Name: Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Öğrenin, farelerde kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliğe stereotaksik cerrahi ile mikroenjeksiyon yapma tekniğini. Bu yöntem, hassas hedefleme ve minimal invaziv erişim sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma R01 NS079623, P01 HL149630 ve P01 HL095491 tarafından desteklenmiştir.

Yazar, protokolün Beth Israel Deaconess Tıp Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerini izlediğini beyan eder.
1. Cerrahi aletlerin ve stereotaksik çerçevenin hazırlanması
NOT: Ameliyat aseptik koşullar altında yapılır. Sterilite steril uç tekniği kullanılarak korunur.
<ol><li>Stereotaksik kolu, stereotaksik çerçeveye enjekte edilebilir bir seçenek (adeno ilişkili virüs (AAV) veya geleneksel izleyici) ile doldurulmuş bir mikropipet veya şırınga ile takın ve fare adaptörünü hazırlayın (Şekil 2A).</li>
	<li>Otoklavlanmış cerrahi aletler hazırlayın (Malzeme tablosu) ve steril bir yüzeye yerleştirin.</li>
</ol>2. Anestezi indüksiyonu ve fare hazırlığı
<ol><li>O2'yi 0,5 L/dak'da açın ve izofluran buharlaştırıcıyı 4,0'a ayarlayarakO2 akışının indüksiyon kutusuna olduğundan emin olun. DİKKAT: İzofluran indüksiyon kutusunun bir davlumbaza yerleştirildiğinden ve izofluran'ın cerrahi bölgeden uzaklaştırıldığından emin olun.</li>
	<li>Fareyi (10 haftalık erkek C57BL/6J) indüksiyon odasına yerleştirin.</li>
	<li>Solunum yavaşladığında, indüksiyon odasını açın ve fareyi hafifçe kaldırın. Saçları baştan omuzlara çıkarmak için makas kullanın.</li>
</ol>3. Farenin stereotaksik çerçevede konumlandırılması
<ol><li>Fareyi stereotaksik çerçeveye hareket ettirin ve burnu esnek bir burun konisine yerleştirin. Bu aşamada,O2 akışının artık burun konisine yönlendirildiğinden emin olun.</li>
	<li>Fareyi yalnızca kulak çubuklarını kullanarak stereotaksik çerçeveye yerleştirin. NOT: Kulak çubuklarının düz ve başın düz olduğundan emin olun.</li>
	<li>Anteroflex, burnu manuel olarak yönlendirerek farenin başını 90° açıyla bükün. Bu konumu korumak için, fare adaptörünün kulak çubuğu sütunları arasına, sütunlara paralel olarak plastik bir bariyer yerleştirin. Kafatasının düz kısmı, geleneksel stereotaksik cerrahideki düz kafatası yaklaşımına benzer şekilde referans görevi görür. NOT: Kafayı aşırı esnetmeyin (yani frontal kafatası kemiğinin düzlemi ile masanın yüzeyinin düzlemi arasındaki 90°'lik bir açının ötesinde), çünkü bu, üst solunum yolundan hava akışını engeller. Hava akımı engellenirse, fareyi yeniden konumlandırın, gövdenin gövdenin altında desteklendiğinden ve plastik bir kartın ön kafatası kemiğinin düzlemi ile Şekil 2A, C'de belirtildiği gibi tablonun yüzeyinin düzlemi arasında 90 ° 'ye ayarlandığından emin olun.</li>
	<li>Isıtma yastığını farenin altına yerleştirin ve ardından boynun ve vücudun geri kalanının aynı seviyede (yani yaklaşık 180 ° veya masaya paralel olarak) konumlandırıldığından emin olun. Yaylı makası tutan alet kutusu, gövdeyi bu konuma kaldırmak için kullanılabilir. NOT: Bu adım, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordon, kafatası tarafından yerinde tutulan CNS'nin daha fazla rostral kısmının aksine, pozisyona bağlı olarak hareket ettiğinden önemlidir.</li>
	<li>4 mg / kg'lık tek bir doz Meloksikam yavaş salınımlı (SR) deri altından (SC) 2 μL / g vücut ağırlığı hacminde enjekte edin ve gözlere kayganlaştırıcı yerleştirin.</li>
	<li>Cerrahi kesi bölgesini önce %70 alkol hazırlama pediyle, sonra betadin hazırlama pediyle ve sonra tekrar alkol hazırlama pediyle temizleyin ve kurumaya bırakın.</li>
	<li>Vücudun altına bir örtü yerleştirin.</li>
	<li>Ellerinizi dezenfekte edin ve steril eldivenler giyin.</li>
	<li>Cerrahi bölgeye bir örtü yerleştirin.</li>
</ol>4. Sarnıç magnasına erişmek için ameliyat
<ol><li>Ayak parmaklarını sıkıştırarak veya kornea refleksini kontrol ederek farenin uygun şekilde uyuşturulduğundan emin olun.</li>
	<li>İzofluranı bakım seviyelerine indirin (2.0).</li>
	<li>Oksipital kemiğin kenarından omuzlara doğru 10 numaralı cerrahi bıçakla tek bir yumuşak hareketle 1-1.2 cm'lik bir kesi yapın.</li>
	<li>Trapezius kasının orta hat raphesinde bir kesi yapın. Bu, eşleştirilmiş longus kapitis kaslarını açığa çıkarır. NOT: Farelerde, trapezius kası çok ince, neredeyse şeffaf bir kastır. Orta hatta kaldığınızdan emin olun ve gereksiz kanamaya neden olacağından altta yatan kasları kesmeyin.</li>
	<li>Her iki retraktör kancasını da eşleştirilmiş longus kapitis kasları arasına yerleştirin, biri sola, diğeri sağa yönlendirilmiştir. Hemostatların ağırlığı, hemostatların pozisyonunun yeniden ayarlanmasıyla değiştirilebilen retraktör kancalarına gerginlik sağlar.</li>
	<li>Cerrahi alanı daha iyi görselleştirmek için cerrahi mikroskopu yerine yerleştirin.</li>
	<li>Eşleştirilmiş longus kapitis kasının sol ve sağ karnını, orta hattın kolayca görülebildiği oksiputtan başlayarak ayırmak için künt laminektomi forsepslerini kullanın. Künt forsepsleri orta çizgideki oksiput kemiği boyunca sarnıç dura mater ile buluştuğu yere kadar yönlendirin ve ardından dura mater boyunca atlasa doğru devam edin. NOT: Eşleştirilmiş longus kapitis kaslarını kesmeye gerek yoktur, çünkü hiçbir şey onları orta hatta bir arada tutmaz; bunu yapmak gereksiz kanamaya neden olur.</li>
	<li>Retraktörleri yeniden konumlandırın ve hemostatları yeniden konumlandırarak gerginliği ayarlayın, sarnıç magna görünümünü açın.</li>
	<li>Beyin sapı ve beyinciğin iyi bir görüntüleme penceresini elde etmek için orta hatta kasları daha da ayırmak için künt laminektomi forsepslerini kullanın.</li>
	<li>Beyincik ve beyin sapı duranın altında görünene kadar 4.7-4.9 arasındaki adımları gerektiği gibi tekrarlayın.</li>
	<li>Künt laminektomi forseps kullanarak, forsepsleri orta hattan lateral yönde hareket ettirerek, beyin sapının net bir görünümü olana kadar ve hedef için gerektiği gibi daha fazla yanal alan oluşturmak için küçük bağ dokusu iplikçiklerinin durasını temizleyin.</li>
</ol>5. Sarnıç zarının açılması
<ol><li>Oksipital kemikten atlasa kadar uzanan durayı yakalamak için açılı Dumont forsepslerini (#4/45) kullanın. Dura'yı oksipital kemiğin yakınında tutun ve durada küçük bir açıklık (~ 0,5 ila 1,5 mm) yapmak için yay makasını kullanın. NOT: Bu rostral konumda, beyin sapı ile üstteki dura arasındaki boşluk en geniştir ve duranın güvenli bir şekilde manipüle edilmesi için yeterli alan sağlar.</li>
	<li>Durayı kaldırmak ve durayı daha da açmak için yaylı makası kullanın. Pencerenin boyutu hedefe bağlıdır. NOT: Birden fazla uzunlamasına enjeksiyon veya bilateral enjeksiyon yaparken daha büyük bir pencereye ihtiyaç duyulacaktır; tek taraflı veya orta hat enjeksiyonları yapılırken küçük bir pencere yeterli olacaktır.</li>
	<li>Dura açıldıktan sonra, fazla beyin omurilik sıvısını steril bir ipucu ucu ile boşaltın.</li>
</ol>6. Yer işaretlerinin ve sıfır noktasının tanımlanması
<ol><li>Beyin sapının sırt yüzeyini, açık dura boyunca ayrıntılı işaretlerle görüntüleyin. Merkezi kanalın IV ventriküle açıldığı nokta olan obeks, standart ön-arka ve mediolateral sıfır noktasıdır.</li>
</ol>7. Hedef koordinatları
NOT: Çeşitli hedefler için, metodolojiler arasındaki geçişi kolaylaştırmak için sıfır noktası bregma'ya göre anterior posterior (AP) ve mediolateral (ML) koordinatları ve sıfır noktası obex'e göre AP ve ML koordinatları ile cisterna magna koordinatları içeren standart koordinatların bir listesini ekledik (Tablo 1). Dorsoventral (DV) koordinatlar, AP ve ML giriş noktasındaki beyin veya beyincik yüzeyine (standart yaklaşım) veya beyin sapı veya üst servikal kordonun yüzeyine (sarnıç magna yaklaşımı) göredir. Ameliyat öncesi planlama yapılmalıdır.
<ol><li>Hedefi belirlemek için üç koordinat kümesini kullanın: AP, ML ve DV. Baş pozisyonu nedeniyle, beyin sapı yapılarının göreceli oryantasyonu konuma göre değişir.<ol>
<li>Hedef mesafe >0,4 mm için kaudalden obekse (Şekil 1B, yeşil) aşağıdakileri gerçekleştirin.<ol>
<li>AP: Obex ve hedef arasındaki AP mesafesini tahmin etmek için herhangi bir standart stereotaksik referans atlası (örneğin, Paxinos ve Franklin atlas2) veya enine düzlemde kesilmiş doku serilerini kullanın.</li>
			<li>ML: Obex ve hedef arasındaki ML mesafesini tahmin etmek için enine düzlemde kesilmiş herhangi bir standart stereotaksik referans atlası veya doku serisini kullanın.</li>
			<li>DV: AP ve ML hedef noktasındaki beyin veya beyincik yüzeyine göre koordinatları tahmin edin. İstenilen AP ve ML koordinatlarındaki beyin sapı yüzeyi ile hedef arasındaki mesafeyi tahmin etmek için enine düzlemde kesilmiş herhangi bir standart stereotaksik referans atlası veya doku serisini kullanın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Hedef mesafe için <0,4 mm kaudalden obekse (Şekil 1B, turuncu) aşağıdakileri gerçekleştirin.<ol>
<li>AP: Beyin sapının anterofleksiyonunu hesaba katmak için koordinatları ayarlayın. Ventral ve rostral koordinatlar için, AP beyin sapı giriş noktası, standart düzlemdeki hedef AP koordinatına göre daha kaudal olacaktır.</li>
			<li>ML: Hedef koordinatları standart bir stereotaksik referans atlasından veya enine düzlemde kesilmiş doku serilerinden türetin. Koordinatlar, hedef AP düzeyinde görselleştirilmiş orta hatta göre olacaktır.</li>
			<li>DV: AP ve ML hedef noktasındaki beyin sapının yüzeyine göre koordinatları tahmin edin. DV'yi beyin sapının anterofleksiyonunu hesaba katacak şekilde ayarlayın. Ventral ve rostral koordinatlar için, DV koordinatları standart düzlemde beyin sapının dorsal yüzeyinden olan mesafeden daha büyük olacaktır.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. Hedefin enjeksiyonu
<ol><li>Stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı hedefe indirin ve standart stereotaksik yaklaşımlarda olduğu gibi çözelti enjekte edin. 3-50 nL arasındaki hacimleri kullanırken iğne izinden kaçınmak için enjeksiyondan sonra 1-5 dakika yerinde bırakın. Ardından, stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı kaldırın.</li>
	<li>8.1. adımı yineleyin. birden fazla hedef için.</li>
</ol>9. Cerrahi alanın kapatılması
<ol><li>Kancaları cerrahi alandan dikkatlice çıkarın. Eşleştirilmiş longus kapitis kasları, sarnıç magnasını tamamen kaplayan nötr bir pozisyona geri dönecektir. Trapezius kasını ve orta hatta dura mater'i kapatmayın, çünkü dikişleri tutmak için çok kırılgandırlar.</li>
	<li>Cildi üç naylon veya polipropilen sütürle kapatın (5-0 veya 6-0).</li>
</ol>10. Ameliyat sonrası bakım
<ol><li>İzofluranı kapatın ve fareyi stereotaksik çerçeveden çıkarın. Fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafese yerleştirin ve uyanana ve hareket edene kadar gözlemleyin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası 1-3. günlerde sağlık durumunu, ağırlığı ve dikişleri izleyin. Dikişleri daha önce alınmamışsa 10. günde çıkarın.</li>
</ol>

<ol><li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stereotaxic+Surgery%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+Science+Education+Database%22%5BJournal%5D)">Rodent Stereotaxic Surgery.</a> JoVE Science Education Database. , Neuroscience (2021).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (2001).</li>
<li>Lein, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+atlas+of+gene+expression+in+the+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome-wide atlas of gene expression in the adult mouse brain.</a> Nature. 445 (7124), 168-176 (2007).</li>
<li>Rangarajan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+in+vivo+assessment+of+targeting+accuracy+of+stereotactic+brain+surgery+in+experimental+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Image-based in vivo assessment of targeting accuracy of stereotactic brain surgery in experimental rodent models.</a> Scientific Reports. 6 (1), 38058(2016).</li>
<li>Blasiak, T., Czubak, W., Ignaciak, A., Lewandowski, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+detection+of+the+bregma+point+on+the+rat+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A new approach to detection of the bregma point on the rat skull.</a> Journal of Neuroscience Methods. 185 (2), 199-203 (2010).</li>
<li>Popesko, P., Rajtova, V., Horak, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPopesko%2C+P+%22A+Colour+Atlas+of+the+Anatomy+of+Small+Laboratory+Animals%2C+Volume+2%3A+Rat%2C+Mouse+and+Golden+Hamster%22">A Colour Atlas of the Anatomy of Small Laboratory Animals, Volume 2: Rat, Mouse and Golden Hamster</a>. 2, Wolfe Publishing Ltd. (1992).</li>
<li>Allen Mouse Brain Atlas. Allen Institute for Brain Science. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://mouse.brain-map.org/experiment/thumbnails/100042147?image_type=atlas">https://mouse.brain-map.org/experiment/thumbnails/100042147?image_type=atlas</a> (2004).</li>
<li>Vanderhorst, V. G. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+retroambiguus-spinal+pathway+in+the+mouse%3A+Localization%2C+gender+differences%2C+and+effects+of+estrogen+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Nucleus retroambiguus-spinal pathway in the mouse: Localization, gender differences, and effects of estrogen treatment.</a> The Journal of Comparative Neurology. 488 (2), 180-200 (2005).</li>
<li>Yokota, S., Kaur, S., VanderHorst, V. G., Saper, C. B., Chamberlin, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory-related+outputs+of+glutamatergic%2C+hypercapnia-responsive+parabrachial+neurons+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Respiratory-related outputs of glutamatergic, hypercapnia-responsive parabrachial neurons in mice.</a> Journal of Comparative Neurology. 523 (6), 907-920 (2015).</li>
<li>Anselmi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonographic+anatomy+of+the+atlanto-occipital+region+and+ultrasound-guided+cerebrospinal+fluid+collection+in+rabbits+%28Oryctolagus+cuniculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Radiology+%26+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Ultrasonographic anatomy of the atlanto-occipital region and ultrasound-guided cerebrospinal fluid collection in rabbits (Oryctolagus cuniculus).</a> Veterinary Radiology & Ultrasound. 59 (2), 188-197 (2018).</li>
<li>Herbert, H., Moga, M. M., Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connections+of+the+parabrachial+nucleus+with+the+nucleus+of+the+solitary+tract+and+the+medullary+reticular+formation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Connections of the parabrachial nucleus with the nucleus of the solitary tract and the medullary reticular formation in the rat.</a> The Journal of Comparative Neurology. 293 (4), 540-580 (1990).</li>
<li>Vanderhorst, V. G., Holstege, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caudal+medullary+pathways+to+lumbosacral+motoneuronal+cell+groups+in+the+cat%3A+evidence+for+direct+projections+possibly+representing+the+final+common+pathway+for+lordosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Caudal medullary pathways to lumbosacral motoneuronal cell groups in the cat: evidence for direct projections possibly representing the final common pathway for lordosis.</a> The Journal of Comparative Neurology. 359 (3), 457-475 (1995).</li>
<li>Vanderhorst, V. G., Terasawa, E., Ralston, H. J., Holstege, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+projections+from+the+nucleus+retroambiguus+to+motoneurons+supplying+the+abdominal+wall%2C+axial%2C+hindlimb%2C+and+pelvic+floor+muscles+in+the+female+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic projections from the nucleus retroambiguus to motoneurons supplying the abdominal wall, axial, hindlimb, and pelvic floor muscles in the female rhesus monkey.</a> The Journal of Comparative Neurology. 424 (2), 233-250 (2000).</li>
<li>Wall, N. R., Wickersham, I. R., Cetin, A., De La Parra, M., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+circuit+tracing+in+vivo+through+Cre-dependent+targeting+and+complementation+of+modified+rabies+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic circuit tracing in vivo through Cre-dependent targeting and complementation of modified rabies virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21848-21853 (2010).</li>
<li>Krashes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+activation+of+AgRP+neurons+drives+feeding+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible activation of AgRP neurons drives feeding behavior in mice.</a> The Journal of Clinical Investigation. 121 (4), 1424-1428 (2011).</li>
<li>Ganchrow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+of+the+solitary+tract+in+the+C57BL%2F6J+mouse%3A+Subnuclear+parcellation%2C+chorda+tympani+nerve+projections%2C+and+brainstem+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Nucleus of the solitary tract in the C57BL/6J mouse: Subnuclear parcellation, chorda tympani nerve projections, and brainstem connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 522 (7), 1565-1596 (2014).</li>
<li>Ung, K., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber-optic+implantation+for+chronic+optogenetic+stimulation+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Fiber-optic implantation for chronic optogenetic stimulation of brain tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (68), e50004(2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Standart stereotaksik cerrahi, CNS1'deki hedef bölgelerin koordinatlarını hesaplamak için genellikle kafatası işaretlerine dayanır. Hedef bölgelere daha sonra kafatası1'den delinen çapak delikleri aracılığıyla erişilir. Bu yöntem, kaudal beyin sapı için ideal değildir, çünkü hedef bölgeler anteroposterior ve dorsoventral düzlemlerdeki kafatası işaretlerinden uzakta bulunur2 ve kafatası ve üstteki kasların anatomisi6'ya</sup...

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için standart stereotaksik cerrahi1 genellikle kafatasının bir dizi kulak çubuğu ve bir ağız çubuğu kullanılarak sabitlenmesini içerir. Koordinatlar daha sonra referans atlasları 2,3 ve kafatası yer işaretlerine, yani bregma (frontal ve parietal kemiklerin dikişlerinin bir araya geldiği nokta) veya lambda (parietal ve oksipital kemiklerin dikişlerinin bir araya geldiği nokta; Şekil 1A,B). Tahmini hedefin üzerindeki kafatasına bir çapak deliğinden sonra, mikroenjeksiyonların verilmesi veya kanüller veya optik fiberlerle enstrümantasyon için hedef bölgeye ulaşılabilir. Bu dikişlerin anatomisindeki farklılıklar ve bregma veya lambda 4,5'in lokalizasyonundaki hatalar nedeniyle, sıfır noktalarının beyne göre konumu hayvandan hayvana değişir. Bu değişkenlikten kaynaklanan hedeflemedeki küçük hatalar, büyük veya yakın hedefler için bir sorun olmasa da, etkileri, anteroposterior veya dorsoventral düzlemlerdeki sıfır noktalarından uzak olan ve / veya yaş, gerginlik ve / veya cinsiyet nedeniyle değişen büyüklükteki hayvanları incelerken daha küçük ilgi alanları için daha büyüktür. Medulla oblongata ve üst servikal kordon için benzersiz olan birkaç ek zorluk vardır. İlk olarak, anteroposterior koordinatlardaki küçük değişiklikler, beyinciğin konumu ve şekli nedeniyle duraya göre dorsoventral koordinatlardaki önemli değişikliklerle ilişkilidir (Şekil 1Bi)2,6,7. İkincisi, üst servikal kordon kafatası2 içinde yer almaz. Üçüncüsü, oksipital kemiğin eğimli pozisyonu ve boyun kaslarının üst tabakası2, beyin sapı ve omurilik arasındaki geçişin yakınında bulunan yapılar için standart stereotaksik yaklaşımı daha da zorlaştırmaktadır (Şekil 1Bi). Son olarak, kaudal beyin sapı ve servikal kordona ilgi duyan birçok hedef küçük2'dir ve hassas ve tekrarlanabilir enjeksiyonlar gerektirir 8,9.
Sarnıç magna aracılığıyla alternatif bir yaklaşım bu sorunları aşar. Sarnıç magna, oksipital kemikten atlasa kadar uzanan geniş bir alandır (Şekil 1A, yani ikinci omur kemiği)10. Beyin omurilik sıvısı ile doldurulur ve dura mater10 ile kaplanır. Oksipital kemik ve atlas arasındaki bu boşluk, kafayı anteroflekleştirdiğinde açılır. Longus capitis kasının üstteki eşleştirilmiş karınları arasında gezinerek ve kaudal beyin sapının dorsal yüzeyini açığa çıkararak erişilebilir. İlgilenilen bölgeler daha sonra sırt yüzeyinin yakınında bulunuyorlarsa, bu bölgelerin işaretlerine dayanarak hedeflenebilir; veya obeksi kullanarak, merkezi kanalın IV ventriküle açıldığı nokta, koordinatların daha derin yapılara ulaşması için sıfır noktası olarak. Bu yaklaşım, ventral solunum grubunu, medüller medial retiküler oluşumu, soliter sistemin çekirdeğini, alan postremasını veya hipoglossal çekirdeği hedeflemek için sıçan11, kedi 12, fare 8,9 ve insan dışı primat 13 dahil olmak üzere çeşitli türlerde başarıyla kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu yaklaşım, anatomi bilgisi, özel bir araç seti ve standart stereotaksik yaklaşıma kıyasla daha gelişmiş cerrahi beceriler gerektirdiği için yaygın olarak kullanılmamaktadır.
Burada, sarnıç magna yoluyla beyin sapına ve üst servikal kordona ulaşmak, yer işaretlerini görselleştirmek, sıfır noktasını ayarlamak (Şekil 2) ve mikroenjeksiyonların stereotaksik olarak verilmesi için hedef koordinatları tahmin etmek ve optimize etmek için adım adım cerrahi bir yaklaşımı açıklıyoruz (Şekil 3). Daha sonra bu yaklaşımla ilgili avantaj ve dezavantajları tartışacağız.

<table><tbody><tr><td>Alkol pedi</td><td>Med-Vet International</td><td>SKU: cerrahi</td><td>alan enfeksiyonunun önlenmesi için MDS090735Z cilt hazırlığı</td></tr><tr><td>Açılı forseps, Dumont #5/45</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td>sadece dura</td></tr><tr><td>Betadine pedini</td> almak için <td>Med-Vet International</td><td>SKU:PVP-PAD</td><td>cerrahi alan enfeksiyonunun önlenmesi için cilt hazırlığı</td></tr><tr><td>Kolera toksin alt birimi-b, Alexa Fluor 488/594 eşlenik</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>488: C34775, 594: C22842</td><td>Floresan izleyici</td></tr><tr><td>Clippers</td><td>Wahl</td><td>Model MC3, 28915-10</td><td>cerrahi alanda kürk tıraş etmek için</td></tr><tr><td>Köşe kelepçeli elektrot tutucu</td><td>Kopf</td><td>1770</td><td>cam pipeti tutmak için</td></tr><tr><td>Akış ölçer</td><td>Gilmont aletleri</td><td>model # 65 MM</td> cerrahi <td>düzlemde</td></tr> <tr><td>fareye izofluran ve oksijen akışını düzenlemek içinFloresan mikro küreler, polistiren</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F13080</td><td>Floresan izleyici</td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Çalma</td><td>53800M</td><td>termoregülasyon</td></tr><tr><td>Portu bağlantı kitli indüksiyon odası</td><td>Midmark Inc</td><td></td><td>93805107 92800131 ilk anestezi sağlayan</td></tr> oda <tr><td>İnsülin Şırıngası</td><td>Exelint International</td><td>26028</td>, <td>salin ve analjezik uygulamak için</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>SKU:RXISO-250</td><td>uçucu anestezik</td></tr><tr><td>İzofluran Matris VIP 3000 buharlaştırıcı</td><td>Midmark Inc</td><td>91305430</td><td>inhalan anestezik uygulama için aparat</td></tr><tr><td>Laminektomi forseps, Dumont #2</td><td>FST</td><td>11223-20</td><td>sadece dura</td></tr><tr><td>Medical havasını temizlemek için, basınçlı</td><td>Linde</td><td>UN 1002</td><td>stimülatör ile kullanılır & Hassas çözelti enjeksiyonu için hava sağlamak için PicoPump</td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>Zoo Pharm LLC</td><td>Lot # MSR2-211201</td><td>analjezik</td></tr><tr><td>Microhematocrit borosilikat cam önceden kalibre edilmiş kılcal tüp</td><td>Globe Scientific Inc</td><td>51628</td><td>malzemenin belirlenen koordinatlara transfeksiyonu için</td></tr><tr><td>Fare adaptörü</td><td>Çalma</td><td>0051625</td><td>&nbsp; Fare cerrahisi için sıçan stereotaksik çerçevenin uyarlanması</td></tr><tr><td>İğne tutucu, Öğrenci Halsted- Sivrisinek Hemostatları</td><td>Dikiş atmak için</td><td>FST</td><td>91308-12</td></tr><tr><td>Oksijen regülatörü</td><td>Yaşam Destek Ürünleri</td><td>S/N 909328, lot 092109</td><td>oksijen tankından oksijen seviyelerini düzenler</td></tr><tr><td>Oksijen tankı, sıkıştırılmış</td><td>Linde</td><td>USP UN 1072</td><td>izofluran ile birlikte sağlanır anastezi</td></tr><tr><td>Plastik kart</td><td>değil uygulanabilir</td><td>uygulanamaz</td><td>herhangi bir sert plastik kart, stereotaktik çerçeveye uyacak şekilde kesilmiş (örn. kimlik kartı)</td></tr> <tr><td>Pnömatik PicoPump (veya benzeri)</td> <td>Dünya Hassas Aletler (WPI)</td> <td>SYS-PV820</td><td>Hassas çözelti enjeksiyonu için</td></tr><tr><td>Salin, steril</td><td>Mountainside Tıbbi Ekipman</td><td>H04888-10</td><td>ameliyat sırasında kaybedilen vücut sıvılarını yerine koymak için</td></tr><tr><td>Neşter sapı, #3</td><td>FST</td><td>10003-12</td><td> neşter tutun</td></tr><tr><td>Makas, Wagner</td><td>FST</td><td>14070-12</td><td>polipropilen sütür kesmek için</td></tr><tr><td>Yaylı makas, Vannas 2.5mm beraberindeki kutu ile</td><td>FST</td><td>15002-08</td><td>makas sadece dura'yı açmak için, vücudu yükseltmek için kutu</td></tr><tr><td>Koordinatlara</td><td></td><td></td><td></td> göre konumu ayarlamak için elektrot tutucuya bağlı stereotaktik mikromanipülatör Kopf 1760-61</tr><tr><td>Stereotaktik 'U' çerçeve düzeneği ve hücre içi taban plakası</td><td>Kopf</td><td>1730-B, 1711</td><td>ameliyat çerçevesi</td></tr><tr><td>Steril pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Puritan</td><td>25-806 10WC</td><td>cerrahi alandan kan emici</td></tr><tr><td>Steril fenestre olmayan örtüler</td><td>Steril cerrahi alan için</td><td>Henry Schein</td><td>9004686</td></tr><tr><td>Steril oftalmik merhem</td><td>Puralube</td><td>P1490</td><td>oküler yağlayıcı</td></tr><tr><td>Stimülatör & Hassas</td><td>çözelti enjeksiyonu için kontrollü ön hava sağlamak için</td>Boru <td>Çimi Tıbbi Aletler</td><td>S44</td></tr><tr><td>Cerrahi Bıçak #10</td><td>Med-Vet International</td> SKU: <td>Cilt insizyonu için</td><td>10SS</td></tr><tr><td>Cerrahi forseps, Cildi tutmak için ekstra ince Graefe</td><td>FST</td><td>11153-10</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi eldivenler</td><td>Med-Vet International</td><td></td><td>aseptik cerrahi</td></tr> <tr><td>için MSG2280ZCerrahi alanın</td><td>5X-40X büyütmesi için</td>cerrahi mikroskop <td>Leica</td><td>Model M320/ F12</td></tr><tr>Cildi <td>kapatmak için</td><td>Sütür 5-0 polipropilen</td><td>Oasis</td><td>MV-8661</td></tr><tr><td>Tegaderm</td><td>3M</td><td>3M ID 70200749250</td><td>steril bariyer sağlar</td></tr><tr><td>Üniversal Kelepçe ve stand direği</td><td>Kopf</td><td>1725</td><td>stereotaktik U çerçeveye ve hücre içi taban plakasına bağlı</td></tr><tr><td>Yara kancası hartman kanama durdurucular</td><td>FST</td><td>18200-09, 13003-10</td><td>kasları ayırmak ve cerrahi pencere sağlamak için</td></tr></tbody></table>

farelerde cisterna magna ile kaudal beyin sapı ve Üst servikal omuriliğin mikroenjekte edilmesine stereotaksik cerrahi yaklaşım

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Erişim daha sonra kafatasından delinmiş çapak delikleri aracılığıyla elde edilir. Bu standart yaklaşım, belirli anatomik zorluklar nedeniyle kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki hedefler için zorlayıcı olabilir, çünkü bu bölgeler kafatası yer işaretlerinden uzaktır ve belirsizliğe yol açar. Burada, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki ayrı ilgi bölgelerini hedeflemek için kullanılan cisterna magna aracılığıyla alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz. Sarnıç magna, oksipital kemikten atlasa (yani ikinci vertebral kemiğe) kadar uzanır, beyin omurilik sıvısı ile doldurulur ve dura mater ile kaplanır. Bu yaklaşım, anatomik engeller nedeniyle ulaşılması zor olan seçilmiş merkezi sinir sistemi (CNS) yapılarına yeniden üretilebilir bir erişim yolu sağlar. Ayrıca, beyin sapı işaretlerinin hedef bölgelere yakın bir yerde doğrudan görselleştirilmesine izin vererek, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki sınırlı ilgi alanlarına küçük enjeksiyon hacimleri verirken doğruluğu arttırır. Son olarak, bu yaklaşım, motor ve sensorimotor çalışmalar için önemli olabilecek beyincikten kaçınmak için bir fırsat sağlar.

Sarnıç magna yaklaşımı, standart stereotaksik yaklaşımlarla ulaşılması zor olan veya tutarsız hedeflemeye eğilimli olan kaudal beyin sapı ve üst servikal kord yapılarını hedeflemeyi mümkün kılar. Sarnıç magnasına ulaşma ameliyatı, cildin insizyonlarını, ince bir trapezius kası tabakasını ve dura materin açılmasını gerektirir ve bu nedenle fareler tarafından iyi tolere edilir. Standart stereotaksik yaklaşımlarda olduğu gibi birden fazla çapak deliğinin delinmesini gerektirmediğinden, birden fazla (uzunlamasına da...

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası kemiklerinden erişimi içerir ve kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Burada, beyin sapı yer işaretlerinin doğrudan görselleştirilmesine dayanan sarnıç magna aracılığıyla kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği hedeflemek için alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz.

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Bu protokol, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki ilgi alanlarına yeniden üretilebilir bir erişim yolu için adım adım kılavuzlar sağlar. Bu teknik, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki sınırlı ilgi alanlarına küçük enjeksiyon hacimleri verirken hassasiyeti arttırır. Bu teknik diğer hayvan modellerine uygulanmıştır ve uygulanabilir.Nöroloji doçenti ve VanderHorst Laboratuvarı'nın baş araştırmacısı Dr. Veronique VanderHorst, bu prosedürü gösterecek. Oksijen akışının burun konisine yönlendirildiğinden emin olun. Fareyi stereotaksik çerçeveye hareket ettirin ve burnu esnek bir burun konisine yerleştirin.Fareyi yalnızca kulak çubuklarını kullanarak stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Yağlayıcıyı gözlerin üzerine yerleştirin. Anteroflex, burnu manuel olarak yönlendirerek farenin kafasını 90 derecelik bir açıyla bükün.Bu konumu güvence altına almak için, fare adaptörünün kulak çubuğu sütunları arasına, kafatasının düz kısmı referans olarak hizmet edecek şekilde, sütunlara paralel olarak plastik bir bariyer yerleştirin. Isıtma yastığını farenin altına yerleştirin ve gövdeyi küçük bir kutuyla yükselterek boynun ve vücudun geri kalanının masaya paralel olarak yerleştirildiğinden emin olun. Vücudun altına bir örtü yerleştirin.Kilogram başına dört miligramlık tek bir doz enjekte edin Meloksikam, vücut ağırlığının gramı başına iki mikrolitrelik bir hacimde deri altından yavaş salınım. Cerrahi kesi bölgesini önce %70 alkollü bir hazırlama pediyle, daha sonra bir Betaine hazırlık pediyle ve daha sonra tekrar bir alkol hazırlama pedi ile temizleyin ve kurumasını bekleyin. Ellerinizi dezenfekte edin ve steril eldivenler giyin, ardından ameliyat bölgesine bir örtü yerleştirin.Ayak parmaklarını sıkıştırarak veya kornea refleksini kontrol ederek farenin uygun şekilde uyuşturulduğundan emin olun. Seviyeleri 2.0'da tutmak için izofluranı azaltın. Oksipital kemiğin kenarından omuzlara doğru tek bir yumuşak hareketle cerrahi 10 bıçakla bir ila 1,2 santimetrelik bir kesi yapın.Trapezius kasının orta hat raphesinde dikkatlice bir kesi yapın ve eşleştirilmiş longus kapitis kaslarını açığa çıkarın. Her iki retraktör kancasını da eşleştirilmiş longus kapitis kasları arasına yerleştirin, biri sola, diğeri sağa yöneliktir. Eşleştirilmiş longus kapitis kasının sol ve sağ karnını ayırmak için, orta hattın kolayca görülebildiği oksiputtan başlayarak künt laminektomi forsepslerini kullanın.Künt forsepsleri orta çizgideki oksiput kemiği boyunca sarnıç dura mater ile buluştuğu yere kadar yönlendirin ve ardından dura mater boyunca atlasa doğru devam edin. Retraktörleri yeniden konumlandırın ve hemostatları yeniden konumlandırarak gerginliği ayarlayın. Beyin sapı ve beyinciğin iyi bir görünümünü elde etmek için orta hatta kasları daha da ayırmak için künt laminektomi forsepslerini kullanın.Beyincik ve beyin sapı duranın altında görünene kadar yukarıdaki prosedürü gerektiği gibi tekrarlayın. Künt laminektomi forseps kullanarak, forsepsleri orta hattan beyin sapının net bir görünümü olana kadar lateral yönde hareket ettirerek küçük bağ dokusu iplikçiklerinin durasını temizleyin ve daha fazla yanal alan yaratın. Beyin sapının sırt yüzeyini, açık dura boyunca ayrıntılı işaretlerle görüntüleyin.Oksipital kemikten atlasa uzanan durayı yakalamak için açılı forsepsleri kullanın, ardından durada yaklaşık 0,5 ila 1,5 milimetrelik küçük bir açıklık yapmak için yay makasını kullanın. Dura açıldıktan sonra, fazla beyin omurilik sıvısını steril bir Q-ucu ile boşaltın. Merkezi kanalın dördüncü ventriküle açıldığı nokta olan obeks, standart anterior-posterior ve mediolateral sıfır noktasıdır.Stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı hedefe yerleştirin. Dorsal kolu dorsoventral sıfır noktasından oluşan dorsal yüzeye indirin. Ardından pipeti beyin sapına indirin ve çözeltiyi enjekte edin.Üç ila 50 nanolitre arasındaki hacimleri kullanırken iğne izinden kaçınmak için iğneyi enjeksiyondan sonra bir ila beş dakika yerinde bırakın. Ardından stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı kaldırın ve bunu birden fazla hedef için tekrarlayın. Kancaları cerrahi alandan dikkatlice çıkarın.Eşleştirilmiş longus kapitis kasları, sarnıç magnasını tamamen kaplayan nötr bir pozisyona geri dönecektir. Trapezius kasını ve orta hatta dura mater'i kapatmayın, çünkü dikişleri tutmak için çok kırılgandırlar. Cildi 3 naylon veya polipropilen dikişlerle kapatın.Sarnıç magna yaklaşımı, standart stereotaksik yaklaşımlarla ulaşılması zor olan veya tutarsız hedeflemeye eğilimli olan kaudal beyin sapı ve üst servikal kord yapılarının hedeflenmesini mümkün kılar. Farelerde, hipoglossal çekirdek, ventral solunum grubu ve kaudal beyin sapındaki bitişik retiküler oluşum gibi yapılar, hipoglossal çekirdek ve ventromedial medulla için burada gösterildiği gibi sarnıç magna yaklaşımı kullanılarak rutin olarak hedeflenmiştir. Sarnıç magna yaklaşımının standart yaklaşıma göre doğruluğunu belirlemek için, ventral ve dorsal bölgeler için anteroposterior, mediolateral ve dorsoventral düzlemlerde amaçlanan ve gerçek hedef bölgeler arasındaki mesafe ölçüldü.Sonuçlar, anteroposterior, mediolateral ve dorsoventral düzlemlerde standart yaklaşıma kıyasla önemli ölçüde daha küçük hatalar göstermekte ve bu hedefler için sarnıç magna yaklaşımının gelişmiş doğruluğunu vurgulamaktadır. Bu protokolü denerken, başın anterofleksiyonunun ve vücudun yükselmesinin tarif edildiği gibi yapıldığından emin olmak çok önemlidir. Daha sonra, kası veya dura materini manipüle etmeden önce önemli noktaları tanımak önemlidir.Bu işaretler tanınmazsa veya kaybolursa, yönlendirilmiş kalmak ve prosedürü amaçlandığı gibi yürütmek zor olacaktır. Bu teknik, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordon içindeki fonksiyonel anatomik organizasyon ile ilgili kavramsal soruların ele alınmasına yardımcı oldu.

stereotaxic-surgical-approach-to-microinject-caudal-brainstem-upper

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Joshi, K., et al. Farelerde kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği Cisterna magna yoluyla mikroenjekte etmek için stereotaksik cerrahi yaklaşım. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, beyin sapı ve üst omuriliğe hedefli iletim için cisterna magna stereotaksik yaklaşımı göstermektedir. Bu yaklaşım, beyin omurilik sıvısı dolu cisterna magna'ya erişerek, standart stereotaksik yöntemler kullanılarak ulaşılması zor olan bölgelere hassas enjeksiyonlar yapılmasını sağlar.

Bir fare modelinde terapötik uygulama için stereotaksik Cisterna Magna yaklaşımı

Kaynak: Porlan, E., et al. Nöral Kök Hücre Özerk ve Özerk Olmayan Etkilerin Analizi için Yetişkin Fare V-SVZ'de Hücrelerin Kararlı ve Verimli Genetik Modifikasyonu. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, bir fare modelinde virüs taşıyan bir terapötik genin stereotaksik enjeksiyonu yoluyla ventriküler-subventriküler bölgedeki (V-SVZ) nöral kök hücrelerin (NSC'ler) stabil genetik modifikasyonunu göstermektedir. Virüs NSC'lere girer, ters transkripsiyona uğrar, genoma entegre olur ve nöroterapötik...

Bir fare modelinde stabil genetik modifikasyon için virüslerin stereotaksik enjeksiyonu

Kaynak: Zamboni, M., et al., İntrasisternal Enjeksiyon Yoluyla Leptomeningeal Hücre Modifikasyonunun İndüksiyonu. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magnasına bir indükleyici ilacın verilmesi prosedürünü göstermektedir. Enjeksiyon, floresan görüntüleme ile onaylanan, beyin omurilik sıvısı yoluyla erişilebilen beyin yüzey hücrelerinde seçici olarak floresan işaretleyici ekspresyonunu indükler.

Cisterna Magna Enjeksiyonu ile Bir Fare Modelinde Hedefe Yönelik İlaç Verilmesi

Kaynak: Xavier, A. L. R., et al. Kemirgenlerin Sarnıç Magna'sına Kanül İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magna'sına bir kanül yerleştirme prosedürünü göstermektedir. Teknik, iğneye monte edilmiş bir kanülün duradan ters üçgen cisterna magna'ya yönlendirilmesini ve beyin omurilik sıvısına hedeflenen iletim için sabitlenmesini içerir.

Bir Fare Modelinde Cisterna Magna'ya Kanül İmplantasyonu

Bu videoda, insan kaynaklı tümör hücrelerini bir farenin beyninin cisterna magnasına verme prosedürünü açıklıyoruz. Ortotopik fare modeli, kanserin kraniyal meninkslere metastatik yayılımını incelemek için kullanılabilir.

Cerrahi Sarnıç Magna Enjeksiyonu: Murin Modelinin Tümör Hücrelerini Doğrudan Merkezi Sinir Sistemine Uygulamak İçin Bir Yöntem

Kaynak: Fricano-Kugler, C. J., et al. Stereotaksik enjeksiyon yoluyla yüksek titreli CRISPR retro ve Lentivirüslerin tasarımı, paketlenmesi ve teslimi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, fare beyninde hassas nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyonu göstermektedir. Protokol, dentat girusa doğru virüs iletimini sağlayarak, nöral devreleri, gen fonksiyonunu ve hastalık mekanizmalarını in vivo olarak incelemek için floresan etiketleme ve CRISPR aracılı gen nakavtını mümkün kılar.

Fare beyninde hedeflenen nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyon

Viral vektörler hedefli gen manipülasyonu için izin verir. Bu arka boynuzu içine, bir viral vektör stereotaksik enjeksiyon, birincil somatosensoriyel afferentleri ve merkezi sinir sistemi nöronları arasındaki sinaptik bir temas önemli yer kullanılarak, koşullu gen ekspresyonu ya da fare omurilik ablasyonu için bir yöntem göstermektedir.

Fare Omurilik Koşullu Gen Manipülasyon için bir Viral Vector Stereotaksik Enjeksiyon

Burada Sisterna magna cannulation (CMc), minimal invaziv bir şekilde izleyiciler, yüzeyler ve sinyal molekülleri beyin-omurilik sıvısı (BOS) sunmak için gerçekleştirmek için bir protokol açıklayın. Farklı görüntüleme yöntemleri ile birlikte, CMc glymphatic sistemi ve CSF dynamics değerlendirme yanı sıra çeşitli bileşiklerin beyin çapında teslim sağlar.

Kanül implantasyon Sisterna Magna kemirgenler içine

Miniskop in vivo kalsiyum görüntüleme, serbestçe davranan farelerde nöronal dinamikleri ve mikro devreleri incelemek için güçlü bir tekniktir. Bu protokol, bir miniskop kullanarak iyi in vivo kalsiyum görüntüleme elde etmek için beyin ameliyatları yapmayı açıklar.

Derin Beyin In Vivo Kalsiyum Görüntüleme için Stereotaksik Viral Enjeksiyon ve Degrade İndeks Lens İmplantasyonu

Mevcut protokol, boyalar ve donmuş kesitler kullanarak viral izleme yapmadan önce stereotaksik enjeksiyon koordinatlarının doğrulama adımını hızlandırmak için pratik bir stratejiyi açıklamaktadır.

Kriyoseksiyon Yoluyla Stereotaksik Enjeksiyon Koordinatlarının Ön Doğrulaması

Protokol, farelerde leptomeningeal metastazı sağlam bir şekilde indükleyen, travmayı ve ekstrakraniyal tümör yükünü azaltan, tümör hücrelerinin perkütan ponksiyon yolu yoluyla cisterna magna'ya enjekte edilmesi için bir yöntemi tanımlar.

Farelerde Leptomeningeal Metastaz Çalışmaları için Minimal İnvaziv Sarnıç Magna Enjeksiyon Modeli

Öğrenin, farelerde kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliğe stereotaksik cerrahi ile mikroenjeksiyon yapma tekniğini. Bu yöntem, hassas hedefleme ve minimal invaziv erişim sağlar.

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Daha fazla video keşfet