Name: Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Öğrenin farelerde mekanik çatışmadan kaçınma testiyle ağrı duyarlılığını ölçme yöntemini. Bu davranışsal analiz tekniği, ağrı koşullarının motivasyonel durumunu değerlendirerek klinik öncesi araştırmaları geliştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

GM, NDSEG Graduate Fellowship tarafından desteklenmektedir. VLT, NIH NIGMS hibe #GM137906 ve Rita Allen Vakfı tarafından desteklenmektedir. AJS, Savunma Bakanlığı hibeleri W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 ve Rita Allen Vakfı tarafından desteklenmektedir. Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi'nden Dr. Alexxai Kravitz'e, oda 2 kat ve prob plakası için 3D yazıcı dosyalarını tasarladığı ve serbestçe kullanılabilir hale getirdiği için minnettarız.

Farelerin kullanımını içeren tüm deneyler ve burada izlenen prosedürler, MD Anderson Kanser Merkezi ve Stanford Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komiteleri tarafından, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na sıkı sıkıya bağlı kalınarak onaylanmıştır.
1. MCA inşaatı
<ol><li>Aşağıdaki boyutlarda yapı haznesi 1: 125 mm x 125 mm x 125 mm (genişlik x derinlik x yükseklik) yan duvarlar, zemin, tavan için kullanılan opak beyazdan 3 mm kalınlığında akrilik. Öne bakan duvar için 3 mm kalınlığında şeffaf bir akrilik kullanın. Özel akrilik yapıştırıcı kullanarak her tarafı önceden birbirine yapıştırın. DİKKAT: Akrilik yapıştırıcı tehlikeli madde olarak kabul edilir (yanıcı, buhara zararlı, yutulduğunda zararlı olabilir, cildi veya gözleri tahriş edebilir). Bu tür yapıştırıcılar yalnızca üreticinin talimatlarına uygun olarak kullanılmalıdır (yani, iyi havalandırılan bir alanda uygun KKD ile).</li>
	<li>Oda 1'in kapağını bir menteşe ile takın, böylece fareler odaya kolayca yerleştirilebilir ve odadan alınabilir. ~ 4800 lüks aydınlatma sağlamak için kapağın iç yüzeyine kendinden yapışkanlı ışık yayan diyot (LED) bandı takın.</li>
	<li>Opak bir akrilik levhayı yerine ve konumundan kaydırarak MCA'nın geri kalanından 1 numaralı odayı kapatın.</li>
	<li>MCA test odasını, oda 2'yi, her tarafta yarı saydam koyu kırmızı akrilikten (3 mm kalınlığında) imal edilmiş, üstte menteşeli bir kapak bulunan 270 mm uzunluğunda aydınlatılmamış bir oda olarak inşa edin. 2 no'lu odanın tabanına, içinden 0,5 mm çapında uçlara sahip bir dizi künt probun (örneğin, körelmiş harita pimleri) çıkıntı yapabileceği 2 mm'lik deliklerden oluşan 13 x 31 ızgara yerleştirin. NOT: 120 kumlu zımpara kağıdı bloğu veya benzeri bir yapıya sahip kör pimler. Sporisidal dezenfektan ile dezenfekte edilmeden önce deterjanla ılık suda temizleyin.</li>
	<li>Prob taban plakasının altına ilave akrilik levhalar yerleştirerek probların yüksekliğini ayarlayın (Şekil 1). Bu yaklaşımı kullanarak cihazı üç ayarla yapılandırın: 0 mm, 2 mm ve 5 mm prob yüksekliği.</li>
	<li>Körelmiş harita pimlerine veya benzer malzemelere alternatif olarak, oda 2'nin zeminini ve prob plakasını yazdırmak için 3D yazıcı dosyalarını kullanın (bkz. Ek Dosya 1: mekanik problara atıfta bulunan SpikeBed-MCA.stl ve Ek Dosya 2: oda 2'nin tabanını oluşturan MCA_baseplate.stl). NOT: 3D baskı mevcut değilse, cihazın duvarlarını inşa etmek için kullanılan aynı akrilik yapıştırıcıyı kullanarak pimleri akrilik bir tabakaya sabitleyin.</li>
	<li>Naylon 12 plastik veya benzeri gibi yıkanabilir ve biyouyumlu bir malzemeyle yazdırın (önerilir).</li>
	<li>Aşağıdaki boyutlarda yapı haznesi 3: 125 mm x 125 mm x 125 mm, ışıksız yarı saydam koyu kırmızı akrilik kutu olarak (her tarafta), oda 1'in karşı ucuna yerleştirilmiştir. Odaya, oda 1 ve 2'ye benzer şekilde menteşeli bir kapak yerleştirin. Bu oda, oda 2'deki mekanik problardan karanlık bir kaçış alanı görevi görür.</li>
</ol>2. Fare MCA alışkanlığı ve testi
<ol><li>Hayvanlarda davranışsal sonuçları içeren tüm deneylerde olduğu gibi, potansiyel önyargıyı en aza indirmek için uygun randomizasyonu ve körleşmeyi gözlemleyin. NOT: Temsili sonuçlar 8-12 haftalık erkek ve dişi C57BL/6J fareler kullanılarak elde edilmiştir (Jackson Laboratuvarları suş numarası 000664). Fareler, kafes başına 5'e kadar, yiyecek ve su ad libitumuna erişim ve 07: 00 saat ila 19: 00 saat ışık döngüsü ile sosyal olarak barındırıldı. MCA, ışık döneminde, saat 09:00 ile 12:00 arasında gerçekleşti.</li>
	<li>Temel testlerin planlanmadan bir gün önce, tüm cihazın sosyal keşfini kolaylaştırmak için fareleri kafes arkadaşlarıyla birlikte 5 dakika (minimum) ila 15 dakika (maksimum) boyunca MCA ünitesine alıştırın.</li>
	<li>İşlem boyunca, oda 1'deki LED'lerin kapatıldığından, oda 1 ve 2 arasındaki bariyerin açık bırakıldığından ve probların sıfır yüksekliğe ayarlandığından (yani, oda 2'nin tabanından çıkıntı yapmadığından) emin olun.</li>
	<li>Çalışma negatif kontrol hayvanlarını içeriyorsa (yani, sahte cerrahi veya araç enjeksiyon kontrolleri) farelerin temel bir testini (isteğe bağlı) gerçekleştirin. İstenirse, oda 2'ye asla geçmeyen yaralanmamış aykırı değerleri hariç tutmak için bir taban çizgisi testi kullanın, ancak bunun gerekli olduğu kanıtlanmamıştır. Kullanılıyorsa, hariç tutulma için tüm ölçütleri ve hariç tutulan fare sayısını bildirin.<ol>
<li>Teste başlamadan önce, tüm MCA cihazının yana bakan görünümüyle bir tripoda 1080p çekim yapabilen bir video kamera kurun. Görüş alanını, MCA kaydedilen görüntüyü dolduracak şekilde ayarlayın.</li>
		<li>Kayıt başladıktan sonra, videonun başlangıcını hayvanın test çalışmasıyla ilgili tanımlayıcı bilgilerle (ör. fare kimliği, prob yüksekliği, tarih, saat noktası vb.) etiketlemek için kameranın görüş alanında elde taşınan bir kuru silme panosu tutun.</li>
		<li>İlk çalıştırma için prob yüksekliğini sıfıra ayarlayın. Test edilecek fareyi ev kafesinden bariyer kapısı yerinde olacak şekilde oda 1'e aktarın. Kaydedilen çekimde görünen bir zamanlayıcı başlatın. NOT: Zamanlayıcı, testin farklı bölümleri arasındaki aralıkların çalıştırmalar arasında tutarlı olmasını sağlar.</li>
		<li>10 sn sonra, oda 1 LED'lerini açın. Fare 20 saniye boyunca yanan odada kaldıktan sonra, 1 ve 2 numaralı odalar arasındaki bariyeri geri çekin.</li>
		<li>Hayvanı 2 dakika boyunca gözlemleyin. Test devam ederken gecikme sürelerini ve/veya bekleme sürelerini bir kronometre ile ölçün. Alternatif olarak, test tamamlandıktan sonra video görüntüleri analiz edilebilir. NOT: Verim ve engelleyici uyaranlara uzun süre maruz kalmaktan kaçınma nedenleriyle, kesinti 2 dakika olarak ayarlandı.</li>
		<li>Tanımlanmış birkaç yararlı sonuçtan birini veya birkaçını ölçün (aşağıya bakın; Şekil 1). Belirli bir deney düzeneğinde davranışın hangi yönlerinin farklı olduğunu belirlemek için teste başlarken 5 sonuç ölçütünün tümünü analiz etmeniz önerilir.<ol>
<li>Seçenek I: Oda 2'ye ilk girişteki gecikmeyi kaydedin. Seçenek II: Oda 2'nin yarısından fazlasını geçme gecikmesini kaydedin. Seçenek III: Toplam bekleme süresini 2 numaralı odaya kaydedin. Seçenek IV: Oda 3'e ulaşmak için gecikmeyi kaydedin (kaçış). Seçenek V: Seçenek II'ye benzer şekilde, her odadaki toplam bekleme süresini 2 dakika içinde kaydedin ve bunları oranlara dönüştürün. NOT: Her deney benzersiz olduğundan ve hastalık modeline özgü biyolojik faktörlerden ve davranış değişikliklerinden etkilenebileceğinden, araştırmacılar bu ve diğer önlemleri kendi ellerinde deneyebilirler.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Test tamamlandıktan sonra, fareyi ev kafesine geri getirin, MCA odalarını% 70 etanol ile temizleyin ve tamamen kurumasını bekleyin. NOT: Fekal boli genellikle etanol/dezenfektan önce kağıt havlularla odadan nispeten kolay bir şekilde temizlenebilir. Daha kapsamlı temizlik gerekli hale gelirse, oda 2 ve 3 sökülebilir ve ılık, sabunlu suya batırılabilir.</li>
		<li>Tüm fareleri prob yüksekliği sıfıra ayarlanmış bir kohortta çalıştırdıktan sonra, mekanik prob taban plakasının altına 3 mm'lik bir akrilik levha yerleştirin ve 2 mm'lik bir prob yüksekliği ile 2.4.2 ila 2.4.7 arasındaki adımları tekrarlayın.</li>
		<li>Prob yüksekliği 2 mm'ye ayarlanmış tüm fareleri çalıştırdıktan sonra, prob taban plakasının altına ikinci bir 3 mm akrilik tabaka yerleştirin ve prob yüksekliği 5 mm olan 2.4.2 ila 2.4.7 arasındaki adımları tekrarlayın. NOT: 8 fareden oluşan bir grup, bu yaklaşım kullanılarak yaklaşık 2 saat içinde test edilebilir. Daha kesin ilaç sonrası zamanlama gerekiyorsa daha küçük grup boyutları kullanın (örneğin, bir ilaç zamanı kursu deneyi için).</li>
		<li>Bir test seansının sonunda bir dezenfektan ile son bir temizlik yapın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ağrıya aşırı duyarlılığı indükledikten sonra ve / veya ilaç tedavisi ile testi tekrarlayın.</li>
	<li>Her farenin performansını, başlangıçta ağrı indüklendikten sonraki performanslarıyla karşılaştırın. Farmakolojik bir müdahalenin etkisini, araçla tedavi edilen hayvanları ilaçla tedavi edilen hayvanlarla aynı zaman noktasında karşılaştırarak değerlendirin.</li>
	<li>Hayvanlar istenen sonuç ölçüsünü yerine getirmeden 2 dakikalık kesime ulaşırsa ve sürekli olmayan verilerle sonuçlanırsa, parametrik olmayan istatistiksel analiz (örneğin, Mann Whitney U Testi) gerçekleştirin.</li>
</ol>

<ol><li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li>
<li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat%3A+a+prospective+multicentre+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li>
<li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li>
<li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Conflict+System%3A+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164(2016).</li>
<li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53(2018).</li>
<li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li>
<li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li>
<li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape%2Favoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li>
<li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2%2C3+dioxygenase%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li>
<li>Hascoët, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+light-dark+paradigm%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neuropsychopharmacology+%26+Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology & Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li>
<li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li>
<li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain%3A+A+Focus+on+Sex+Differences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li>
<li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li>
<li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice%2C+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Reports%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651(2018).</li>
<li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System%3A+Cognitive-Motivational+Aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromodulation%22%5BJournal%5D)">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li>
</ol>

Yazarların açıklanacak ilgili çıkar çatışmaları yoktur.

Tüm davranış testlerinde olduğu gibi, hayvanların tedavisine uygun kullanım, randomizasyon ve körleştirme baştan sona esastır. Karmaşık davranışlara ve karar vermeye yönelik çok faktörlü girdiler göz önüne alındığında, hayvanların sıkıntıyı en aza indirirken mümkün olduğunca tutarlı bir şekilde ele alınması, alışkanlık haline getirilmesi ve test edilmesi zorunludur. Fare yerleştirme zamanlamasını oda 1'e yeniden üretmek, LED ışıklarını açmak ve bariyeri kaldırmak için de özen gösterilmelidir, çünkü buradaki farklılıklar ...

Ağrı, duyusal ve duygusal bileşenlerle ilgili karmaşık bir deneyimdir. Ağrı algısı eşiğinde bir azalma ve termal ve / veya mekanik uyaranlara aşırı duyarlılık, uyaranla uyarılan ağrı davranış testlerinin yakalayabileceği bu deneyimin temel özellikleridir (Hargreaves'in ısı duyarlılığı testi ve von Frey mekanik duyarlılık testi gibi)1,2. Bu tür testler sağlam ve tekrarlanabilir sonuçlar vermesine rağmen, algılanan zararlı bir uyarandan refleksif geri çekilmeye güvenmeleri ile sınırlıdır. Bu, yalnızca bu testlere devam eden ağrı araştırmalarına güvenmeyi sorgulamıştır. Bu amaçla, ağrı araştırmacıları birkaç yıldır ağrının duygusal ve / veya motivasyonel bileşenlerinin daha fazlasını yakalamak için kemirgen ağrı modellerinde kullanılmak üzere alternatif / tamamlayıcı davranış testlerini araştırmaktadır. Bu uyarılmamış, gönüllü veya refleksif olmayan önlemler (örneğin, tekerlek koşma, yuvalama aktivitesi, şartlı yer tercihi 3,4,5), klinik öncesi ağrı araştırmalarının çevrilebilirliğini geliştirmek amacıyla uygulanmaktadır.
Mekanik çatışmadan kaçınma (MCA) testi ilk olarak Harte ve ark. tarafından 2016yılında 6, ağırlıklı olarak sıçanlarda 7,8'de kullanılır ve daha önceki bir yaklaşımın bir modifikasyonunu temsil eder - yerden kaçınma paradigması. Bu yaklaşımda, arka pençenin zararlı bir uyaranı, hayvanın bu tür bir uyarımdan kaçmak / kaçınmak için amaçlı davranışlarını yönlendirmek için başka türlü arzu edilen (karanlık) bir odada gerçekleştirilir 9,10. MCA testi, arka pençenin bir gözlemci tarafından manuel olarak zararlı bir şekilde uyarılmasına güvenmek yerine, fareleri engelleyici bir ortamdan kaçmak ve karanlık odaya ulaşmak için potansiyel olarak zararlı bir uyaranı müzakere etmeye zorlar. Tahlil testine adını veren çatışma / kaçınma şu iki rakip motivasyondan kaynaklanmaktadır: parlak aydınlatılmış alanlardan kaçmak ve pençelerin zararlı uyarılmasından kaçınmak. MCA testi ayrıca, ağrı kesici çevresel ipuçlarıyla eşleştirilmesinin, ağrı kesici / ödüllendirici bağlam11 için bir tercihi yansıtan davranış değişikliklerini yönlendirdiği şartlı yer tercihi testi ile özellikleri de paylaşır.
Temel olarak konuşursak, tüm bu analizler benzer bir yaklaşımı paylaşır: bir hayvanın bir aversif ortamı diğerine tercih etmesinde, duygusal / motivasyonel durumlarının bir göstergesi olarak bir kayma kullanmak. MCA testi, parlak bir şekilde aydınlatılmış bir odadan ve ardından ayarlanabilir yükseklik problarına sahip karanlık bir orta odadan ve herhangi bir engelleyici uyaran içermeyen karanlık bir üçüncü odadan oluşan 3 odalı bir paradigmadır. Yaralanmamış bir fare, kemirgenlerin parlak ışığa doğuştan gelen isteksizliği göz önüne alındığında, tipik olarak karanlık bir odaya kaçmak için motive edilir12. Bu örnekte, parlak aydınlatılmış bir ortamdan kaçmak için doğal motivasyon, yalnızca karanlık ortamda meydana gelen arka pençe stimülasyonuyla (ayarlanabilir yükseklik probları) karşılaşma konusundaki isteksizliğin üstesinden gelir. Buna karşılık, ağrı yaşayan bir fare (örneğin iltihaplanma veya nöropati nedeniyle), parlak aydınlatılmış ortamda daha fazla zaman geçirmeyi tercih edebilir, çünkü devam eden dokunsal aşırı duyarlılık ortamında mekanik probların hoş olmayan dokunsal deneyiminden kaçınmak için motivasyon vardır.
Bu makalede, MCA testinin değiştirilmiş bir sürümü açıklanır. Orijinal yöntemi (sıçanlardagerçekleştirilen 6) farelerde kullanılmak üzere uyarladık. Ayrıca, veri toplamayı kolaylaştırmak için test edilen prob yüksekliklerinin sayısını altıdan üçe (zemin yüksekliğinden 0, 2 ve 5 mm yüksek) düşürdük. Bu yaklaşım çoklu ağrı modellerinde test edilmiş ve bilinen analjeziklerle doğrulanmıştır, bu da ağrı aşırı duyarlılığının ve / veya ilişkili duygusal ve motivasyonel değişikliklerin davranıştaki bu değişiklikleri yönlendirdiğini göstermektedir. Bu yaklaşımın uygulanması nispeten hızlıdır ve diğer refleksif olmayan önlemlerle karşılaştırıldığında uyarlanabilir, bu da günlerce süren alışkanlık ve eğitim 1,2 gerektirebilir. Diğer ağrı ölçümleriyle uyum içinde, MCA ağrının duygusal ve motivasyonel yönleri hakkında değerli bilgiler üretebilir.

<table><tbody><tr><td>32.8ft 3000K-6000K Ayarlanabilir Beyaz LED Şerit Işıklar, 600 SMD 2835 LED'li Kısılabilir Süper Parlak LED Şerit Işıklar</td><td>Lepro</td><td>SKU: 410087-DWW-US</td><td>Aydınlatma odası için 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td></tr><tr><td>3D baskılı 'başak yatak' ve 'oda 2 kat'Shapeways</td><td></td> N<td>/A</td><td>İsteğe bağlı, körelmiş harita pimlerine alternatif olarak mekanik problar için.</td></tr><tr><td>% 70 etanol</td><td>Çeşitli</td><td>N / A</td><td>Fareler arasındaki MCA'yı temizlemek için.</td></tr><tr><td>Akrily-Hinge 2</td><td>TAP Plastics</td><td>N/A</td>, <td>hazne kapaklarını arka duvarlara takmak için. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td></tr><tr><td>Chemcast Dökme Akrilik Levha, Şeffaf</td><td>TAP Plastik</td><td>Yok</td><td>3 mm kalınlığında. Oda 1'in ön duvarı için. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td></tr><tr><td>Chemcast Döküm Şeffaf Renkli Akrilik, Şeffaf Koyu Kırmızı -% 50</td> <td>TAP Plastik</td><td>Yok</td><td>3mm kalınlığında. % 50 ışık geçirgenliği. 2 ve 3 numaralı odaların duvarları ve kapakları için. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td></tr><tr><td>Chemcast Yarı Saydam & Opak Renkli Dökme Akrilik, İşaret Opak Beyaz -% 0.1</td> <td>TAP Plastik</td><td>Yok</td><td>3mm kalınlığında. Yan duvarlar ve hazne 1'in kapağı için. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td></tr><tr><td>Dezenfektan (örneğin Quatricide)</td><td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td><td>65020F</td><td>Bir test oturumunun sonunda MCA'yı dezenfekte etmek için.</td></tr><tr><td>Kuru silinebilir işaretleyiciler ve pano</td><td>Çeşitli</td><td>Yok</td><td>Video çekimlerinin başına deneysel bilgiler eklemek için.</td></tr><tr><td>Harita pimleri</td><td>Çeşitli</td><td>N/A</td><td>Mekanik problar için isteğe bağlı. Kullanmadan önce keskin noktaları köreltmek için zımpara kağıdı kullanın. 3D baskılı parçaların yerine kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Kağıt havlular</td><td>Çeşitli</td><td>N/A</td><td>MCA'yı temizlemek/dezenfekte etmek için.</td></tr><tr><td>SCIGRIP Weld-On # 3 Akrilik Çimento</td><td>TAP Plastics</td><td>N/A</td><td>Akrilik levhaları odalara monte etmek ve menteşeleri sabitlemek için. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td></tr><tr><td>Kronometre</td><td>Çeşitli</td><td>N/A</td><td>Kaçış gecikmelerini/bekleme sürelerini gerçek zamanlı olarak veya kaydedilmiş videodan kaydetmek için.</td></tr><tr><td>Zamanlayıcı</td><td>Çeşitli N</td><td>/ A</td><td>LED'in açılmasını sağlamak için, bariyerin çıkarılması ve testin tamamlanması tutarlı bir şekilde zamanlanır.</td></tr><tr><td>Video kamera</td><td>Çeşitli</td><td>HDRCX405 Handycam Video Kamera</td><td>MCA cihazında fare davranışını kaydetmek için. 1080p çözünürlüğe sahip herhangi bir tüketici sınıfı video kamera ile değiştirilebilir.</td></tr><tr><td>Tripod</td><td>Famall</td><td>N/A</td><td>MCA çekimi kaydetmek için kamerayı tezgah yüksekliğinde tutabilen herhangi bir tripod kabul edilebilir.</td></tr></tbody></table>

farelerde ağrı davranışını Ölçmek için mekanik Çatışmadan kaçınma testi

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Ağrı hem duyusal (nosiseptif) hem de duygusal (hoş olmayan) boyutlardan oluşur. Preklinik modellerde, ağrı geleneksel olarak ağrının nosiseptif bileşeni ile ilgili çıkarımlara izin veren, ancak ağrının duygusal veya motivasyonel bileşeni hakkında çok az bilgi sağlayan refleksif testler kullanılarak değerlendirilmiştir. Bu nedenle, ağrının bu bileşenlerini yakalayan testler geliştirmek translasyonel olarak önemlidir. Bu nedenle, araştırmacıların ağrı algısını bu düzeyde incelemek için refleksif olmayan davranışsal testler kullanmaları gerekir. Mekanik çatışmadan kaçınma (MCA), 3 odacıklı bir paradigmada zararlı bir mekanik uyarana motivasyonel tepkileri incelemek için kurulmuş gönüllü bir refleksif olmayan davranış testidir. Bir farenin konum tercihindeki bir değişiklik, rakip zararlı uyaranlarla karşı karşıya kaldığında, pençelerin dokunsal uyarımına karşı parlak ışığın algılanan tatsızlığını çıkarmak için kullanılır. Bu protokol, ağrı araştırmacılarının çeşitli fare ağrısı modellerinde duygusal-motivasyonel tepkileri anlamak için kullanabilecekleri MCA testinin değiştirilmiş bir versiyonunu özetlemektedir. Burada özel olarak tanımlanmamış olsa da, örnek MCA verilerimiz, MCA prosedürünü göstermek için ağrı modelleri olarak intraplantar tam Freund adjuvanını (CFA), korunmuş sinir hasarını (SNI) ve bir kırık / döküm modelini kullanır.

MCA testi, mekanik olarak farklı birkaç fare ağrısı modeliyle başarıyla kullanılmıştır. Şekil 2, seçilen sonuç ölçüsünün oda 2'nin orta noktasını geçtiği verileri göstermektedir (Şekil 2A). Yarım nokta ve oda 3'e kaçış kullanılarak elde edilen veriler çok benzerdir, 5 mm prob yüksekliği13 olan nöropatik ağrının korunmuş sinir hasarı (SNI) modelinde oda 3 kaçışı için ~ 40 s, yarı yol için ~ 40 sn ve 45 s'dir.
CF...

Mekanik çatışmadan kaçınma testi, farelerde ağrı duyarlılığının refleksif olmayan bir okuması olarak kullanılır ve çeşitli fare ağrısı modellerinde duygusal-motivasyonel tepkileri daha iyi anlamak için kullanılabilir.

Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Bu yöntem, farklı ağrı koşulları altında hayvanların etkili veya motivasyonel durumu hakkındaki soruları cevaplamaya yardımcı olabilir. Klinik öncesi araştırmaların çevirisini geliştirmede önemli bir adımdır. Bu tekniğin temel avantajı, nispeten hızlı ve kolay bir şekilde gerçekleştirilmesi, ancak yine de ağrıyla ilgili davranışları etkileyen karmaşık motivasyonları değerlendirmesidir.Birinci odanın yan duvarlarını, zeminini ve tavanını opak beyaz üç milimetre kalınlığında bir akrilik kullanarak inşa ederek başlayın. Ön cepheye bakan duvar için, üç milimetre kalınlığında net bir akrilik kullanın. Birinci odanın kapağını bir menteşe ile takın, böylece fareler odaya kolayca yerleştirilebilir ve odadan alınabilir.Ardından, yaklaşık 4.800 lüks aydınlatma sağlamak için kendinden yapışkanlı ışık yayan diyot bandını kapağın iç yüzeyine takın. MCA cihazının geri kalanından odacığı kapatmak için opak bir akrilik tabakayı yerine ve dışına kaydırın. Daha sonra, 270 milimetre uzunluğunda aydınlatılmamış bir oda olan MCA test odasını, üstte menteşeli bir kapakla her tarafta yarı saydam koyu kırmızı akrilik kullanarak inşa edin.Ardından, odanın tabanına, 0,5 milimetre çapında uçlara sahip bir dizi künt probun çıkıntı yapabileceği iki milimetre delikli 13 x 31 ızgara yerleştirin. Prob taban plakasının altına ek akrilik levhalar yerleştirerek probların yüksekliğini ayarlayın. Bu yaklaşımı kullanarak cihazı sıfır, iki ve beş milimetre prob yükseklikleriyle yapılandırın.Körelmiş harita pimlerine veya benzeri malzemelere alternatif olarak, ikinci odanın zeminini ve prob plakasını naylon 12 plastik gibi yıkanabilir ve biyouyumlu bir malzemeyle yazdırmak için 3D yazıcı dosyalarını kullanın. Son olarak, bir ve iki numaralı odalara benzer menteşeli bir kapakla her tarafta yarı saydam koyu kırmızı akrilik kullanarak karanlık bir oda üç inşa edin. İkinci odadaki mekanik problardan karanlık bir kaçış alanı olarak hizmet etmesi için birinci odanın karşı ucuna yerleştirin.Temel testi planlamadan bir gün önce, tüm cihazın sosyal keşfini kolaylaştırmak için fareleri kafes arkadaşlarıyla 5 ila 15 dakika boyunca MCA ünitesine alıştırmak. Birinci odadaki LED'lerin kapatıldığından, bir ve iki oda arasındaki bariyerin açık tutulduğundan ve probların ikinci odanın tabanından çıkıntı yapmadığından emin olun. Ardından, tüm MCA cihazının yandan bakan görünümüyle bir tripoda 1080 piksel çekim yapabilen bir video kamera kurun.Görüş alanını, MCA kaydedilen görüntüyü dolduracak şekilde ayarlayın. Kayıt başladıktan sonra, videonun başlangıcını hayvanın test çalışmasıyla ilgili tanımlayıcı bilgilerle etiketlemek için kameranın saha görünümünde elde taşınan kuru silme tahtasını tutun. İlk çalıştırma için, prob yüksekliğini sıfıra ayarlayın ve test edilecek fareyi ev kafesinden bariyer kapısı yerinde olacak şekilde bir odaya aktarın.Kaydedilen çekimde görünen bir zamanlayıcı başlatın. 10 saniye sonra, odayı bir LED'i açın. Fare 20 saniye boyunca yanan odada kaldıktan sonra, bir ve iki oda arasındaki bariyeri geri çekin.Hayvanı iki dakika boyunca gözlemleyin ve test devam ederken gecikmeleri veya bekleme sürelerini bir kronometre ile ölçün. İkinci odaya ilk girişteki gecikmeyi, ikinci odanın yarısından fazlasını geçme gecikmesini, ikinci odadaki toplam bekleme süresini, üçüncü odaya ulaşma gecikmesini ve her odadaki toplam bekleme süresini iki dakika içinde kaydedin ve bunları oranlara dönüştürün. Test tamamlandıktan sonra, fareyi ev kafesine geri getirin.MCA odalarını% 70 etanol ile temizleyin ve tamamen kurumasını bekleyin. Prob yüksekliği sıfıra ayarlanmış olarak kohorttaki tüm fareleri çalıştırdıktan sonra, mekanik prob taban plakasının altına üç milimetrelik bir akrilik levha yerleştirin ve çalıştırmayı iki milimetrelik bir prob yüksekliği ile tekrarlayın. Prob yüksekliği iki milimetreye ayarlanmış tüm fareleri çalıştırdıktan sonra, prob taban plakasının altına üç milimetre daha akrilik levha yerleştirin ve çalıştırmayı beş milimetrelik bir prob yüksekliği ile tekrarlayın.Test seansının sonunda bir dezenfektan ile son bir temizlik yapın. Freund'un adjuvan kaynaklı enflamatuar ağrı modelinin tamamında, bir salin enjeksiyonu, başlangıçla karşılaştırıldığında kaçış gecikmesini değiştirmez. Adjuvan ile enjekte edilen fareler, enjeksiyondan dört gün sonra kaçış gecikmesinde önemli bir artış gösterdi, ancak yalnızca prob yüksekliği beş milimetreye yükseltildiğinde.Bu artan gecikme, testin başlamasından 90 dakika önce karprofen alan farelerde görülmedi. Nöropatik ağrının korunmuş sinir hasarı modeli, prob yüksekliği beş milimetreye ayarlandığında taban çizgisine karşı kaçma gecikmesini önemli ölçüde arttırdı. Bu artış, testten 90 dakika önce opioid analjezik buprenorfin uygulanması ile önlendi.Sinir hasarından önce MCA testinin temel turuna tabi tutulmayan farelerde artan kaçış gecikmesi de gözlenmiştir. Beş milimetrede korunmuş sinir hasarı farelerinde artan kaçış gecikmesi, testten 90 dakika önce uygulanan gabapentin ile önlendi. Kırık veya döküm modelinde, birinci odadan kaçma gecikmesi, yaralanmadan önce prob yüksekliği ile orantılı olarak artmıştır.Yaralanma sonrası, gecikme sıfır milimetrede değişmeden kaldı, ancak erkekler için iki milimetre ve beş milimetre prob yüksekliğinde ve kadınlar için beş milimetre prob yüksekliğinde, taban çizgisine kıyasla önemli ölçüde arttı. Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, tüm farelerin MCA cihazına alıştığından emin olmak ve çalışma boyunca uygun randomizasyon ve körleştirmeyi sürdürmektir. Bu yöntem, von Frey veya koşullu yer tercihi dahil olmak üzere diğer ağrı duyarlılığı ölçümleriyle birlikte kullanılabilir.

mechanical-conflict-avoidance-assay-to-measure-pain-behavior-in-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Elektronik von Frey ölçümleri, enflamatuar bir olaydan önce ve sonra sürekli olarak uygulanan basınç uyaranlarına kemirgen mekanik çekilme eşiklerindeki değişikliklerin hızlı ve hassas bir şekilde ölçülmesine izin verdiği için klasik von Frey filamentlerine etkili ve geliştirilmiş bir alternatiftir.

Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Bu opioid kaynaklı hiperaljezi ve farelerde tolerans gelişimini incelemek için bir protokol açıklar. Naif ve morfin ile tedavi edilen hayvanların, termal ve mekanik nosiseptif yanıtların ölçümü dayanarak, ağrı duyarlılığı (hiperaljezi) 'de artışı ölçmek ve kronik opiat uygulama ile bağlantılı analjezi (tolerans) azalma sağlar.

Termal ve Mekanik nosiseptik Usuller kullanma Farelerde Morfin kaynaklı Hiperaljezi ve Analjezik Hoşgörü Değerlendirilmesi

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Bu yazıda biz üretim yöntemleri ve bir IL4-10 rekombinant füzyon protein kalite kontrolü için ayrıntıları sağlar. Biz de bir fare modeli enflamatuar ağrı ağrı gidermek için bu proteinin etkinliğini test etmek nasıl göstereceğim.

Kronik ağrı tedavisinde rekombinant proteinler gelişimi

Tipik olarak, fare boyun enjeksiyon modeli pruritogen kaynaklı çizilme davranışlarını değerlendirmek için kullanılır. Ancak, model sadece kaşıntı değil, ağrı hakkında bilgi sağlar. Burada, aynı anda ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışları ölçmek için kullanılabilir farelerde bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı.

Ağrı ve Kaşıntıya Bağlı Davranışların Eşzamanlı Ölçümü İçin Yanak Enjeksiyon Modeli

Biz artrit ağrı uyarılmış bir ölçüsü geliştirdik ve kimyasal olarak indüklenen artrit farklı fare modellerinde spontan acı ölçmek için standart bir yöntem ile birleştiğinde. Bu hassas ve eklem ağrısı farklı türleri için tekrarlanabilir önlemlerdir.

Fare modelleri Monoarticular diz ağrısı kendiliğinden ve uyarılmış önlemler

Sırt ağrısının önlenmesi ve yönetimi için yeni terapötik müdahaleler geliştirmek için, bu tedavilerin mekanizmalarını ve etkinliğini translasyonel bir bakış açısıyla incelemek için hayvan modellerine ihtiyaç vardır. Mevcut protokol, sıçandaki mekanik duyarlılığı değerlendirmek için standartlaştırılmış bir yöntem olan BMS testini açıklamaktadır.

Kronik Sırt Ağrısının Mekanik Araştırılması için Sıçanda Geri Mekanik Duyarlılık Değerlendirmesi

Farelerde sırt ağrısı modelinin basit, hızlı indüksiyonu için yöntemler burada idrar plazminojen aktivatörünün intraligament enjeksiyonu kullanılarak sağlanmaktadır.

Ürokinaz tipi Plazminojen Aktivatörü ile İndüklenen Fare Sırt Ağrısı Modeli

Bu protokol, operant tabanlı bir orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı kullanılarak nöropatik orofasiyal ağrının bir sıçan modelinde mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesini açıklar.

Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Burada, analjezik etkiyi değerlendirmek için her iki arka pençe karragenan enjeksiyonu ile modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli sunuyoruz.

Farelerde analjezik etkiyi incelemek için modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli

Protokol, farelerde diz hiperaljezisinin nasıl ölçüleceğini açıklar. Akut diz ağrısının fare modellerinde ve osteoartrit (OA) modellerinde örnekler gösteriyoruz.

Farelerde Diz Hiperaljezisinin Basınç Uygulama Ölçümü Kullanılarak Değerlendirilmesi

Öğrenin farelerde mekanik çatışmadan kaçınma testiyle ağrı duyarlılığını ölçme yöntemini. Bu davranışsal analiz tekniği, ağrı koşullarının motivasyonel durumunu değerlendirerek klinik öncesi araştırmaları geliştirir.

Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi

Daha fazla video keşfet