Name: Yaşlı Yetişkinlerin Plazmasındaki Fenolik Metabolitlerin Kütle Spektrometri Analizine Bağlanan Yarı Hedefli Ultra Yüksek Performanslı Kromatografi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Keşfedin, yaşlı yetişkinlerin plazmasındaki fenolik metabolitleri yarı hedefli UPLC-MS/MS yöntemiyle nasıl analiz edeceğinizi. Bu teknik, beslenme müdahalelerinin sağlık üzerindeki etkilerini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, CONACYT, Meksika (CB- 2016-01-286449) ve UACJ-PIVA'nın (Projeler 313-17-16 ve 335-18-13) finansal desteği için minnettardır. OAMB, doktora bursu için CONACYT'e teşekkür eder. UACJ'nin Multimedya Üretim ofisinden gelen teknik destek minnetle kabul edilmektedir.

Bu protokolde kullanılan plazma örnekleri, tüm etik kuralları takip eden ve Universidad Autónoma de Ciudad Juárez'den Kurumsal Etik ve Biyoetik Komitesi (CIEB-2018-1-37) tarafından onaylanan önceki bir çalışmada toplanmıştır. Plazmadaki fenolik bileşiklerin ve metabolitlerin UPLC-MS / MS ile ekstraksiyonu ve tanımlanması için tam protokol Şekil 1'de gösterilmiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63164/63164fig01.jpg"> Şekil 1: Plazmadaki fenolik bileşiklerin ve metabolitlerin yarı hedefli UPLC-MS/MS yöntemi ile ekstraksiyonu ve tanımlanmasının şematik gösterimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63164/63164fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
1. Numune hazırlama
<ol><li>Plazma numunelerini analize kadar -80 °C'de saklayın.</li>
	<li>Plazma numunelerini oda sıcaklığında 15 dakika boyunca çözün. NOT: Numuneler, prosesi hızlandırmak için 37 °C'de bir su banyosuna yerleştirilebilir (5 dk).</li>
	<li>200 μL plazma örneğini 2 mL'lik bir mikrotüpe yerleştirin ve 1.000 μL saf etanol ile karıştırın. 30 sn için plazma örneğini vorteksleyin. NOT: Plazma numuneleriyle çalışırken daima eldiven kullanın.</li>
	<li>Numuneyi 5 dakika boyunca 6.580 x g'de santrifüj yapın. Santrifüjlemeden sonra, süpernatantı bir mikropipet veya Pasteur pipet ile toplayın ve yeni bir mikrotüpe yerleştirin. Süpernatantı 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Önceki adımdaki peleti 1.000 μL 0 etanol, 30 s vorteks ile karıştırın ve ardından 5 dakika boyunca 6.580 x g'de santrifüj yapın. NOT: Pelet güçlü bir şekilde paketlenmiştir ve numune ile saf etanol arasındaki teması sağlamak için iyice askıya alınması gerekir. Peletin etanol ile yıkanması için mikropipet kullanılması önerilir.</li>
	<li>Santrifüjlemeden sonra, süpernatantı toplayın ve daha önce Adım 1.4'ten elde edilen süpernatant ile karıştırın. 2 mL'lik bir mikrotüp içinde.</li>
	<li>135 psi'de saf azot (% 99.997) kullanarak etanol'ü numuneden çıkarın. Numune kaybını önlemek için iğneyi mikrotüpün üstünden 1 cm uzakta tutun ve numune kuruyana kadar yıkayın. Etanolün buharlaştırılması için ısıya gerek yoktur. NOT: Numune kaybını önlemek için azot akışı düşük olmalıdır. Etanol kuruduktan sonra, numune kuruluğunu sağlamak için azot akışını en az 5 dakika tutun. Protokol bu noktada duraklatılabilir; numuneler -20 °C'de saklanmalıdır. Numuneleri 12 saatten fazla saklamaktan kaçının.</li>
	<li>Kuru numuneleri 100 μL'lik bir asetonitril karışımında yeniden askıya alın: 50:50 (v:v) oranında su.</li>
	<li>Numuneyi 0,45 μm naylon şırınga membranından doğrudan bir HPLC şişe mikro ekine filtreleyin. NOT: Flakondaki numuneler analizden önce -20 °C'de saklanabilir. Numuneleri en fazla 8 saat saklayın. Numunelerin filtrasyondan hemen sonra UPLC sistemine enjekte edilmesi önerilir.</li>
</ol>2. UPLC-MS/MS analizi
<ol><li>C18 ters faz sütunu (50 mm x 2,1 mm; 1,8 μm) ile donatılmış bir UPLC'ye 3 μL numune enjekte edin. Otomatik numune alma cihazı sıcaklığını 20 °C'ye ve kolon termostatını 25 °C'ye ayarlayın. Her numuneyi üçlü olarak enjekte edin.</li>
	<li>Suda çözücü A olarak% 0.1 (v: v) formik asit ve çözücü B olarak% 100 asetonitril kullanın Akış hızını 0.4 mL / dak ve gradyan programını aşağıdaki gibi ayarlayın: 0-1 dakika % 10 B, 1-4 dakika % 30 B, 4-6 dakika% 38 B, 6-8 dakika % 60 B, 8-8.5 dakika% 60 B, 8.5-9 dakika % 10 B (Tablo 1).</li>
	<li>Kütle spektrometresini negatif mod iyonizasyonuna ayarlayın. 340 °C'de kurutma gazı olarak azot ve 13 L/dak debi kullanın. Nebülizör basıncını 60 psi'ye ayarlayın. Kılcal gerilimi 4.000 V'a, parçalayıcı voltajını 175 V'a ve Sıyırıcı voltajını 65 V'a ayarlayın. çarpışma enerjisini 20 V'ta kullanın (Tablo 2).</li>
	<li>100-1100 kütle-yük oranı (m/z) arasındaki kütleleri tarayın ve MS/MS için 50-1000 m/z arasındaki kütleleri tarayın (Tablo 2). Veri alımını Otomatik MS/MS moduna ayarlayın. Aşağıdaki referans kütlesini kullanın: 119.036 ve 966.0007.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Süre (dk)</td>
			<td>Solvent A (HPLC suyunda %0,1 formik asit)</td>
			<td>Solvent B (0 asetonitril)</td>
		</tr>
<tr>
<td>0 ila 1</td>
			<td>90</td>
			<td>10</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 ila 4</td>
			<td>70</td>
			<td>30</td>
		</tr>
<tr>
<td>4 ila 6</td>
			<td>62</td>
			<td>38</td>
		</tr>
<tr>
<td>6 ila 8</td>
			<td>40</td>
			<td>60</td>
		</tr>
<tr>
<td>8 ila 8,5</td>
			<td>40</td>
			<td>60</td>
		</tr>
<tr>
<td>8,5 ila 9</td>
			<td>90</td>
			<td>10</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Fenolik bileşiklerin UPLC ile ayrılması için kullanılan mobil faz gradyanı.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>İyonizasyon modu</td>
			<td>Negatif</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kurutma gazı</td>
			<td>340 °C'de azot, akış hızı 13 L/dak</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nebülizör basıncı</td>
			<td>60 psi</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kılcal gerilim</td>
			<td>175 V</td>
		</tr>
<tr>
<td>MS tarama kütleleri</td>
			<td>100-1100 m/z</td>
		</tr>
<tr>
<td>MS/MS tarama kütleleri</td>
			<td>50-1000 m/z</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: MS/MS analizi için iyonizasyon parametreleri.
3. Veritabanı oluşturma
<ol><li>Fenolik bileşikleri, fenolik metabolitleri veya bilimsel literatürde ilgi çeken diğer bileşikleri arayın.</li>
	<li>UPLC sisteminde bulunan veritabanı yönetim yazılımını açın. Dosya |'nı seçin Yeni Kişisel Veritabanı Bileşik Kitaplığı (PCDL) | Yeni PCDL oluşturun. PCDL türünü seçin: LC/MS Metabolomics. PCDL için bir ad ayarlayın. Ardından Oluştur'u seçin.</li>
	<li>Araç çubuğunda PCDL'yi ve ardından Düzenlemeye izin ver seçeneğini belirleyin. Ardından Bileşikleri bul düğmesini tıklayın. NOT: Yeni bir PCDL olduğundan, tablo sonuçları boş olacaktır. PCDL'ye yeni bileşikler eklendiğinde bu durum değişecektir.<ol>
<li>Bileşikleri, cihazın genel kütüphanesinden kopyalayarak özel kişisel veritabanı bileşik kütüphanesine ekleyin. Cihazın veritabanı yönetim yazılımında bulunan mevcut veritabanını açın. Bileşikleri bul düğmesini tıklayın. Tek arama seçeneğinde, ilgilenilen bileşiği bulmak için bileşik arama ölçütlerini girin. NOT: Bileşikler isim, moleküler formül, tam kütle ve tutma süresi ile bulunabilir.</li>
		<li>Bileşik sonuçlar tablosunda, faiz bileşiğini seçin. Birden fazla bileşik seçmek için, ilk bileşiği tıklatın, CTRL tuşunu basılı tutun ve ardından ilgilenilen her bileşiği tıklatın. Ardından, vurgulanan tüm bileşiklere sağ tıklayın ve PCDL'ye Ekle'yi seçin.</li>
		<li>Yeni pencerede, özelleştirilmiş kişisel veritabanı dosyasını arayın ve seçin. Kutuları işaretleyin Varsa bileşikler için spektrumları dahil edin ve varsa bileşikler için iyon hareketlilik bilgilerini ekleyin. Ekle düğmesini tıklatın. Yeni iletişim kutusunda, eklenen yeni bileşikleri kontrol etmek için Evet'i seçin. İlgilendiğiniz daha fazla bileşik aramaya devam etmek için Hayır'ı seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İlgilenilen bileşikler cihazın genel kütüphanesinde mevcut değilse, yeni bileşikleri manuel olarak ekleyin.<ol>
<li>Özel kişisel veritabanını açın. Açıldıktan sonra, Adım 3.3'ü izleyin. Bileşikleri düzenle seçeneğini belirleyin. Yeni ekle düğmesini tıklayın.</li>
		<li>Pencerenin üst kısmında, yeni bileşik için bilgileri doldurun. Formülü, adı, IUPAC adını, CAS numarasını, Chemspider ID'yi ve diğer tanımlayıcıları doldurun.</li>
		<li>Yeni ilgi alanı bileşiğinin bilgilerini doldurmak için ücretsiz çevrimiçi kütüphanelerde (Chemspider, PubChem ve Phenol Explorer) bulunan bilgileri kullanın. İşiniz bittiğinde, yeni bileşik bilgileri özel kişisel veritabanına kaydetmek için Yeni olarak kaydet düğmesine tıklayın. NOT: Serbest kütüphanelerden bilgi eklerken, klorür veya iyodür iyonları olmadan bileşik bilgileri eklediğinizden emin olun. Bu, ilgilenilen bileşiğin tam kütlesini ve moleküler formülünü değiştirebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Özel kişisel veritabanını tamamlamak için işlemi ilgilendiğiniz tüm bileşiklerle tekrarlayın.</li>
</ol>4. Veri analizi
<ol><li>Numunelerde bulunan fenolik bileşikleri ve fenolik metabolitleri tanımlamak için cihazın kalitatif yönetici yazılımını kullanın.</li>
	<li>Örnek dosyayı açın. Kromatogram panelinde, Kromatogramları Tanımla'yı seçin ve toplam iyon kromatogramını (TIC), çıkarılan MS iyon kromatogramını (EIC) ve MS/MS'nin EIC'sini ayıklayın.</li>
	<li>Bileşikleri Bul panelinde, Formüle Göre Bul-Seçenekler'i seçin. Yeni pencerede, Formül Kaynağı'nı ve ardından Veritabanı/Kitaplık seçeneğini belirleyin. Daha önce oluşturulmuş kişisel veritabanını bulun ve Aç'a tıklayın.</li>
	<li>Formül Eşleştirme seçeneğini belirleyin ve milyonda 5 parçalık (ppm) bir kütle eşleşme toleransı ayarlayın. NOT: Kütlelerin farklı bir eşleşme toleransı 10 ppm'ye ayarlanabilir; bu fark kullanılan kütle spektrometresine bağlıdır.</li>
	<li>Negatif İyonlar seçeneğini belirleyin ve yalnızca -H iletişim kutusunu seçin. Sonuçlar seçeneğinde, Extract EIC, Extract Clean Spectrum, Extract Raw Spectrum ve include Structure iletişim kutularını işaretleyin.</li>
	<li>Sonuç Filtreleri seçeneğini belirleyin. Mark Skor ise uyar ve skor </li><li></li></ol>

<ol><li>Morley, J. E., Anker, S. D., von Haehling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence%2C+incidence%2C+and+clinical+impact+of+sarcopenia%3A+facts%2C+numbers%2C+and+epidemiology-update+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cachexia%2C+Sarcopenia+and+Muscle%22%5BJournal%5D)">Prevalence, incidence, and clinical impact of sarcopenia: facts, numbers, and epidemiology-update 2014.</a> Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. 5 (4), 253-259 (2014).</li>
<li>Cruz-Jentoft, A. J., Sayer, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcopenia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Sarcopenia.</a> The Lancet. 393 (10191), 2636-2646 (2019).</li>
<li>Beaudart, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrition+and+physical+activity+in+the+prevention+and+treatment+of+sarcopenia%3A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">Nutrition and physical activity in the prevention and treatment of sarcopenia: systematic review.</a> Osteoporosis International. 28 (6), 1817-1833 (2017).</li>
<li>Ozer, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenolic+compositions+and+antioxidant+activities+of+Maya+nut+%28Brosimum+alicastrum%29%3A+Comparison+with+commercial+nuts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Food+Properties%22%5BJournal%5D)">Phenolic compositions and antioxidant activities of Maya nut (Brosimum alicastrum): Comparison with commercial nuts.</a> International Journal of Food Properties. 20 (11), 2772-2781 (2017).</li>
<li>Subiria-Cueto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brosimum+alicastrum+Sw.+%28Ram%C3%B3n%29%3A+An+alternative+to+improve+the+nutritional+properties+and+functional+potential+of+the+wheat+flour+tortilla%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">Brosimum alicastrum Sw. (Ramón): An alternative to improve the nutritional properties and functional potential of the wheat flour tortilla.</a> Foods. 8 (12), 1-18 (2019).</li>
<li>Martínez-Ruiz, N., Torres, L. E. J., del Hierro-Ochoa, J. C., Larqué-Saavedra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bebida+adicionada+con+Brosimum+alicastrum+sw.%3A+Una+alternativa+para+requerimientos+dietarios+especiales%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Salud+P%C3%BAblica+y+Nutrici%C3%B3n%22%5BJournal%5D)">Bebida adicionada con Brosimum alicastrum sw.: Una alternativa para requerimientos dietarios especiales.</a> Revista Salud Pública y Nutrición. 18 (3), 1-10 (2019).</li>
<li>Rodríguez-Tadeo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionality+of+bread+and+beverage+added+with+brosimum+alicastrum+sw.+Seed+flour+on+the+nutritional+and+health+status+of+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">Functionality of bread and beverage added with brosimum alicastrum sw. Seed flour on the nutritional and health status of the elderly.</a> Foods. 10 (8), 1-21 (2021).</li>
<li>Muñoz-Bernal, ÓA., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuevo+acercamiento+a+la+interacci%C3%B3n+del+reactivo+de+Folin-Ciocalteu+con+az%C3%BAcares+durante+la+cuantificaci%C3%B3n+de+polifenoles+totales%5BTitle%5D)+AND+%22TIP+Revista+Especializada+en+Ciencias+Qu%C3%ADmico-Biol%C3%B3gicas%22%5BJournal%5D)">Nuevo acercamiento a la interacción del reactivo de Folin-Ciocalteu con azúcares durante la cuantificación de polifenoles totales.</a> TIP Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas. 20 (2), 28-33 (2017).</li>
<li>Luca, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactivity+of+dietary+polyphenols%3A+The+role+of+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Food+Science+and+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Bioactivity of dietary polyphenols: The role of metabolites.</a> Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 60 (4), 626-659 (2020).</li>
<li>Kawabata, K., Yoshioka, Y., Terao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+intestinal+microbiota+in+the+bioavailability+and+physiological+functions+of+dietary+polyphenols%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Role of intestinal microbiota in the bioavailability and physiological functions of dietary polyphenols.</a> Molecules. 24 (2), (2019).</li>
<li>de Llano, D. G., Moreno-Arribas, M. V., Bartolomé, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranberry+polyphenols+and+prevention+against+urinary+tract+Infections%3A+Relevant+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Cranberry polyphenols and prevention against urinary tract Infections: Relevant considerations.</a> Molecules. 25 (15), (2020).</li>
<li>Alsaleh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry%3A+A+guide+for+the+clinician%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Experimental+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry: A guide for the clinician.</a> Journal of Clinical and Experimental Hepatology. 9 (5), 597-606 (2019).</li>
<li>Wang, X., Sun, H., Zhang, A., Wang, P., Han, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-performance+liquid+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+as+a+sensitive+and+powerful+technology+for+metabolomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry as a sensitive and powerful technology for metabolomic studies.</a> Journal of Separation Science. 34 (24), 3451-3459 (2011).</li>
<li>Feliciano, R. P., Mills, C. E., Istas, G., Heiss, C., Rodriguez-Mateos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorption%2C+metabolism+and+excretion+of+cranberry+%28poly%29phenols+in+humans%3A+A+dose+response+study+and+assessment+of+inter-individual+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Absorption, metabolism and excretion of cranberry (poly)phenols in humans: A dose response study and assessment of inter-individual variability.</a> Nutrients. 9 (3), (2017).</li>
<li>Mateos, R., Goya, L., Bravo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+and+metabolism+of+hydroxycinnamic+acids+%28chlorogenic%2C+caffeic%2C+and+ferulic+acids%29+by+HepG2+cells+as+a+model+of+the+human+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Uptake and metabolism of hydroxycinnamic acids (chlorogenic, caffeic, and ferulic acids) by HepG2 cells as a model of the human liver.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (23), 8724-8732 (2006).</li>
<li>Rodriguez Lanzi,, Perdicaro, C., Antoniolli, D. J., Piccoli, A., Vazquez Prieto, M. A., Fontana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenolic+metabolites+in+plasma+and+tissues+of+rats+fed+with+a+grape+pomace+extract+as+assessed+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Phenolic metabolites in plasma and tissues of rats fed with a grape pomace extract as assessed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. , 28-33 (2018).</li>
<li>Hou, Y., He, D., Ye, L., Wang, G., Zheng, Q., Hao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+detection+and+identification+strategy+for+untargeted+metabolomics+based+on+UPLC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">An improved detection and identification strategy for untargeted metabolomics based on UPLC-MS.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 191, 113531(2020).</li>
<li>Nagy, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+identification+of+dimethoxycinnamic+acids+in+human+plasma+after+coffee+intake+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">First identification of dimethoxycinnamic acids in human plasma after coffee intake by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Chromatography A. 1218 (3), 491-497 (2011).</li>
<li>Marmet, C., Actis-Goretta, L., Renouf, M., Giuffrida, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+phenolic+acids+and+their+methylates%2C+glucuronides%2C+sulfates+and+lactones+metabolites+in+human+plasma+by+LC-MS%2FMS+after+oral+ingestion+of+soluble+coffee%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Quantification of phenolic acids and their methylates, glucuronides, sulfates and lactones metabolites in human plasma by LC-MS/MS after oral ingestion of soluble coffee.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 88, 617-625 (2014).</li>
<li>McCord, J., Strynar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+per-and+polyfluorinated+chemical+species+with+a+combined+targeted+and+non-targeted-screening+high-resolution+mass+spectrometry+workflow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Identifying per-and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow.</a> Journal of Visualized Experiments. 2019 (146), 1-15 (2019).</li>
<li>Muñoz-Bernal, ÓA., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytochemical+characterization+and+antiplatelet+activity+of+Mexican+red+wines+and+their+by-products%5BTitle%5D)+AND+%22South+African+Journal+of+Enology+and+Viticulture%22%5BJournal%5D)">Phytochemical characterization and antiplatelet activity of Mexican red wines and their by-products.</a> South African Journal of Enology and Viticulture. 42 (1), 77-90 (2021).</li>
<li>Muñoz-Bernal, ÓA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriquecimiento+de+un+vino+tinto+con+un+extracto+de+compuestos+fen%C3%B3licos+provenientes+de+orujo+de+uva%3A+bioaccesibilidad%2C+an%C3%A1lisis+sensorial+y+respuesta+biol%C3%B3gica%5BTitle%5D)+AND+%22Universidad+Aut%C3%B3noma+de+Ciudad+Ju%C3%A1rez%22%5BJournal%5D)">Enriquecimiento de un vino tinto con un extracto de compuestos fenólicos provenientes de orujo de uva: bioaccesibilidad, análisis sensorial y respuesta biológica.</a> Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. , (2021).</li>
<li>Low, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Data+sharing+in+PredRet+for+accurate+prediction+of+retention+time%3A+Application+to+plant+food+bioactive+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Data sharing in PredRet for accurate prediction of retention time: Application to plant food bioactive compounds.</a> Food Chemistry. , 357(2021).</li>
<li>Sánchez-Patán, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+catabolism+of+grape+seed+flavan-3-ols+by+human+faecal+microbiota.+Targeted+analysis+of+precursor+compounds%2C+intermediate+metabolites+and+end-products%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Gut microbial catabolism of grape seed flavan-3-ols by human faecal microbiota. Targeted analysis of precursor compounds, intermediate metabolites and end-products.</a> Food Chemistry. 131 (1), 337-347 (2012).</li>
<li>Zhang, X., Sandhu, A., Edirisinghe, I., Burton-Freeman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+and+urinary+%28poly%29phenolic+profiles+after+4-week+red+raspberry+%28Rubus+idaeus+L.%29+intake+with+or+without+fructo-oligosaccharide+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Plasma and urinary (poly)phenolic profiles after 4-week red raspberry (Rubus idaeus L.) intake with or without fructo-oligosaccharide supplementation.</a> Molecules. 25 (20), (2020).</li>
</ol>

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Bir gıda veya gıda takviyesinin tüketiminden sonra emilen biyoaktif fitokimyasalların tanımlanması ve miktarının belirlenmesi, bu bileşiklerin ve bunları içeren gıdaların sağlık yararlarını göstermek ve anlamak için çok önemlidir. Bu çalışmada, sadece yaşlılar için özel olarak formüle edilmiş iki gıda ürünü ile 30 günlük bir beslenme müdahalesinden sonra plazmada konsantrasyonu artan ana fenolik bileşiklerin ve metabolitlerinin tanımlanmasına yönelik UPLC-MS / MS yöntemi geliştirilmiştir. Bir bileşiğin plazmada sadece mü...

Sarkopeni yaşlı popülasyonda hızlandırılmış kas kaybına bağlı ilerleyici bir iskelet hastalığıdır. Bu durum düşme riskini arttırır ve günlük yaşam aktivitelerinin sınırlı olmasına neden olur. Sarkopeni, 65 yaşın üzerindeki kişilerin yaklaşık% 5-10'unda ve 80 yaş ve üstü kişilerin yaklaşık% 50'sinde bulunur1. Sarkopeni tedavisi için spesifik bir ilaç onaylanmamıştır, bu nedenle fiziksel aktivite ve dengeli bir diyetle korunma önemlidir1,2. Süt proteini ve esansiyel amino asitlerle zenginleştirilmiş özel olarak formüle edilmiş gıdalarla yapılan beslenme müdahaleleri, sarkopeninin önlenmesinde olumlu sonuçlar göstermiştir2. Diğer çalışmalarda, yazarlar diyete E vitamini ve izoflavonlar gibi vitamin ve antioksidanları dahil ederek, bel ve kalçalardaki kas kazanımının faydalarını arttırmıştır3.
Brosimum alicastrum Sw. (Ramón), Meksika tropikal bölgelerinde yetişen bir ağaçtır; yüksek besin değeri nedeniyle Maya kültürleri tarafından tüketilmiştir4. İyi bir protein, lif, mineral ve klorojenik asit gibi fenolik antioksidanlar kaynağıdır5. Toz haline getirilebildiği ve pişirme ürünlerinde kullanılabildiği veya içeceklerde tüketilebildiği için, son çalışmalar Ramón tohumu ununun (RSF) besin değerlerini artırmak için farklı gıdalara dahil edilmesini değerlendirmiştir. RSF takviyeli kapuçino aromalı bir içecek formüle edildi, diyet lifi bakımından yüksekti ve porsiyon başına 6 g'dan fazla protein içeriyordu ve tüketiciler tarafından oldukça kabul edildi; bu nedenle, özel diyet gereksinimlerini karşılamak için potansiyel bir alternatif olarak kabul edildi6. Bir takip çalışmasında, RSF ayrıca bir kek ve protein, diyet lifi, mikro besinler ve fenolik antioksidanlar bakımından zengin yeni bir içecek formüle etmek için kullanıldı. Muffin ve içecek, her iki ürünü de 30 gün boyunca günde iki kez tüketen yaşlı bireyler için bir diyet müdahalesinde kullanıldı. Bu süreden sonra, katılımcıların beslenme ve sarkopenik durumları iyileşti ve plazmanın toplam fenolik içeriği arttı7. Bununla birlikte, plazmadaki toplam fenolik bileşiklerin belirlenmesi spektrofotometrik bir yöntemle gerçekleştirilmiştir, bu nedenle emilen gerçek fenolik bileşiklerin tanımlanması mümkün olmamıştır; Dahası, bu yöntem fenolik bileşikler için tamamen spesifik değildir, bu nedenle bazı abartılı tahminler meydana gelebilir8.
Bu antioksidanlar bakımından zengin gıdaların tüketiminden sonra emilen fenolik bileşiklerin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi zor bir iştir, ancak bu fitokimyasalların biyolojik aktivitesini göstermek için gereklidir. Çoğu fenolik bileşiğin biyoyararlanımı düşüktür; Bunların %5'inden azı plazmada yapısal dönüşüm olmadan bulunabilir. Fenolik bileşikler, enterositler ve hepatositler tarafından gerçekleştirilen metilasyon, sülfonasyon veya glukuronidasyon gibi çeşitli biyotransformasyonlara uğrar9. Fenolik bileşikler ayrıca mikrobiyota tarafından plazmaya emildikten sonra vücutta yararlı etkilerini gösterebilecek bakteriyel katabolitlere biyotransforme edilir10. Örneğin, fenilasetik asit, flavonoidlerin ve oligomerik proantosiyanidinlerin bakteriyel dönüşümünün bir ürünüdür ve kızılcık tüketiminden sonra idrar yollarındaki bakterilerin (Escherichia coli) yapışmasının% 40'ına kadarını inhibe edebilir11.
Doğal olarak oluşan fenolik bileşiklerin yapısal çeşitliliği, metabolitlerinin çeşitliliğine ve düşük biyoyararlanımlarına eklendiğinde, plazmadaki tanımlamalarını daha da zorlaştırmaktadır. Nükleer manyetik rezonans (NMR) ve tandem kütle spektroskopisi (MS / MS) gibi spektroskopik analiz platformlarını kullanan metabolomik profilleme, muhtemelen bu hedefe ulaşmak için en iyi yaklaşımdır; ne yazık ki, ekipmana kolayca erişilemez ve analiz protokollerinin geliştirilmesi hala sınırlıdır12. Birçok çalışma, metabolomik çalışmalarda kütle spektrumlarının karmaşıklığını azaltmak için bir strateji olarak MS / MS'in bir ayırma sistemi (sıvı kromatografisi gibi) ile birleştiğini bildirmiştir. Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) ayırma yöntemlerinin yakın zamanda piyasaya sürülmesi, analiz süresini kısaltmış ve geleneksel yüksek performanslı sıvı protokollerine kıyasla çözünürlüğü ve hassasiyeti artırmıştır, bu nedenle UPLC-MS / MS sistemleri analitik metabolomik topluluğu tarafından hızla kabul görmüştür13. Bu şekilde, bazı çalışmalar fenolik metabolitleri araştırmış ve kızılcık alımından sonra bireylerin plazmasında kafeinik asit, quercetin ve ferulik asitten glukuronid türevlerinin yanı sıra şırıngaik ve vanilik asitten sülfonlu türevleri tespit etmiştir14. Önceki protokoller, plazma gibi biyoakışkanlarda fenolik bileşikleri ve fenolik metabolitleri bulmayı amaçlamıştır. Bu protokoller, bir UV-vis dedektörüne bağlanmış yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile tanımlama ve nicelleştirmeye dayanıyordu15. Bununla birlikte, bu tür protokoller, mutlak tanımlamayı ve doğru nicelemeyi değerlendirmek için otantik standartların kullanılmasını gerektirir. Çok çeşitli çalışmalar, biyoakışkanlarda (sülfonlanmış, glukuronidlenmiş ve metillenmiş formlar) UPLC-MS ve UPLC-MS / MS tarafından en yaygın metabolitleri tanımlamıştır; Bununla birlikte, bakteriyel metabolitlerin büyük bir kısmı, tam bilgilerini içeren veritabanlarının bulunmaması nedeniyle bildirilmemiştir16. Metabolit tanımlama, metabolit standartlarının maliyeti ve ticari kullanılabilirliği nedeniyle karmaşıktır. Bu nedenle, en iyi strateji, kimyasal kimliği belirlemek için moleküler özellik bilgilerinin (m / z, monoizotopik tam kütle, izotopik dağılım ve parçalanma paterni) kullanılmasına dayanan ve polipolifenol-richts tüketiminden sonra biyoakışkanlarda tanımlanan polifenol metabolitlerini içeren serbestçe kullanılabilen çevrimiçi veritabanlarıyla karşılaştıran hedefsiz veya yarı hedefli MS / MS metabolit analizi olabilir12 . Fenolik bileşiklerin ve metabolitlerinin tanımlanması için UPLC-MS / MS çalışmalarında kullanılan en önemli veritabanları İnsan Metabolom Veritabanı (HMDB), LipidBlast Kütüphanesi, METLIN Kütüphanesi ve PubChem, ChemSpider ve Phenol Explorer17 gibi diğer tamamlayıcı veritabanlarıdır.
Bu çalışmada, RSF içeren çörek ve içecek tüketimi çalışmasına katılan yaşlı insan grubunun plazma örneklerini analiz etmek için yarı hedefli bir UPLC-MS/MS yöntemi geliştirilmiştir7. Plazma metabolitlerinin farklı ücretsiz çevrimiçi veritabanlarından elde edilen veriler toplandı ve özel bir veritabanına entegre edildi. Bu veritabanına, 30 günlük beslenme müdahalesinden önce ve sonra beş plazma örneğindeki polifenolik metabolitleri tanımlamak için ekipman yazılımı tarafından otomatik olarak erişilebilir. Bu, sarkopeninin önlenmesi için tasarlanmış özel olarak formüle edilmiş fonksiyonel gıdalardan emilen ana fenolik bileşikleri veya metabolitlerini tanımlamak için yapılır.

<table><tbody><tr><td>Asetonitril</td><td>Tedia</td><td>Al1129-001</td><td>LC Kütle spektrometresi</td></tr><tr><td>Otomatik Numune Alma Cihazı</td><td>Agilent Technologies</td><td>G4226A</td><td>1290 Infinity serisi</td></tr><tr><td>C18 ters faz sütunu</td><td>Agilent Technologies</td><td>959757-902</td><td>Zorbax Eclipse plus C18 2.1x50 mm, 1.8 & mu; m; Hızlı çözünürlüklü HD</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5452000018</td><td>Mini Spin; Rotor F-45-12-11</td></tr><tr><td>Termostatlı kolon bölmesi</td><td>Agilent Technologies</td><td>G1316C</td><td>1290 Infinity serisi</td></tr><tr><td>Diyot Dizisi Dedektörü (UV-Vis)</td><td>Agilent Technologies</td><td>G4212B</td><td>1260 Infinity serisi</td></tr><tr><td>Elektrosprey iyonnizasyon kaynağı</td><td>Agilent Technologies</td><td>G3251B</td><td>Çift püskürtücü ESI kaynağı</td></tr><tr><td>Formik asit</td><td>J.T. Baker</td><td>0128-02</td><td>Baker reaktifi, ACS</td></tr><tr><td>Mass Hunter Veri Toplama</td><td>Agilent Technologies</td><td>G3338AA</td><td></td></tr><tr><td>Mass Hunter Kişisel Bileşik Datbase ve Kütüphane Yöneticisi</td><td>Agilent Technologies</td><td>G3338AA</td><td></td></tr><tr><td>Mass Hunter Kalitatif Analiz</td><td>Agilent Technologies</td><td>G3338AA</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Marka</td><td>BR780546</td><td>Mikrosantrifüj tüpü, kapaklı 2 mL</td></tr><tr><td>Saf etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023-1L</td><td>200 kanıt, moleküler biyoloji için</td></tr><tr><td>Q-TOF LC/MS</td><td>Agilent Technologies</td><td>G6530B</td><td>6530 Doğru Kütle</td></tr><tr><td>Kuaterner pompa</td><td>Agilent Technologies</td><td>G4204A</td><td>1290 Infinity serisi</td></tr><tr><td>Şırınga filtresi</td><td>Thermo Scientific</td><td>44514-NN</td><td>17 mm, 0.45 & mu; m, naylon membran</td></tr><tr><td>Termostat</td><td>Agilent Technologies</td><td>G1330B</td><td>1290 Infinity serisi</td></tr><tr><td>Flakon</td><td>Agilent Technologies</td><td>8010-0199</td><td>Amber, PFTE kırmızı silikon 2 mL, vidalı üst ve mavi kapaklı</td></tr><tr><td>Flakon ek parçası</td><td>Agilent Technologies</td><td>5183-2089</td><td>Flakon ek parçası 200 & mu; 2 mL standart açıklık için L, konik</td></tr><tr><td>Su</td><td>Tedia</td><td>WL2212-001</td><td>LC Kütle spektrometresi</td></tr></tbody></table>

yaşlı yetişkinlerin plazmasındaki fenolik metabolitlerin kütle spektrometri analizine bağlanan yarı hedefli ultra yüksek performanslı kromatografi

Semi-Targeted Ultra-High-Performance Chromatography Coupled to Mass Spectrometry Analysis of Phenolic Metabolites in Plasma of Elderly Adults

23 yaşlı kişiden oluşan bir gruba, sarkopeninin (yaşa bağlı kas kütlesi kaybı) önlenmesi için özel olarak formüle edilmiş fonksiyonel yemekler (bir içecek ve bir kek) verildi. Plazma örnekleri, müdahalenin başlangıcında ve fonksiyonel öğünlerin tüketilmesinden 30 gün sonra alındı. Fenolik bileşikleri ve metabolitlerini tanımlamak için tandem kütle (UPLC-MS / MS) analizi ile birleştirilmiş yarı hedefli ultra yüksek performanslı kromatografi gerçekleştirildi. Plazma proteinleri etanol ile çökeltildi ve numuneler UPLC-MS / MS cihazına enjeksiyondan önce mobil fazda (1: 1 asetonitril: su) konsantre edildi ve yeniden askıya alındı. Ayırma bir C18 ters faz sütunu ile gerçekleştirildi ve bileşikler deneysel kütleleri, izotopik dağılımları ve fragman desenleri kullanılarak tanımlandı. İlgilenilen bileşikler, veri bankalarının ve dahili yarı hedefli kütüphaneninkilerle karşılaştırıldı. Ön sonuçlar, müdahaleden sonra tanımlanan başlıca metabolitlerin fenilasetik asit, glisitin, 3-hidroksifenilvalerik asit ve gomisin M2 olduğunu göstermiştir.

Plazma örneklerinin negatif modda yarı hedefli UPLC-MS/MS analizi yoluyla fenolik metabolitlerin tanımlanması için adım adım süreç Şekil 2'de gösterilmiştir. İlk olarak, plazma fenolik ekstraktından elde edilen toplam iyon kromatogramı (TIC) (toplam plazma örneğinin protein çökelmesinden sonra elde edilen), cihazın kalitatif yazılımı aracılığıyla elde edildi. Daha sonra, ekstrakte edilen iyon kromatogramı kullanıldı ve her sinyalin (veya moleküler özelliğin) tam kütle v...

Bu protokolün amacı, yarı hedefli kromatografi-kütle spektrometrisi yöntemi kullanarak plazmadaki fenolik metabolitleri tespit etmektir.

Yaşlı Yetişkinlerin Plazmasındaki Fenolik Metabolitlerin Kütle Spektrometri Analizine Bağlanan Yarı Hedefli Ultra Yüksek Performanslı Kromatografi

A group of 23 elderly persons was given functional meals (a beverage and a muffin) specially formulated for the prevention of sarcopenia (age-related loss ...

Bu protokolün amacı, plazmadaki fenolik metabolitleri yarı hedefli bir UPLC-MS / MS yöntemiyle tespit etmektir. Plazma proteinleri, UPLC ekipmanına enjeksiyondan önce etanol ve konsantre numunelerle çökeltildi ve mobil fazda yeniden askıya alındı. Bileşikler, metabolomik, yazılım ve farklı ücretsiz çevrimiçi veritabanları için PCDL yöneticisi kullanılarak laboratuvarda bir araya getirilen yarı hedefli bir kütüphane kullanılarak tanımlandı.Brosimum alicastrum tohum unu ile formüle edilmiş bir çörek ve içecek formülü ile beslenme müdahalesi uyguladık. Girişim sonunda katılımcıların beslenme ve sarkopenik durumları iyileştirildi ve plazmanın toplam fenolik içeriği arttırıldı. Ancak hangi fenolik bileşiklerin emildiğini ve olumlu etkiye katkıda bulunduğunu tanımlamamız gerekir.Bu antioksidanlar bakımından zengin gıdaların tüketiminden sonra emilen fenolik bileşiklerin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi zor bir iştir, ancak bu fitokimyasalların biyolojik aktivitesini göstermek için gereklidir. Çoğu fenolik bileşenin biyoyararlanımı düşüktür, dahası% 5'inden azı plazmaya yapısal dönüşüm olmadan girer. Çoğu metilasyon, sülfonasyon veya glukuronidasyon gibi çeşitli biyotransformasyondan geçer.Çok çeşitli çalışmalar, biyoakışkanlardaki en yaygın metabolitleri UPLC-MS ve UPLC-MS / MS ile tanımlamıştır. Bununla birlikte, bakteri metabolitinin büyük bir kısmı, tam bilgilerini içeren veritabanlarının eksikliğinden kaynaklanmamaktadır. Metabolit tanımlama, metabolit standartlarının maliyeti ve ticari kullanılabilirliği nedeniyle karmaşıktır.Bu nedenle, en iyi strateji hedefsiz veya yarı hedefli MS / MS metabolit analizi olabilir. Bu analiz, moleküler özellik bilgisinin, kütle-yük oranı monoizotopik tam kütlenin, izotopik dağılımın ve parçalanma paterninin kullanımına dayanır. Kimyasal kimliği belirlemek ve polifenol bakımından zengin diyetlerin tüketiminden sonra biyosıvılarda tanımlanan polifenol metabolitlerini içeren ücretsiz çevrimiçi veritabanlarıyla karşılaştırmak.Bu çalışmada, beslenme müdahalesinde yer alan bir grup yaşlı kişinin plazma örneklerini analiz etmek için yarı hedefli bir UPLC-MS / MS yöntemi geliştirdik. Plazma örneklerini analize kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Plazma örneklerini oda sıcaklığında 15 dakika veya 37 santigrat derecede beş dakika boyunca defrost edin.200 mikrolitre plazma örneğini iki milimetrelik bir mikrotüpe yerleştirin ve 1000 mikrolitre saf etanol ile karıştırın. 30 saniye boyunca vorteks plazma örneği. Beş dakika boyunca 6.580 santrifüj kuvvetinde santrifüj numunesi.Santrifüjlemeden sonra, süpernatantı bir mikropipet veya Pasteur pipet ile toplayın ve yeni bir mikrotüpe yerleştirin. Süper natantı rezerve et. Bir peleti 1000 mikrolitre saf etanol ile karıştırın, 30 saniye boyunca köşeye koyun ve ardından aynı koşullarda santrifüj yapın.Süpernatantı toplayın ve ilk süpernatan ile karıştırın. 135 psi'de saf azot kullanarak etanol'ü numuneden çıkarın. Numune kaybını önlemek için iğneyi mikrotüpün üstünden bir santimetre uzakta tutun ve numune kuruyana kadar yıkayın.Kuru numuneleri 100 mikrolitrede bir tanesinde askıya almak, bir asetonitril karışımını suyla karıştırmaktır. 45 mikro naylon şırınga membranından doğrudan bir HPLC şişesi mikro ekine filtreleyin C 18 ters fazlı kolonla donatılmış UPLC'ye üç mikrolitre numune enjekte edin. Otomatik örnekleyici sıcaklığını 20 Santigrat ve kolon termostatını 25 Santigrat olarak ayarlayın.Her numuneyi üçlü olarak enjekte edin. Suda çözücü A olarak% 0.1 formik asit ve% 100 asetonitril çözücü B olarak kullanın.Akış hızını dakikada 0.4 milimetreye ve bir gradyan programına aşağıdaki gibi ayarlayın, sıfır ila bir dakika% 10 B, bir ila dört dakika% 30 B, dört ila altı dakika% 38 B, altı ila sekiz dakika% 60B, sekiz ila 8.5 dakika% 60B, 8,5 ila dokuz dakika %10 B. Kütle spektrometresini negatif mod iyonizasyonuna ayarlayın.Azotu 300 santigrat derecede kurutma gazı ve dakikada 13 litrede akış hızı olarak kullanın. Nebülizör basıncını 30 psi'ye ayarlayın. 4.000 voltta kılcal bir voltaj, 175 voltta parçalayıcı voltaj ve 65 voltta Skimmer voltajı ayarlayın.100 ila 1100 m/z arasındaki kütleleri tarayın ve kütle spektrometrisi için 50 ila 1000 m/z arasındaki kütleleri tarayın. Veri alımını Otomatik MS/MS moduna ayarlayın. Aşağıdaki referans kütlesini kullanın, 119.036 ve 966.0007.Fenolik bileşikleri, fenolik metabolitleri ve bilimsel literatürde ilgi çeken diğer bileşikleri araştırın. UPLC sisteminde bulunan veritabanı yönetim yazılımını açın. Dosya'yı ve ardından yeni kişisel veritabanı bileşik kitaplığı PCDL'yi seçin.Ardından yeni PCDL oluştur'u seçin. PCDL LC/MS metabolomik türünü seçin. PCDL için adı ayarlayın.Ardından oluştur'u seçin. Araç çubuğunda PCDL'yi ve ardından düzenlemeye izin ver seçeneğini belirleyin. Ardından bileşikleri bul düğmesine tıklayın.Bileşikler kişisel kütüphaneye iki şekilde eklenebilir, ilk olarak enstrümanın genel kütüphanesinden kopyalanarak. Bunu yapmak için, şu ana kadar veri yönetimine dahil edilen mevcut veritabanlarını açın. Bileşikleri bul düğmesine tıklayın.Tek arama seçeneğinde, ilgilenilen bileşiği bulmak için bileşik arama ölçütlerini girin. Bileşik sonuçlar tablosunda, faiz bileşiğini seçin. Birden fazla bileşik seçmek için, ilk bileşiği tıklatın, sonra CTRL tuşunu basılı tutun ve ardından ilgilenilen her bir bileşiği tıklatın.Ardından, vurgulanan tüm bileşiklere sağ tıklayın ve PCDL'ye Ekle'yi seçin. Yeni pencerede, özelleştirilmiş kişisel veritabanı dosyasını arayın ve seçin. Kutuyu işaretleyin, varsa bileşik için spektrum içerir.Ekle düğmesini tıklatın. Yeni iletişim kutusunda, eklenen yeni bileşikleri kontrol etmek için Evet'i seçin. İlgilendiğiniz daha fazla bileşik aramaya devam etmek için Hayır'ı seçin.İkincisi, yeni bileşikler cihazın genel kütüphanesinde mevcut değilse manuel olarak eklenebilir. Bu açık için, özel kişisel veritabanı. Açıldıktan sonra PCDL'yi ve ardından düzenlemeye izin ver seçeneğini seçin.Bileşikleri düzenle seçeneğini belirleyin. Yeni ekle düğmesini tıklayın. Pencerenin üst kısmında, yeni bileşiğin bilgilerini tamamlayın.Formülü, adı, IUPAC adını, CAS numarasını, Chemspider ID'yi ve diğer tanımlayıcıları doldurun. Ücretsiz çevrimiçi kütüphanelerde bulunan bilgileri kullanarak, Chemspider, PubChem ve Phenol Explorer, yeni ilgi alanı bileşiğinin bilgilerini doldurmak için. İşiniz bittiğinde, yeni bileşik bilgileri özel kişisel veritabanına kaydetmek için Yeni olarak kaydet düğmesine tıklayın.Özel kişisel veritabanını tamamlamak için işlemi ilgilendiğiniz tüm bileşiklerle tekrarlayın. Fenolik bileşikleri ve fenolik metabolitleri tanımlamak için cihazın kalitatif yönetici yazılımını kullanın. Örnek dosyayı açın.Kromatogram panelinde, Kromatogramları tanımla'yı seçin ve toplam iyon kromatogramı TIC'yi, MS EIC'nin ekstrakte edilmiş iyon kromatogramını ve MS / MS'nin EIC'sini çıkarın. Bileşikleri bul panelinde, formüle göre bul seçeneklerini belirleyin.Yeni pencerede, formül kaynağını ve ardından veritabanı eğik çizgi kitaplığı seçeneğini seçin. Daha önce oluşturulmuş kişisel veritabanını bulun ve aç'a tıklayın. Formül eşleştirme seçeneğini belirleyin ve milyonda beş parçalık bir kütle eşleşme toleransı (ppm) ayarlayın.Negatif iyonlar seçeneğini belirleyin ve yalnızca eksi H iletişim kutusunu seçin. Sonuç seçeneğinde, EIC ayıklama işlemini işaretleyin, temizlenmiş spektrumu ayıklayın, ham spektrumu ayıklayın ve yapılandırılmış iletişim kutuları ekleyin. Sonuç filtreleri seçeneğini belirleyin.Ve sonra puan ise uyar, sonra skor eşleşmesini% 80 olarak ayarlayınSonra skor ise eşleşmiyor işareti yapın ve puanı% 75 olarak ayarlayınArdından, numunede ilgilenilen bileşikleri tanımlamak için formüle göre bileşikleri bul'a tıklayın. Plazma örneklerinin yarı hedefli UPLC MS / MS analizi yoluyla fenolik metabolitlerin tanımlanması için adım adım süreç bir sonraki şekilde gösterilmiştir. İlk olarak, toplam iyon-kromatogram, ücretsiz çevrimiçi veritabanlarından elde edilen 645 fenolik bileşiği ve metabolitlerini içeren, kendi kendine oluşturulan bir PCDL veritabanı kullanılarak elde edildi.Daha sonra, ekstrakte edilen iyon-kromatogram ve parçalanma paterni veya beş ppm'den daha az kütleye sahip iyonlar, eşleşme toleransı elde edildi. Son olarak, tespit edilen piklerin izotopik dağılımı teorik bileşiklerinkiyle karşılaştırıldı. Bu analizden, plazma örneklerinde toplam 25 fenolik bileşik ve metabolit tanımlanmıştır.Tasarım yönteminin absorbe fenolik bileşiklerin veya metabolitlerinin tanımlanmasındaki etkinliğini değerlendirmek için, 30 günlük müdahaleden önce ve sonra elde edilen çalışma katılımcılarının beş örneği analiz edilmiştir. Her bileşiğin nispi bolluğu, tedaviden önce AUC ile tedaviden sonra eğrinin altındaki alanın bölünmesiyle hesaplandı. Tablo dördüncü, brosimum alicastrum unu içeren gıdaların 30 günlük tüketiminden sonra plazmada bir artış gösteren 12 fenol bileşiğinin listesini göstermektedir.Fenilasetik asit sadece tedaviden sonra sürekli olarak daha yüksek konsantrasyonda bulunan metabolitti. Glisitin, glikozile izoflavon ve üç hidroksifenilvalerik asit, beş numunenin üçünde artmış, ancak diğer ikisinde azalmıştır. Bir lignan olan Gomisin M2, beş numunenin üçünde ancak beslenme müdahalesinden sonra tespit edildi.Diğer fenolik bileşikler ve metabolitler sadece bir numunede ve sadece tedaviden sonra bulundu. Mevcut makalede geliştirilen yöntem, çoğu yerde yaratıldığı amaç için çok uygun olduğunu göstermektedir. Tedavi başına örnek basit ve etkiliydi.Fenolik metabolitlerin UPLC ayrımı ve yarı hedefli MS/MS tanımlaması sağlandı.

semi-targeted-ultra-high-performance-chromatography-coupled-to-mass

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Kütle spektrometresi (UPLC-MS) ile birleştirilmiş ultra performanslı sıvı kromatografisi ile hedeflenmemiş metabolit profili, metabolizmayı araştırmak için güçlü bir tekniktir.  Bu makale, numune organizasyonu ve hazırlama, veri toplama, veri analizi, kalite kontrol ve metabolit tanımlaması dahil olmak üzere serumun hedeflenmemiş metabolit profili için kullanılan tipik bir iş akışını özetlemektedir.

Ultra Performans Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi (UPLC-MS) ile Serum Büyük Ölçekli Sigara hedefli metabolomik Profilleme

Hedefsiz metabolomik bir metabolik profili anlık üreten bir hipotez sağlar. Bu protokol, serum hücreler veya doku metabolitlerinin çıkarma ve analiz gösterecektir. Metabolitleri bir dizi sıvı-sıvı faz ekstraksiyon kullanılarak anket vardır, Mikrosirkülasyon Ultra Performanslı sıvı kromatografisi / diferansiyel analiz yazılımı için birleştiğinde yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (UPLC-HRMS).

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Metabolit profil sağlık ve hastalık metabolizmanın çalışmasında değerli bir varlık olmuştur. Polarizasyon değiştirmesi ve hızlı görev döngüsü ile yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi birleştiğinde normal aşamalı sıvı kromatografisi kullanarak, yüksek hassasiyet, doğruluk ve çözünürlük ile biyolojik madde polar metabolik bileşimini analiz etmek için bir protokol açıklar.

Hassas, Büyük Ölçekli Kantitatif metabolomik için bir strateji

Metabolomiks deneylerde sonuçların güvenilirliği numune hazırlama etkinliği ve yeniden üretilebilirlik bağlıdır. Daha sonra bileşikler bin kadar analiz, ya da ilgi sadece bileşik sınıfları seçeneği ile biyolojik sıvılardan metabolitlerin çıkarma sağlayan bir sıkı ve derinlemesine bir yöntem tarif edilmektedir.

Derinlemesine ve Bilgilendirici metabolomic Analizi Çoklu Metaboliti&#39;nin Bileşik Sınıfları Kurtar Multi-step Hazırlama Tekniği

Burada biz bir yüksek-den geçerek yöntemi ile kalite kontrol multisegment enjeksiyon-kılcal göre geliştirilmiş çözünürlük ve ilaç kötüye kullanımı ve bunların metabolitleri büyük paneller tespiti için sağlar kapsamlı uyuşturucu gözetimi için tarif Elektroforez-kütle spektrometresi.

Multisegment enjeksiyon-kılcal Elektroforez kütle spektrometresi kullanılarak yüksek üretilen iş ve kapsamlı uyuşturucu gözetim

Buğday tanemetabolitleri ve lipitlerinin hedeflenmemiş analizi için bir yöntem sunulmuştur. Protokol, pozitif ve negatif elektrosprey iyonizasyon modlarında edinim ile bir asetonnril metabolit çıkarma yöntemi ve ters faz sıvı kromatografi-kütle spektrometresi metodolojisi içerir.

Hedefsiz Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi Tabanlı Metabolomik Buğday Tanesi Analizi

Fenolik asitler, kepekli tahıllarda bulunan önemli fitokimyasallardır. Antioksidan koruyucu fonksiyonlar gibi biyoaktif özelliklere sahiptirler. Bu çalışma, HPLC tanımlaması, toplam fenolik içerik tahmini ve tahıl ve baklagillerde fenolik asitlerin antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için genelleştirilmiş bir yöntemin raporlanmasını amaçlamıştır.

Tahılların ve baklagillerin serbest çözünür fenolik asit bileşimini ve antioksidan kapasitesini belirlemek için genelleştirilmiş bir yöntem

Bu protokol, yaşlanan ve bölünmeyen hücrelerin darbeli SILAC, hedefsiz kütle spektrometrisi analizi ve protein yarı ömürlerinin kolaylaştırılmış bir hesaplaması ile metabolik etiketlenmesi için iş akışını açıklar.

Metabolik Etiketleme ve Kütle Spektrometrisi ile Yaşlanan ve Bölünmeyen Kültürlü Hücrelerde Protein Devir Hızlarının Ölçülmesi

Geleneksel Çin tıbbı araştırmalarında yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi analizini ve moleküler yerleştirmeyi entegre eden genel bir protokolü açıklıyoruz.

Gynura bicolor DC'nin Kimyasal Bileşenlerini İncelemek için Yüksek Çözünürlüklü Tandem Kütle Spektrometresi

Uyumlu esneklik proteini fonksiyonunda önemli bir rol oynamaktadır. Burada, düzenli ve düzensiz protein işlevi sürücü hızlı yapısal değişiklikleri algılama için hidrojen döteryum değişimi bağlanmış zamana bağımlı elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi kullanılmasını tarif eder.

Zaman çözülmesi elektro sprey iyonizasyon Hidrojen-döteryum Değişim Kütle Spektrometre Protein Yapısı ve Dinamikleri incelenmesi için

Keşfedin, yaşlı yetişkinlerin plazmasındaki fenolik metabolitleri yarı hedefli UPLC-MS/MS yöntemiyle nasıl analiz edeceğinizi. Bu teknik, beslenme müdahalelerinin sağlık üzerindeki etkilerini değerlendirmeye yardımcı olur.

Yaşlı Yetişkinlerin Plazmasındaki Fenolik Metabolitlerin Kütle Spektrometri Analizine Bağlanan Yarı Hedefli Ultra Yüksek Performanslı Kromatografi (Video) | JoVE Journal

Yaşlı Yetişkinlerin Plazmasındaki Fenolik Metabolitlerin Kütle Spektrometri Analizine Bağlanan Yarı Hedefli Ultra Yüksek Performanslı Kromatografi

Daha fazla video keşfet