Name: Nekrotizan Enterokolitin Yenidoğan BALB/c Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Öğrenin, yenidoğan BALB/c farelerinde nekrotizan enterokolit modeli kurarak T hücre yanıtlarını ve bağırsak patolojisini nasıl inceleyeceğinizi. Bu yöntem immün mekanizmaları anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, klinik örneği sağladığı için Guangzhou Kadın ve Çocuk Tıp Merkezi Klinik Biyolojik Kaynak Bankası'na ve fare sağladığı için Guangzhou Forevergen Biyobilimler Laboratuvarı Hayvan Merkezi'ne teşekkür ediyor. Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı hibe 81770510 (R.Z.) tarafından desteklendi.

Bu araştırma Guangzhou Kadın ve Çocuk Tıp Merkezi Tıbbi Etik Komitesi (NO. 174A01) ve Guangzhou Forevergen Biyobilim laboratuvarı Hayvan Merkezi Hayvan Etik Komitesi (IACUC-G160100) tarafından onaylanmıştır. Tüm hayvanlar belirli bir patojen içermeyen (SPF) ortamda aynı odada yetiştirildi ve deneyler geleneksel bir ortamda gerçekleştirildi. Üreme için kullanılan fareler 7-8 haftalıktı; NEC (n = 72) indüklemek için fareler 4. günde barajdan ayrılmış ve barajlar (n=14) orijinal kafeste tutularak kontrol (Cont.) grubu fareleri (n=24) emzirilmiştir.
1. Reaktiflerin ve cihazların hazırlanması
<ol><li>BALB/c fareleri için süt ikamesini ilgili oranda hazırlayın (prematüre bebek sütü tozu: keçi sütü tozu = 2:1). NOT: Formula milk12'nin son besin bileşimleri Tablo 1'de gösterilmiştir.</li>
	<li>LPS çözeltisi (2,5 mg/mL)<ol>
<li>4 mL sterilize edilmiş çift damıtılmış suda toplam 10 mg LPS toz çözün, iyice karıştırın ve aliquoting'den sonra -20 °C'de bir buzdolabında saklayın. NOT: LPS çözeltisi, anında kullanım için 2-8 °C'de veya uzun süreli depolama için -20 °C'de karanlıkta saklanır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Yenidoğan BALB/c farelerinde nekrotizan enterokolit indükle
<ol><li>Yenidoğan fareleri besleyin.<ol>
<li>Yenidoğan fareleri, 0-4.</li>
		<li>4. Gün gecesi (yenidoğan fareleri 2,5-3 g ağırlığındayken), NEC grubundaki yenidoğan farelerini NEC'i indüklemek için barajdan ayırın, bir hayvan inkübatöründe tutun ve formülle besleyin. Ancak, Cont. grubunun barajda kalmasına ve beslenmesine izin verilir. NOT: Barajdan ayrılan yenidoğan fareleri, zayıf vücut ısısı düzenlemeleri nedeniyle bir inkübatörde yetiştirilmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gavage tüpünü % 75 alkol kaplarına 1-2 dakika bekleterek hazırlayın ve temiz, çift damıtılmış suda iki kez yıkayın. NOT: Fareler arasında çapraz kontaminasyonu önlemek için, yukarıdaki işlem her fareyi besledikten sonra yapılmalıdır.</li>
	<li>NEC modelini teşvik edin.<ol>
<li>Yenidoğan farelerini 4.</li>
		<li>Fareleri LPS (bir seferde 20-30 μL) ile yapıştırın ve 5. günde (bir seferde 40-50 μL) formülle besleyin.</li>
		<li>5. günden itibaren, fareleri 5 gün boyunca günde iki kez hipoksi-reoksijenasyon-soğuk şok döngüsüne tabi edin. Fareleri 90 s için% 5 O2'de bir hipoksi cihazına yerleştirin ve 3 dakika boyunca reoksijene edin; bu işlemi beş kez tekrarlayın. Daha sonra, fareleri 15 dakika boyunca 4 ° C'lik bir ortama yerleştirin ve ardından bir inkübatöre aktarın. İndüksiyon işlemi için Şekil 1A,B'ye bakın. NOT: Hipoksi-reoksijenasyon-soğuk stimülasyon döngüsü sabah bir kez ve öğleden sonra bir kez gerçekleştirildi. Kapta % 95 N2 ile% 5 O2 karışımı hazırlandı ve konsantrasyon bir oksijen dedektörü ile ölçüldü.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tüm fareleri yakından gözlemleyin, her gün tartın, indüksiyon döneminde farelerin hayatta kalmasını kaydedin ve dışkı özelliklerini kaydedin (yapışkan dışkı / kanlı dışkı ile veya olmadan). NOT: Kurulan NEC modeli 5 gün sürer.</li>
	<li>10. gün veya daha önce, fareler NEC semptomları gösterdiğinde (ileus, hematochezia, ishal)13, fareleri izofluran ile inhalasyon anestezisi ile ötenazi edin, sonra hemen bağırsak dokusunu toplayın. Kendiliğinden ölen farelerden doku toplamayın. NOT: Bu çalışmada, fare öthenazisinin bitiş noktası, fare tüm vücudun hematochezia ve siyanoz gösterdiğinde uyarlanmıştır.</li>
</ol>3. Fareyi gavage
<ol><li>Mide tüpünü sağ elinde tutarak fare kafasını sabitle. Mide tüpünü farenin ağzının sol köşesinden yerleştirin. NOT: Kafa, farenin kafasındaki işaret parmağıyla sabitlendi ve farenin çalışma sırasında öne doğru eğilmesini ve mide tüpünün takılmasını etkilemesini önlemek için hafifçe geriye ve aşağıya bastırıldı.</li>
	<li>Tüpü yavaşça ağzın ortasına hareket ettirin. Tüpü yaklaşık 2-3 cm yerleştirdikten sonra, sindirim sistemine 40-50 μL formül veya 20-30 μL LPS itin. Gavage için Şekil 2A,B'ye bakın. NOT: Normal şartlarda mide tüpü sindirim sistemine sorunsuz bir şekilde yerleştirilir. Fare güçlü bir kusma refleksine sahipse, mide tüpü yanlışlıkla nefes borusuna yerleştirilmiştir. Mide tüpü yavaşça çekilmeli ve farenin tekrar gavage denemeden önce bir süre dinlenmesine izin verilmelidir. Ek olarak, gavage prosedürü farelerin ötanazisinden önce NEC modelini teşvik etmek için kullanılır.</li>
</ol>4. Hematoksilin ve eozin (H&E) lekelenmesi için taze bağırsak dokusu örnekleri toplayın
<ol><li>Fareden taze ileum dokusunu 24 saat boyunca% 10 formalin içine daldırin.</li>
	<li>Dokuları parafin içine katıştırın ve 4 μm bölümlere dilimleyin.</li>
	<li>Ksilendeki bölümleri ayrıştırın ve mutlak etanol, % 95 etanol,% 80 etanol, % 70 etanol ve damıtılmış suda art arda yeniden sulandırarak her adımda 5 dakika bekletin. Bölümleri hematoksilin çözeltisi ile 5 dakika boyunca lekelendirin ve 5 s için% 75 alkolde% 1 hidroklorik asitte ayırt edin. Son olarak, onları 1 dakika boyunca eosin çözeltisi ile lekelayın. NOT: Hematoksilin çözeltisi ile lekelendikten sonra, aşırı bağlı hematoksilin çözeltisi ve sitoplazmik hematoksilin boyasını çıkarmak için etanolde% 1 hidroklorik asit ile ayırt edilmelidir. % 1 hidroklorik asit konsantrasyonu bağırsak dokusu için uygundur.</li>
	<li>40x büyütmede bağırsak dokusunun histopatolojisini inceleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Horbar, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+and+neonatal+morbidity+among+infants+501+to+1500+grams+from+2000+to+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009.</a> Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).</li>
<li>Stoll, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+outcomes+of+extremely+preterm+infants+from+the+NICHD+Neonatal+Research+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network.</a> Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).</li>
<li>Neu, J., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis.</a> New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).</li>
<li>Sangild, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invited+Review%3A+The+preterm+pig+as+a+model+in+pediatric+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology.</a> Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).</li>
<li>Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+an+equivalent+clonotype+among+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).</li>
<li>Kuroda, E., Yamashita, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+enhanced+macrophage-mediated+prostaglandin+E2+production+and+its+suppressive+role+in+Th1+activation+in+Th2-dominant+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice.</a> Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).</li>
<li>Fornefett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+clinics%2C+pathologies+and+immune+responses+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+infected+with+Streptobacillus+moniliformis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis.</a> Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).</li>
<li>Rosas, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+influences+immune+responses+and+disease+outcome+of+cutaneous+L.+mexicana+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice.</a> International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).</li>
<li>Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+preterm+infants+and+the+influence+of+milk+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">T cells in preterm infants and the influence of milk diet.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1035(2020).</li>
<li>Nanthakumar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+excessive+intestinal+inflammation+in+necrotizing+enterocolitis%3A+an+immature+innate+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response.</a> PLoS One. 6 (3), 17776(2011).</li>
<li>Afrazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+and+treatment+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Toll-like+receptors+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond.</a> Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).</li>
<li>Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk-substitutes+comparable+to+rat%27s+milk%3B+their+preparation%2C+composition+and+impact+on+development+and+metabolism+in+the+artificially+reared+rat%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat.</a> British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin-induced+myeloid-derived+suppressor+cell+therapy+attenuates+pathologic+inflammatory+conditions+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).</li>
<li>MohanKumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+neonatal+model+of+necrotizing+enterocolitis+caused+by+anemia+and+red+blood+cell+transfusions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions.</a> Nature Communications. 10 (1), 3494(2019).</li>
<li>He, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitory+presence+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+neonates+is+critical+for+control+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation.</a> Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).</li>
<li>Cho, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+pathoimmunology+of+necrotizing+enterocolitis+reveals+novel+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities.</a> Nature Communications. 11 (1), 5794(2020).</li>
<li>Halpern, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+IL-18-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).</li>
<li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP3K2-regulated+intestinal+stromal+cells+define+a+distinct+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche.</a> Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).</li>
<li>Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+new+insights+into+pathogenesis+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms.</a> Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).</li>
<li>Chuang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cow%27s+milk+protein-specific+T-helper+type+I%2FII+cytokine+responses+in+infants+with+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

NEC, özellikle prematüre bebeklerde görülme sıklığı ve mortalitesi yüksek olan yenidoğanlarda en sık görülen gastrointestinal sistem acil durumudur1,2,3. Bununla birlikte, patogenez hala belirsizdir. Şu anda mukozal hasar, patojen istilası ve enteral beslemenin NEC3 için yüksek riskli faktörler olduğuna inanılmaktadır. Bugüne kadar, NEC modeli için kullanılan hayvanlar çoğunlukla domuzlar, sıçanlar ve far...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
<img alt="Timeline diagram of NEC induction; process includes LPS, formula, hypoxia, reoxygenation stimulation." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="NEC induction timeline diagram, days after birth, LPS-formula hypoxia reoxygenation protocol" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was&#160;updated.

Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

En şiddetli gastrointestinal (GI) hastalık olan nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerin çoğunda (%>90), özellikle de çok düşük doğum ağırlığına (VLBW) sahip bebeklerde görülür 1. VLBW bebeklerde hastalığın görülme sıklığı %10 ile %12 arasında değişmektedir ve NEC tanısı alan çocukların mortalitesi %20 ile %30 arasında 2,3'tür. NEC'in nedeni mukozal yaralanmalar, patojenik bakterilerin istilası ve bağırsak beslenmesi ile ilgili olabilir, bu da enflamatuar yanıtlara ve hassas konaklarda bağırsak yaralanmalarının indüksiyonuna yol açabilir3. NEC patogenez belirsizdir. İlgili araştırmalar, etkilenen bebeğin immün yanıtının anormal olduğunu ve genetik duyarlılık, mikrovasküler gerginlik ve bağırsak bakteri değişikliklerinin hastalıkta önemli roller oynayabileceğini göstermektedir3.
NEC hayvan modeli, NEC patogenezini araştırmak için vazgeçilmez bir araçtır. NEC modelleri için kullanılan hayvan türleri domuzlar, sıçanlar ve farelerdir. Bununla birlikte, uzun gebelik süresi, büyüme döngüleri ve yüksek maliyetler nedeniyle, son yıllarda domuzlar NEC modelleri için ilk tercih olmamıştır ve sıçanlar veya farelerle değiştirilmiştir4. Farklı fare suşlarının bağışıklık arka planında farklılıklar olduğu için5, farklı çalışmaların NEC hayvan modelleri oluşturmak için farklı fare suşları kullanması gerekir. BALB/c fareleri önemli bir özelliğe sahiptir; enfekte olduklarında veya dış hasarla başa olduklarında, farelerde enfeksiyon sırasında TH2 hücrelerinin polarizasyonu, diğer fare suşlarındakinden önemli ölçüde daha güçlüdür6,7,8. T yardımcı hücreleri NEC'in oluşumunda ve ilerlemesinde, özellikle TH2 hücrelerinin gelişiminde çok önemli bir rol oynar3,9,10,11. Bu nedenle, bu çalışmada T hücreleri üzerinde NEC hastalığı araştırmaları için yararlı olabilecek NEC modelini oluşturmak için BALB / c fareleri kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Mutlak etanol</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Co, LTD.</td><td></td><td></td>100092683</tr><tr><td>Keçi Sütü tozu</td><td>&nbsp; Petag&nbsp;</td><td></td><td></td>71795558417</tr><tr><td>HE boya çözeltisi</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Co., LTD.</td><td>G1003</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD, Shenzhen Ödül Yaşam Teknolojisi Co, LTD.</td><td>R510&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Adrich</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>Tıbbi oksijen</td><td>çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>çeşitli Mikroskop</td><td>NIKON</td><td>NIKON görüntüleme sistemi (DS-Ri2)</td><td></td></tr> <tr><td>Nötr reçine</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Co., LTD.</td><td></td><td></td>10004160</tr><tr><td>Parafin</td><td>çeşitli</td><td>çeşitli</td><td></td></tr><tr><td>Prematüre bebek süt tozu</td><td>Abbott</td><td>57430</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Co, LTD.</td><td></td><td></td>10023418</tr><tr><td>%1 Hidroklorik asit</td><td>çeşitli</td><td>çeşitli</td><td></td></tr><tr><td>%10 Formalin</td><td>LEAGENE</td><td>DF0110</td><td></td></tr></tbody></table>

nekrotizan enterokolit'in yenidoğan balb/c fare modeli

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren kullanılır. İlgili çalışmalar, fareler enfekte olduğunda, BALB / c farelerinde C57BL / 6J farelere kıyasla Th2 hücre farklılaşmasının baskın olduğunu göstermiştir. Çalışmalar, NEC'in oluşumu ve gelişiminin T yardımcı tip 2 (Th2) hücrelerindeki artışla ilişkili olduğunu ve genellikle enfeksiyon eşlik ettiğini ileri sürmektedir. Bu nedenle, bu çalışmada neonatal BALB/c fareleri, NEC'li çocuklarda gözlemlenenlerle benzer klinik özelliklere ve bağırsak patolojik değişikliklere sahip bir NEC modeline neden olmak için kullanılmıştır. Bu hayvan modelinin NEC'deki Th2 hücre yanıtlarını incelemek için kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için daha fazla çalışma yapılması garanti edilir.

BALB/c fare NEC modeli formül besleme, LPS besleme, hipoksi ve soğuk stimülasyon ile indüklendi. İndüksiyon döneminde, fareler bağırsak patolojisi, dışkı özellikleri, vücut ağırlığı değişiklikleri ve günlük sağkalım için gözlendi. NEC indüksiyonu sırasında ince bağırsağın temsili görüntüleri; resimdeki sayılar 0 (normal epitel) ile 4 (en şiddetli) arasında bağırsak patolojisi skorunu temsil eder (Şekil 3A). Bağırsak patolojisi skoru NEC grubunda Kont. grubuna göre anlamlı olarak daha yüksekt...

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren kullanılır. İlgili çalışmalar, fareler enfekte olduğunda, BALB / c farelerinde C57BL / 6J farelere kıyasla Th2 hücre farklılaşmasının baskın olduğunu göstermiştir. Çalışmalar, NEC'in oluşumu ve gelişiminin T yardımcı tip 2 (Th2) hücrelerindeki artışla ilişkili olduğunu ve genellikle enfeksiyon eşlik ettiğini ileri sürmektedir. Bu nedenle, bu çalışmada neonatal BALB/c fareleri, NEC'li çocuklarda gözlemlenenlerle benzer klinik özelliklere ve bağırsak patolojik değişikliklere sahip bir NEC modeline neden olmak için kullanılmıştır. Bu hayvan modelinin NEC'deki Th2 hücre yanıtlarını incelemek için kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için daha fazla çalışma yapılması garanti edilir.

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Bu çalışmada, T hücreleri üzerinde hastalık araştırmaları için yardımcı olacak NEC modelini oluşturmak için BALB / c fareleri yararlanılarak gerçekleştirilen bir çalışmadır. Beşinci günde, iki grup vücut büyüklüğü üzerinde önemli bir fark göstermez. Bununla birlikte, 10. günde NEC fareleri kontrol farelerinden önemli ölçüde daha inceydi.NEC grubundaki farelerin ağırlığı yavaşça arttı ve beş günlük model kuruluşu sırasında hayatta kalma oranı yavaş yavaş azaldı. NEC modeli T hücre polarizasyonunu incelemek için avantajlı olabilir. Prosedürü gösteren Yan Tian olacak, laboratuvarımdan bir yüksek lisans mezunu.Fareleri 20 ila 30 mikrolitre LPS ile gavage ve beşinci günde 40 ila 50 mikrolitre formülle besleyin. Beşinci günden itibaren, onları 90 saniye boyunca% 5 oksijende bir hipoksi cihazına yerleştirin ve üç dakika boyunca yeniden oksijen verin. Daha sonra, fareleri 15 dakika boyunca dört santigrat derecelik bir ortama yerleştirin ve bir inkübatöre aktarın.Tüm fareleri yakından gözlemleyin, her gün tartın, indüksiyon döneminde farelerin hayatta kalmasını kaydedin ve dışkılarının kanlı ve yapışkan olup olmadığını kaydedin. Mide tüpünü sağ elde tutarak, farenin kafasını işaret parmağıyla farenin kafasında hafifçe geriye ve aşağı doğru bastırılarak sabitlayın. Mide tüpünü ağzın sol köşesinden yerleştirin ve yavaşça iki ila üç santimetreyi ağzın ortasına hareket ettirin.40 ila 50 mikrolitre formül veya 20 ila 30 mikrolitre LPS'yi sindirim sistemine itin. Fare güçlü bir kusma refleksine sahipse ve mide tüpü nefes borusuna giriyorsa, yavaşça çekin ve tekrar gavage denemeden önce farenin dinlenmesine izin verin. Taze fare illum dokusunu% 10 formalin içine daldırin, dokuları parafin içine gömün ve dört mikrometre bölümünden dilimleyin.Bölümleri ayrıştırmak için ksilen içine koyun. Mutlak etanol, %95 etanol, %80 etanol, %70 etanol ve damıtılmış suda beş dakika boyunca başarıyla bekletin. Daha sonra, bölümleri beş dakika boyunca hematoksilin çözeltisi ile lekeleyin ve beş saniye boyunca% 1 hidroklorik asit ve% 70 alkolde ayırt edin.Son olarak, onları bir dakika boyunca eozin çözeltisi ile lekelayın ve bağırsak dokusunun histopatolojisini 40 kat büyütmede inceleyin. Bağırsak patolojisi skorunun sıfırdan dörde kadar olan fotomikrograflarında bozulmamış ve normal mukoza, hafif submukozal ve lamina propria ayrımı, orta derecede submukozal ve lamina propria ayrımı, şiddetli submukoz ve lamina propria ayrımı ve bağırsak nekrozu ile bağırsak villi kayboluşu görüldü. Bağırsak patolojisi skoru NEC grubunda 0.001'den az P değeri ile kontrole göre anlamlı olarak daha yüksekti.Dışkı, iyi biçimlendirilmiş peletlerle sıfırdan sıvı dışkı ile üçe puanlandı. 10. günde, NEC gruplarının dışkı puanları, P değeri 0.001'den az olan NEC grubunda önemli ölçüde daha yüksekti. Beşinci günde, iki grup vücut boyutunda önemli bir fark göstermedi.Bununla birlikte, 10. günde, NEC grubundaki fareler, kontrol grubundaki farelerden daha ince ve baştan kuyruğa daha küçüktü. NEC grubundaki farelerin ağırlığı yavaşça arttı ve model kuruluşunun beş günü boyunca hayatta kalma oranı yavaş yavaş azaldı. NEC hastalarından bağırsak dokusunun resetektif ileosekal bölgesinde bağırsak mukozal dokusunun nekrozu görüldü.Bu çalışmada, NEC grubundaki farelerde de ileosel kanama ve nekroz gelişti. Fareyi incelerken, farenin mide tüpü takılmasını etkilememek için zorlanmadığından emin olun. Fareleri 20 ila 30 mikrolitre LPS ile gavage ve beşinci günde 40 ila 50 mikrolitre formülle besleyin.Beşinci günden itibaren, 90 saniye boyunca% 5 oksijende bir hipoksi cihazına yerleştirin ve üç dakika boyunca reoksijene edin. Bu model T hücreleri üzerinde NEC hastalığı araştırmaları için yararlı olabilir ve NEC'deki Th2 hücre yanıtlarının incelenmesine yardımcı olabilir.

a-neonatal-balbc-mouse-model-of-necrotizing-enterocolitis

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Seman, B. G. ve diğerleri. Gram-negatif bakteriyel sepsisin neonatal görüntüleme modeli. J. Vis. Exp. (2020)Video, kapsüllü biyolüminesans bakteriler kullanılarak sistemik enfeksiyonu incelemek için yeni doğumlu fare modelini gösteriyor. Yenidoğan yavrulara yüksek veya düşük dozlu bakteriyel askı enjeksiyonu yapılır ve doğum sonrası bakım için annelerine geri verilir. Kapsüllü bakteriler erken bağışıklık tespitinden kaçınır, sistematik olarak yayılır ve zamanla lüminesans görüntüleme...

Kapsüllenmiş Biyolüminesans Bakterilerle Yenidoğan Farelerde Enfeksiyonun Modellenmesi

Bu video, lipopolisakkarit tedavisinin neden olduğu insan kaynaklı bir neonatal enteroid modelinde nekrotizan enterokolit hastalığının gelişimini göstermektedir. Bu model bağırsak patofizyolojisini incelemeye yardımcı olur.

İnsan Epitelyal Enteroid Modelinde Nekrotizan Enterokolit İndüksiyonu

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Bu iletişim kuralı kurmak ve 7 günlük eski farelerde neonatal sepsis değerlendirmek için gerekli adımları sağlar.

Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli

FEMI'nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis'i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Neonatal farelerin biyolüminesans E. coli O1:K1:H7 ile enfeksiyonu, önemli pulmoner inflamasyon ve akciğer patolojisi ile septik enfeksiyona neden olur. Burada, sistemik bakteriyel yüklerin numaralandırılmasına paralel olarak uzunlamasına intravital görüntüleme, inflamatuar profilleme ve akciğer histopatolojisi ile birlikte neonatal sepsisin modellenmesi ve incelenmesi için yapılan prosedürleri açıklıyoruz.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Bu protokol, hastalık patogenezine yönelik mekanik çalışmalar için kullanılabilen bir in vitro nekrotizan enterokolit (NEC) modelini açıklar. İnsan yenidoğan bağırsağından, endotel hücrelerinden ve şiddetli NEC'li bir yenidoğanın bağırsak mikrobiyomundan türetilen bağırsak enteroidleri ile tohumlanmış bir mikroakışkan çipe sahiptir.

İnsan Yenidoğan Bağırsak Enteroidlerini ve Disbiyotik Mikrobiyomu İçeren Nekrotizan Enterokolitin Mikroakışkan Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, nekrotizan enterokolitin (NEC) yenidoğan fare modelini ve ardından yenidoğan murin ince bağırsağından lamina propria bağışıklık hücrelerinin izolasyonunu özetlemektedir.

İmmün Hücre Profili Oluşturma için Nekrotizan Enterokolit ve Lamina Propria İzolasyonunun Yenidoğan Fare Modeli

Öğrenin, yenidoğan BALB/c farelerinde nekrotizan enterokolit modeli kurarak T hücre yanıtlarını ve bağırsak patolojisini nasıl inceleyeceğinizi. Bu yöntem immün mekanizmaları anlamak için değerlidir.

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Daha fazla video keşfet