Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren kullanılır. İlgili çalışmalar, fareler enfekte olduğunda, BALB / c farelerinde C57BL / 6J farelere kıyasla Th2 hücre farklılaşmasının baskın olduğunu göstermiştir. Çalışmalar, NEC'in oluşumu ve gelişiminin T yardımcı tip 2 (Th2) hücrelerindeki artışla ilişkili olduğunu ve genellikle enfeksiyon eşlik ettiğini ileri sürmektedir. Bu nedenle, bu çalışmada neonatal BALB/c fareleri, NEC'li çocuklarda gözlemlenenlerle benzer klinik özelliklere ve bağırsak patolojik değişikliklere sahip bir NEC modeline neden olmak için kullanılmıştır. Bu hayvan modelinin NEC'deki Th2 hücre yanıtlarını incelemek için kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için daha fazla çalışma yapılması garanti edilir.

Bu çalışmada, T hücreleri üzerinde hastalık araştırmaları için yardımcı olacak NEC modelini oluşturmak için BALB / c fareleri yararlanılarak gerçekleştirilen bir çalışmadır. Beşinci günde, iki grup vücut büyüklüğü üzerinde önemli bir fark göstermez. Bununla birlikte, 10. günde NEC fareleri kontrol farelerinden önemli ölçüde daha inceydi.

NEC grubundaki farelerin ağırlığı yavaşça arttı ve beş günlük model kuruluşu sırasında hayatta kalma oranı yavaş yavaş azaldı. NEC modeli T hücre polarizasyonunu incelemek için avantajlı olabilir. Prosedürü gösteren Yan Tian olacak, laboratuvarımdan bir yüksek lisans mezunu.

Fareleri 20 ila 30 mikrolitre LPS ile gavage ve beşinci günde 40 ila 50 mikrolitre formülle besleyin. Beşinci günden itibaren, onları 90 saniye boyunca% 5 oksijende bir hipoksi cihazına yerleştirin ve üç dakika boyunca yeniden oksijen verin. Daha sonra, fareleri 15 dakika boyunca dört santigrat derecelik bir ortama yerleştirin ve bir inkübatöre aktarın.

Tüm fareleri yakından gözlemleyin, her gün tartın, indüksiyon döneminde farelerin hayatta kalmasını kaydedin ve dışkılarının kanlı ve yapışkan olup olmadığını kaydedin. Mide tüpünü sağ elde tutarak, farenin kafasını işaret parmağıyla farenin kafasında hafifçe geriye ve aşağı doğru bastırılarak sabitlayın. Mide tüpünü ağzın sol köşesinden yerleştirin ve yavaşça iki ila üç santimetreyi ağzın ortasına hareket ettirin.

40 ila 50 mikrolitre formül veya 20 ila 30 mikrolitre LPS'yi sindirim sistemine itin. Fare güçlü bir kusma refleksine sahipse ve mide tüpü nefes borusuna giriyorsa, yavaşça çekin ve tekrar gavage denemeden önce farenin dinlenmesine izin verin. Taze fare illum dokusunu% 10 formalin içine daldırin, dokuları parafin içine gömün ve dört mikrometre bölümünden dilimleyin.

Bölümleri ayrıştırmak için ksilen içine koyun. Mutlak etanol, %95 etanol, %80 etanol, %70 etanol ve damıtılmış suda beş dakika boyunca başarıyla bekletin. Daha sonra, bölümleri beş dakika boyunca hematoksilin çözeltisi ile lekeleyin ve beş saniye boyunca% 1 hidroklorik asit ve% 70 alkolde ayırt edin.

Son olarak, onları bir dakika boyunca eozin çözeltisi ile lekelayın ve bağırsak dokusunun histopatolojisini 40 kat büyütmede inceleyin. Bağırsak patolojisi skorunun sıfırdan dörde kadar olan fotomikrograflarında bozulmamış ve normal mukoza, hafif submukozal ve lamina propria ayrımı, orta derecede submukozal ve lamina propria ayrımı, şiddetli submukoz ve lamina propria ayrımı ve bağırsak nekrozu ile bağırsak villi kayboluşu görüldü. Bağırsak patolojisi skoru NEC grubunda 0.001'den az P değeri ile kontrole göre anlamlı olarak daha yüksekti.

Dışkı, iyi biçimlendirilmiş peletlerle sıfırdan sıvı dışkı ile üçe puanlandı. 10. günde, NEC gruplarının dışkı puanları, P değeri 0.001'den az olan NEC grubunda önemli ölçüde daha yüksekti. Beşinci günde, iki grup vücut boyutunda önemli bir fark göstermedi.

Bununla birlikte, 10. günde, NEC grubundaki fareler, kontrol grubundaki farelerden daha ince ve baştan kuyruğa daha küçüktü. NEC grubundaki farelerin ağırlığı yavaşça arttı ve model kuruluşunun beş günü boyunca hayatta kalma oranı yavaş yavaş azaldı. NEC hastalarından bağırsak dokusunun resetektif ileosekal bölgesinde bağırsak mukozal dokusunun nekrozu görüldü.

Bu çalışmada, NEC grubundaki farelerde de ileosel kanama ve nekroz gelişti. Fareyi incelerken, farenin mide tüpü takılmasını etkilememek için zorlanmadığından emin olun. Fareleri 20 ila 30 mikrolitre LPS ile gavage ve beşinci günde 40 ila 50 mikrolitre formülle besleyin.

Beşinci günden itibaren, 90 saniye boyunca% 5 oksijende bir hipoksi cihazına yerleştirin ve üç dakika boyunca reoksijene edin. Bu model T hücreleri üzerinde NEC hastalığı araştırmaları için yararlı olabilir ve NEC'deki Th2 hücre yanıtlarının incelenmesine yardımcı olabilir.