Name: Primer Siliyer Diskinezinin Birinci Basamak Tanısı için Yüksek Hızlı Video Mikroskopi Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: Öğrenin, yüksek hızlı video mikroskopi analizi ile Primer Siliyer Diskinezi'nin güvenilir birinci basamak tanısını nasıl yapılır. Bu yöntem, solunum tıbbında klinik uygulamada tüm yaş grupları için hızlı ve uygun maliyetlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çocuk hemşiresi Bayan Johanna Juvankoski'ye fırçalamalarla ilgili mükemmel yardımı için özel teşekkürlerimizi sunmak istiyoruz. Ayrıca, Profesör Heymut Omran'a (University Clinic Münster, UKM), web sitelerinden normal siliyer hareketin şematik figürünü kullanma izni verdiği için özel şükranlarımızı sunmak istiyoruz. Son olarak, PGCE'den Bay Alan Brown BA'ya (Hons) makaleyi düzelttiği için teşekkür ederiz.

Etik Beyan:
Bu çalışma yerel etik kurul tarafından onaylanmıştır (69/2017) ve Helsinki deklarasyonuna uygun olarak yürütülmüştür.
1. Solunum epitel hücrelerinin toplanması ve taşınması
<ol><li>Fırçalama<ol>
<li>Fırçalamadan önce, kirpik fonksiyonuna müdahale eden biyofilmleri ortadan kaldırmak için hastaya iki haftalık bir oral amoksisilin-klavulanik asit kürü uygulayın. Antibiyotiğin işlemden 2 gün önce sonlandırıldığından emin olun.</li>
		<li>Fırçalanmış epitel hücre şeritleri üzerindeki mukoza materyalinin bir kaplamasını azaltmak için, hastadan burnunu iyice üflemesini isteyin. Ebeveynlerden küçük çocuklarının burunlarını üflemesine yardım etmelerini isteyin.</li>
		<li>Fırçalama için, 0,6 mm boyutunda bir diş arası fırça kullanın ( bkz. Hastanın başını bir elinizle sabit tutun ve diğer elinizle yeterli epitel hücre şeridi toplamak için her iki burun deliğinin inferior konkasını fırçalayın. NOT: Dişler arası fırçayı inferior konkanın altına derinlemesine yerleştirirken genellikle hafif bir direnç görülür. Burun fırçalama işlemi yaklaşık 2 sn hızlı dönme ve toplama ile gerçekleştirilir. Daha uzun ve yoğun fırçalama, aksi takdirde ciddi epitel hasarına ve ardışık epistaksislere neden olabilir.</li>
		<li>Bronkoskopi şüpheli PCD dışındaki nedenlerle planlanıyorsa, bronkoskopi sırasında karina veya bronşiyal epiteli fırçalayarak veya biyopsi ile örnekler toplayın13.</li>
		<li>Hasat edilen hücre şeritlerini, hücre besleyici Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamını (DMEM) içeren 1,5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne bırakın. NOT: Epitel hücre şeritleri genellikle fırçayı tüp duvarına fırlatıp çevirerek fırçayı daha kolay düşürür.</li>
		<li>Mikrosantrifüj tüpünün kapağını kapatın ve tüpü bir ışık kaynağına karşı tutun. Hasat edilen hücre şeritlerini ve konglomeraları keşfetmek için tüpü sallayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Numunenin taşınması<ol>
<li>Mikrosantrifüj tüplerini sıkıca kapatılmış bir polistiren kutuya yerleştirin ve tüplerin kapağının düzgün bir şekilde kapatıldığından ve tüplerin kutunun içine sabitlendiğinden emin olun.</li>
		<li>Soğuk bir paket ekleyin; ancak, numuneyi dondurmaktan kaçının. NOT: İncelemeden önce numunenin korunması için optimum sıcaklık yaklaşık 4-8 ° C'dir (39.2-46.4 ° F).</li>
		<li>Korunan numunelerin sonraki 24 saat boyunca analiz edildiğinden emin olun. NOT: Bu deneylerde, fırçalama ve HSVMA arasındaki ortalama süre 3 saattir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Yüksek hızlı video mikroskopi analizi (HSVMA)
<ol><li>Örneklerin video mikroskopisi<ol>
<li>Numuneleri içeren mikrosantrifüj tüplerini aldıktan sonra, optimal, in vivo benzeri bir ortamı taklit etmek için 37 ° C'ye (98.6 ° F) kadar ısıtın.</li>
		<li>Mikroskop bir ısıtma ünitesi ile donatılmışsa, tüpleri kaputun altına yerleştirin ve orada ısıtın. Alternatif olarak, numuneleri ısıtmak için bir inkübatör kullanın.</li>
		<li>PC'deki kamerayı ve video ünitesinin yazılımını başlatın.</li>
		<li>Bir pipet kullanarak, numuneden az miktarda alın ve bir küvet veya cam tabanlı bir kaba iki damla yerleştirin ( bkz. Küvet veya tabağı bir kapakla örtün ve mikroskop altına yerleştirin.</li>
		<li>Örneklerin değerlendirilmesi için, soğuk ışık kaynağı ve yüksek hızda (en az 200 kare / s) kayıt yapabilen bir video kamera ile donatılmış bir diferansiyel girişim mikroskobu kullanın. 100x büyütmeli bir yağ daldırma lensi kullanın ve optiğin yüzeyine bir damla daldırma yağı koyun. NOT: Lensin aşağıdan yaklaştığı mikroskoplar önerilir.</li>
		<li>Kabın dibine mikroskop merceği ile yaklaşın ve kırmızı kan hücreleri olmayan ve düşük mukus içeriğine sahip hücre kümelerini arayın. Temsili bir ilgi alanı (ROI) bulduktan sonra, en büyük kirpik hareketlerine sahip belirli bir kirpik grubuna odaklanın ve bir video dizisi kaydedin. Yenen kirpikleri olan hücreleri yana doğru ve yukarıdan kaydedin. Bundan sonra, başka bir temsili hücre kümesi arayın ve kaydı tekrarlayın. NOT: Kirpik kaplı hücreler 1.000x büyütme altında araştırılmalı ve dövülen kirpikler, 200 / s veya daha fazla kare hızında ayarlanmış bir dijital yüksek hızlı video (DHSV) kamera ile kaydedilmelidir (bu protokolde 256 / s). Kaydedilen video kliplerden elde edilen veriler sabit sürücüde çok fazla alan gerektirdiğinden, harici bir SSD sabit sürücüsü önerilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Video dizilerinin analizi<ol>
<li>CBF ve CBP'yi belirlemek için video klipleri kare kare oynatın.</li>
		<li>CBF'yi belirlemek için kare hızını 15 kare/sn ile ağır çekime ayarlayın ve art arda 10 vuruş sayın.</li>
		<li>10 atımlık tek bir döngü sırasında geçen kare sayısını kaydedin ve sonucu Eq'ya (1) ekleyin. Kaydedilen tüm kirpik vuruş döngülerinin ortalamasını hesaplayarak frekansı belirleyin ve sonucu yaş için referans değerlerle karşılaştırın (bkz. Tablo 1)14. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63292/63292eq01.jpg"> (1) Burada X, 10 atımlık bir döngü sırasında geçen karelerin sayısıdır.</li>
		<li>CBP'yi değerlendirmek için, dayak kirpiklerinin hareketinin tam aralıkta olup olmadığını (bkz. Şekil 1) ve senkronize olup olmadığını izleyin. Seçim yanlılığını önlemek için CBP'yi iki bağımsız operatörün değerlendirmesini sağlayın.</li>
		<li>HSVMA analizinin sonuçlarını PCD ile uyumlu, olası olmayan veya sonuçsuz olarak raporlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Cilia%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of primary ciliary dyskinesia.</a> Cilia. 4 (1), 2(2015).</li>
<li>Mirra, V., Werner, C., Santamaria, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ciliary+dyskinesia%3A+An+update+on+clinical+aspects%2C+genetics%2C+diagnosis+and+future+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary ciliary dyskinesia: An update on clinical aspects, genetics, diagnosis and future treatment strategies.</a> Frontiers in Pediatrics. 5, 135(2017).</li>
<li>Schultz, R., Elenius, V., Lukkarinen, H., Saarela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+novel+mutations+in+the+DNAH11+gene+in+primary+ciliary+dyskinesia+%28CILD7%29+with+considerable+variety+in+the+clinical+and+beating+cilia+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Medical+Genetics%22%5BJournal%5D)">Two novel mutations in the DNAH11 gene in primary ciliary dyskinesia (CILD7) with considerable variety in the clinical and beating cilia phenotype.</a> BMC Medical Genetics. 21 (1), 237(2020).</li>
<li>Knowles, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+of+DNAH11+in+patients+with+primary+ciliary+dyskinesia+with+normal+ciliary+ultrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Mutations of DNAH11 in patients with primary ciliary dyskinesia with normal ciliary ultrastructure.</a> Thorax. 67 (5), 433-441 (2012).</li>
<li>Boon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ciliary+dyskinesia%3A+critical+evaluation+of+clinical+symptoms+and+diagnosis+in+patients+with+normal+and+abnormal+ultrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Primary ciliary dyskinesia: critical evaluation of clinical symptoms and diagnosis in patients with normal and abnormal ultrastructure.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 9, 11(2014).</li>
<li>Kouis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+primary+ciliary+dyskinesia+in+consecutive+referrals+of+suspected+cases+and+the+transmission+electron+microscopy+detection+rate%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Prevalence of primary ciliary dyskinesia in consecutive referrals of suspected cases and the transmission electron microscopy detection rate: a systematic review and meta-analysis.</a> Pediatric Research. 81 (3), 398-405 (2017).</li>
<li>Marthin, J. K., Nielsen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+of+nasal+nitric+oxide+technique+as+first-line+test+for+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Choice of nasal nitric oxide technique as first-line test for primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 37 (3), 559-565 (2011).</li>
<li>Jackson, C. L., Behan, L., Collins, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+diagnostic+testing+in+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Accuracy of diagnostic testing in primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 47 (3), 837-848 (2016).</li>
<li>Lucas, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((European+Respiratory+Society+guidelines+for+the+diagnosis+of+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">European Respiratory Society guidelines for the diagnosis of primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 49 (1), 1601090(2017).</li>
<li>Shoemark, A., Dell, S., Shapiro, A., Lucas, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERS+and+ATS+diagnostic+guidelines+for+primary+ciliary+dyskinesia%3A+similarities+and+differences+in+approach+to+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">ERS and ATS diagnostic guidelines for primary ciliary dyskinesia: similarities and differences in approach to diagnosis.</a> European Respiratory Journal. 54 (3), 1901066(2019).</li>
<li>Kouis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost-effectiveness+analysis+of+three+algorithms+for+diagnosing+primary+ciliary+dyskinesia%3A+a+simulation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Cost-effectiveness analysis of three algorithms for diagnosing primary ciliary dyskinesia: a simulation study.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 14 (1), 142(2019).</li>
<li>Rubbo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+high-speed+video+analysis+to+diagnose+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Accuracy of high-speed video analysis to diagnose primary ciliary dyskinesia.</a> Chest. 155 (5), 1008-1017 (2019).</li>
<li>Friedman, N. R., Pachigolla, R., Deskin, R. W., Hawkins, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+technique+to+diagnose+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Optimal technique to diagnose primary ciliary dyskinesia.</a> The Laryngoscope. 110 (9), 1548-1551 (2000).</li>
<li>Chilvers, M. A., Rutman, A., O´Callaghan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analysis+of+cilia+and+ciliated+epithelial+ultrastructure+in+healthy+children+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Functional analysis of cilia and ciliated epithelial ultrastructure in healthy children and young adults.</a> Thorax. 58 (4), 333-338 (2003).</li>
<li>Lucas, J. S., Paff, T., Goggin, P., Haarman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+methods+in+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Paediatric+Respiratory+Reviews%22%5BJournal%5D)">Diagnostic methods in primary ciliary dyskinesia.</a> Paediatric Respiratory Reviews. 18, 8-17 (2016).</li>
<li>Ballenger, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+effect+of+cigarette+smoke+on+human+respiratory+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental effect of cigarette smoke on human respiratory cilia.</a> New England Journal of Medicine. 263, 832-835 (1960).</li>
<li>Stanley, P. J., Wilson, R., Greenstone, M. A., Mac William, L., Cole, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cigarette+smoking+on+nasal+mucociliary+clearance+and+ciliary+beat+frequency%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Effect of cigarette smoking on nasal mucociliary clearance and ciliary beat frequency.</a> Thorax. 41 (7), 519-523 (1986).</li>
<li>Kobbernagel, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+azithromycin+maintenance+therapy+in+primary+cilia+dyskinesia+%28BESTCILIA%29%3A+a+multicentre%2C+double-blind%2C+randomised%2C+placebo-controlled+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of azithromycin maintenance therapy in primary cilia dyskinesia (BESTCILIA): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 3 trial.</a> Lancet Respiratory Medicine. 8 (5), 493-505 (2020).</li>
<li>Takeyama, K., Tamaoki, J., Chiyotani, A., Tagaya, E., Konno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+macrolide+antibiotics+on+ciliary+motility+in+rabbit+airway+epithelium+in-vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Effect of macrolide antibiotics on ciliary motility in rabbit airway epithelium in-vitro.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 45 (8), 756-758 (1993).</li>
<li>Toskala, E., Haataja, J., Shirasaki, H., Rautliainen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+cells+harvested+with+nasal+brushing%3A+a+method+for+evaluating+ciliary+function%5BTitle%5D)+AND+%22Rhinology%22%5BJournal%5D)">Culture of cells harvested with nasal brushing: a method for evaluating ciliary function.</a> Rhinology. 43 (2), 121-124 (2005).</li>
<li>Pifferi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+cell+culture+method+for+the+diagnosis+of+atypical+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Simplified cell culture method for the diagnosis of atypical primary ciliary dyskinesia.</a> Thorax. 64 (12), 1077-1081 (2009).</li>
<li>Hirst, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+primary+ciliary+dyskinesia+epithelial+cells+at+air+liquid+interface+can+alter+ciliary+phenotype+but+remains+a+robust+and+informative%2C+diagnostic+aid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Culture of primary ciliary dyskinesia epithelial cells at air liquid interface can alter ciliary phenotype but remains a robust and informative, diagnostic aid.</a> PLoS One. 9 (2), 89675(2014).</li>
<li>Papon, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+ciliary+beating+in+primary+ciliary+dyskinesia%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of ciliary beating in primary ciliary dyskinesia: a pilot study.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 7 (10), 78(2012).</li>
<li>Smith, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia+FA%3A+a+research+tool+for+automated%2C+high-throughput+measurement+of+ciliary+beat+frequency+using+freely+available+software%5BTitle%5D)+AND+%22Cilia%22%5BJournal%5D)">Cilia FA: a research tool for automated, high-throughput measurement of ciliary beat frequency using freely available software.</a> Cilia. 1 (8), 14(2012).</li>
<li>Sampaio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliar+Move%3A+new+software+for+evaluating+ciliary+beat+frequency+helps+find+novel+mutations+by+a+Portuguese+multidisciplinary+team+on+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal+Open+Research%22%5BJournal%5D)">Ciliar Move: new software for evaluating ciliary beat frequency helps find novel mutations by a Portuguese multidisciplinary team on primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal Open Research. 7 (1), 00792(2021).</li>
<li>Mullowney, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ciliary+dyskinesia+and+neonatal+respiratory+distress%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary ciliary dyskinesia and neonatal respiratory distress.</a> Pediatrics. 134 (6), 1160-1166 (2014).</li>
<li>Leigh, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardizing+nasal+nitric+oxide+measurement+as+a+test+for+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Standardizing nasal nitric oxide measurement as a test for primary ciliary dyskinesia.</a> Annals of the American Thoracic Society. 10 (6), 574-581 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Burada, HSVMA kullanarak PCD için teşhis süreci, birinci basamak teşhis ışığında tanımlanmış ve tartışılmıştır. HSVMA'nın kurulması nispeten kolay, uygun maliyetli11 ve deneyimli ellerde güvenilir bir yöntem12 olmasına rağmen, HSVMA tuzakları olmayan bir teşhis önlemi değildir. Anormal CBF ve CBP, bronko-respiratuar epitel15'in iltihaplanmasına yol açan ikincil enfeksiyona bağlı olabilir ve aynı nedenle, sigara içen bireylerin anormal vuruş frekansla...

Primer siliyer diskinezi (PKD), kirpiklerin dövülme hareketinde bozukluklara neden olan nadir, kalıtsal bir genetik bozukluktur. Teşhis edilmezse, MCC'nin ciddi şekilde bozulması nedeniyle daha sonraki yaşamda ciddi akciğer hasarına yol açar. Geçmişte, prevalansının 1: 4.000 ila 50.000 arasında olduğu tahmin edilmektedir. Sürekli olarak gelişen teşhis ve durumun artan farkındalığı nedeniyle, PCD prevalansı ile ilgili güncellemeler, çok daha yaygın olabileceğini ve muhtemelen 1.2yerine 1: 4.000 ila 20.000 aralığında olabileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, PCD'li hastalar hala az teşhis edilir veya çok geç teşhis edilir 1,3. Bu nedenle, konjenital situs inversus ve/veya heterotaksi veya perinatal rinore, yenidoğan solunum sıkıntısı, tıkalı burun ve beslenme güçlüğü olan bebekler PKD açısından şüpheli olmalıdır. Daha sonraki yaşamda, kronik otitis, tekrarlayan pnömoni, rinosinüzit ve bozulmuş MCC'ye bağlı kronik, tipik ıslak öksürük, bronşektazi ve bozulmuş akciğer fonksiyonu ile kombinasyon halinde yetişkinliğe kadar devam eden PCD'nin ayırt edici semptomlarıdır2.
PCD'li olduğundan şüphelenilen hastalara farklı tanı araçları kullanılarak tanı konulabilir. TEM, geçmişte birinci basamak teşhis için altın standart olarak kabul edilmiştir. Bununla birlikte, PCD vakalarının% 30'una kadarı anormal ultrayapı 1,3,4,5,6 göstermez ve farklı bir tanısal yaklaşım gerektirir. Bu nedenle, giderek artan sayıda merkez ve Avrupa Solunum Derneği'nin (ERS) kılavuzları, ilk basamak tanı1,7,9,10 olarak nazal nitrik oksit (nNO) ve HSVMA'nın bir kombinasyonunu önermektedir. HSVMA ve nNO, PCD11'li bir hastanın tanımlanmasında da en uygun maliyetli seçeneklerdir. Bununla birlikte, genetik testler tanıya dahil edilmiş olsa bile, şu anda PCD'yi% 100 kesinlik 8,9,10 ile dışlayabilecek tek başına bir test veya test kombinasyonu olmadığı akılda tutulmalıdır.
Mevcut tanı seçeneklerinden HSVMA, canlı, kirpik kaplı solunum hücrelerine odaklanan ve siliyer atım paterni (CBP) ve siliyer atım frekansını (CBF) değerlendiren tek testtir. TEM'in aksine, HSVMA'nın sonuçları genellikle test gününde hızlı bir şekilde elde edilebilirken, TEM'in sonuçları numune alındıktan aylar sonra gelebilir. HSVMA tüm yaş grupları için uygulanabilirken, nNO yüksek derecede uyumluluk gerektirir; 5 yaşın altında kullanma girişimleri genelliklebaşarısız olur 10. Deneyimli ellerde, HSVMA PCD'yi sırasıyla% 100 ve% 96,12'de teşhis etmek için mükemmel duyarlılık ve özgüllüğe sahiptir.
Bu makalede, kirpik kaplı solunum hücrelerinin burnun inferior konkasından toplanması, hasat edilen hücrelerin araştırma bölgesine taşınması için hücre besleyici bir ortamda korunması ve CBF ve CBP'yi belirlemek için mikroskobik video analizi süreci dahil olmak üzere HSVMA'yı gerçekleştirmek için adım adım prosedür açıklanmaktadır. Ek olarak, normal CBP'leri ve CBF'leri anormal kirpik fonksiyonu ile karşılaştıran hastalardan bazı video klipler gösterilmiştir (Video 3, Video 4, Video 5, Video 6, Video 7 ve Video 8).

<table><tbody><tr><td>Amoksisilin-klavulanik asit</td><td>Orion Oyj</td><td></td><td>40 mg / kg, yetişkinler için 2 doz / gün'e bölünmüş, 875/125 mg 1 tablet x2 / gün</td></tr><tr><td>Kamera Yazılımı</td><td>Hamamatsu</td><td></td><td>HCI Image</td></tr><tr>Koruma <td>ve taşıma için</td><td>herhangi bir</td><td></td><td>soğuk paket</td></tr><tr><td>Diferansiyel girişim mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Ters, hücre gözlemci mikroskobu</td></tr><tr><td>Digitial High Hızlı Video Kamera</td><td>Hamamatsu</td><td></td><td>Orca Flash 4.0, dijital kamera tipi C11440</td></tr><tr><td>Dulbecco&akut; s Modifiye Eagle Medium</td><td>Thermo Fisher</td><td>10565018</td><td>bazal hücre kültürü ortamı</td></tr><tr><td>Eppendorf tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td>1.5 mL tüp</td></tr><tr><td>Cam tabanlı mikro kuyu kabı</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>küvet</td></tr> mikroskopi <tr><td>için Isıtma Ünitesi</td><td>Carl Zeiss/PeCon</td><td>810-450001</td><td>Carl Zeiss PeCon TempModule S1 sıcaklık kontrollü</td></tr> <tr><td>inkübasyon elemanlarıDiş arası fırçası 0,6 mm</td><td>Doft</td><td>872267</td><td>Fermuarlı torbada yeniden kullanılabilir saplı ve kapaklı uzun bir tel üzerinde diş arası fırçası</td></tr><tr><td>Objektif</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>100x/1.46, &alpha; Plan-Apochromat DIC objektif</td></tr><tr><td>Taşıma için</td> <td>herhangi bir</td><td></td><td>kapaklı küçük polistiren kutu</td></tr></tbody></table>

primer siliyer diskinezinin birinci basamak tanısı için yüksek hızlı video mikroskopi analizi

High-speed Video Microscopy Analysis for First-line Diagnosis of Primary Ciliary Dyskinesia

Primer siliyer diskinezi (PKD), ağırlıklı olarak otozomal resesif geçişli kalıtsal bir konjenital hastalıktır. Bozukluk, kirpiklerin hareketinde bozulmaya neden olur ve mukosiliyer klirensin (MCC) ciddi şekilde bozulmasına neden olur. Teşhis edilmezse veya çok geç teşhis edilirse, durum bronşektazi gelişimine ve daha sonraki yaşamda akciğerlerde ciddi hasara yol açar. PCD'yi teşhis etme yöntemlerinin çoğu zaman alıcıdır ve bunları kurmak için kapsamlı ekonomik kaynaklar gerektirir. Yüksek hızlı video mikroskopi analizi (HSVMA), canlı solunum hücrelerini in vitro kirpikleri yenerek görselleştirmek ve analiz etmek için tek tanı aracıdır. Hızlı, uygun maliyetli ve deneyimli ellerde PCD için bir teşhis aracı olarak çok güvenilirdir. Ek olarak, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) gibi klasik tanısal önlemler, morfolojik değişiklikler olmadığı için bazı mutasyonlar için geçerli değildir. 
Bu yazıda solunum epitel hücrelerinin toplanması süreci, numunenin daha fazla hazırlanması ve HSVMA süreci açıklanmaktadır. Ayrıca, fırçalanmış hücrelerin, bir kliniğin HSVMA'yı gerçekleştirecek ekipmana sahip olmadığı durumlarda, depolama ve araştırma alanına taşınması için besleyici bir ortamda tutarak nasıl başarılı bir şekilde zarar görmeden ve dövülmeden tutulabileceğini de açıklıyoruz. Ayrıca, TEM tanısı konamayan dynein kolu ağır zincir 11 geninde (DNAH11) mutasyonu olan hastalardan patolojik dayak paternleri içeren videolar da gösterilmiştir; üst solunum yollarının enfeksiyonu nedeniyle sonuçsuz bir HSVMA'nın yanı sıra kırmızı kan hücrelerinin üst üste binmesiyle başarısız bir fırçalamanın sonucu. Bu makalede, pulmonoloji hastaları ve nadir görülen akciğer hastalıkları ile ilgilenen her birimi, PCD için günlük rutin teşhislerinin bir parçası olarak HSVMA gerçekleştirmeye veya örnekleri HSVMA gerçekleştirme konusunda uzmanlaşmış bir merkeze göndermeye teşvik etmek istiyoruz.

Video 1 ve Video 2, CBF ve CBP'nin normal aralıkta olduğu normal bir kontrol gösterir (bkz. Şekil 1). Video 3, Video 4, Video 5 ve Video 6, DNAH11 geninde homozigot mutasyonu olan iki PCD hastasını temsil etmektedir (c.2341G &gt; A; p. Glu781Lys)3. Bu temsili videolar, DNAH11 genindeki mutasyonların fenotiplerinin dikkate değer olmas...

Yüksek hızlı video mikroskopi analizi, gerçekleştirilmesi nispeten kolay, hızlı, uygun maliyetli ve deneyimli ellerde, primer siliyer diskinezinin birinci basamak teşhisi için oldukça güvenilir bir araçtır ve ciddi akciğer hastalıklarının teşhisi ve tedavisinde yer alan her merkezde mevcut olmalıdır.

Primer Siliyer Diskinezinin Birinci Basamak Tanısı için Yüksek Hızlı Video Mikroskopi Analizi

Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a congenital disorder predominantly inherited in an autosomal recessive trait. The disorder causes disturbance in the ...

Yüksek hızlı Video mikroskopi analizi, primer siliyer diskinezinin ilk basamak teşhisi için güvenilir bir araçtır. Bu tekniğin uygulanması nispeten kolay, hızlı, uygun maliyetli ve deneyimli ellerde çok güvenilir bir araçtır. Ve her yaş grubundan hastalar için geçerlidir.Video mikroskobu ayrıca ikincil siliyer fonksiyonu da ortaya koymaktadır. Örneğin, bakteriyel veya viral enfeksiyonlar nedeniyle. Ancak esas olarak primer siliyer diskinezi tanısı koymak için kullanılmıştır.Bilim adamları bu yöntemi canlı hücrelerdeki hücre içi süreçleri veya biyolojik fonksiyonları görselleştirmek için de kullanırlar. Bu prosedürde bana yardımcı olacak kişi laboratuvar teknisyenimiz Bayan Tina Peromaa olacak.Solunum epitel hücrelerini toplamadan önce, hastadan burnunu iyice üflemesini isteyin. Hasta hazır olduğunda, hastanın başını bir elinizle sabit tutun ve diğer yandan yeterli epitel hücre şeritleri toplamak için burun deliğinin inferior konkasını fırçalamak için 0.6 milimetre büyüklüğünde bir interdental fırça kullanın. Hasat edilen hücre şeritlerini, hücre beslenen DMEM'yi içeren 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne bırakın.Mikrosantrifüj tüpünün kapağını kapattıktan sonra tüpü ışık kaynağına karşı tutun ve hasat edilen hücre şeritlerini ve konglomeraları keşfetmek için tüpü sallayın. Daha sonra, mikrosantrifüj tüplerini, kapakları düzgün bir şekilde kapatılmış olarak bir polistiren kutuya yerleştirin. Kutuyu kapatmadan önce, tüplerin kutunun içine sabitlendiğinden emin olun.Ardından, numunenin dondurulmasını önlerken kutuya soğuk bir paket ekleyin. Numuneleri içeren mikro santrifüj tüplerini polistiren kutusundan çıkardıktan sonra, yüksek hızlı video mikroskopi analizi veya HSVMA için 37 santigrat dereceye kadar ısınmak üzere mikroskop ısıtma ünitesinin kaputunun altına bir tüp yerleştirin. Ardından, kamerayı ve bilgisayardaki video ünitesinin yazılımını başlatın.Küçük bir numune almak için bir pipet kullanın ve numunenin iki damlasını bir küvete yerleştirin. Mikroskop altına yerleştirmeden önce küveti bir kapakla örtün. 100x büyütmeli bir yağ daldırma lensi kullanın ve optiğin yüzeyine bir damla daldırma yağı koyun.Mikroskop merceği ile çanağın dibine yaklaşırken, kırmızı kan hücreleri olmayan ve düşük mukus içeriğine sahip hücre kümelerini arayın. Temsili bir ilgi alanı veya ROI bulduktan sonra, en büyük kirpik hareketlerine sahip dayak kirpiklerinin bir grubuna odaklanın ve bir video dizisi kaydedin. Hücreleri kirpik tarafı akıllıca ve yukarıdan döverek kaydedin.Temsili analiz, yandan ve yukarıdan görülen normal kirpik hareketlerini gösterir. DNAH11 geninde bir mutasyona sahip primer siliyer diskinezi veya PCD hastasının örneği, siliyer atımın klasik sert minimal hareketli modelini gösterdi. Yandan ve yukarıdan bakıldığında.Aynı mutasyona sahip başka bir PKD hastasında, dövülen kirpiklerin farklı bir hiperkinetik ancak verimsiz paterni gözlendi. Tekrarlayan üst solunum yolu enfeksiyonları olan bir hastada patolojik siliyer beat paterni ve siliyer beat sıklığı da görüldü. Fırçalama prosedürü titizlikle gerçekleştirilirse, siliyer epitel hücreleri kırmızı kan hücrelerinin bir kaplaması ile kaplandığı için HSVMA analizi yapılamaz.İşlemdeki en önemli adım, fırçalamalardan yeterli solunum hücresi elde etmek ve bu materyali video analizi için iyi korunmuş halde tutmaktır. Kalan materyal, kirpiklerdeki olası yapısal kusurları tespit etmek veya kusurları ve siliyer proteinlerin sentezini ortaya çıkarmak için elektron mikroskobu veya immünoflouresense mikroskobu yapmak için kullanılabilir.

high-speed-video-microscopy-analysis-for-first-line-diagnosis-primary

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Havayolu kirpikler hareketliliği ve kirpikler oluşturulan akış fare trakea kullanarak görselleştirme ve ölçülmesi için kolay ve güvenilir bir tekniktir açıklanmıştır. Bu teknik faktörler çok çeşitli farmakolojik ajanlar, genetik faktörler, çevresel maruziyet, ve / veya mukus yük gibi mekanik faktörler de dahil olmak üzere, kirpikler hareketliliği nasıl etkilediğini belirlemek için değiştirilebilir.

Kemirgen Havayolu Epiteli içinde Cilia Motilite Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için ex vivo Yöntemi

Bu çalışmada, ayrıntılı bir ışık mikroskobik tekniği, ultrastrüktürel analiz için bir elektron mikroskobik yöntemle birlikte CPEC kirpiklerin ex vivo hareketinin gerçek zamanlı gözlemi ve analizi için optimize edilmiştir.

Koroid Pleksus Epitel Hücreleri Silier Hareketi Gözlem<em&gt; Ex Vivo</em

Son zamanlarda ulaşım yolları çeşitli proteinlerin canlı hücrelerdeki birincil kirpikler içinde translocating için üç boyutlu (3D) kayma yerlerini eşleştirilmiş. Burada deneysel kurulum, biyolojik örneklerin işlem ve veri analizleri yaklaşım yeni görüntüleme 3D süper çözünürlük floresan için uygulanan bu kağıt ayrıntıları birincil kirpikler yaşıyorum.

Yüksek hızlı süper çözünürlük hızı mikroskobu canlı birincil Cilium içinde uygulanması

Bu yayında, çift modalite radyonüklid görüntüleme kullanarak in vivo farelerde hava yolu mukozirary boşluğunu (MCC) değerlendirme protokollerini açıklıyoruz. Bu protokol, çift SPECT/CT sisteminde fare tüm gövde (MWB) kolimatörleri kullanılarak tek bir foton emisyonlu bilgisayarlı tomografi (SPECT) ve bilgisayarlı tomografi (BT) alma protokolü için tasarlanmıştır.

Farelerde Mukozdiliyel Temizliğin In vivo Değerlendirilmesi

PCD tanısı için başarılı ve yüksek kaliteli siliyer fonksiyonel analizi garanti etmek için, solunum epitel örneklemesi ve işlenmesi için hassas ve dikkatli bir yöntem şarttır. COVID-19 pandemisi sırasında PCD tanı hizmeti vermeye devam etmek için, siliyer videomikroskopi protokolü uygun enfeksiyon kontrol önlemlerini içerecek şekilde güncellenmiştir.

Dijital Yüksek Hızlı Siliyer Videomikroskopi Kullanarak Burun Fırçalama Örneklemesi ve İşleme – COVID-19 Pandemisine Adaptasyon

Bu protokol, nazal epitel hücresi toplanmasını, genişlemesini ve organotipik hava yolu epitel hücre modellerine farklılaşmasını ve canlı hücre görüntüleme ve özel yapım senaryolar yoluyla kirpik vuruş sıklığının nicelleştirilmesini açıklar.

Primer İnsan Nazal Epitel Hücre Modellerinin Silia Beat Sıklığının Ölçülmesi İçin Toplanması, Genleştirilmesi ve Farklılaştırılması

Hava-sıvı arayüz kültürü, akciğer hava yolunun apikal tarafını taklit eden primer normal insan bronşiyal epitel hücrelerini farklılaştırarak psödostratifiye hava yolu epiteli geliştirmek için yaygın olarak kullanılır. Burada, siliyer fonksiyon ve membran bütünlüğü gibi biyofiziksel özelliklerini izleyerek kalitesini belirlemek için kolay bir protokol açıklıyoruz.

Psödostratifiye Akciğer Hava Yolu Epitelinin Siliyer Fonksiyonunun ve Membran Geçirimsizliğinin Belirlenmesi

Bu yöntem, bir ARL13B-CENTRIN-2 transgenik fare modelindeki endojen sinyalin, doku toplamadan kirpik organizasyonunun analizine kadar, mineralize dokunun geniş alanlarında üç boyutlu olarak primer kirpikleri yerinde görüntülemek için kullanılmasını tanımlar. Bu protokol diğer doku tiplerine de uygulanabilir.

Kas-İskelet Dokusundaki Primer Kirpiklerin ARL13B-CENTRIN-2 Fare Modeli Kullanılarak Hacimsel Görüntülenmesi ve Analizi

Bu makale, tek hücreli FISH, blastomer çekirdeklerinin yayılmasını teknikleri, in situ hibridizasyon ve klinik bir ortamda pre-implantasyon genetik tanı (PGD) uygulanan sinyal puanlama için uygun probların seçim açıklamaktadır.

Pre-implantasyon Genetik Tanı için FISH

Transabdominal ultrason, Reeves'in muntjac geyiğindeki üreme durumunu değerlendirmek için etkili, noninvaziv bir araç olarak tanımlanır. Bu yöntemler erken gebelik tanısı almak ve fetal canlılığı değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin gelecekteki uygulamaları gebelik yaşının tahminini ve anne hastalığının fetal gelişim üzerindeki etkilerini içerir.

Reeves'in Muntjac Geyisinde Gebelik Tanısı için Transabdominal Ultrason

Öğrenin, yüksek hızlı video mikroskopi analizi ile Primer Siliyer Diskinezi'nin güvenilir birinci basamak tanısını nasıl yapılır. Bu yöntem, solunum tıbbında klinik uygulamada tüm yaş grupları için hızlı ve uygun maliyetlidir.

Primer Siliyer Diskinezinin Birinci Basamak Tanısı için Yüksek Hızlı Video Mikroskopi Analizi

Daha fazla video keşfet