Minipiglerde RPE'nin taşıyıcı üzerine subretinal implantasyonu: Preoperatif preparatlar, cerrahi teknikler ve postoperatif bakım için kılavuzlar

Yaşa bağlı Makula Dejenerasyonu, santral görme kaybının ana nedenlerinden biri olarak kabul edilir. RPE tabakasının ilerleyici dejenerasyonu ve disfonksiyonu, AMD'nin erken formunun bir işaretidir. Retina hastalıklarının tedavisinde kaydedilen ilerlemelere rağmen, etkin bir tedavi yönteminin geliştirilmesi hala zor olmaya devam etmektedir.

En umut verici tedavi konseptlerinden biri, RPE'nin farklı kökenli in vitro kültürlü RPE hücreleri ile değiştirilmesidir. RPE genellikle bir hücre süspansiyonu, kendi kendini destekleyen hücre tabakası veya yapay bir taşıyıcı tarafından desteklenen bir hücre tek katmanı şeklinde subretinal boşluğa teslim edilir. İki geç yöntemin temel avantajı, implantasyondan sonra, hücrelerin subretinal boşlukta farklılaşmış tek katmanlı bir durumda bulunmasıdır.

İn vivo olarak gerçekleştirilen klinik öncesi hayvan çalışmaları, insanlarda yararlı ve potansiyel olarak uygulanabilir olabilecek verileri elde etmek için büyük bir göz hayvanı modelinde tekrarlanabilir ve güvenli bir cerrahi prosedür oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu protokolle, farklı hücre tiplerinin ve hücre taşıyıcılarının implantasyonu ile in vivo deneysel çalışmalarda kullanılabilecek büyük bir hayvan modelinde bir hücre taşıyıcısının in vivo subretinal implantasyonu için kullanılan subretinal cerrahi tekniğin prensiplerini sunmayı amaçladık. Bu video ile, Libechov minipig'in gözünde hücre taşıyıcısının subretinal implantasyonunun cerrahi prosedürünün adım adım bir protokolünü sunmak istiyoruz.

Kapak spekulumunu takın. Sklerotomiler için sklerayı açığa çıkarmak için burun tarafındaki konjonktivayı limbustan iki ila üç milimetre uzakta açın. Üç adet 25 gauge trokarı, pars plana bölgesine limbustan üç milimetre uzağa yerleştirin.

Ozmotik kornea ödemini önlemek için korneayı ıslak tutun veya tüm ameliyat boyunca metil selüloz ile kaplayın. Standart üç portlu pars plana vitrektomi yaklaşımı ile vitreus gövdesinin orta kısmını çıkarın. Gelecekteki büyük sklerotomi alanında lensin arkasındaki vitreusu dikkatlice çıkarın.

Kontrollü bir posterior vitreus dekolmanı gerçekleştirmek için genellikle retinaya yapışık kalan posterior vitreusu boyamak için intravitreal triamsinolon asetonid enjeksiyonunu kullanın. Bundan sonra, 41 gauge kanül ile daha merkezi bir subretinal BSS enjeksiyonunu yavaşça gerçekleştirin ve blebin çevreye doğru oluşumunu önleyin. Geçici retinal damar tıkanıklığını önlemek için subretinal enjeksiyon sırasında sulama sisteminin göz içi basınç ayarını 15 milimetre cıvaya kadar düşürün.

Nazal bleb tabanının yakınında 27 gauge endodiatermi probu ile retinanın lineer büyük endodiatermisini gerçekleştirin. Daha sonra, 25 gauge MVR bıçağı veya sulama sisteminin yüksek göz içi basınç ayarına sahip dikey makaslar kullanarak üç ila beş dakika boyunca 60 milimetre cıvaya kadar üç milimetre büyük bir retinotomi yapın. Daha sonra 2.75 milimetrelik bir fako bıçağı kullanarak limbustan üç milimetre büyük bir sklerotomi yapın.

Büyük sklerotomi içindeki skleral damarların ve siliyer cismin olası kanamasının ekzodiatermisine dikkat edin. Büyük sklerotominin yanındaki prolapsus vitreus gövdesini vitrektör ile çıkarın. Daha sonra enjektörü, baskın bir el ile yavaşça büyük skleromi yoluyla vitreus boşluğuna yerleştirin.

Hücre taşıyıcısını retinotomi yoluyla subretinal boşluğa implante edin. Enjektörü gözden çekin ve büyük sklerotomiyi 8-0 ile kapatın. Göz içi hipotonisi ile ilişkili komplikasyonları önlemek için Vicryl sütürü. Silikon uçlu kanül ile tam bir akışkan-hava değişimi gerçekleştirin.

Bundan sonra, göz içi basıncı normal olana kadar silikon yağını vitreus boşluğuna enjekte edin. Ameliyatın sonunda trokarları çıkarın ve üç sklerotomi ve konjonktivayı 8-0 ile kapatın. Vicryl dikişleri. Daha fazla ayrıntı için lütfen Cerrahi İşlem bölümüne bakın.

Perioküler bölgeyi temizleyin. Üst ve alt göz kapağını çıkarmak için forseps ve makas kullanın. Üçüncü göz kapağını çıkarın.

Konjonktivayı kesin. Göz kaslarını makasla kesin. Kesimi yüzeyden derinliğe dairesel olarak ilerletin.

Optik siniri kesin. Gözü yörüngeden çıkarın. Silikon yağı ile doldurulmuş vitreus boşluğunun berraklığı, ameliyat sonrası dönemin herhangi bir noktasında subretinal hücre taşıyıcısı ile retinanın durumunu görselleştirmeyi sağlar.

Kırmızısız görüntüler, hücre taşıyıcı çerçevesi içindeki ekili insan RPE hücrelerinin yansıtıcılığının, yerli domuz RPE tabakasının yansıtıcılığından farklı olmadığını göstermektedir. İn vivo OCT görüntüleme, subretinal boşluğa implante edilen hücre taşıyıcısının tüm retina kalınlığını önemli ölçüde artırmadığını ortaya koymaktadır. Bruch'un zarı da hasar görmemiş gibi görünüyor.

Hücre taşıyıcısının çerçevesi, OCT sinyalinin sadece küçük gölgelenmesine neden olur. Retinanın post-mortem kriyo kesitlerinin histolojik çalışması, implante edilmiş primer insan RPE alanında sürekli ve düzensiz pigmentli hücre tabakasının oluşumunu göstermektedir ve bu da hücre taşıyıcı hücreler üzerinde yetiştirilenlerin hayatta kaldığını kanıtlamaktadır. Doku kesitinin immünohistokimyasal analizi, implantasyon alanında bulunan insan RPE hücrelerini gösterir ve yerli minipig RPE hücrelerine benzer tipik RPE belirtecini ifade eder.

Buna rağmen, implante edilen RPE hücreleri bir hücre tek katmanlı olarak görünmez. Yine de, bu hücreler tanımlanmış subretinal boşlukta bulunur. Minipiglerin büyük bir göz hayvan modeli, bu durumda, Libechov minipigleri, insan gözü anatomisi ve fizyolojisine benzerlikleri nedeniyle, dejeneratif retina hastalıklarının tedavisi için yeni kavramların gelecekteki uygulaması için en uygun modellerden biri olarak görüyoruz.

Bu benzerlikler, hücre taşıyıcısının subretinal implantasyonu için cerrahi tekniklerin ve enstrümantasyonun geliştirilmesine izin verir ve bu teknik insan göz bozukluklarının tedavisine kolayca aktarılabilir. Minipigler üzerindeki ameliyatların, insan ameliyatlarında da kullanılacak olan implantasyon dağıtım araçları da dahil olmak üzere aynı enstrümantasyonla gerçekleştirilmesini sağlamak önemlidir, böylece kazanılan deneyim ve know-how'ın insanlara zorlanmadan uygulanması sağlanır. Preoperatif cerrahi ve postoperatif bakım prosedürlerinin ayrıntılı olarak tanımlanması, verimli ve standartlaştırılmış veri üretimini artırarak gelecekteki çalışmalar için yararlı olabilir.