Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Bu protokol, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki ilgi alanlarına yeniden üretilebilir bir erişim yolu için adım adım kılavuzlar sağlar. Bu teknik, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki sınırlı ilgi alanlarına küçük enjeksiyon hacimleri verirken hassasiyeti arttırır. Bu teknik diğer hayvan modellerine uygulanmıştır ve uygulanabilir.

Nöroloji doçenti ve VanderHorst Laboratuvarı'nın baş araştırmacısı Dr. Veronique VanderHorst, bu prosedürü gösterecek. Oksijen akışının burun konisine yönlendirildiğinden emin olun. Fareyi stereotaksik çerçeveye hareket ettirin ve burnu esnek bir burun konisine yerleştirin.

Fareyi yalnızca kulak çubuklarını kullanarak stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Yağlayıcıyı gözlerin üzerine yerleştirin. Anteroflex, burnu manuel olarak yönlendirerek farenin kafasını 90 derecelik bir açıyla bükün.

Bu konumu güvence altına almak için, fare adaptörünün kulak çubuğu sütunları arasına, kafatasının düz kısmı referans olarak hizmet edecek şekilde, sütunlara paralel olarak plastik bir bariyer yerleştirin. Isıtma yastığını farenin altına yerleştirin ve gövdeyi küçük bir kutuyla yükselterek boynun ve vücudun geri kalanının masaya paralel olarak yerleştirildiğinden emin olun. Vücudun altına bir örtü yerleştirin.

Kilogram başına dört miligramlık tek bir doz enjekte edin Meloksikam, vücut ağırlığının gramı başına iki mikrolitrelik bir hacimde deri altından yavaş salınım. Cerrahi kesi bölgesini önce %70 alkollü bir hazırlama pediyle, daha sonra bir Betaine hazırlık pediyle ve daha sonra tekrar bir alkol hazırlama pedi ile temizleyin ve kurumasını bekleyin. Ellerinizi dezenfekte edin ve steril eldivenler giyin, ardından ameliyat bölgesine bir örtü yerleştirin.

Ayak parmaklarını sıkıştırarak veya kornea refleksini kontrol ederek farenin uygun şekilde uyuşturulduğundan emin olun. Seviyeleri 2.0'da tutmak için izofluranı azaltın. Oksipital kemiğin kenarından omuzlara doğru tek bir yumuşak hareketle cerrahi 10 bıçakla bir ila 1,2 santimetrelik bir kesi yapın.

Trapezius kasının orta hat raphesinde dikkatlice bir kesi yapın ve eşleştirilmiş longus kapitis kaslarını açığa çıkarın. Her iki retraktör kancasını da eşleştirilmiş longus kapitis kasları arasına yerleştirin, biri sola, diğeri sağa yöneliktir. Eşleştirilmiş longus kapitis kasının sol ve sağ karnını ayırmak için, orta hattın kolayca görülebildiği oksiputtan başlayarak künt laminektomi forsepslerini kullanın.

Künt forsepsleri orta çizgideki oksiput kemiği boyunca sarnıç dura mater ile buluştuğu yere kadar yönlendirin ve ardından dura mater boyunca atlasa doğru devam edin. Retraktörleri yeniden konumlandırın ve hemostatları yeniden konumlandırarak gerginliği ayarlayın. Beyin sapı ve beyinciğin iyi bir görünümünü elde etmek için orta hatta kasları daha da ayırmak için künt laminektomi forsepslerini kullanın.

Beyincik ve beyin sapı duranın altında görünene kadar yukarıdaki prosedürü gerektiği gibi tekrarlayın. Künt laminektomi forseps kullanarak, forsepsleri orta hattan beyin sapının net bir görünümü olana kadar lateral yönde hareket ettirerek küçük bağ dokusu iplikçiklerinin durasını temizleyin ve daha fazla yanal alan yaratın. Beyin sapının sırt yüzeyini, açık dura boyunca ayrıntılı işaretlerle görüntüleyin.

Oksipital kemikten atlasa uzanan durayı yakalamak için açılı forsepsleri kullanın, ardından durada yaklaşık 0,5 ila 1,5 milimetrelik küçük bir açıklık yapmak için yay makasını kullanın. Dura açıldıktan sonra, fazla beyin omurilik sıvısını steril bir Q-ucu ile boşaltın. Merkezi kanalın dördüncü ventriküle açıldığı nokta olan obeks, standart anterior-posterior ve mediolateral sıfır noktasıdır.

Stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı hedefe yerleştirin. Dorsal kolu dorsoventral sıfır noktasından oluşan dorsal yüzeye indirin. Ardından pipeti beyin sapına indirin ve çözeltiyi enjekte edin.

Üç ila 50 nanolitre arasındaki hacimleri kullanırken iğne izinden kaçınmak için iğneyi enjeksiyondan sonra bir ila beş dakika yerinde bırakın. Ardından stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı kaldırın ve bunu birden fazla hedef için tekrarlayın. Kancaları cerrahi alandan dikkatlice çıkarın.

Eşleştirilmiş longus kapitis kasları, sarnıç magnasını tamamen kaplayan nötr bir pozisyona geri dönecektir. Trapezius kasını ve orta hatta dura mater'i kapatmayın, çünkü dikişleri tutmak için çok kırılgandırlar. Cildi 3 naylon veya polipropilen dikişlerle kapatın.

Sarnıç magna yaklaşımı, standart stereotaksik yaklaşımlarla ulaşılması zor olan veya tutarsız hedeflemeye eğilimli olan kaudal beyin sapı ve üst servikal kord yapılarının hedeflenmesini mümkün kılar. Farelerde, hipoglossal çekirdek, ventral solunum grubu ve kaudal beyin sapındaki bitişik retiküler oluşum gibi yapılar, hipoglossal çekirdek ve ventromedial medulla için burada gösterildiği gibi sarnıç magna yaklaşımı kullanılarak rutin olarak hedeflenmiştir. Sarnıç magna yaklaşımının standart yaklaşıma göre doğruluğunu belirlemek için, ventral ve dorsal bölgeler için anteroposterior, mediolateral ve dorsoventral düzlemlerde amaçlanan ve gerçek hedef bölgeler arasındaki mesafe ölçüldü.

Sonuçlar, anteroposterior, mediolateral ve dorsoventral düzlemlerde standart yaklaşıma kıyasla önemli ölçüde daha küçük hatalar göstermekte ve bu hedefler için sarnıç magna yaklaşımının gelişmiş doğruluğunu vurgulamaktadır. Bu protokolü denerken, başın anterofleksiyonunun ve vücudun yükselmesinin tarif edildiği gibi yapıldığından emin olmak çok önemlidir. Daha sonra, kası veya dura materini manipüle etmeden önce önemli noktaları tanımak önemlidir.

Bu işaretler tanınmazsa veya kaybolursa, yönlendirilmiş kalmak ve prosedürü amaçlandığı gibi yürütmek zor olacaktır. Bu teknik, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordon içindeki fonksiyonel anatomik organizasyon ile ilgili kavramsal soruların ele alınmasına yardımcı oldu.