Gryllus bimaculatus'un Laboratuvar Kültürlerinin Sürdürülmesi, Böcek Tarımı ve Omurgasız Fizyolojisi için Çok Yönlü Bir Ortopteran Model

Bu teknikler, hayvan yemi ve insan gıdası için yetiştirilen önemli bir mini hayvan türü olan Gryllus bimaculatus'u yetiştirmek için pratik ve kanıtlanmış yöntemleri ve giderek daha önemli alternatif model organizmayı göstermektedir. Gryllus bimaculatus kültürü için bu laboratuvar yöntemleri, Kuzey Amerika kriket çiftçiliği endüstrisinde yaygın olan tekniklerden türetilmiştir ve kriket çiftçiliği operasyonlarının laboratuvar ölçeğinde bir faksını temsil etmektedir. Başlamak için, bir terazide temiz bir kap hazırlayın ve yaklaşık bir insan yumruğu büyüklüğünde bir kuru hindistancevizi hindistan cevizi hindistan cevizi kütlesini tartın.

Ardından, hindistan cevizini, orijinal hacmin altı katına kadar genişlemeyi barındırabilen sızdırmaz, temiz bir kaba yerleştirin. Temiz ellerle, hindistan cevizi kümelerini daha büyük bloktan çıkarılan parçadan yavaşça ayırın. Daha sonra, 250 mililitrelik dereceli bir silindir kullanarak, beş parça suyun kütlesi ile bir parça kuru hindistan cevizine beş ila bir oran elde etmek için doğru deiyonize su hacmini ölçün ve ölçülen deiyonize suyu yavaşça ekleyin, tüm hindistan cevizi parçacıklarını eşit şekilde nemlendirin.

Daha sonra, eşit hidrasyon sağlamak için kümeleri manuel olarak masere edin ve hindistan cevizinin daha önce tartıldığı kabı yeniden tarayın. 75 gram ıslak hindistan cevizini tartın ve hindistan cevizinin kabın dibine eşit şekilde yayıldığından ve küme olmadığından emin olmak için temiz, plastik bir kaşık kullanarak 100 milimetre x 15 milimetrelik bir Petri kabına aktarın. Ardından, Petri kabının yan tarafını, doğum kolonisini ve yumurta toplama olayının tarihini belirten etiketli bir laboratuvar bandı ile etiketleyin.

Kademeli bir silindire ilave 45 mililitre deiyonize su ölçün ve eşit hidrasyon sağlamak için Petri kabındaki paketlenmiş hindistan cevizinin yüzeyine eşit şekilde su ekleyin. Petri kabı paketlendikten sonra, kalan ıslak hindistan cevizini eksi 20 santigrat derecede saklamak için hava geçirmez bir kapta kapatın. Sulu yumurtlama substratını, istenen ebeveyn cırcır böceklerini içeren kafeslere beslemeden mümkün olduğunca uzağa yerleştirin ve tarih ve saati belgeleyin.

Ardından, çalışma yüzeyine küçük, otoklavlanabilir bir çöp kabı yerleştirin. Ardından, çöp haznesinin yanındaki tezgaha temiz, boş, 29,3 litrelik bir plastik kafes yerleştirin. Ana kriket stoklarını ve yumurtlama substratını içeren 29,3 litrelik başka bir kafesi, boş kafesten çöp kabının karşı tarafına yerleştirin.

24 saat sonra, yumurtlama substratını ana kriket kafesinden çıkarın ve otoklavlanabilir atık kabının üzerine yerleştirin. Yumurtlama substratının üst kısmını, kriketlerin hindistan cevizinin yüzeyine tekmelemiş olabileceği herhangi bir frass veya yem parçacığı için inceleyin. Daha sonra, Hindistan cevizi kirleticilerini temiz bir Scoopula veya plastik kaşıkla atık kabına çıkarın ve plastik kaşığı atık kabına yerleştirin.

Ardından, temizlenmiş yumurtlama substratını temiz, 29.3 litrelik kafese yerleştirin. Daha sonra, kafesi 12 saatlik karanlık, 12 saatlik hafif bir fotoperiyotta% 60 bağıl nemde 27 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin. Damızlık stoğu içeren kafesi orijinal konumuna iade edin ve çalışma yüzeyindeki tüm öğeleri temizleyin.

Ardından, atık kabını, kriket yumurtalarıyla potansiyel olarak kontamine olmuş öğelerin depolanmasına adanmış bir tesis içi dondurucuya yerleştirin. Daha sonra, çalışma yüzeyini% 10 ağartıcı çözeltisi ile sterilize edin ve 60 saniye bekletin. Çalışma yüzeyini temiz bir kağıt havluyla silin.

Dondurucuyu açtıktan sonra, kağıt havluyu atık haznesine atın. Kullanılmayan iki adet 30,8 santimetre x 30,8 santimetre ticari yumurta karton düzlüğü seçin. Ve bir maket bıçağı veya güçlü makaslarla, bunları eşit büyüklükte altı ayrı 10,1 santimetre genişliğinde şerit halinde kesin.

Ardından, sarkan karton parçacıklarını çıkarmak için kesilmiş kenarları elinizle fırçalayın. Ardından, altı ayrı 10,1 santimetre x 30,8 santimetrelik karton parçasını dikey olarak kafesin altına yerleştirin, kartonun daha uzun ekseni 29,3 litrelik bir kafesin daha dar yatay eksenini kapsar. Altı dik parçanın üstüne yedinci bir karton parçası yerleştirin.

Üç parça kaba, kahverengi kağıt havluyu yaklaşık 25 santimetre x 25 santimetre seçtikten sonra, her birini ikiye katlayın. Ardından, iki tanesini karton yapısının proksimal tarafının üstünü kaplayacak şekilde yerleştirin ve birini distal taraftaki karton yığının üzerine yerleştirin. Yumurtlama sonrası 11. günde, yumurtlama substratını kafesin proksimal sağ köşesine hareket ettirin.

Bir kapak gözlendiğinde, kartonların üstüne yerleştirilen kağıt havluları, ıslanana kadar buğulayın, ancak aktif olarak su dökmeyin. Ardından, 100 milimetrelik bir Petri kapağının her iki tarafını da% 70 etanol ile iyice silin ve kurumasını bekleyin. Daha sonra, 50 gram beslemeyi 60 watt'lık, tek servisli bir karıştırıcıya alın ve bir dakika boyunca 10.000 rpm'de öğütün.

Beslemenin bir gramını ölçtükten sonra, kafesteki Petri kabı kapağına çalkalayın. Bir kaşığın veya Scoopula'nın temiz ucunu kullanarak, yemi yemeğin dibine mümkün olduğunca düzgün bir şekilde yayın. Daha sonra, beslemeyi her iki günde bir değiştirin.

Eski beslemeyi otoklavlanabilir atık konteynerine atın. Yemde küf büyümesini izleyin. Yem beyaz veya yeşilimsi görünmeye başlarsa, Petri kabını atın ve hemen besleyin.

Yumurtlamadan sonraki 14 günde, tüm cırcır böceklerini hindistan cevizi yüzeyinden ve Petri kabının kenarlarından kafese fırçalayarak doğum hindistan cevizi substratına yapışan cırcır böceklerini çıkarmak için 2.54 santimetrelik bir boya fırçası kullanın. Daha sonra, çıkarılan yumurtlama substratını otoklavlanabilir atık haznesine yerleştirin ve otoklavlamaya kadar dondurucuda saklayın. Daha sonra, doğum substratını hidrasyon için taze bir hindistan cevizi kabı ile değiştirin.

Deiyonize bir su yıkama şişesi kullanarak, hindistan cevizinin yüzeyi parlayana kadar su ekleyin, ancak havuzlanmıyor. Cırcır böcekleri, ortalama kütlesi 21 miligram olan bir popülasyondan stoklandı. Deneyin sonunda, tüm kombine genç ve yetişkin kriketlerin ortalama kütlesi 0.724 gram idi.

Deney sona erdiğinde, 65 günlükken, 30 yetişkin erkek mevcuttu ve ortalama kütle 0.721 gram iken, 58 yetişkin kadın için ortalama kütle 0.841 gram idi. Stoklama ve hasat arasındaki hayatta kalma oranı% 89 idi ve haftalık olarak tüm kafeslerdeki tüm bireysel kriketlerin toplam sayımlarıyla ölçüldü. 65. günde, tüm kriketlerin yaklaşık% 68'i yetişkin instarına ulaşmıştı.

Sulama veya buğulama sırasında muhafaza tabanında su damlacıkları oluşumunu önleyin. Kağıt havlunun sığınağın üzerine yerleştirilmesi nem gradyanına izin verir ve su damlacıklarını buğulanmadan emer. Bu prosedür, Gryllus bimaculatus'u model bir organizma olarak desteklemek için birçok yaşam bilimleri alanındaki araştırmacılar için bir şablon görevi görür.

Bugüne kadar, Gryllus bimaculatus veya başka bir paurometabolöz model organizmanın yetiştirilmesi için birkaç resmi protokol yayınlanmıştır. Böcek tarımında kullanılan böcekler için yetiştirme yöntemlerinin kodlanması ve standartlaştırılması, araştırma grupları arasındaki sonuçların karşılaştırılmasını daha iyi sağlayacaktır.