Name: Rejeneratif Kapasitenin Karşılaştırmalı Analizi için Zebra Balığı ve Medaka Kullanan Yetişkin Optik Tektumunun Bıçak Yarası Yaralanma Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Keşfedin yetişkin zebra balığı optik tektumunda bıçak yarası yaralanma modelini. Bu yöntem, nöronal rejenerasyonun moleküler mekanizmalarını incelemek ve merkezi sinir sistemi için rejeneratif tedavilere katkıda bulunmak amacıyla kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, JSPS KAKENHI Hibe Numarası 18K14824 ve 21K15195 ve AIST, Japonya'nın dahili hibesi ile desteklenmiştir.

Tüm deneysel protokoller, Ulusal İleri Endüstriyel Bilim ve Teknoloji Enstitüsü'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Zebra balığı ve medaka standart prosedürlere göre muhafaza edildi28.
1. Yetişkin optik tektumda bıçak yarası yaralanması
<ol><li>Anestezi için% 0.4 (w / v) trikain stok çözeltisi hazırlayın. 100 mL'lik bir stok çözeltisi için, 400 mg trikain metansülfonatı ( Malzeme Tablosuna bakınız) 90 mL damıtılmış suda çözün ve 1 M Tris HCl tamponu (pH 9.0) kullanarak pH'ı 7.0'a ayarlayın. pH ayarlandıktan sonra, 100 mL'ye kadar su ekleyin, ardından uygun alikotları yapın ve -20 ° C'de saklayın.</li>
	<li>Yetişkin zebra balığı veya medaka'yı uyuşturmak için, %0,4'lük trikain stok çözeltisini balık tesisi suyuyla seyrelterek %0,02'lik (w/v) bir trikain çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>Balıkları% 0.02 trikain çözeltisi ile uyuşturun; hareket etmediklerinde veya dokunmaya tepki vermediklerinde uyuşturulurlar (1-2 dk).</li>
	<li>Anestezi uygulanan balığı bir strafor tepsiye yerleştirin (bkz. Malzeme Tablosu) ve balığı strafora dikey olarak yerleştirilmiş iki 30 G iğne arasına dik olarak sabitleyin.</li>
	<li>Balık kafasının hareket etmesini önlemek için balık gövdesini tutun ve kafatasından optik tektum yarımkürelerinden birinin medial bölgesine dikey olarak 30 G'lik bir iğne yerleştirin (Şekil 1A, B). Yerleştirme derinliği ~ 0,75 mm'dir ve neredeyse 30 G eğimin uzunluğunun yarısına eşittir. Bu ekleme derinliği, bu balıkların benzer vücut büyüklüğü nedeniyle zebra balığı ve medaka üzerinde beyin hasarına neden olur. NOT: Medaka'nın kafatasında pullar vardır. Bıçak yarası yaralanmasını etkili ve doğru bir şekilde indüklemek için 30 G iğnesini kullanarak pulları çizin ve çıkarın (Şekil 1C).</li>
	<li>Yaralı balıkları taze balık tesisi suyu olan bir balık tankına aktarın ve anesteziden tamamen iyileştikten sonra tankı balık yetiştirme sistemine taşıyın. NOT: Balıklar birkaç dakika içinde iyileşecek ve serbestçe hareket etmeye başlayacaktır.</li>
	<li>Yaralanmadan sonra soy analizi için, 5 mM bromodeoksiüridin (BrdU) içeren taze balık tesisi suyu hazırlayın (Malzeme Tablosuna bakınız) ve daha sonra balıkları bu 5 mM BrdU çözeltisi ile önceden belirlenmiş bir süre boyuncainkübe edin 13,19 (deneysel bir tasarımla belirlendiği gibi). Daha sonra bu balıkları adım 2'ye göre inceleyin ve BrdU birleşmesini ve hücre soy kimliğini uygun şekilde değerlendirin. NOT: Bu adım, hücre soyağacı analizi için isteğe bağlı bir adımdır. BrdU sinyallerini algılamak için, adım 4.3'te gösterildiği gibi antijen alımını gerçekleştirin.</li>
</ol>2. Beyin diseksiyonu
<ol><li>İntrakardiyal perfüzyon için% 0.02 trikain çözeltisi, diseksiyon için bir strafor tepsi ve bir uzatma tüpü ve 30 G iğne (bkz. Malzeme Tablosu) ile fosfat tamponlu salin (1x PBS) içeren 10 mL'lik bir şırınga hazırlayın.</li>
	<li>Yaralı balıkları seçilen zaman noktalarında uyuşturun.</li>
	<li>Kağıt havluları strafor tepsiye yerleştirin ve anestezi uygulanan balıkları kağıt havluların üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Anal yüzgecin her iki tarafına dikey olarak iki adet 30 G iğne yerleştirerek balık gövdesini yerinde tutun (Şekil 2A).</li>
	<li>Anüsten kalbe ventral bir kesi yapın (Şekil 2B) ve bu organın her iki tarafına iki adet 30 G iğne daha sokarak kalbi görünür tutun (Şekil 2C). NOT: Kalp, hem zebra balığı hem de medaka'da hipodermisin gümüşi epitel tabakasında kaplıdır (Şekil 2C).</li>
	<li>Forsepsin ucuyla gümüş epitel tabakasını yavaşça çıkarın (Şekil 2D).</li>
	<li>30 G iğnesini ventriküle yerleştirin, eğimi yukarıda tutun ve forsepsleri kullanarak atriyuma bir kesi yapın (Şekil 2E). 1x PBS'yi itmek için şırıngaya dikkatlice bastırın ve atriyumun kanı temizlediğini onaylayın. NOT: İğnenin ventriküle nüfuz etmesini önlemek için, iğneyi dikkatlice yarım eğimin derinliğine yerleştirin ve ardından yerleştirme derinliğini ayarlayın. Perfüzyon iyi yapılırsa, solungaçlar beyaza döner (Şekil 2F, G).</li>
	<li>Kan boşaltıldıktan ve solungaçlar beyaza döndükten sonra perfüzyonu durdurun.</li>
	<li>Balık gövdesini yerine sabitleyen iğneleri çıkarın ve balık ventral tarafını aşağıya doğru sabitleyin (Şekil 2H). Omuriliği kesin ve kafatasını optik tektumdan ve telensefalondan çıkarın (Şekil 2I). Ardından, optik sinirleri kesin ve beyni dikkatlice inceleyin. NOT: Diseksiyon sırasında optik sinirlere dikkat edin, çünkü sinirler tektuma bağlıdır. Optik sinir çekildiğinde, optik tektum beyinden ayrılabilir. Kan alma işlemi tamamlanmazsa, beyin açık pembe görünür ( Şekil 2J'de sağ beyin).</li>
	<li>Beyinleri 1x PBS'de 1 mL% 4 paraformaldehit içeren 1.5 mL tüplere aktarın ve gece boyunca 4 ° C'de sabitleyin.</li>
</ol>3. Dondurulmuş bölümlerin hazırlanması
<ol><li>Sabit beyinleri her biri 5 dakika boyunca 1x PBS'de üç kez yıkayın.</li>
	<li>Beyinleri kriyoproteksiyona tabi tutmak için, 1x PBS'de 1 mL% 30 (w / v) sakkaroz ile 1.5 mL tüplere aktarın ve gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin. Gömme bileşiğini (2:1 OCT bileşiği ve %30 sakkaroz karışımı, bakınız Malzeme Tablosu) 30 mL OCT ve 15 mL %30 sakkarozu birleştirerek hazırlayın. Bunu 4 °C'de saklayın. NOT: Kabarcıkları karışık bileşikten çıkarmak için, 50 mL tüpleri oda sıcaklığında 2 dakika boyunca 10.000 x g'de santrifüj edin veya tüpleri gece boyunca dik olarak yerleştirin.</li>
	<li>Bir alüminyum bloğu gece boyunca -80 ° C'de inkübe edin, böylece kriyomoldu soğutmak için disseke edilmiş beyin gömme bileşiği ile kriyomolda gömüldükten hemen sonra (bakınız Malzeme Tablosuna bakınız). NOT: Alüminyum bloğu soğutmak için sıvı azot da kullanılabilir. Bu durumda, alüminyum blok, gömmeden hemen önce alüminyum bloğu örtmek için yeterli sıvı azotla doldurulmuş bir Strafor kutuya yerleştirilmelidir. Sıvı azot süblimasyonunu onayladıktan sonra, kriyomoldu önceden soğutulmuş alüminyum blok üzerine yerleştirin. Alüminyum bloğa bir kerede kaç tane kriyomold yerleştirilebileceğini doğrulamak daha iyidir. Tüm numuneleri hızlı bir şekilde soğutmak için yeterli alan sağlamak için sıvı azot veya ek bir ön soğutmalı blok kullanılması önerilir.</li>
	<li>Önceden soğutulmuş alüminyum bloğu strafor bir kutuya koyun. Alüminyum bloğun ısınmasını önlemek için kapaklı bir strafor kutu kullanın.</li>
	<li>Koronal kesitler için, beyni bir kriyomold içine gömün ve mikroskop altında forseps kullanarak oryantasyonu ayarlayın (Şekil 3A).</li>
	<li>Kriyomoldu strafor kutudaki önceden soğutulmuş alüminyum blok üzerine yerleştirin ve OCT bileşiğinin donmasına izin verin (Şekil 3B). OCT bileşiği donmaya başladığında, beyaz olur.</li>
	<li>Bir numune diskine küçük bir OCT bileşiği çemberi uygulayın ve kriyobloğu numune diskine bağlamak için kriyobloğu monte edin.</li>
	<li>Numune diskini kriyostata yerleştirin ve OCT bileşiğini tamamen dondurun.</li>
	<li>Numune diskini kriyostattaki numune kafasına yerleştirin.</li>
	<li>Kriyoblokun yönünü ayarlayın ve ekstra bölgeleri kaldırmak için OCT'yi kırpın. NOT: Telensefalonu keserken kesme düzleminin yönünü ayarlayın. Bıçak bir kriyostat ile donatılmıştır. Numune kafasının açısını değiştirerek kesme düzleminin yönünü ayarlamak mümkündür.</li>
	<li>Bir kriyostat kullanarak tüm optik tektum boyunca 14 μm kalınlığında seri kesitler kesin. Slaytları -25 °C'de saklayın. NOT: Uzun süreli depolama -80 °C'de olmalıdır.</li>
</ol>4. Floresan immünoboyama
<ol><li>Kuru cam slaytlar oda sıcaklığında (RT) 30 dakika boyunca sürgü rafında kayar. Slaytları RT'de 30 dakika boyunca 1x PBS'de yıkayın. Anti-PCNA veya BrdU antikorları ile immün boyama yapılacaksa, adım 4.2 veya adım 4.3'e geçin.</li>
	<li>500 mL'lik bir beherde 500 mL 10 mM sodyum sitrat hazırlayın ve sitrat tamponunu sıcak plakalı manyetik karıştırıcı üzerinde 85 ° C'ye ısıtın, ardından slaytları bir slayt boyama rafına yerleştirin ve rafı sitrat tamponunda 85 ° C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. Kaynamayı önlemek için, sıcaklığı 85 °C civarında tutun. Antijen alımından sonra, slaytları 1x PBS'de (PBSTr) % 0.1 Triton'da üç kez yıkayın, her yıkama RT'de 5 dakika sürer. NOT: Bu adım, proliferasyon hücre nükleer antijeni (PCNA) alımı için isteğe bağlı bir adımdır.</li>
	<li>Damıtılmış suda 12 N HCl seyrelterek 2 N HCl çözeltisi hazırlayın. Bir sıvı engelleyici kullanarak (bakınız Malzeme Tablosu), 2 N HCl çözeltisini bölümlerin etrafında tutmak için hidrofobik bir bariyer olarak bir çizgi çizin.<ol><li>Slaytları immün boyama tepsilerine yerleştirin ve 2N HCl çözeltisinden 200-300 μL uygulayın. Tepsileri 37 ° C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. Antijen alımından sonra, %0.1 PBSTr'de üç kez yıkayın ve her yıkama RT'de 5 dakika sürer. NOT: Bu adım, BrdU antijen alımı için isteğe bağlı bir adımdır.</li>
	</ol></li>
	<li>Kalan çözeltiyi kağıt havlu kullanarak emer ve çıkarın. Daha sonra, antikor çözeltisini gerektiği gibi bölümlerin etrafında tutmak için hidrofobik bir bariyer çizmek için bir sıvı bloker kullanın.</li>
	<li>Slaytları tepsilere yerleştirin ve her slayta 200-300 μL blokaj çözeltisi, PBSTr'de% 3 (v / v) at serumu) uygulayın ve slaytları RT'de 1 saat boyunca inkübe edin.</li>
	<li>Bölümleri RT'de 5 dakika boyunca PBSTr ile yıkayın ve üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Bloke edici çözeltiyi (her slayt için 200-300 μL antikor çözeltisi) kullanarak birincil antikorları hazırlayın ( Malzeme Tablosuna bakınız). Kalan PBSTr'yi kağıt havlularla çıkarın ve slaytları immün boyama tepsilerine yerleştirin. Birincil antikor çözeltisini her slayta uygulayın ve tepsileri gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.</li>
	<li>Bölümleri RT'de 5 dakika boyunca PBSTr ile yıkayın ve üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Bloke edici tamponu (1:500) kullanarak floresan sekonder antikor çözeltisi hazırlayın (bkz. Kalan PBSTr'yi kağıt havlularla çıkarın ve slaytları immün boyama tepsilerine yerleştirin. İkincil antikor çözeltisini alüminyum folyo ile her slayt ve gölge tepsisine uygulayın. RT'de 1-2 saat inkübe edin.</li>
	<li>Bölümleri RT'de 5 dakika boyunca PBSTr ile ışığa maruz bırakmadan üç kez yıkayın.</li>
	<li>Nükleer boyama için Hoechst çözeltisini (1x PBS'de 1:500 seyreltme, Malzeme Tablosuna bakınız) hazırlayın. Kalan PBSTr'yi kağıt havlularla çıkarın ve slaytları immün boyama tepsilerine yerleştirin. Hoechst çözeltisini her slayda uygulayın ve tepsileri alüminyum folyo ile örtün. RT'de 30 dakika boyunca inkübe edin.</li>
	<li>Bölümleri RT'de ışığa maruz bırakmadan 10 dakika boyunca 1x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Kalan 1x PBS'yi kağıt havlu kullanarak emer ve çıkarın ve floresan immünoboyama için suda çözünür bir montaj ortamı ( bkz. Bölümlerin üzerine yavaşça 24 x 45 mm'lik bir kapak kayması yerleştirin. Slaytları ışığa maruz bırakmadan 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Floresan mikroskobu veya konfokal mikroskopi altındaki bölümleri gözlemleyin ve görüntüleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Becker, T., Wullimann, M. F., Becker, C. G., Bernhardt, R. R., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+regrowth+after+spinal+cord+transection+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Axonal regrowth after spinal cord transection in adult zebrafish.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (4), 577-595 (1997).</li>
<li>Raymond, P. A., Barthel, L. K., Bernardos, R. L., Perkowski, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+retinal+stem+cells+and+their+niches+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of retinal stem cells and their niches in adult zebrafish.</a> BMC Developmental Biology. 6, 36(2006).</li>
<li>März, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+response+following+stab+injury+in+the+adult+zebrafish+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon.</a> Developmental Dynamics. 240 (9), 2221-2231 (2011).</li>
<li>Kang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tissue+repair+by+regeneration+enhancer+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modulation of tissue repair by regeneration enhancer elements.</a> Nature. 532 (7598), 201-206 (2016).</li>
<li>Simões, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+directly+contribute+collagen+to+scar+formation+during+zebrafish+heart+regeneration+and+mouse+heart+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Macrophages directly contribute collagen to scar formation during zebrafish heart regeneration and mouse heart repair.</a> Nature Communications. 11 (1), 600(2020).</li>
<li>Hoang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulatory+networks+controlling+vertebrate+retinal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration.</a> Science. 370 (6519), (2020).</li>
<li>Alunni, A., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+view+of+regenerative+neurogenesis+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates.</a> Development. 143 (5), 741-753 (2016).</li>
<li>Diotel, N., Lübke, L., Strähle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+and+distinct+features+of+adult+neurogenesis+and+regeneration+in+the+telencephalon+of+zebrafish+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Common and distinct features of adult neurogenesis and regeneration in the telencephalon of zebrafish and mammals.</a> Frontiers in Neuroscience. 14, 568930(2020).</li>
<li>Labusch, M., Mancini, L., Morizet, D., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+divergent+features+of+adult+neurogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved and divergent features of adult neurogenesis in zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 525(2020).</li>
<li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+reparative+phenotypes+between+zebrafish+and+medaka+after+cardiac+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Differential reparative phenotypes between zebrafish and medaka after cardiac injury.</a> Developmental Dynamics. 243 (9), 1106-1115 (2014).</li>
<li>Lai, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+analyses+in+zebrafish+and+medaka+reveal+that+harnessing+the+immune+response+promotes+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Reciprocal analyses in zebrafish and medaka reveal that harnessing the immune response promotes cardiac regeneration.</a> eLife. 6, 25605(2017).</li>
<li>Lust, K., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activating+the+regenerative+potential+of+M%C3%BCller+glia+cells+in+a+regeneration-deficient+retina%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Activating the regenerative potential of Müller glia cells in a regeneration-deficient retina.</a> eLife. 7, 32319(2018).</li>
<li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regenerative+capacity+of+the+optic+tectum+of+adult+medaka+and+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Differential regenerative capacity of the optic tectum of adult medaka and zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 686755(2021).</li>
<li>Adolf, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+acquired+features+of+adult+neurogenesis+in+the+zebrafish+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon.</a> Developmental Biology. 295 (1), 278-293 (2006).</li>
<li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain%3A+origin%2C+proliferation+dynamics%2C+migration+and+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295 (1), 263-277 (2006).</li>
<li>Alunni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+neural+stem+cells+in+the+medaka+optic+tectum+proliferation+zones%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Evidence for neural stem cells in the medaka optic tectum proliferation zones.</a> Developmental Neurobiology. 70 (10), 693-713 (2010).</li>
<li>Kuroyanagi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+zones+in+adult+medaka+%28Oryzias+latipes%29+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Proliferation zones in adult medaka (Oryzias latipes) brain.</a> Brain Research. 1323, 33-40 (2010).</li>
<li>Ito, Y., Tanaka, H., Okamoto, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Developmental Biology. 342 (1), 26-38 (2010).</li>
<li>Shimizu, Y., Ueda, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+regulates+proliferation+and+differentiation+of+radial+glia+in+regenerative+processes+after+stab+injury+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling regulates proliferation and differentiation of radial glia in regenerative processes after stab injury in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Glia. 66 (7), 1382-1394 (2018).</li>
<li>Ueda, Y., Shimizu, Y., Shimizu, N., Ishitani, T., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+sonic+hedgehog+and+notch+signaling+in+regenerative+neurogenesis+in+adult+zebrafish+optic+tectum+after+stab+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Involvement of sonic hedgehog and notch signaling in regenerative neurogenesis in adult zebrafish optic tectum after stab injury.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (15), 2360-2372 (2018).</li>
<li>Kiyooka, M., Shimizu, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+inhibition+promotes+regenerative+neurogenesis+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase inhibition promotes regenerative neurogenesis after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 529 (2), 366-371 (2020).</li>
<li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+acetyltransferase+EP300+regulates+the+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+during+adult+neurogenesis+and+regenerative+neurogenesis+in+the+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Histone acetyltransferase EP300 regulates the proliferation and differentiation of neural stem cells during adult neurogenesis and regenerative neurogenesis in the zebrafish optic tectum.</a> Neuroscience Letters. 756, 135978(2021).</li>
<li>Shimizu, Y., Kiyooka, M., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analyses+reveal+IL6%2FStat3+signaling+involvement+in+radial+glia+proliferation+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analyses reveal IL6/Stat3 signaling involvement in radial glia proliferation after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 668408(2021).</li>
<li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420(2019).</li>
<li>Yu, S., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+cell-cycle+entry+and+cell-state-dependent+fate+outputs+of+injury-reactivated+tectal+radial+glia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Stochastic cell-cycle entry and cell-state-dependent fate outputs of injury-reactivated tectal radial glia in zebrafish.</a> eLife. 8, 48660(2019).</li>
<li>Bisese, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+transcriptome+response+of+the+midbrain%2Fdiencephalon+to+injury+in+the+adult+mummichog+%28Fundulus+heteroclitus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">The acute transcriptome response of the midbrain/diencephalon to injury in the adult mummichog (Fundulus heteroclitus).</a> Molecular Brain. 12 (1), 119(2019).</li>
<li>Schmidt, R., Beil, T., Strähle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stab+wound+injury+of+the+zebrafish+adult+telencephalon%3A+a+method+to+investigate+vertebrate+brain+neurogenesis+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration.</a> Journal of Visualized Experiments. (4), e51753(2014).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+5th+ed%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio) 5th ed</a>. , University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>Curado, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish%3A+a+new+tool+for+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Developmental Dynamics. 236 (4), 1025-1035 (2007).</li>
<li>Shimizu, Y., Ito, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radial+glial+cell-specific+ablation+in+the+adult+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Radial glial cell-specific ablation in the adult zebrafish brain.</a> Genesis. 53 (7), 431-439 (2015).</li>
<li>Godoy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+regenerate+following+chemogenetic+ablation+in+the+olfactory+bulb+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons regenerate following chemogenetic ablation in the olfactory bulb of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Scientific Reports. 10 (1), 12825(2020).</li>
<li>Sawahata, M., Izumi, Y., Akaike, A., Kume, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+brain+ischemia-reperfusion+model+induced+by+hypoxia-reoxygenation+using+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">In vivo brain ischemia-reperfusion model induced by hypoxia-reoxygenation using zebrafish larvae.</a> Brain Research Bulletin. 173, 45-52 (2021).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Burada, beyin hasarı sonrası RGC proliferasyonunun ve farklılaşmasının değerlendirilmesini kolaylaştırmak için bir iğne kullanarak optik tektumda bıçak yarası yaralanmalarını indüklemek için kullanılabilecek bir dizi yöntem açıklanmaktadır. İğne aracılı bıçak yaraları, standart bir alet seti kullanılarak birçok deneysel örneğe uygulanabilen basit, verimli bir şekilde uygulanan bir yöntemdir. Zebra balığı beyninin çeşitli bölgeleri için bıçak yarası yaralanma modelleri geliştirilmiştir 3,19,29...

Zebra balığı (Danio rerio), diğer memelilere kıyasla merkezi sinir sistemini (CNS) yenileme yeteneğinde artışa sahiptir 1,2,3. Son zamanlarda, bu artan rejeneratif kapasitenin altında yatan moleküler mekanizmaları daha iyi anlamak için, yeni nesil dizileme teknolojisi kullanılarak doku rejenerasyonunun karşılaştırmalı analizleri yapılmıştır 4,5,6. Zebra balığı ve tetrapodlardaki beyin yapıları oldukça farklıdır 7,8,9. Bu, benzer beyin yapılarına ve biyolojik özelliklere sahip küçük balıkların kullanıldığı birkaç beyin hasarı modelinin, bu artan rejeneratif kapasiteye katkıda bulunan altta yatan moleküler mekanizmaların araştırılmasını kolaylaştırmak için geliştirildiği anlamına gelir.
Ek olarak, medaka (Oryzias latipes), zebra balığı ile karşılaştırıldığında 10,11,12,13 kalp ve nöronal rejenerasyon için düşük kapasiteye sahip popüler bir laboratuvar hayvanıdır. Zebra balığı ve medaka, yetişkin nöral kök hücreler (NSC'ler) için benzer beyin yapılarına ve nişlere sahiptir14,15,16,17. Zebra balığı ve medaka'da, optik tektum iki tip NSC, nöroepitel benzeri kök hücreler ve radyal glial hücreler (RGC'ler) içerir15,18. Yetişkin zebra balıklarının optik tektumunda bıçak yarası yaralanması daha önce geliştirilmiş ve bu model bu hayvanlarda beyin rejenerasyonunu düzenleyen moleküler mekanizmaları araştırmak için kullanılmıştır 19,20,21,22,23. Bu genç yetişkin zebra balığı bıçak yarası yaralanma modeli, RGC'lerden 19,24,25 rejeneratif nörogeneze neden olmuştur. Optik tektumdaki bu bıçak yarası yaralanması sağlam ve tekrarlanabilir bir yöntemdir 13,19,20,21,22,23,24,25. Aynı yaralanma modeli erişkin medakaya uygulandığında, medaka optik tektumdaki RGC'lerin düşük nörojenik kapasitesi, yaralanma sonrası RGC proliferasyonu ve farklılaşmasının karşılaştırmalı analizi ile ortaya konmuştur13.
Optik tektumdaki bıçak yarası yaralanma modelleri mummichog modelleri26'da da geliştirilmiştir, ancak tektum yaralanmasının ayrıntıları telensefalik yaralanma27 ile karşılaştırıldığında iyi belgelenmemiştir. Zebra balığı ve medaka kullanılarak optik tektumda bıçak yarası yaralanması, diferansiyel rejeneratif kapasiteye sahip türler arasındaki diferansiyel hücresel tepkilerin ve gen ekspresyonunun araştırılmasına olanak sağlar. Bu protokol, bir enjeksiyon iğnesi kullanılarak optik tektumda bıçak yarası yaralanmasının nasıl gerçekleştirileceğini açıklar. Bu yöntem zebra balığı ve medaka gibi küçük balıklara uygulanabilir. Burada histolojik analiz için numune hazırlama ve floresan immünohistokimya ve kriyoseksiyonlar kullanılarak hücresel proliferasyon ve farklılaşma analizi süreçleri açıklanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>10 mL şırınga</td><td>TERUMO</td><td>SS-10ESZ</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris-HCl (pH 9.0)</td><td>NIPPON GENE</td><td>314-90381</td><td></td></tr><tr><td>30 G iğne</td><td>Dentronics</td><td>HS-2739A</td><td></td></tr><tr><td>%4 Paraformaldehit Fosfat Tampon Çözeltisi</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum blok</td><td></td><td></td><td>115 x 80 x 37 mm (G x D x Y) 6 kriyomoldu dondurmak için yeterli boyuttur</td></tr><tr><td>Anti-BLBP</td><td>Millipore</td><td>ABN14</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-BrdU</td><td>Abcam</td><td>ab1893</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-HuC</td><td>Invitrogen</td><td>A21271</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-PCNA</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc-56</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Brmodeoksiüridin</td><td>Wako</td><td>023-15563</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop C1 plus</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Sakura Finetek Japonya</td><td>4565</td><td>10 x 10 x 5 mm (G x D x Y)</td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Leica</td><td>CM1960</td><td></td></tr><tr><td>Danio rerio WT suşları RW</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uzatma tüpü</td><td>TERUMO</td><td>SF-ET3520</td><td></td></tr><tr><td>Floresan boya lekeli dokularla kullanım için Floromount (TM) Sulu Montaj Ortamı</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>F4680-25ML</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>DUMONT</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Fare IgG (H + L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32723</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>A11035</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 çözeltisi</td><td>Dojindo</td><td>23491-52-3</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Wako</td><td>080-01066</td><td></td></tr><tr><td>10 slayt için Kuluçka Odası Koyu Turuncu COSMO</td><td>BIO CO., LTD.</td><td>10DO</td><td></td></tr><tr><td>MAS kaplama sürgülü cam</td><td>Matsunami cam</td><td>MAS-01</td><td></td></tr><tr><td>Mikro kapak camı</td><td>Matsunami cam</td><td>C024451</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>Normal at serumu engelleme solüsyonu</td><td>VEKTÖR LABRATORIES</td><td>S-2000-20</td><td></td></tr><tr><td>OCT Bileşik</td><td>Sakura Finetek Japonya</td><td>83-1824</td><td></td></tr><tr><td>Oryzias latipes WT suşları Kabin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PAP Kalem Süper Sıvı Engelleyici</td><td>DAIDO SANGYO</td><td>PAP-S</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS) Tabletleri, pH 7.4</td><td>TaKaRa</td><td>T9181</td><td></td></tr><tr><td>Strafor tepsi</td><td></td><td></td><td>100 x 100 x 10 mm (G x D x Y) strafor levha tepsi olarak mevcuttur</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Wako</td><td>196-00015</td><td>%30 (a/h) PBS'de sükroz</td></tr><tr><td>Trikain (MS-222)</td> <td>nacarai tesque</td><td>14805-24</td><td></td></tr><tr><td>Trisodyum Sitrat Dihidrat</td><td>Wako</td><td>191-01785</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Wako</td><td>04605-250</td><td></td></tr></tbody></table>

rejeneratif kapasitenin karşılaştırmalı analizi için zebra balığı ve medaka kullanan yetişkin optik tektumunun bıçak yarası yaralanma modeli

Stab Wound Injury Model of the Adult Optic Tectum Using Zebrafish and Medaka for the Comparative Analysis of Regenerative Capacity

Zebra balığı, merkezi sinir sistemini (CNS) yenilemek için üstün bir kapasiteye sahipken, medaka daha düşük bir CNS rejeneratif kapasitesine sahiptir. Zebra balığı ve medaka'nın yetişkin optik tektumunda bir beyin hasarı modeli geliştirilmiş ve bu balık türleri arasında bu dokunun yüksek rejeneratif kapasitesini düzenleyen moleküler mekanizmaları aydınlatmak için karşılaştırmalı histolojik ve moleküler analizler yapılmıştır. Burada erişkin optik tektum için nöral kök hücrelerin (NSC) proliferasyonu ve farklılaşması için bir iğne ve histolojik analizler kullanılarak bir bıçak yarası yaralanma modeli sunulmuştur. Optik tektumun merkezi bölgesine manuel olarak bir iğne sokuldu ve daha sonra balıklar intrakardiyal olarak perfüze edildi ve beyinleri diseke edildi. Bu dokular daha sonra kriyoseksiyona tabi tutuldu ve uygun NSC proliferasyonu ve farklılaşma belirteçlerine karşı immün boyama kullanılarak değerlendirildi. Bu tektum yaralanma modeli, hem zebra balığı hem de medaka'da sağlam ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar ve yaralanma sonrası NSC yanıtlarını karşılaştırmaya olanak tanır. Bu yöntem, zebra balığı, medaka ve Afrika killifish dahil olmak üzere küçük teleostlar için mevcuttur ve rejeneratif kapasitelerini karşılaştırmamızı ve benzersiz moleküler mekanizmaları araştırmamızı sağlar.

Sağ yarımküreye iğne sokulması kullanılarak optik tektumda bıçak yarası yaralanması (Şekil 1, Şekil 4A ve Şekil 5A), radyal glial hücre (RGC) proliferasyonu ve yenidoğan nöronlarının oluşumu dahil olmak üzere çeşitli hücresel yanıtları indükler. Benzer şekilde, zebra balığı ve medaka'nın yaşlı popülasyonları, rejeneratif yanıttaki yaşlanma etkilerine karşı koymak için kullanılmıştır. Daha sonra dondurulmuş kesitlerde floresan immüno...

Yetişkin zebra balıklarında mekanik bir beyin hasarı modeli, yüksek rejeneratif kapasitelerini düzenleyen moleküler mekanizmaları araştırmak için tanımlanmıştır. Yöntem, floresan immünoboyama kullanarak rejeneratif yanıtları değerlendirmek için birden fazla küçük balık türünün optik tektumunda bir bıçak yarası yaralanması oluşturmayı açıklar.

Rejeneratif Kapasitenin Karşılaştırmalı Analizi için Zebra Balığı ve Medaka Kullanan Yetişkin Optik Tektumunun Bıçak Yarası Yaralanma Modeli

While zebrafish have a superior capacity to regenerate their central nervous system (CNS), medaka has a lower CNS regenerative capacity. A brain injury ...

Bıçak yarası yaralanması, nonspesifik hücre ablasyonunu indükleyen mekanik bir yaralanma yöntemidir. Bu yöntem, beyin hasarı sonrası RGC proliferasyonu ve farklılaşmasının değerlendirilmesini kolaylaştırır. İğne aracılı bıçak yarası yaralanması, beyin hasarını indüklemek için basit, etkili bir şekilde uygulanan bir yöntemdir.Bu yöntem, standart bir araç seti kullanılarak birçok deneysel numuneye uygulanabilir. Zebra balıklarının rejeneratif kapasitesi, bıçak yarası yaralanma modeli kullanılarak gösterilmiştir. Nöronal rejenerasyonu düzenleyen moleküler mekanizmaya yeni bakış açıları, merkezi sinir sisteminde rejeneratif tedaviye katkıda bulunur.Anestezi uygulanmış yetişkin bir zebra balığı veya medaka'yı strafor tepsiye yerleştirerek başlayın. Balıkları, straforun içine dikey olarak yerleştirilmiş iki adet 30 gauge iğne arasına dik olarak sabitleyin. Balık kafasının hareket etmesini önlemek için balık gövdesini tutun ve ardından kafatasından optik tektum kürelerinden birinin medial bölgesine dikey olarak 30 gauge'lik bir iğne yerleştirin.Daha sonra, yaralı balıkları taze balık tesisi suyu olan bir balık tankına aktarın. Balıklar anesteziden tamamen iyileştikten sonra, tankı üreme s

stab-wound-injury-model-adult-optic-tectum-using-zebrafish-medaka-for

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video, lazer yaralanması kullanılarak yetişkin zebra balıklarında retina dejenerasyonunu indüklemek için bir prosedürü göstermektedir. Lazer, retinadaki fotoreseptör hücrelerini hedef alarak hücre ölümünü ve dejeneratif bir süreci tetikler. Bu hasar, Müller glia (MG) hücrelerini aktive eder ve retinal rejenerasyona yardımcı olan kök hücre progenitörlerine farklılaşmalarına yol açar.

Zebra Balıklarında Retina Dejenerasyonu ve Rejenerasyonunun Fokal Lazer Yaralanması Kullanılarak Modellenmesi

Spinal Transeksiyon sonra, yetişkin zebrabalıkları altı hafta sonrası yaralanma ile fonksiyonel iyileşme var. Larva şeffaflık ve hızlı iyileşme yararlanmak için, larva omurilik transecting için bir yöntem mevcut. Transeksiyon sonra, 3 gün sonrası yaralanma ile 2 gün sonrası yaralanma başlayan duyusal iyileşme gözlemlemek, ve C-bend hareketi.

Larva Zebra balığı Omurilik Kesisi

Zebra balığı yetişkin nörogenezi ve rejenerasyonunun hücresel ve moleküler mekanizmalarına ışık tutmak için, zebra balığı yetişkin telensefalonunda mekanik yaralanmalara neden olan invaziv cerrahi ve ardından bıçaklanmış hemisferdeki değişikliklerin immünohistokimya veya in situ hibridizasyon ile izlenmesi için bir protokol geliştirdik.

Zebra balığı Yetişkin telencephalon stab Yara Yaralanma: Omurgalı Beyin nöron ve Rejenerasyon Soruşturma Bir Yöntem

Burada, gentamisin enjeksiyonu ile akut böbrek hasarını indükleyerek erişkin böbrek rejenerasyonunu incelemek için güvenilir bir yöntem sunuyoruz. Yaralanmanın gentamisin dozajına ve çevre sıcaklığına bağlı olduğunu, lhx1a+'yı etiketlemek için yerinde hibridizasyon kullanarak, yeni nefronlar geliştirdiğini gösterdik.

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

Bu makale, zebra balığı embriyolarında mekanik damar yaralanması oluşturmak için bir yöntemi açıklamaktadır. Bu yaralanma modeli, gerçek zamanlı mikroskopi için ideal olan bir organizmada hemostaz, yaralanmaya bağlı iltihaplanma ve yara iyileşmesini incelemek için bir platform sağlar.

Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık

Zebra balığı retina rejenerasyon çoğunlukla sabit retina kullanılarak incelenmiştir. Ancak, bu tür interkinetic nükleer göç gibi dinamik süreçler rejeneratif tepki sırasında meydana gelen ve altında yatan mekanizmaları araştırmak için canlı hücre görüntüleme gerektirir. Burada, biz multiphoton mikroskopi kullanılarak Interkinetic Nükleer Göç (INM) gerçek zamanlı olarak izlemek için kültür ve görüntüleme koşulları açıklar.

Multiphoton Mikroskopi Canlı hücre Görüntüleme için Yetişkin Transgenik Zebra balığı Retina Eksplantlarından Kültür

Zebra balığı retina dejenerasyonu/rejenerasyon omurgalılarda mekanizmaları incelemek için popüler bir hayvan modelidir. Bu iletişim kuralı yerelleştirilmiş yaralanma dış retina iç retina en az hasar ile kesintiye neden yöntemi açıklanır. Daha sonra in vivo retina morfoloji ve Müller glia yanıt retina yeniden oluşturma işlemi boyunca izliyoruz.

Bir lazer kaynaklı retina dejenerasyonu, Zebra balığı rejenerasyon modelini Müller Glia hücre aktivasyonu

Burada, 3 Yetişkin zebra balığı yaralanma model ve immünsupresif ilaç tedavisi ile kombine kullanımları açıklanmaktadır. Biz doku Yenileyici görüntüleme ve kemik Qafqaz orada tespit rehberlik sağlar.

Kemik doku Yenileyici prednizolon etkilerini incelemek için yetişkin zebra balığı yaralanma modelleri

Yetişkin zebra balığı için Marmarou ağırlık düşürme modelini, künt travmatik beyin hasarı (TBI) ve sonraki nöronal yenilenmenin altında kalan mekanizmaların ardından çok çeşitli patolojileri incelemek üzere değiştirdik. Bu künt kuvvetli TBI modeli ölçeklenebilir, hafif, orta veya şiddetli bir TBI'ya neden oluyor ve insan TBI'sında gözlenen yaralanma heterojenliğini yeniden özetler.

Yetişkin Zebra Balıklarında Künt Kuvvet Yaralanmasının Etkilerini Incelemek İçin Ölçeklenebilir Bir Model

Makale, retinal girdinin optik tektum büyümesini ve gelişimini nasıl etkilediğini araştırmaya yönelik ilk adım olarak canlı zebra balığı larvalarından gözlerin cerrahi olarak nasıl çıkarılacağını açıklamaktadır. Ek olarak, makale larva anesteziizasyonu, fiksasyon ve beyin diseksiyonu, ardından immünohistokimya ve konfokal görüntüleme hakkında bilgi vermektedir.

Görsel Sistemin Innervasyona Bağlı Büyümesini ve Gelişimini İncelemek için Canlı Zebra Balığı Larvalarında Göz Çıkarılması

Bu protokol, hücresel düzeyde sonraki yara kapanmasını değerlendirmek için zebra balıklarının oküler yüzeyine aşınma yoluyla zarar vermeye odaklanır. Bu yaklaşım, kornea epitelini kısmen çıkarmak için bir oküler çapaktan yararlanır ve yara kapanması sırasında hücre morfolojisindeki değişiklikleri izlemek için taramalı elektron mikroskobu kullanır.

Zebra Balığı Kornea Yara İyileşmesi: Aşınmadan Yara Kapatma Görüntüleme Analizine

Keşfedin yetişkin zebra balığı optik tektumunda bıçak yarası yaralanma modelini. Bu yöntem, nöronal rejenerasyonun moleküler mekanizmalarını incelemek ve merkezi sinir sistemi için rejeneratif tedavilere katkıda bulunmak amacıyla kullanılır.

Rejeneratif Kapasitenin Karşılaştırmalı Analizi için Zebra Balığı ve Medaka Kullanan Yetişkin Optik Tektumunun Bıçak Yarası Yaralanma Modeli (Video) | JoVE Journal

Rejeneratif Kapasitenin Karşılaştırmalı Analizi için Zebra Balığı ve Medaka Kullanan Yetişkin Optik Tektumunun Bıçak Yarası Yaralanma Modeli

Daha fazla video keşfet