Name: Ateroskleroz Hayvan Modelinde Partikül Madde Maruziyeti Üzerine Miyokard İskemisinin Şiddetlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Keşfedin miyokard iskemisi, ateroskleroz ve partikül madde maruziyetini birleştiren bileşik hayvan modeli oluşturma yöntemini. Bu güvenilir model, kardiyovasküler hastalık ve çevresel toksikoloji araştırmaları için değerli bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu model, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 81673640, 81841001 ve 81803814) ve Çin'in Yenilikçi İlaç için Büyük Ulusal Bilim ve Teknoloji Programı (2017ZX09301012002 ve 2017ZX09101002001-001-3) desteğiyle geliştirilmiştir.

Burada açıklanan tüm hayvan faaliyetleri, Çin Materia Medica, Çin Tıp Bilimleri Akademisi Enstitüsü Hayvan Etiği Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışma için 6-8 haftalık erkek ApoE-/- fareler (C57BL/6 arka plan) kullanıldı.
1. Deneysel hazırlık
<ol><li>Tribromoetanol anesteziklerini hazırlayın (15 mg / mL): 0.75 g tribromoetanol, 1 mL tert-amil alkol içinde çözün (bkz. Tamamen çözündükten sonra, steril salin ile 50 mL'ye kadar seyreltin. Çözeltiyi steril bir kapta 4 ° C'de saklayın ve ışığa maruz kalmaktan kaçının. NOT: Bu protokolde, hayvanların optimal anestezi iyileşme süresi ve hayatta kalma oranı nedeniyle tribromoetanol kullanılmıştır. Anestezi rejimini seçerken yerel hayvan etik komitesinin tavsiyelerine uyun.</li>
	<li>PM süspansiyonunu hazırlayın: 10 mL santrifüj tüplerinde 5 mg DPM ( Dizel partikül madde, bkz. 5 mL normal salin ekleyin ve iyice karıştırmak için tüpü baş aşağı çevirin. Tüpü kapatmak için parafin film kullanın ve daha sonra ultrasonik kırılma için 2-3 saat (40KHz, 80w) için ultrasonik temizleyiciye koyun. NOT: Süspansiyon homojen olmalı ve partikül aglomeralarından arındırılmış olmalıdır. Kullanmadan önce iyice çalkalayın.</li>
</ol>2. Farelerde ateroskleroz indüksiyonu
<ol><li>Fareleri 12 hafta boyunca yüksek yağlı bir diyetle (yumurta sarısı tozu% 10, domuz yağı% 10, sterol% 1, bakım yemi% 79, Malzeme Tablosuna bakınız) besleyin.</li>
	<li>Aterosklerozun ilerlemesini tahmin etmek için, rastgele 2-3 fare seçin ve ultrason görüntüleme veya doğrudan anatomik gözlem ile aort arkında bir plak olup olmadığını kontrol edin17. NOT: Anatomik gözlem için, hayvanlar rastgele örnekleme ile seçildi ve anestezi sonrası ötenazi yapıldı. Daha sonra göğüs boşlukları açıldı ve kan damarları doğrudan görselleştirildi. Anatomik gözlem genellikle daha güvenilirdir, çünkü ultrason görüntüleme tüm plakları tespit edemeyebilir.</li>
	<li>Ateroskleroz oluştuğuna karar verdikten sonra, fareleri bir sonraki adım için hazırlayın.</li>
</ol>3. Orotrakeal entübasyon ve partikül madde akut maruziyeti
NOT: PM, 12 haftalık yüksek yağlı beslenmeden sonra 4 hafta boyunca haftada bir kez maruz kalacak ve sürekli olarak yüksek yağlı bir diyet verilecektir.
<ol><li>Üst kenardan 1,5 cm uzağa sabitlenmiş bir lastik bantla bir diseksiyon panosu hazırlayın (bkz. Diseksiyon panosunu masa düzleminden 60° açıyla sabitleyin.</li>
	<li>İntraperitoneal enjeksiyonla tribromoetanol anestezik kullanarak fareyi anestezi altına alın (her 10 g vücut ağırlığı için 0.1 mL). 2-3 dakika sonra, doğru bir refleks olup olmadığını kontrol etmek için fareyi çevirin. Sedasyonu onaylamak için bir ayak parmağı sıkışması yapın. Gözlere steril yağlama bırakın.</li>
	<li>Diseksiyon panosunu alkollü mendillerle dezenfekte edin.</li>
	<li>Anestezi uygulanan fareyi tahta üzerinde sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve üst kesici dişleri lastik banda bağlayın.</li>
	<li>Esnek bir boruya sahip küçük bir LED spot ışığı kullanın (bkz. Işığı, aksiller çizginin orta noktasında bulunan trakeaya odaklayın.</li>
	<li>Farenin ağzına küçük bir steril pamuklu çubuk koyun, ardından dili dışarı çıkarmak için çubuğu yuvarlayın.</li>
	<li>Dili tutun ve ağız boşluğunu, farenksi ve trakeayı aynı uzunlamasına yönde yapmak için yavaşça yukarı çekin. Trakeanın girişi olan glottis, her nefeste açılıp kapanan parlak bir nokta olarak gösterilecektir.</li>
	<li>Dili nazikçe tutmaya devam edin. Kanülü (22 G) glottis'i hedefleyerek farenin trakeasına yerleştirin, kanül trakeaya yerleştirildikten sonra iğne çekirdeğini çekin.</li>
	<li>Tüpün sütüzde doğru olup olmadığını test etmek için az miktarda normal salin içeren bir pipet tabancası kullanın. Tüp doğru konumdaysa, pipet tabancasındaki sıvı sütunu her nefeste zıplayacaktır.</li>
	<li>50 μL DPM süspansiyonunu (adım 1.2'de hazırlanan) pipet tabancasıyla tüpe bırakın. Süspansiyon, nefes alırken farenin akciğerlerine doğal olarak solunacaktır. NOT: Düzgün nefes almayı sağlamak için, fareye 10 s arayla DPM süspansiyonunun iki katını (bir kereliğine 25 μL) vermek daha iyidir.</li>
	<li>PM maruziyetinden sonra evcil hayvan konut iğnesini çıkarın. Farenin bilincini yeniden kazanana kadar (10-20 dakika) ısıtma pedleri üzerinde kalmasını bekleyin ve ardından ev kafesine geri yerleştirin.</li>
</ol>4. Koroner arter ligasyonu
NOT: Miyokard İskemisi modelleme operasyonu (koroner arter ligasyonu) 16. haftada yapılır .
<ol><li>Cerrahi aletler hazırlayın. Otoklavlamadan sonra, tüm cerrahi aletleri kapalı bir alet kutusunda saklayın. Ameliyattan önce 20-30 dakika boyunca% 75 alkole batırın.</li>
	<li>Ameliyat platformunu oluşturun. Uygun platform eğimini elde etmek için, bir hücre kültürü çanak kapağı (150 mm x 25 mm) kullanın. 0-0 ipeği (10-15 cm uzunluğunda) ikiye katlayın ve bir süspansiyon döngüsü oluşturmak için bant kullanarak ipliğin uçlarını eğimli platformun üstüne takın.</li>
	<li>Adım 3.2'de açıklanan prosedürü izleyerek fareleri anestezi altına alın. NOT: Her tribromoetanol uygulaması arasında 1 haftalık bir aralık sağlanmalıdır.</li>
	<li>Platformu alkollü mendillerle dezenfekte edin.</li>
	<li>Fareyi entübasyon platformunda sırtüstü konuma getirin ve üst kesici dişleri adım 4.2'de açıklanan süspansiyon döngüsüne bağlayın. Kuyruğu, uzuvları ve bıyıkları bantlayın.</li>
	<li>Ameliyattan önce sol göğsün kıllarını ve bitişik sağ göğsün bir kısmını epilasyon kremi ile çıkarın.</li>
	<li>Adım 3.4-3.8'de açıklanan prosedürü izleyerek farelerde orotrakeal entübasyon uygulayın.</li>
	<li>Evcil hayvan konut iğnesini bir hayvan vantilatörüne bağlayın (bkz. Ventilatör ayarı: solunum hızı - 120 kez / dak; inhalasyon/solunum oranı - 1:1.1; gelgit hacmi - 1.7 mL.</li>
	<li>Dezenfekte etmek için cildi iyodofor ve alkol ile silin.</li>
	<li>Kalbi açığa çıkarın. Oftalmik makasla 0,5-1 cm kesilmiş bir cilt yapın ve kaburgaları açığa çıkarmak için kasları (pektoral yüzeysel kas ve serratus anterior kas) destekleyin. Kaburgayı oftalmik cımbızla (kancalı) kelepçeleyin ve ardından üçüncü interkostal boşlukta küçük bir kesim yapın (bkz. Ev yapımı göğüs açma aletleri ile bir çalışma penceresi yapın. NOT: Cilt kesimi, ksifoid proses ve aksilla hattının yaklaşık üçte birinde bulunur.</li>
	<li>Perikard zarlarını sökün. Daha sonra 4.11-4.14 adımlarını izleyerek LAD'yi yetkilendirmek mümkündür. NOT: Pulmoner loblar görüşü engelliyorsa, küçük bir steril pamuklu çubukla kalbin arkasına itin.</li>
	<li>İlk başta, LAD'yi bulun.</li>
	<li>Steril 6-0 ipek sütürü mikrovasküler hemostatik forseps kullanarak bir iğne ile tutun (bkz. İpeği, koroner arterin bulunduğu bölgedeki 2 mm genişliğinde bir miyokarddan geçirin. NOT: Sadece LAD'yi kandırmaya çalışmayın, bu da majör intraoperatif kanamaya neden olabilir.</li>
	<li>Doku kırılmasını önlemek için ligatür ve miyokard dokuları arasına kısa bir steril 5-0 ipek parçası yerleştirin.</li>
	<li>LAD'yi ve etrafındaki küçük miyokard demetini sıkıca bağlayın. Sol ventrikülün (LV) ön duvarı soluklaştığında ligasyon başarılı kabul edilir; ST-segment yükselmesi, bir elektrokardiyogram makinesi bağlıysa aynı anda gözlemlenebilir.</li>
	<li>Havayı göğüsten yavaşça sıkın. İnterkostal kasları ve cildi steril 5-0 ipek ile sırayla dikiştirin. NOT: Göğüsten havayı sıkmak için, akciğer genişlemesi anında göğsü kapatın ve ortadaki göğüs kafesini hafifçe sıkmak ve havanın son dikişin ötesinden kaçmasına izin vermek için işaret ve orta parmakları kullanın. Şırıngalar göğüs gazını çıkarmak için de kullanılabilir. NOT: Basit kesilmiş dikiş tavsiye edilir, çünkü fareler uyanıkken ipeği kemirebilirler.</li>
</ol>5. Kurtarma
<ol><li>Ameliyattan sonra tüm kan lekelerini temizleyin, aksi takdirde fare başkaları tarafından saldırıya uğrar.</li>
	<li>Fareyi yanal yaslanmış bir konumda bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fare işaretlerini anesteziden iyileşene kadar 5-20 dakika boyunca sürekli izleyin. İzleme süresi vücudun durumuna bağlıdır. NOT: Fareler yanal yaslanmış pozisyonda daha kolay nefes alırlar.</li>
	<li>Sağ refleks geri kazanıldıktan sonra, fareleri yiyecek ve su şişesi ile bir ısıtma yastığı üzerindeki kurtarma kafeslerini temizlemek için aktarın. Farenin hayatta kalmasını sağlamak için 15-30 dakika izlemeye devam edin. Tamamen özerk bir şekilde hareket etmeden önce fareyi diğerlerinden uzak tutun.</li>
	<li>Yara enfeksiyonunu önlemek için, penisilin sodyumunu istenen doza göre kas içinden enjekte edin (1.00.000-1.50.000 U / kg). Ayrıntılar için lütfen dozaj dönüşümü için ilaç etiketlemesine bakın.</li>
	<li>Fareyi tekrar ev kafesine yerleştirin. Örnek toplamadan önce bir sonraki 24 saat boyunca izlemeye devam edin. Uzun süreli deneyler için analjezikleri uygulayın.</li>
</ol>

<ol><li>Al-Kindi, S. G., Brook, R. D., Biswal, S., Rajagopalan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+determinants+of+cardiovascular+disease%3A+lessons+learned+from+air+pollution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Environmental determinants of cardiovascular disease: lessons learned from air pollution.</a> Nature Reviews: Cardiology. 17 (10), 656-672 (2020).</li>
<li>WHO. Ambient (outdoor) Air Pollution. WHO. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/ambient-(outdoor)-air-quality-and-health">https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/ambient-(outdoor)-air-quality-and-health</a> (2021).</li>
<li>Kim, K. H., Kabir, E., Kabir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+the+human+health+impact+of+airborne+particulate+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Environment+International%22%5BJournal%5D)">A review on the human health impact of airborne particulate matter.</a> Environment International. 74, 136-143 (2015).</li>
<li>Rajagopalan, S., Al-Kindi, S. G., Brook, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+pollution+and+cardiovascular+disease%3A+JACC+State-of-the-Art+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Air pollution and cardiovascular disease: JACC State-of-the-Art Review.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (17), 2054-2070 (2018).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+between+short-term+exposure+to+particulate+matter+and+ultrafine+particles+and+myocardial+infarction+in+Augsburg%2C+Germany%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Hygiene+and+Environmental+Health%22%5BJournal%5D)">Associations between short-term exposure to particulate matter and ultrafine particles and myocardial infarction in Augsburg, Germany.</a> International Journal of Hygiene and Environmental Health. 218 (6), 535-542 (2015).</li>
<li>Sun, Q., Hong, X., Wold, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+effects+of+ambient+particulate+air+pollution+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular effects of ambient particulate air pollution exposure.</a> Circulation. 121 (25), 2755-2765 (2010).</li>
<li>Emini Veseli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Animal models of atherosclerosis.</a> European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).</li>
<li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Left+anterior+descending+%28LAD%29+coronary+artery+ligation%3A+An+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine Left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: An improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55353(2017).</li>
<li>Lei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+effect+of+diesel+exhaust+particles+and+different+fractions+exposure+on+blood+coagulation+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The acute effect of diesel exhaust particles and different fractions exposure on blood coagulation function in mice.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 18 (8), 4136(2021).</li>
<li>Gao, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circulation Research. 107 (12), 1445-1453 (2010).</li>
<li>Pei, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LncRNA+PEAMIR+inhibits+apoptosis+and+inflammatory+response+in+PM2.5+exposure+aggravated+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury+as+a+competing+endogenous+RNA+of+miR-29b-3p%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">LncRNA PEAMIR inhibits apoptosis and inflammatory response in PM2.5 exposure aggravated myocardial ischemia/reperfusion injury as a competing endogenous RNA of miR-29b-3p.</a> Nanotoxicology. 14 (5), 638-653 (2020).</li>
<li>Jia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PM2.5-induced+pulmonary+inflammation+via+activating+of+the+NLRP3%2Fcaspase-1+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology%22%5BJournal%5D)">PM2.5-induced pulmonary inflammation via activating of the NLRP3/caspase-1 signaling pathway.</a> Environmental Toxicology. 36 (3), 298-307 (2021).</li>
<li>Vogel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ST-segment+elevation+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">ST-segment elevation myocardial infarction.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 39(2019).</li>
<li>Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+landscape+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The changing landscape of atherosclerosis.</a> Nature. 592 (7855), 524-533 (2021).</li>
<li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+neutrophil+extracellular+trap+formation+aggravates+acute+myocardial+infarction+injury+in+Apolipoprotein+E+deficiency+mice+via+the+ROS-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">Excessive neutrophil extracellular trap formation aggravates acute myocardial infarction injury in Apolipoprotein E deficiency mice via the ROS-dependent pathway.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 1209307(2019).</li>
<li>Pluijmert, N. J., Bart, C. I., Bax, W. H., Quax, P. H. A., Atsma, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+on+cardiac+function%2C+remodeling+and+inflammation+following+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+or+unreperfused+myocardial+infarction+in+hypercholesterolemic+APOE%2A3-Leiden+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Effects on cardiac function, remodeling and inflammation following myocardial ischemia-reperfusion injury or unreperfused myocardial infarction in hypercholesterolemic APOE*3-Leiden mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16601(2020).</li>
<li>Centa, M., Ketelhuth, D. F. J., Malin, S., Gistera, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+atherosclerosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (148), e59828(2019).</li>
<li>Benedek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+TTC+staining+for+the+evaluation+of+tissue+injury+in+the+early+phases+of+reperfusion+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Use of TTC staining for the evaluation of tissue injury in the early phases of reperfusion after focal cerebral ischemia in rats.</a> Brain Research. 1116 (1), 159-165 (2006).</li>
<li>Mehlem, A., Hagberg, C. E., Muhl, L., Eriksson, U., Falkevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+neutral+lipids+by+oil+red+O+for+analyzing+the+metabolic+status+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Imaging of neutral lipids by oil red O for analyzing the metabolic status in health and disease.</a> Nature Protocols. 8 (6), 1149-1154 (2013).</li>
<li>Nelson, A. M., Nolan, K. E., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated orotracheal intubation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (157), e60844(2020).</li>
<li>Zheng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+fine+airborne+particulate+matters+induces+hepatic+fibrosis+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Exposure to fine airborne particulate matters induces hepatic fibrosis in murine models.</a> Journal of Hepatology. 63 (6), 1397-1404 (2015).</li>
<li>Bai, N., van Eeden, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+and+vascular+effects+of+circulating+diesel+exhaust+particulate+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Inhalation+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Systemic and vascular effects of circulating diesel exhaust particulate matter.</a> Inhalation Toxicology. 25 (13), 725-734 (2013).</li>
<li>Furuyama, A., Kanno, S., Kobayashi, T., Hirano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrapulmonary+translocation+of+intratracheally+instilled+fine+and+ultrafine+particles+via+direct+and+alveolar+macrophage-associated+routes%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Extrapulmonary translocation of intratracheally instilled fine and ultrafine particles via direct and alveolar macrophage-associated routes.</a> Archives of Toxicology. 83 (5), 429-437 (2009).</li>
<li>Brunekreef, B., Holgate, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+pollution+and+health%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Air pollution and health.</a> Lancet. 360 (9341), 1233-1242 (2002).</li>
</ol>

Yazarların beyan etmek için rekabet eden finansal çıkarları yoktur.

Kompozit bir hayvan modelinin kurulması, tek MI modelinden biraz farklıdır. Yüksek bir hayatta kalma oranını korumak, kompozit modelin geliştirilmesinde zordur. ApoE-/- farelerde aterosklerozun şiddeti, yüksek yağlı beslenme süresi7'nin uzatılmasıyla daha şiddetli hale gelir ve farelerin zayıflığı mortalitenin artmasına neden olur. Bu nedenle, deney sırasında farelerin durumunu sürekli izlemek ve aterosklerozu indükleme süresini deneyin ihtiyaçlarına göre ayarlamak gerekir.
<p class...

Hava kirliliği, yüksek tüm nedenlere bağlı mortalite ile ilişkilendirilmiştir ve su kirliliği, toprak kirliliği ve mesleki maruziyetin toplamından daha fazla hastalık yüküne katkıda bulunmuştur1. DSÖ'nün bir raporu, dış hava kirliliğinin 2016 yılında dünya çapında hem şehirlerde hem de kırsal alanlarda 4,2 milyon erken ölüme neden olduğunu ortaya koymuştur2. Dünya çapında insanların% 91'i, hava kalitesinin DSÖ kılavuz sınırlarını aştığı yerlerde yaşamaktadır2. Ayrıca, ince partikül madde (PM) (≤2.5 μm çapında, PM2.5), küresel halk sağlığı3, özellikle düşük gelirli ve orta gelirli ülkelerin şehirlerinde yaşayan insanlar için en önemli hava kirliliği tehdidi olarak kabul edilmektedir.
Hava kirliliğinin kardiyovasküler hastalıklar üzerindeki olumsuz etkileri daha fazla ilgiyi hak etmektedir. Önceki çalışmalar, PM'nin kardiyovasküler hastalık (CVD'ler) riskinin artmasına yol açtığını göstermiştir4. Birkaç saat boyunca yüksek konsantrasyonlarda ultra ince partiküllere maruz kalmak, miyokard enfarktüsü mortalitesinin artmasına neden olabilir. Miyokard enfarktüsü öyküsü olan kişiler için, ultra ince parçacıklara maruz kalmak, nüks riskini önemli ölçüde artırabilir5. Ayrıca, PM maruziyetinin ateroskleroz6'nın ilerlemesini hızlandırdığı genel olarak kabul edilmektedir.
Tıbbi araştırmalar için uygun bir hayvan modeli seçmek çok önemlidir. Basit ateroskleroz hayvan modelleri7, miyokard iskemisi hayvan modelleri8 ve PM maruziyeti hayvan modelleri9 zaten mevcuttur. ApoE−/− (apolipoprotein E nakavt edilmiş) fare, ateroskleroz çalışmalarında kullanılan geleneksel bir fare modelidir. ApoE-/- farelerde plazma lipoproteinlerini temizleme yeteneği ciddi şekilde bozulmuştur. Yüksek yağlı diyetle beslenme, insanlarda gözlenen aterosklerotik kalp hastalığının diyet bağımlılığına benzeyen şiddetli ateroskleroza neden olur7. Sol anterior inen koroner arterin (LAD) ligasyonuiskemik olayı indüklemek için klasik bir yöntemdir 8,10. Trakeal infüzyon birçok araştırmada kullanılmıştır ve daha iyi simülasyonu ve daha düşük maliyeti nedeniyle maruzkalma modellerinden 11,12 öne çıkmaktadır.
Bununla birlikte, tek hastalığın hayvan modellerinin bilimsel araştırmalarda önemli sınırlamaları vardır. Sadece LAD ligasyonu ile indüklenen miyokard iskemisi gerçek durumda simüle edilmez. Doğal durumda, miyokard iskemisi genellikle plak rüptürü ve tıkalı koroner arterlerden kaynaklanır13. İskemik kardiyomiyopatili hastalarda genellikle aterosklerotik bazik lezyonlar vardır13. Ayrıca vücutta anormal lipid metabolizması ve inflamatuar reaksiyonlar vardır14. Bu nedenle, fiziksel faktörlerin neden olduğu veya doğal koşullar altında iskeminin farklı patolojik bulguları vardır. Mevcut çalışmalar aterosklerozlu miyokard iskemisi modellerinde enfarktüs ve inflamasyonun daha şiddetli olduğunu göstermiştir15,16. PM maruziyeti, inflamasyonu ve oksidatif stresi indükleyerek ateroskleroz ve miyokard iskemisini daha da kötüleştirebilir1. Üç faktör genellikle doğal durumda bir arada bulunur, bu nedenle gerçek durum bileşik bir model kullanılarak daha iyi simüle edilebilir.
Bu protokol, ateroskleroz (AS) ve PM akut maruziyetini birleştiren bir miyokard iskemisi (MI) hayvan modelinin geliştirilmesini açıklar. ApoE-/-- fareler, aterosklerozu indüklemek için yüksek yağlı bir diyetle beslendi. PM'nin pulmoner maruziyeti, PM süspansiyonunun trakeadan damlatılması ile taklit edildi. Farelerde LAD'nin bağlanması miyokard iskemisini indüklemek için kullanıldı. Bu yöntemler, hastalık durumunu daha iyi simüle etmek ve hayvanların hayatta kalma oranını artırmak için birleştirildi ve optimize edildi. Büyük bir maruz kalma ünitesine veya gaz anestezi makinesine gerek yoktur, bu da deneyin gerçekleştirilmesini kolaylaştırır. Bu model, hava kirliliğinde PM maruziyetinin ateroskleroz ve iskemik kardiyomiyopati üzerindeki etkisini incelemek ve bu tür karmaşık faktörlere sahip hastalıkları tedavi etmek için geliştirilen yeni ilaçlar üzerinde araştırma yapmak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-Tribromoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>%75 alkol dezenfektanı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hayvan ventilatörü</td><td>Shanghai Alcott Biotech</td><td>ALC-V8S</td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu çubuklar</td><td></td><td></td><td>Bebekler</td></tr><tr><td>için</td><td></td><td></td> steril pamuklu çubuklar <td>Steril, Yaklaşık 3 mm çapında</td></tr><tr><td>Kültür Kabı</td><td>Corning</td><td>430597</td><td>150 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Dizel Partikül Madde</td><td>Ulusal Standartlar Enstitüsü Teknoloji</td><td>1650b</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon tahtası</td><td></td><td></td><td>Yaklaşık 25 x 17 cm. Diseksiyon tahtası aynı boyutta ahşap bir tahta ile değiştirilebilir Fareler</td></tr><tr><td></td><td></td><td>için yüksek yağlı diyet</td><td>Reçete: yumurta sarısı tozu %10, domuz yağı %10, sterol %1, bakım yemi %79</td></tr> <tr><td>İyodofor dezenfektan</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LED spot ışığı</td><td></td><td></td><td>5 V, 3 W, hortumlar ve kelepçeler ile</td></tr><tr><td>Tıbbi ipek iplik topu</td><td>Şangay Tıbbi Sütür İğnesi Factory Co., Ltd.</td><td>-</td><td>0-0</td></tr><tr><td>Tıbbi bant</td><td>3M</td><td>1527C-0</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Vasküler Hemostatik Forseps</td><td>Şangay Tıbbi Aletler (Grup) Ltd., Corp. Cerrahi Aletler Fabrikası</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>İğne Tutucular Şangay</td><td>Tıbbi Aletler (Grup) Ltd., Corp. Cerrahi Aletler Fabrikası</td><td>JC32010</td><td></td></tr><tr><td>Normal salin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oftalmik Makas</td><td>Şangay Tıbbi Aletler (Grup) Ltd., Corp. Cerrahi Aletler Fabrikası</td><td>Y00040</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmik cımbız, 10cm, kavisli, kancalı</td><td>Şangay Tıbbi Aletler (Group) Ltd., Corp. Cerrahi Aletler Fabrikası</td><td>JD1080</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmik cımbız, 10cm, kavisli, dişli</td><td>Şangay Tıbbi Aletler (Grup) Ltd., Corp. Cerrahi Aletler Fabrikası</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları</td><td>Axygen</td><td>T-200-Y-R-S</td><td>0-200 &mu; L</td></tr><tr><td>Pipet</td><td>eppendorf</td><td>3121000074</td><td>100 uL</td></tr><tr><td>Emniyet pimi</td><td></td><td></td><td>Yaklaşık 4,5 cm uzunluğunda, göğüs açma aletleri yapmak için</td></tr><tr><td>Küçük Hayvan I.V. Kanüller</td><td>Baayen sağlık hizmetleri suzhou</td><td>BAAN-322025</td><td>IV KATETER 22FG x 25 MM</td></tr><tr><td>İplikli sütür iğnesi</td><td>Şangay Tıbbi Sütür İğnesi Factory Co., Ltd.</td><td>-</td><td>6-0, Naylon hattı</td></tr><tr><td>İplikli sütür iğnesi</td><td>JinHuan Medical</td><td>F503</td><td>5-0</td></tr><tr><td>Şırınga</td><td></td><td></td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Tert-amil alkol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zoom-stereo mikroskop</td><td>Mshot</td><td>MZ62</td><td></td></tr></tbody></table>

ateroskleroz hayvan modelinde partikül madde maruziyeti Üzerine miyokard İskemisinin Şiddetlenmesi

Aggravation of Myocardial Ischemia upon Particulate Matter Exposure in Atherosclerosis Animal Model

Hava kirliliğinin neden olduğu sağlık sorunları (özellikle partikül kirliliği), özellikle kardiyovasküler hastalık hastaları arasında, karmaşık bozuklukları ağırlaştıran ve kötü prognoza neden olan giderek daha fazla dikkat çekmektedir. Basit miyokard iskemisi (MI) veya partikül madde (PM) maruziyet modeli, birden fazla nedeni olan hastalıkların bu tür çalışmaları için uygun değildir. Burada, PM maruziyeti, ateroskleroz ve miyokard iskemisini birleştiren kompozit bir model oluşturmak için bir yöntem tanımlanmıştır. ApoE − / - fareler ateroskleroz geliştirmek için 16 hafta boyunca yüksek yağlı bir diyetle beslendi, PM'nin pulmoner maruziyetini simüle etmek için PM standart süspansiyonunun trakeal instilasyonu yapıldı ve sol ön inen koroner arter son maruziyetten bir hafta sonra bağlandı. PM'nin trakeal instilasyonu, akut akciğer maruziyetini simüle ederken, deneyin maliyetini önemli ölçüde azaltabilir; noninvaziv trakeal entübasyon ile klasik sol ön inen arter ligasyonu ve yeni bir yardımcı genişleme cihazı hayvanın hayatta kalma oranını sağlayabilir ve operasyonun zorluğunu azaltabilir. Bu hayvan modeli, hastanın hava kirliliği ile ağırlaşan miyokard enfarktüsünün patolojik değişikliklerini makul bir şekilde simüle edebilir ve birden fazla nedeni olan hastalıkları içeren çalışmalarla ilgili hayvan modellerinin inşası için bir referans sağlayabilir.

Fareler koroner arter ligasyonundan 24 saat sonra ötenazi yapıldı ve anesteziden sonra kan toplandı. Fareler tribromoetanol (adım 3.2'ye göre) ile uyuşturuldu ve kan örneği retroorbital sinüsten toplandı. Kalp toplandı ve İskemi derecesi 2,3,5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) boyama ile incelendi (Şekil 1). TTC süksinat dehidrogenaz ile reaksiyona girdiğinde normal dokular kırmızıya dönerken, iskemik dokular azalmış dehidrogenaz aktivitesi nedeniyle soluk kalır<sup class="xr...

Bu protokol, ateroskleroz ile miyokard iskemisini şiddetlendiren partikül maddeye (PM) maruz kalan kompozit bir hayvan modelini tanımlamaktadır.

Ateroskleroz Hayvan Modelinde Partikül Madde Maruziyeti Üzerine Miyokard İskemisinin Şiddetlenmesi

The health problems caused by air pollution (especially particulate pollution) are getting more and more attention, especially among cardiovascular ...

Buradaki protokol, miyokard iskemisinin bileşik bir hayvan modelini oluşturmak içindir. Ateroskleroz ve PM akut maruziyeti ile birleştirilir. Bu, ilgili hastalık üzerine yapılan araştırmalar için daha güvenilir bir hayvan modelidir.Bu hayvan modeli, bu tür hastalıkları gerçek bir durumda daha iyi simüle edebilir. Ayrıca bu yöntem yüksek bir başarı oranına sahiptir ve gerçekleştirilmesi kolaydır. Model, patolojik araştırma ve karmaşık faktörlere sahip hastalıkların ilaç geliştirilmesi için kullanılabilir.Bu model, kardiyovasküler ve çevresel toksikoloji araştırmaları için bir platform sağlayabilir ve çok faktörlü hastalığın araştırılması için fikir ve referanslara katkıda bulunur. Orotrakeal entübasyon, göğsün çatlak açıklığı ve doğru ligasyon pozisyonu bu modelin başarısının anahtarıdır. Fare brifingini sürdürmek ve kanamayı önlemek önemlidir.Rastgele iki ila üç fare seçerek başlayın ve ultrason görüntüleme veya doğrudan anatomik gözlem ile aort arkında bir plak olup olmadığını kontrol edin. Seçilen fareyi anestezi altına alın ve fare tahtasında sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Üst kesici dişleri lastik banda bağlayın.Aksiller hattın orta noktasının etrafında bulunan trakea üzerinde esnek bir boruya sahip küçük bir LED spot ışığını odaklayın. Farenin ağzına küçük bir steril pamuklu çubuk koyun ve ardından dili dışarı çıkarmak için çubuğu yuvarlayın. Dili tutun ve ağız boşluğunu, farenksi ve trakeayı aynı uzunlamasına yönde yapmak için yavaşça yukarı çekin.Trakeanın girişi olan glottis, her nefeste açılıp kapanan parlak bir nokta olarak görülebilir. Glottis'i hedefleyerek farenin trakeasına 22 gauge kanola yerleştirin ve ardından iğne çekirdeğini çıkarın. Borunun hırıltılı suda doğru olup olmadığını test etmek için az miktarda normal salin içeren bir pipet tabancası kullanın.Tüp doğru konumdaysa, pipet tabancasındaki sıvı sütunu her nefeste zıplayacaktır. Pipet tabancasıyla tüpe 50 mikrolitre DPM süspansiyonu bırakın. PM maruziyetinden sonra evcil hayvan konut iğnesini çıkarın.Bilincini geri kazanana kadar fareyi ısıtma yastığının üzerinde tutun ve ardından fareyi tekrar ev kafesine yerleştirin. Fareyi entübasyon platformunda sırtüstü konuma getirin ve fareyi sabitleyin. Sol göğsün kıllarını ve bitişik sağ göğsün bir kısmını epilasyon kremi ile çıkarın.Ardından, evcil hayvan konut iğnesini bir hayvan vantilatörüne bağlayın. Dezenfekte etmek için cildi iyodoform ve alkolle silin. Oftalmik makasla yaklaşık bir santimetre boyunca bir cilt kesimi yapın ve kaburgaları açığa çıkarmak için kasları destekleyin.Kaburgayı dişli bir oftalmik cımbızla kelepçeleyin ve üçüncü interkostal boşlukta küçük bir kesim yapın. Ev yapımı göğüs açma aletleri ile bir ameliyat penceresi yapın ve ardından perikardiyal membranları sökün. Steril altı sıfır ipek sütürü mikrovasküler hemostatik forseps kullanarak bir iğne ile tutun.İpeği, koroner arterin bulunduğu bölgedeki iki milimetre genişliğinde bir miyokarddan geçirin. Doku kırılmasını önlemek için ligatür ve miyokard dokuları arasına kısa bir steril beş sıfır ipek parçası yerleştirin. Sol ön inen koroner arteri ve etrafındaki küçük miyokard demetini sıkıca bağlayın.Sol ventrikülün ön duvarı soluklaştığında lejyon başarılı kabul edilir. Havayı göğüsten yavaşça sıkın. Daha sonra interkostal kasları ve cildi steril beş sıfır ipek ile sırayla dikiştirin.Ameliyattan sonra tüm kan lekelerini temizleyin ve ardından fareyi yanal yaslanmış bir pozisyonda bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fare işaretlerini anesteziden iyileşene kadar yaklaşık beş ila 20 dakika boyunca sürekli izleyin. Sağ refleks geri kazanıldıktan sonra, fareyi yiyecek ve su şişesiyle birlikte bir ısıtma yastığı üzerindeki temiz bir kurtarma kafesine aktarın.Farenin hayatta kalmasını sağlamak için 15 ila 30 dakika izlemeye devam edin. Son olarak, yara enfeksiyonunu önlemek için penisilin sodyumu istenen doza göre kas içinden enjekte edin. İskeminin derecesi TTC boyaması ile incelendi.TTC süksinat dehidrogenaz ile reaksiyona girdiğinde normal dokular kırmızıya döner. İskemik dokular azalmış dehidrogenaz aktivitesi nedeniyle soluk kalırken. Temsili görüntüler, MI ameliyatı veya PM maruziyeti olmayan, MI ameliyatı geçiren ancak PM maruziyeti olmayan ve MI ameliyatı ve PM maruziyeti geçiren kalp dokularını göstermektedir.PM maruziyeti ağırlaştırılmış miyokard iskemisi. Yağ Kırmızı O, dokulardaki trigliseritler gibi nötr yağları tam olarak renklendirebilir. Resimdeki kırmızı lekeler plakları gösterir.Düzenli diyet yapan vahşi tip farelerin aortundaki plaklar, yüksek yağlı diyete sahip APO E nakavt fareleri ve yüksek yağlı bir diyete sahip ve PM maruziyetinden muzdarip APO E nakavt fareleri burada yağ kırmızısı O boyama ile gösterilmiştir. Yüksek yağ beslenmesi APO E nakavt farelerde ateroskleroza ve PM maruziyeti ağırlaştırılmış ateroskleroza yol açmıştır. Seromiyotomi sırasında endotrakeal tüpün düzgün bir şekilde yerleştirildiğinden emin olmak önemlidir.Operatörün entübasyon operasyonunu hızlı, doğru bir şekilde tamamlaması ve operasyon sırasında hayvanın solunum durumuna her zaman dikkat etmesi gerekir. Yöntemimiz, hava kirliliği ve kardiyovasküler hastalıkların kesişimi ile ilgilenen araştırmacılara yardımcı olmaktadır. Burada bir fikir veriyoruz.Tabii ki, araştırmacılar doğrudan tanımladığımız hayvan modeline dayanarak araştırma da yapabilirler.

aggravation-myocardial-ischemia-upon-particulate-matter-exposure

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Histokimyasal ve immünohistokimyasal analizle birlikte aort sinüsünün ve çıkan aortun hassas kesitini kullanarak fare modellerinde aterosklerotik lezyonları ölçmek ve karakterize etmek için prosedürleri açıklıyoruz.

Murin Aort Sinüsünde Aterosklerotik Lezyonların Kantitatif Analizi ve Karakterizasyonu

Bu video kemirgen arterlerde intimal plak iki kalkınma modelleri gösterir ve miyointimal hiperplazi ve ateroskleroz farklılıkları vurgulamaktadır.

Farelerde Ateroskleroz Karşı miyointimal hiperplazide uyaran: İki Geçerli Modellerinin An Introduction

Bu çalışmada farelerde hızlandırılmış ateroskleroz indüksiyonu için invaziv bir prosedür açıklanmaktadır. Elektrik veya kriyo kaynaklı yaralanma yöntemi ile karşılaştırıldığında, mekanik kaynaklı yaralanma revaskülarizasyon tedavileri sonrası restenoz insan durumunu taklit eder ve ilgili moleküler mekanizmaların çalışması için idealdir.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Burada biz miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarı Patofizyoloji anlamada translasyonel değerini artırmak için örnekleme prosedürleri akut miyokard infarktüsü, kurulan bir domuz modelinin standart hale getirmek için bir protokol göstermek ve yeni ilaç adaylarının sınamak için.

Kapalı göğüs domuz miyokard infarktüsü manken standardizasyon doku ve kan örnekleme prosedürleri tarafından geliştirilmesi

ApoE- / - fareler aldosteron sürekli bir sürüm boyunca aterojenik bir diyet ile beslenen aort kökünde ateroskleroz ikna etmek için bir protokol açıklar. Plak kompozisyon karakterize yöntemleri de açıklanmaktadır.

Apolipoprotein E-eksik farelerde Mineralocorticoid reseptörlerinin etkinleştirmesi üzerinden aterosklerotik plaklar indüksiyon

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu protokol, perikard ve içeriğini korurken farelerde miyokard enfarktüsünü indükleme adımlarını özetlemektedir.

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

Etanol bağlı gelişimsel hasar moleküler mekanizmalarını anlayabilmek için, biz etanol maruz kalma zebrabalıkları modeli geliştirdik ve etanol maruz kaldıktan sonra meydana gelen fiziksel, hücresel ve genetik değişimler...

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Cerrahi travma inflamatuvar yanıt indükler. Sitokinler ve endojen ligand iskemi ve reperfüzyon sonrası miyokard infarkt modüle bilinmektedir. Biz torakotomi etkilerini en aza indirmek için asılı ağırlıklar kullanılarak murin iskemi ve reperfüzyon değiştirilmiş bir kapalı göğüs modeli sunuyoruz.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Keşfedin miyokard iskemisi, ateroskleroz ve partikül madde maruziyetini birleştiren bileşik hayvan modeli oluşturma yöntemini. Bu güvenilir model, kardiyovasküler hastalık ve çevresel toksikoloji araştırmaları için değerli bir platform sunar.

Ateroskleroz Hayvan Modelinde Partikül Madde Maruziyeti Üzerine Miyokard İskemisinin Şiddetlenmesi

Daha fazla video keşfet