
NOT: Bu protokolde kullanılan ekipman, reaktifler ve diğer sarf malzemelerinin listesi için Malzeme Tablosuna ve çözeltilerin ve bileşimlerinin listesi için Tablo 1'e bakın.
<ol><li>Yakalama ve peroksidaz konjuge mAb'ler<ol><li>mAb'yi sulandırmak için, liyofilize mAb'yi 1: 1 damıtılmış su karışımında yeniden süspanse edin: 0.5 mg / mL'de gliserol. Tekrarlanan donarak çözülmeyi önlemek için gerektiği gibi alikotlar yapın ve bunları -20 °C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Engelleme tamponu (BB)<ol><li>5 g ELISA dereceli kazeini 100 mL 0.1 N NaOH içinde çözerek bloke edici tamponu hazırlayın. Son hacmi 1.0 L'ye getirmek için 900 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ekleyin ( Tablo 1'e bakınız).</li>
		<li>İndikatör olarak 0.02 g fenol kırmızısı ekleyin ve pH'ı HCl ile 7.4'e ayarlayın. BB'yi bir haftaya kadar 4 ° C'de saklayın veya -20 ° C'de uzun süreli depolama için 50 mL'ye alın.</li>
	</ol></li>
	<li>Pozitif kontroller<ol><li>Pozitif kontrolleri yeniden oluşturmak için, 1.000 μL BB ekleyerek liyofilize proteinleri yeniden sulandırın. Stok pozitif kontrol solüsyonlarının gerektikçe ayrılmasını sağlayın ve -20 °C'de saklayın.</li>
		<li>Seri seyreltme için, her bir pozitif kontrolü BB cinsinden nihai çalışma konsantrasyonuna aşağıdaki gibi daha fazla seyreltin: Pf, 2 pg/μL; Pv (VK210), 182 (pg/μL); Pv (VK247), 89 sayfa/μL. NOT: Pozitif kontrollerin konsantrasyonlarının tam konsantrasyonu bir partiden diğerine değişebilir. İhtiyaç duyulan tam konsantrasyon için ürün bilgi sayfasına bakın. Yukarıdaki çalışma konsantrasyonundan başlayarak pozitif kontrol konsantrasyonları, Pf için 2, 1, 0.5, 0.25, 0.13, 0.06 pg/μL'dir; PV210 için 182, 91, 46, 23, 11, 5,7 pg/μL; ve 89, 45, 22, 11, 5.6, 2.8 pg/μL PV247.</li>
	</ol></li>
	<li>Negatif kontroller NOT: İdeal negatif kontrol, test numuneleri ile aynı şekilde hazırlanan dişi Anofel sivrisineklerinin baş-toraks homojenatıdır. Bununla birlikte, BB negatif kontrol olarak da kullanılabilir.<ol><li>Negatif kontrol olarak BB ile, güvenilir pozitif okumalar için 2 kat absorbans eşiğini kullanın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Sivrisinek örneği hazırlama
<ol><li>Toplanan her yetişkin sivrisineğin başını ve göğüs kafesini steril bir tıraş bıçağıyla karından ayırın. Başı ve göğüs kafesi önceden etiketlenmiş 1,5 mL'lik bir santrifüj öğütme tüpüne yerleştirin. İstenirse 10 sivrisineğin havuz başlıkları ve göğüsleri. NOT: Numune hazırlama için, tipik olarak, enfekte bir sivrisinekten alınan tükürük bezi diseke edilecek ve CS-ELISA'ya tabi tutulacaktır. Bununla birlikte, toplanan sivrisineklerin başı ve göğüs kafesi, CS-ELISA'yı doğrudan (tükürük bezleri için diseksiyon yapmadan) gerçekleştirmek için de kullanılabilir12,13,19.</li>
	<li>Her tüpe 50 μL Öğütme Tamponu (GB) ekleyin ve numuneyi temiz bir havaneli (sabunla yıkanmış) ile homojenize edin. Kullanılmış havaneli 250 μL GB ile homojenize sivrisinek(ler)i içeren tüpe ~300 μL'lik bir nihai hacme kadar durulayın.</li>
	<li>Numuneyi kullanana kadar bir dondurucuda (-20 °C) saklayın veya ELISA'yı gerçekleştirmek için hemen devam edin.</li>
</ol>3. Sporozoit ELISA
<ol><li>Sporozoit ELISA çalışma sayfasını doldurun (Ek Materyal 1'e bakınız). Her CSP (Pf, Pv-210 veya Pv-247) için bir ELISA plakası hazırlayın.</li>
	<li>Antikoru PBS'de çözerek yakalama mAb çalışma solüsyonunu hazırlayın: 4 μg/mL Pf; 2 μg/mL Pv-210; 2 μg/mL Pv-247. Plaka başına 5 mL ilavesine dayalı olarak gereken hacimleri hesaplayın. Çözeltiyi nazikçe girdaplayın.</li>
	<li>Adım 3.2'den itibaren çalışan her mAb çözeltisinden 50 μL'yi ELISA plakasının her bir oyuğuna pipetleyin. Plakayı plastik bir kapakla örtün ve 30 dakika veya gece boyunca oda sıcaklığında inkübe edin.</li>
	<li>Kuyu içeriğini aspire edin ve tüm sıvıyı çıkarmak için plakayı en az 5 kez kağıt havluların üzerine baş aşağı vurun. NOT: Bir aspirasyon sistemi (temiz uçlara bağlı çok kanallı vakumlu emme) mevcut değilse, antikorları lavaboya boşaltın ve ardından plakayı kağıt havluların üzerine hafifçe vurun.</li>
	<li>Plakadaki tüm kuyucukları doldurmak için 200 μL BB ekleyin. Plakayı plastik bir kapakla örtün. Plakayı oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. Kuyu içeriğini aspire edin veya boşaltın. Tüm sıvıyı çıkarmak için plakayı kağıt havluların üzerine 5 kez baş aşağı vurun.</li>
	<li>Sivrisinek homojenatını ve kumandayı aşağıdaki gibi plakaya yükleyin.<ol><li>H1 ve H2 kuyularına 50 μL pozitif kontrol ekleyin.</li>
		<li>C satırından G'ye kadar olan sütun 1 ve 2'deki kuyucuklara 50 μL BB ekleyin. Ardından, G1 ve G2 kuyularına 50 μL pozitif kontrol ekleyin. Pozitif kontrolün G1 ve G2'den başlayarak, ardından F1 ve F2'den C1 ve C2'ye kadar seri bir seyreltme yapın. NOT: Tüm pozitif kontrol kuyuları 50 μL içermelidir.</li>
		<li>A1, A2, B1 ve B2 kuyularına 50 μL BB (negatif kontrol) ekleyin.</li>
		<li>Her homojenat numunesinden 50 μL'yi Bilinmeyen (Unk) bir kuyuya ekleyin.</li>
		<li>Plakayı örtün ve oda sıcaklığında 2 saat inkübe edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Yaklaşık 2 saat sonra alt tabakaları hazırlamaya başlayın. ABTS substrat 2 bileşenli kit için, substrat A ve substrat B'yi 1:1 oranında karıştırın. NOT: Tam 96 oyuklu bir plaka, 5 mL substrat A ve 5 mL substrat B gerektirir.</li>
	<li>1 μg/mL'lik bir çalışma konsantrasyonu elde etmek için sulandırılmış konjuge mAb'ye BB ekleyerek Pf, Pv-210 ve Pv-247 için peroksidaz etiketli mAb'lerin çalışma çözeltilerini hazırlayın.<ol><li>Plaka başına 5 mL çalışma eşleniği mAb çözeltisinin eklenmesine dayalı olarak gerekli hacimleri hesaplayın.</li>
		<li>Peroksidaz aktivitesini, adım 3.8'de yapılan peroksidaz etiketli mAb'nin 5 μL'sini, adım 3.7'de yapılan 100 μL substrat ile ayrı bir 1.5 mL'lik tüpte karıştırarak test edin. Yavaşça girdap. NOT: Berraktan yeşile hızlı bir renk değişimi olmalıdır, bu da peroksidaz enziminin ve substratların çalıştığını gösterir.</li>
	</ol></li>
	<li>Kuyu içeriğini aspire edin veya boşaltın ve tüm sıvıyı çıkarmak için plakayı kağıt havluların üzerine 5 kez baş aşağı vurun.</li>
	<li>Kuyuları 200 μL PBS-Tween ile iki kez yıkayın, kuyu içeriğini aspire edin ve plakaya her biri 5 kez vurun.</li>
	<li>Her bir oyuğa adım 3.8'de yapılan 50 μL peroksidaz etiketli mAb ekleyin. Plakayı örtün ve karanlıkta oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. Kuyu içeriğini aspire edin veya boşaltın ve plakayı 5 kez bir kağıt havluya baş aşağı vurun.</li>
	<li>Kuyuları 200 μL PBS-Tween ile 3 kez yıkayın, kuyu içeriğini aspire edin ve plakaya her biri 5 kez vurun.</li>
	<li>Her bir oyuka adım 3.7'de hazırlanan substrat çözeltisinden 100 μL ekleyin. Plakayı örtün ve karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin.</li>
	<li>30 dakika sonra, bir ELISA plaka okuyucu kullanarak 405-414 nm'de absorbansı okuyun. NOT: Kullanılan ELISA plaka okuyucu için özel talimatları izleyin. Bu protokol için kullanılan yazılımın talimatlarıyla ilgili ayrıntılar için Ek Materyal S2'ye bakın. Pozitif kontrol kuyularında berraktan yeşile gözle görülür bir renk değişimi olmalıdır.</li>
</ol>4. Analiz
<ol><li>Pozitif numunelerin tespit edilmesi.<ol><li>Absorbans değerleri kesme değerin üzerinde olan numuneleri (negatif numunelerin ortalama absorbans değerinin iki katı) pozitif olarak etiketleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>CSP'nin Ölçülmesi<ol><li>Aşağıdaki gibi kontrol seyreltme serisinden oluşturulan standart eğriyi kullanarak numunedeki CSP konsantrasyonunu tahmin edin.<ol><li>Seri olarak seyreltilmiş kontrollerin absorbans değerlerini (y ekseni) konsantrasyonlarına (x ekseni) göre çizerek standart eğriyi oluşturun.</li>
			<li>A ve B'nin serbest parametreler olduğu y = A + Bx kullanarak en uygun olanı belirlemek için doğrusal regresyon gerçekleştirin.</li>
			<li>Belirli bir absorbans değeri için denklemi çözerek her pozitif numune için CSP konsantrasyonunu belirleyin.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Bray, R. S., Garnham, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+life-cycle+of+primate+malaria+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22British+Medical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">The life-cycle of primate malaria parasites.</a> British Medical Bulletin. 38 (2), 117-122 (1982).</li>
<li>Held, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primate+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Primate malaria.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 162 (1), 587-593 (1969).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+Malaria+and+Other+Parasitic+Diseases.+Manual+on+practical+entomology+in+Malaria%2C+Part+I+and+Part+II%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Division of Malaria and Other Parasitic Diseases. Manual on practical entomology in Malaria, Part I and Part II.</a> World Health Organization. , Geneva. (1975).</li>
<li>Robert, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+distribution+of+circumsporozoite+antigen+in+Anopheles+gambiae+infected+with+Plasmodium+falciparum%2C+using+the+enzyme-linked+immunosorbent+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+Royal+Society+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Study of the distribution of circumsporozoite antigen in Anopheles gambiae infected with Plasmodium falciparum, using the enzyme-linked immunosorbent assay.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 82 (3), 389-391 (1988).</li>
<li>Fontenille, D., Meunier, J. Y., Nkondjio, C. A., Tchuinkam, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+circumsporozoite+protein+enzyme-linked+immunosorbent+assay+compared+with+microscopic+examination+of+salivary+glands+for+calculation+of+malaria+infectivity+rates+in+mosquitoes+%28Diptera%3A+Culicidae%29+from+Cameroon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Use of circumsporozoite protein enzyme-linked immunosorbent assay compared with microscopic examination of salivary glands for calculation of malaria infectivity rates in mosquitoes (Diptera: Culicidae) from Cameroon.</a> Journal of Medical Entomology. 38 (3), 451-454 (2001).</li>
<li>Echeverry, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+robust+single+PCR+for+Plasmodium+sporozoite+detection+in+mosquitoes+using+the+cytochrome+oxidase+I+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Fast and robust single PCR for Plasmodium sporozoite detection in mosquitoes using the cytochrome oxidase I gene.</a> Malaria Journal. 16 (1), 230(2017).</li>
<li>Singh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genus-+and+species-specific+nested+polymerase+chain+reaction+malaria+detection+assay+for+epidemiologic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">A genus- and species-specific nested polymerase chain reaction malaria detection assay for epidemiologic studies.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 60 (4), 687-692 (1999).</li>
<li>Snounou, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotyping+of+Plasmodium+spp.+Nested+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genotyping of Plasmodium spp. Nested PCR.</a> Methods in Molecular Medicine. 72, 103-116 (2002).</li>
<li>Snounou, G., Singh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nested+PCR+analysis+of+Plasmodium+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nested PCR analysis of Plasmodium parasites.</a> Methods in Molecular Medicine. 72, 189-203 (2002).</li>
<li>Snounou, G., Viriyakosol, S., Jarra, W., Thaithong, S., Brown, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+four+human+malaria+parasite+species+in+field+samples+by+the+polymerase+chain+reaction+and+detection+of+a+high+prevalence+of+mixed+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Biochemical+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Identification of the four human malaria parasite species in field samples by the polymerase chain reaction and detection of a high prevalence of mixed infections.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 58 (2), 283-292 (1993).</li>
<li>Wirtz, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Plasmodium+vivax+sporozoites+in+mosquitoes+using+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Identification of Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes using an enzyme-linked immunosorbent assay.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 34 (6), 1048-1054 (1985).</li>
<li>Wirtz, R. A., Burkot, T. R., Graves, P. M., Andre, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+evaluation+of+enzyme-linked+immunosorbent+assays+for+Plasmodium+falciparum+and+Plasmodium+vivax+sporozoites+in+mosquitoes+%28Diptera%3A+Culicidae%29+from+Papua+New+Guinea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Field evaluation of enzyme-linked immunosorbent assays for Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes (Diptera: Culicidae) from Papua New Guinea.</a> Journal of Medical Entomology. 24 (4), 433-437 (1987).</li>
<li>Wirtz, R. A., Sattabongkot, J., Hall, T., Burkot, T. R., Rosenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+Plasmodium+vivax-VK247+sporozoites%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for Plasmodium vivax-VK247 sporozoites.</a> Journal of Medical Entomology. 29 (5), 854-857 (1992).</li>
<li>Burkot, T. R., Williams, J. L., Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Plasmodium+falciparum-infected+mosquitoes+by+a+double+antibody+enzyme-linked+immunosorbent+assay%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Identification of Plasmodium falciparum-infected mosquitoes by a double antibody enzyme-linked immunosorbent assay.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 33 (5), 783-788 (1984).</li>
<li>Rosenberg, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circumsporozoite+protein+heterogeneity+in+the+human+malaria+parasite+Plasmodium+vivax%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Circumsporozoite protein heterogeneity in the human malaria parasite Plasmodium vivax.</a> Science. 245 (4921), 973-976 (1989).</li>
<li>Marie, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+real-time+quantitative+PCR+to+measure+the+wild+Plasmodium+falciparum+infectivity+rate+in+salivary+glands+of+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a real-time quantitative PCR to measure the wild Plasmodium falciparum infectivity rate in salivary glands of Anopheles gambiae.</a> Malaria Journal. 12, 224(2013).</li>
<li>Arevalo-Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoreactivity+of+sera+from+low+to+moderate+malaria-eEndemic+areas+against+Plasmodium+vivax+rPvs48%2F45+proteins+produced+in+Escherichia+coli+and+chinese+hamster+ovary+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunoreactivity of sera from low to moderate malaria-eEndemic areas against Plasmodium vivax rPvs48/45 proteins produced in Escherichia coli and chinese hamster ovary systems.</a> Frontiers in Immunology. 12, 634738(2021).</li>
<li>Balkew, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+the+distribution%2C+bionomics%2C+and+insecticide+susceptibility+of+Anopheles+stephensi+in+Ethiopia%2C+2018-2020%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">An update on the distribution, bionomics, and insecticide susceptibility of Anopheles stephensi in Ethiopia, 2018-2020.</a> Malaria Journal. 20 (1), 263(2021).</li>
<li>Wirtz, R. A., Avery, M., Benedict, M., Sutcliffe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+sporozoite+ELISA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Anopheles+Research%22%5BJournal%5D)">Plasmodium sporozoite ELISA.</a> Methods in Anopheles Research. , 333-343 (2016).</li>
<li>Durnez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((False+positive+circumsporozoite+protein+ELISA%3A+a+challenge+for+the+estimation+of+the+entomological+inoculation+rate+of+malaria+and+for+vector+incrimination%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">False positive circumsporozoite protein ELISA: a challenge for the estimation of the entomological inoculation rate of malaria and for vector incrimination.</a> Malaria Journal. 10, 195(2011).</li>
</ol>

Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

CSP-ELISA, Plasmodium CSP'yi tespit etmek için oldukça spesifik ve uygun maliyetli bir yöntem sağlar. P. falciparum ve P. vivax sporozoitlerin yanı sıra P vivax 11,13,14,15'in iki alt tipi olan VK210 ve VK247 arasında ayrımcılığa izin verir. Güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için bazı kritik noktalara dikkat edilmelidir. Mikrobiyal üremeyi önle...

Plasmodium sporozoitler, sivrisineklerdeki sıtma parazitlerinin bulaşıcı aşamasıdır. Sporozoitler insanlara sivrisinek ısırıkları yoluyla verilir. Sivrisinekte, sporozoitler ilk olarak orta bağırsak duvarındaki ookistlerin içinde oluşur. Hazır olduklarında hemokoele salınırlar ve sivrisinek tükürük bezlerine giderler. Orada olgunlaşırlar ve kanla beslenme sırasında insanlara bulaşmaya hazır hale gelirler. İnsanlarda, sporozoitler dermiste biriktirilir. Daha sonra kan damarına girerler ve hepatositlerde enfeksiyon oluşturmak için karaciğere ulaşmak için kan dolaşımı boyunca hareket ederler 1,2.
Sivrisinek tükürük bezlerinin sporozoit enfeksiyonunu belirlemek için üç farklı yöntem kullanılmıştır. İlk yöntem, tükürük bezlerinin diseksiyonu ve ardından sporozoitlerin ışık mikroskobu altında doğrudan incelenmesidir. Bu yöntem, Anofel sivrisinek tükürük bezlerindeki sporozoitleri tespit etmek ve ölçmek için altın standarttır3. Bununla birlikte, hem diseksiyon hem de mikroskobik inceleme konusunda iyi eğitimli bir teknisyen gerektirir. Ayrıca, Plasmodium türlerini ve CSP alt tiplemesini belirlemek için kullanılamaz (P. vivax için)4,5. İkinci yöntem, sivrisinek gövdesinin üst kısmındaki Plasmodium DNA'yı tespit etmek için polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanır6. PCR'nin özgüllüğü göz önüne alındığında, parazitin hem türü hem de alt tiplemesi mümkündür 7,8,9,10. PCR giderek daha fazla kullanılmasına rağmen, nispeten pahalı ekipman ve iyi eğitimli personel gerektirir. Plasmodium'a özgü circumsporozoite proteinini (CSP) tespit etmek için son yöntem olan ELISA, otuz yıldır temel dayanak noktası olmuştur 11,12,13. CSP hem ookist sporozoitlerinde hem de tükürük bezi sporozoitlerindebulunur 12,14. Spesifik antikorlar kullanarak, bu yöntem Plasmodium türlerinin tanımlanmasına ve P. vivax sporozoitlerin CSP alt tiplemesine izin verir. Bu testin mantığı, sıtma bulaşmasını anlamak (yani sporozoit enfeksiyon oranını belirlemek) için çok sayıda yabani sivrisineği incelemek için basit bir yüksek verimli testin gerekliliğidir.
ELISA yönteminin mikroskobik incelemeye göre iki önemli avantajı vardır. İlk olarak, araştırmacıların sivrisinek örneklerini örnek işleme için hazır olana kadar tutmalarına izin verir. İkincisi, ELISA yöntemi, türe özgü monoklonal antikorlar aracılığıyla Plasmodium türlerini ayırt etmek için kullanılabilir. Ek olarak, ELISA daha fazla sayıda sivrisinek örneğini barındırabilir ve çok daha yüksek bir verime izin verir15. Sporozoit DNA'sını tespit eden PCR ile karşılaştırıldığında, ELISA prosedürü daha fazla zaman alır ancak daha az maliyetlidir16. Burada tarif edilen ELISA testi, sivrisinek enfektivitesini belirlemek ve P. falciparum'un CSP'sini ve P. vivax, VK210 ve VK247'nin iki CSP varyantının her birini ayrı ayrı tespit etmek için geliştirilmiştir. Bu ELISA yöntemi, sivrisinek enfeksiyonunun mevsimsel dinamiklerini belirlemek ve 12,13,17,18 alanındaki başlıca sıtma vektörlerinin türlerini belirlemek için birçok çalışmada kullanılmıştır. Bu testi gerçekleştirmek için, bir ELISA plaka okuyucu ile donatılmış standart bir laboratuvar yeterlidir.
Genel yaklaşım Şekil 1'de özetlenmiştir. Bu sandviç ELISA'da, her bir Plasmodium türü/alt tipi için spesifik olan birincil (yakalama) monoklonal antikor (mAb) ilk olarak ELISA plakasını kaplamak için kullanılır. Her plaka tek bir yakalama mAb ile kaplanmıştır. mAb'nin işlevi, sivrisinek homojenatlarında karşılık gelen CSP antijenini yakalamaktır. Antijen yakalama ve plaka yıkamalarından sonra, yakalama mAb'sine bağlı CSP'nin varlığını tespit etmek için peroksidaz ile işaretlenmiş ikinci bir CSP'ye özgü antikor kullanılır. Peroksidaz tarafından katalize edilen kimyasal reaksiyon, CSP için pozitif kuyularda renk gelişimi ile sonuçlanır.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Ekipman< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ELISA plaka okuyucu</td><td>BioTek Instrument, Inc.</td><td>Synergy H1</td><td>Absorbans, UV-VIS absorbans algılama modu kullanılarak ölçülür</td></tr><tr><td>Öğütücü tokmak tokmağı</td><td>Axygen</td><td>PES-15-B-SI</td><td>Sivrisinek başını/toraksını</td></tr><tr><td><güçlü>Reaktifleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABTS substratını homojenleştirmek için 2 bileşenli</td><td>KPL</td><td>50-62-00</td><td>Peroksidaz tahrikli algılama için</td></tr><tr><td>Engelleme tamponu (BB)</td><td></td><td></td><td>Not: çözelti</td></tr><tr><td>Yakalama ve peroksidaz konjuge monoklonal antikorlar (mAbs)Not</td><td></td><td></td><td>: mAbs, Sporozoit ELISA Reaktif Kitlerinin (P. falciparum için MRA-890 ve P. vivax için MRA-1028K) bir parçası olarak liyofilize formda elde edilebilir. BEI Kaynaklarından (https://www.beiresources.org.)</td></tr><tr><td>Kazein</td><td>Sigma aldrich</td><td>9000-71-9</td><td>Tampon hazırlığını engellemek için</td></tr><tr><td>Öğütme tamponu (GB)</td><td></td><td></td><td>Not: çözelti</td></tr><tr><td>Igepal CA-630</td><td>Sigma aldrich</td><td>9002-93-1</td><td>Öğütme tamponu hazırlığı için</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma aldrich</td><td>7447-40-7</td><td>Fosfat tamponu tuzlu su hazırlığı için</td></tr><tr><td>KH2PO4 </td><td>Sigma aldrich</td><td>7778-77-0</td><td>Fosfat tamponu tuzlu su hazırlama için</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Fosfat tamponu tuzlu su hazırlığı için</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Fosfat tamponu tuzlu su hazırlığı için</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma aldrich</td><td>1310-73-2</td><td>Tampon hazırlığını bloke etmek için</td></tr><tr><td>PBS-Tween</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pf yakalama mAb</td><td>CDC</td><td>Pf-CAP</td><td>Pf circumsporozoit proteini</td></tr><tr><td>Pf peroksidaz mAb</td><td>CDC</td><td>Pf-HRP</td><td>Pf circumsporozoit proteinini tespit etmek için</td></tr><tr><td>Pf pozitif kontrol</td><td>CDC</td><td>Pf-PC</td><td>Pf pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Fenol kırmızı</td><td>Sigma aldrich</td><td>143-74-8</td><td>Tampon hazırlamayı engellemek için</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td></td><td></td> <td>Not: çözelti</td></tr><tr><td>Pozitif kontroller</td><td></td><td></td><td>Not: çözelti</td></tr><tr><td>Pv210 yakalama mAb</td><td>CDC</td><td>Pv210-CAP</td><td>Pv210 circumsporozoite proteini yakalamak için</td></tr><tr><td>Pv210 peroksidaz mAb</td><td>CDC</td><td>Pv210-HRP</td><td>Pv210 circumsporozoite proteini</td></tr><tr><td>Pv210 pozitif kontrol</td><td>CDC</td><td>Pv210-PC'yi tespit etmek için</td><td>Pv210 pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Pv247 yakalama mAb</td><td>CDC</td><td>Pv247-CAP</td><td>Pv247 circumsporozoite proteini yakalamak için</td></tr><tr><td>Pv247 peroksidaz mAb</td><td>CDC</td><td>Pv247-HRP</td><td>Pv247 circumsporozoite proteinini tespit etmek için</td></tr><tr><td>Pv247 pozitif kontrol</td><td>CDC</td><td>Pv247-PC</td><td>Pv247 pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma aldrich</td><td>9005-64-5</td><td>PBS-Tween hazırlığı için</td></tr><tr><td>< güçlü > Sarf malzemeleri< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tek kullanımlık pipetleme rezervuarları</td><td>Jenerik</td><td></td><td>Çalışma reaktifleri için</td></tr><tr><td>ELISA plakaları: ELISA için 96 iyi şeffaf yuvarlak alt PVS</td><td>Corning Life Science</td><td>2797</td><td></td></tr><tr><td>Eldivenler: tek kullanımlık eldivenler ve dondurucu eldivenleri</td><td>Jenerik</td><td></td><td>Kişisel koruma için</td></tr><tr><td>Laboratuvar önlüğü</td><td>Jenerik</td><td></td><td>kişisel koruma için</td></tr><tr><td>Çok Kanallı Pipet P30-300</td><td>Jenerik Solüsyon</td><td></td><td>transferi için</td></tr><tr><td>Pipet seti, P2, P20, P200 ve P1000</td><td>Jenerik Solüsyon</td><td></td><td>transferi için</td></tr><tr><td>Pipet uçları 10 ve mikro; L, 200 ve mikro; L ve 1000 &mikro; L</td><td>Jenerik</td><td></td><td>Çözelti transferi için</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler 5 mL, 10 mL</td><td>Jenerik</td><td></td><td>Çözelti transferi için</td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Jenerik</td><td></td><td>Çözelti transferi için</td></tr></tbody></table>

enzime bağlı İmmünosorbent testi kullanılarak anofel sivrisineklerinde plasmodium sporozoitlerin tespiti

Detection of Plasmodium Sporozoites in Anopheles Mosquitoes using an Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Plasmodium sporozoitler, insanları enfekte eden sıtma parazitlerinin enfektif aşamasıdır. Dişi Anofel sivrisineklerinin tükürük bezlerinde bulunan sporozoitler, kanla beslenme sırasında sivrisinek ısırıkları yoluyla insanlara bulaşır. Sivrisinek tükürük bezlerinde sporozoitlerin varlığı bu nedenle sivrisinek bulaşıcılığını tanımlar. Bir Anofel sivrisineğinin Plasmodium sporozoitleri taşıyıp taşımadığını belirlemek için, enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) yöntemi, sporozoitlerin ana yüzey proteini olan Plasmodium circumsporozoite proteinini (CSP) tespit etmek için standart bir araç olmuştur. Bu yöntemde, her bir sivrisineğin göğüs kafesi ile birlikte baş, karından ayrılır, homojenize edilir ve Plasmodium falciparum'a özgü CSP'nin ve Plasmodium vivax'ın iki alt tipinin her biri olan VK210 ve VK247'nin varlığını tespit etmek için bir sandviç ELISA'ya tabi tutulur. Bu yöntem, sivrisinek enfeksiyonunun mevsimsel dinamikleri ve çalışma alanlarındaki başlıca sıtma vektörlerinin türleri dahil olmak üzere sıtma bulaşmasını incelemek için kullanılmıştır.

Temsili ELISA sonuçları Şekil 2'de gösterilmiştir. Bu deneyde, P. falciparum ELISA A7 kuyusunda sporozoit enfeksiyonu tespit etti. Pozitif kuyu, soluk yeşil rengiyle görsel olarak tespit edilebilir (Şekil 2A). Bu kuyunun absorbans değeri, kesme eşiğinin üzerindeydi (dört negatif kontrol kuyusunun ortalama değerinin iki katı) (Şekil 2B). 80 bilinmeyen kuyunun tümünün absorbans değerlerinin dağılımı Şekil...

Bu protokol, sivrisineklerde tükürük bezi sporozoitlerini tespit etmek için sandviç enzime bağlı bir immünosorbent testini tanımlar. Kolayca bulunabilen monoklonal antikorları kullanan yöntem, Plasmodium falciparum veya Plasmodium vivax taşıyan sivrisineklerin uygun maliyetli, yüksek verimli tespitini sağlar. Yöntem, vektör araştırmaları da dahil olmak üzere sıtma bulaşma araştırmaları için uygundur.

Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Anofel Sivrisineklerinde Plasmodium Sporozoitlerin Tespiti

Plasmodium sporozoites are the infective stage of malaria parasites that infect humans. The sporozoites residing in the salivary glands of female ...

ELISA tekniği, sivrisinek vektöründeki sıtma parazitini yüksek hassasiyet ve özgüllükle tespit etmek ve aynı anda çok sayıda numuneyi işleyebilmek için gerçekten yararlıdır. Bu teknik, araştırmacıların sivrisinek örneklerini örnek işleme için hazır olana kadar tutmalarına olanak tanır ve türe özgü monoklonal antikorlar kullanılarak Plasmodium türlerini ayırt etmek için gerçekleştirilebilir. Sivrisineklerin başını ve göğüs kafesini karından ayırarak numuneyi hazırlayın ve önceden etiketlenmiş 1.5 mililitrelik bir santrifüj öğütme tüpüne yerleştirin.Her tüpe 50 mikrolitre öğütme tamponu ekleyin ve numuneyi bir havaneli ile homojenize edin. Havaneli 250 mikrolitre öğütme tamponu ile durulayın ve son hacmi 300 mikrolitreye çıkarmak için çözeltiyi tüpe ekleyin. Circumsporozoite proteini için bir ELISA plakası hazırlayın ve sporozoit ELISA çalışma sayfasını doldurun.Antikor çözeltisini PBS'de hazırlayın ve plaka başına beş mililitre çözelti ekleyin. ELISA plakasının her bir oyuğuna 50 mikrolitre antikor solüsyonu pipetleyin. Tabağa bir kapak yerleştirin ve 30 dakika veya gece boyunca oda sıcaklığında inkübe edin.Çözeltiyi kuyuya aspire edin ve sıvıyı çıkarmak için plakayı bir kağıt havluya beş kez vurun. Kuyu plakalarına 200 mikrolitre engelleme tamponu ekleyin ve bir kapakla kapatın. Oda sıcaklığında bir saat inkübe edin ve kuyu içeriğini aspire edin.Sıvıyı çıkarmak için plakayı tekrar bir kağıt havluya vurun. H bir ve H iki kuyucuğuna 50 mikrolitre pozitif kontrol ekleyin. Daha sonra C'den G'ye kadar olan sıraların birinci ve ikinci sütunlarındaki kuyucuklara 50 mikrolitre bloke edici tampon ekleyin.Pozitif kontrolü G bir ve G iki'den başlayarak, ardından F bir ve F iki'yi C bir ve C ikiye kadar seri olarak seyreltin. A bir, A iki, B bir ve B iki kuyularına 50 mikrolitre negatif kontrol ekleyin. Homojenat çözeltisinden 50 mikrolitre çıkarın ve bilinmeyen bir kuyuya ekleyin.Plakayı örtün ve iki saat boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Substrat A ve B'yi bire bir oranında karıştırarak substrat çözeltisini hazırlayın. Her plakaya beş mililitre çalışma eşlenik antikor çözeltisi eklemeye dayalı olarak gerekli hacmi belirleyin.1.5 mililitrelik bir tüpte 100 mikrolitre substrat çözeltisine beş mikrolitre peroksidaz etiketli antikor çözeltisi ekleyerek peroksidaz aktivitesini değerlendirin. Kuyu içeriğini aspire edin ve plakayı bir kağıt havlu üzerine baş aşağı koyarak sıvıyı çıkarın. Kuyuları 200 mikrolitre PBS Tween ile iki kez yıkayın.Kuyu içeriğini aspire edin ve plakaya beş kez vurun. Her oyuğa 50 mikrolitre peroksidaz etiketli antikor çözeltisi ekleyin. Daha sonra karanlıkta oda sıcaklığında bir saat inkübe edin.Kuyu içeriğini aspire edin ve plakayı bir kağıt havluya beş kez vurun. Kuyuları 200 mikrolitre PBS Tween ile üç kez yıkayın, içindekileri aspire edin ve plakaya beş kez vurun. Her kuyucuğa 100 mikrolitre substrat çözeltisi ekleyin.Plakayı örtün ve karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, bir ELISA plaka okuyucu kullanarak 405 ila 414 nanometredeki absorbansı okuyun. Absorbansa sahip numuneleri, kesme değerinin üzerinde bir değere sahip olarak pozitif olarak etiketleyin ve standardı kullanarak numunedeki CSP konsantrasyonunu belirleyin.Standart bir eğri oluşturmak için absorbans değerlerini çözelti konsantrasyonuna karşı çizin. Doğrusal regresyon yöntemini kullanarak en uygun olanı belirleyin. CSP konsantrasyonunu belirlemek için pozitif bir numune için her bir absorbans değerinin denklemini çözün.ABTS ile ELISA uygulandıktan 30 dakika sonra, sporozoit enfeksiyonu kuyuda soluk yeşil bir rengin ortaya çıkmasıyla tespit edilebilir. Pozitif kontrol kuyuda herhangi bir renk değişikliği göstermedi. Negatif ve pozitif kuyular için absorbans değerleri belirlenmiştir.Pozitif kuyu, kesme eşiğinin üzerinde bir absorbans değeri sergilerken, negatif kontroller önemli ölçüde daha düşük değerler gösterdi. Ayrıca, diğer 80 bilinmeyen kuyunun absorbans değerleri de elde edilmiştir. Düz çizgi, negatif kontrol kuyularının ortalama absorbansını temsil eder ve kesikli çizgi, pozitiflik eşiğini temsil eder.Standart eğri kullanılarak, A yedi kuyusundaki CSP konsantrasyonunun mikrolitre başına 0.35 pikogram olduğu belirlendi ELISA işleminin bu adımı, spesifik olmayan vektörü önlemek için hızlı bir şekilde gerçekleştirilmelidir. Ek olarak, mikrobiyal büyümeyi önlemek için tüm numuneler ve çözelti buzdolabında saklanmalıdır. Araştırmacıların pozitif tespitleri PCR gibi diğer yöntemlerle doğrulamaları önerilir.Bu, özellikle tek okuma eşiğin üzerinde değerlendiğinde, güveni önemli ölçüde artıracaktır. Bu teknik, araştırmacıların sivrisineklerde olası enfeksiyon araştırmaları yapmalarına izin verdi ve bu da ana vektörü tanımlamak için önemlidir.

detection-plasmodium-sporozoites-anopheles-mosquitoes-using-an-enzyme

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Sıtma için potansiyel bir gen refrakter olarak tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde Plasmodium enfeksiyonları önlemede rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, sivrisinek Plasmodium enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Gametocyte kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı hazırlamak ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol

Sivrisinek örneklerden kalitesi sıtma parazit ve vektör DNA ayıklamak için bir hızlı ve ekonomik bir şekilde açıklanmıştır. Basit bir yöntem sivrisinek orta bağırsak ve tükürük bezi aşamalarında sıtma parazitlerinin genotipleme yanı sıra moleküler tanımlanması, Chelex reçine çelatlama özelliklerine etkinleştirir...

DNA ekstraksiyonu için A Simple Chelex Protokolü<em&gt; Anofel</em&gt; Spp.

Bu video, bir fare modelini canlı zayıflatılmış sporozoitlerle bağışıklamak için bir testi göstermektedir. Radyasyonla zayıflatılmış Plasmodium sporozoitler, farenin kulağının sırt tarafına enjekte edilir. Her iki kulakta birden fazla yere enjeksiyonlardan sonra, farenin iyileşmesine izin verilir.

Bir Fare Modelinde Canlı Zayıflatılmış Sporozoitlerle İntradermal Bağışıklama

Sıtma bulaştıran sivrisinekler, yalnızca moleküler teknikler kullanılarak tespit edilebilen epidemiyolojik olarak önemli bir dizi özelliğe sahiptir. MALDI-TOF tabanlı bir SNP genotipleme platformu kullanarak, sıtma vektörlerinin birden fazla temel özelliğini (tür, böcek ilacı direnci, parazit enfeksiyonu ve konakçı seçimi) aynı anda tespit etmek için bir test geliştirdik.

Sıtma verici Sivrisinekler için bir çok algılama Deneyi

Burada, Plasmodium sporozoitlerinin intradermal enjeksiyonunu takiben fare derisinden miyeloid hücreleri izole etmek ve lenf düğümünü boşaltmak için bir protokol açıklıyoruz. Toplanan hücrelerin akış sitometrisi, cildi karakterize etmek ve parazite karşı drenaj lenf nodu inflamatuar yanıtını karakterize etmek için güvenilir bir test sağlar.

Canlı zayıflatılmış intradermal aşılama sonrasında Fare Deri ve akan lenf düğümü gelen Myeloid Hücre İzolasyonu<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoitler

Deneysel serebral sıtmanın bir fare modelini tarif ediyoruz ve manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak inflamatuar ve mikrovasküler patolojinin in vivo olarak nasıl izlenebileceğini gösteriyoruz.

Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanarak Deneysel Serebral Sıtma Bir Modelinde Ödem Gelişimi ve Mikrovasküler Patolojinin İn Vivo Takibi

İnsan sıtma parazitlerine kemirgen sıtma parazitlerinin yaşam döngüsü ve biyolojisinin çarpıcı benzerlikleri nedeniyle, kemirgen sıtma modelleri sıtma araştırmaları için vazgeçilmez hale gelmiştir. Burada, vahşi tip ve transgenik kemirgen sıtma türlerinin fenotipeksi analizinde kullanılan en önemli tekniklerden bazılarını standardize ettik.

Kemirgen Sıtma paraziti Asexual ve cinsel kan aşamaları ve sivrisinek aşamaları phenotypic Analizi

Geçerli Zika, chikungunya ve dang virüs karmaşık numune hazırlama ve pahalı araçları gerektirir ve düşük kaynak ortamlarda kullanmak zor tespit etmek için teşhis multiplexed. Algılamak ve yüksek duyarlılık ve özgüllük ile bu virüs ayırt etmek için hedef özgü strand displaceable probları ile izotermal amplifikasyon kullanan bir tanı gösteriyoruz.

Çoğaltılmış izotermal amplifikasyon Zika, Chikungunya ve dang 1 tespit etmek için teşhis platformu dayalı

Standart membran besleme testi (SMFA), potansiyel sıtma önleyici bileşiklerin değerlendirilmesi ve tanımlanması için altın standart olarak kabul edilir. Bu yapay besleme sistemi, bu tür bileşiklerin Plasmodium falciparum parazitinin yoğunluğu ve prevalansı üzerindeki etkilerini daha fazla değerlendirmek için sivrisinekleri enfekte etmek için kullanılır.

Anofellerde Plasmodium falciparum Enfeksiyonunun Tespiti için Standart Membran Besleme Testi

Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonunda, seroloji testleri immünolojik çapraz reaksiyon nedeniyle düşük özgüllükle iyi sonuçlar verebilir. Bu yazıda açıklanan kurum içi antijen yakalama ELISA, yüksek tür özgüllüğünü garanti eder ve M. pneumoniae'nin doğru teşhisi için güvenilir bir tarama testi olduğu gösterilmiştir.

Mycoplasma pneumoniae'nin Spesifik Tespiti için Antijen Yakalama Enzimine Bağlı İmmünosorbent Testi

Sıtma, enfekte sivrisinekler tarafından Plasmodium'un sporozoit aşamasının aşılanması yoluyla bulaşır. Transgenik Plazmodyum , sıtmanın biyolojisini daha iyi anlamamızı sağladı ve sıtma aşısı geliştirme çabalarına doğrudan katkıda bulundu. Burada, transgenik Plasmodium berghei sporozoitleri üretmek için aerodinamik bir metodolojiyi açıklıyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Plasmodium berghei Sporozoitlerinin Üretilmesi

Öğrenin, Anopheles sivrisineklerinde Plasmodium sporozoitlerini tespit etmek için sandwich ELISA yöntemini. Bu teknik, yüksek duyarlılıkla malarya bulaş araştırmalarında büyük ölçekli taramalar yapmayı kolaylaştırır.

Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Anofel Sivrisineklerinde Plasmodium Sporozoitlerin Tespiti

Daha fazla video keşfet