Name: Sıçanlarda Derin Hipotermik Dolaşım Tutuklamasının Kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Öğrenin sıçanlarda derin hipotermik dolaşım tutuklaması kurma yöntemini. Bu protokol kardiyovasküler fizyoloji ve nöroinflamasyon araştırmaları için güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, deney sırasında video verilerinin toplanmasına yardımcı olduğu için Liang Zhang'a teşekkür ediyor. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe numarası: 82070479) ve Merkezi Üniversiteler için Temel Araştırma Fonları (Hibe numarası: 3332022128) tarafından desteklenmiştir.

Protokoller kurumsal bir incelemeden geçti ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi, Fuwai Hastanesi, Çin Tıp Bilimleri Akademisi'nden (FW-2021-0005) onay aldı. Tüm deneysel prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
NOT: Erkek Sprague-Dawley sıçanları (ağırlık: 500-600 g, yaş: 12-14 hafta) standart laboratuvar koşullarında yiyecek ve suya serbest erişimle tutulmuştur. Sıçanlar rastgele iki gruba ayrıldı (n = 6, her grup): DHCA grubu ve normal sıcaklık CPB grubu (NtCPB grubu).
1. Hazırlık çalışmaları
<ol><li>Deneyden önce cerrahi aletleri (forseps, makas, mikro forseps, elektrokoagülatör, tıraş makinesi vb.) sterilize edin (Şekil 1).</li>
	<li>2-0 ipek, 16 G kanül (endotrakeal kateter), 22 G kanül, ev yapımı 16 G kanül (multi-delikli intravenöz kateter), enjeksiyon şırıngaları, gazlı bez ve bant içeren sarf malzemelerinin kullanılabilirliğini sağlayın. NOT: Ev yapımı 16 G kanül için, kanülün ucunda 2 mm çapında iki veya üç deliği kesmek için bir neşter kullanın, bu da venöz drenajın daha pürüzsüz hale getirilmesine yardımcı olacaktır.</li>
	<li>Sevofolran,% 2 lidokain, salin, heparin (5 IU / mL, 250 IU / mL), epinefrin (40 μg / mL), norepinefrin (20 μg / mL), hidroksietil nişasta ve bikarbonat mevcudiyetini sağlayın.</li>
	<li>DHCA devrelerinin bir rezervuar (Murphy'nin damlalığından modifiye edilmiş), bir makaralı pompa, bir ısı eşanjörü, bir membran oksijenatör, bağlantı tüpleri ve bir su deposu içerdiğinden emin olun (Şekil 2). Devreyi bağlayın ve 12 mL hidroksietil nişastayı 1 mL heparin sodyum (250 IU) ve 1 mL salin ile karıştırın. Devreyi 14 mL astarlama çözeltisi ile makaralı pompa hafifçe dönerken (10-40 mL/dak) astarlayın. NOT: Rezervuar, Murphy'nin damlalığı ile bir kan transfüzyon cihazından yeniden kalıplanır. Damlalığın venöz giriş kısmı 10-15 cm'de kalır ve venöz çıkış kısmı 10 cm'de kalır.</li>
</ol>2. Anestezi ve kanülasyon
<ol><li>Sıçanları% 2-3% sevofluran ile anestezi altına alın ve daha sonra sıçan bilincini kaybettikten sonra konjonktival refleks ve kas gevşemesinin eksikliğini test edin. NOT: Konjonktival refleks, korneaya her dokunulduğunda göz kapağının anında kapanmasını ifade eder. Korneaya hafifçe dokunmak için pamuklu çubuk kullanın. Anestezi derinliği yeterli olduğunda göz kapakları kapanmayacaktır.</li>
	<li>Konjonktival refleks kaybolduktan ve kas direnci gözlenmedikten sonra 16 G kanül ile endotrakeal entübasyon yapın. Tüpü bir vantilatöre bağlayın ve ventilatör üzerindeki düğmelere tıklayarak parametreleri ayarlayın (gelgit hacmi: 1.0-1.2 mL / 100g, kalp atış hızı: dakikada 80 atım [bpm], I: E = 1: 1, ilham veren oksijen fraksiyonu: % 60).</li>
	<li>Sıçanın altına elektrikli bir ısıtma battaniyesi koyun ve sıçanı bantla sabitleyin. Kuruluğu önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Sol kasık bölgesindeki, sağ servikal bölgedeki ve kuyruktaki saçları tıraş makinesi ile tıraş edin. Ardından, cildi iyot ve alkolle üç kez dezenfekte edin.</li>
	<li>Sonraki adımlara geçmeden önce anestezi derinliğini kontrol edin. Solunum hızı ventilatör tarafından ayarlanandan daha yüksekse (80 bpm) veya kas sertliği varsa, sevofluran çıkış konsantrasyonunu arttırın. NOT: Anestezi derinliği yeterli olduğunda, solunum ritmi ventilatör ile senkronize edilmeli ve kaslar gerginlik olmadan tamamen gevşetilmelidir. Sıçanın prosedür boyunca herhangi bir bilinç dönüşü yaşamadığından emin olmak için her 30 dakikada bir anestezi derinliğini kontrol edin.</li>
	<li>Sol kasık bölgesinde (yaklaşık 1 cm) cildi kesmek için bir neşter kullanın ve sol femoral ven ve arteri açığa çıkarmak için kas ve dokuyu yumuşak bir şekilde disseke edin. Arteri dikkatlice ayırın.</li>
	<li>Sol femoral artere 22 G intravenöz kateteri kanüle edin. Arteri ve kateteri 2-0 ipek ile (kanülasyon bölgesinde) bağlayın. Pıhtılaşmayı önlemek amacıyla kanülü yıkamak için salin içeren heparin (5 UI / mL) kullanın. Kan basıncını izlemek için kateteri basınç sensörüne bağlayın.</li>
	<li>Kuyruğun derisini (yaklaşık 1,5 cm) kesin ve daha sonra cerrahi alanın ortasında bulunan kuyruk arterini ortaya çıkarmak için kuyruk arterinin yüzeysel fasyasını kesmek için bir neşter kullanın.</li>
	<li>Kuyruk arterini 22 G intravenöz kateter ile kanüle edin. Arteri ve kateteri 2-0 ipek ile (kanülasyon bölgesinde) bağlayın. Pıhtılaşmayı önlemek için kateteri yıkamak için salin içeren heparin (5 UI / mL) kullanın. NOT: İntravenöz kateteri kanüle ederken, sol el forseps ile arteri / veni tutar ve sağ el kateterin içindeki iğne ile arteri / damarı delir ve daha sonra kanülü artere koyar.</li>
	<li>Sağ juguler vendeki cildi kesin (yaklaşık 2 cm) ve ardından damarı açığa çıkarmak için kas ve dokuyu ayırın. Sağ dış juguler ven içine 16 G ev yapımı çok delikli bir intravenöz kateter yerleştirin ve sağ inferior vena kavaya veya sağ atriyuma dikkatlice yerleştirin. NOT: Sol femoral ven ve arter sol kasık bölgesinin yüzeyinin altındadır. Damar arterden daha kalındır ve arterlerin kan rengi parlak kırmızıdır. Sağ juguler ven sağ servikal bölgenin ortasındadır; cilt kesildiğinde ve kaslar ayrıldığında, damar görülebilir (yaklaşık 0.3-0.4 cm genişliğinde). Kateterin ucu sağ atriyuma dokunduğunda, kan basıncı dalgası dalgalanacaktır. Daha sonra kateteri biraz geriye çektikten sonra kateterin ucu superior vena kavada olacaktır.</li>
	<li>Heparin sodyumu (500 IU / kg) sağ dış damardan uygulayın. Kirlenmeyi önlemek için her bir kanül bölgesini nemli gazlı bezle örtün. NOT: Yaklaşık 40 cm yükseltmek için ameliyat masasının altına bir kutu koyun.</li>
</ol>3. DHCA başlatma
<ol><li>DHCA devresini önce kuyruk arterindeki kateterle bağlayın ve pompa akış hızını 1-2 mL / dak'da tutun. Ardından, rezervuarı sağ dış juguler vendeki kateter ile bağlayın. Rezervuarda her zaman yaklaşık 1 cm'lik bir kan seviyesi olduğundan emin olun.</li>
	<li>Su deposunu açın ve önce su sıcaklığını 37 ° C'ye ayarlayın.</li>
	<li>Kan basıncı stabil hale geldikten sonra, kanı pompalamak için pompa akışını yavaşça 80-100 mL / kg / dak'ya kadar artırın.</li>
</ol>4. Soğutma
<ol><li>Oda sıcaklığını yaklaşık 20 °C olarak ayarlayın. Buz küplerini tek kullanımlık eldivenlere koyun ve ardından sıçanın kafasına ve yanlarına yerleştirin. Tankın sıcaklığını, sıçanların rektal sıcaklığına göre gerçek zamanlı olarak ayarlayın.</li>
	<li>Sol femoral arterden 0.1 mL kan toplayın ve kan gazı analizi için kan gazı makinesine yerleştirin. Ventilatörün ilgili parametrelerini kan gazı analizi sonuçlarına göre uygun şekilde değiştirin (örneğin, PaCO2). NOT: Kalp atış hızı ve kan basıncı değişebilir ve pompa akış hızı buna göre ayarlanmalıdır. Su deposu ile sıçan arasındaki sıcaklık gradyanı 10 ° C'den az olmalıdır. Sıcaklığın 30 dakika içinde 15-20 ° C'ye düşürülebildiğinden emin olun. PaCO2'nin normal aralığı 35-45 mmHg'dir. Kan gazı sonuçları daha düşük bir PaCO2 gösteriyorsa, gelgit hacmini azaltabilir ve bunun tersi de geçerlidir.</li>
</ol>5. Derin hipotermik dolaşım durması
<ol><li>Rektal sıcaklık 15-20 ° C'ye düştüğünde, dolaşım durması sırasında derin hipoterminin korunmasını sağlamak için tek kullanımlık eldivenleri (buz içeren) değiştirin.</li>
	<li>Makaralı pompayı durdurun, rezervuarı çevre ile temas halinde tutun ve kanı yavaşça dış juguler damardan rezervuara boşaltın.</li>
	<li>Kan basıncı dalga formuna dikkat edin. Kan basıncı ve kalp atış hızı 0 olduğunda, drenajı durdurun ve rezervuarı kapalı tutun. Vantilatörünü kapatın. NOT: Dolaşım durmasının süresi, deneyin amacına göre değişir.</li>
</ol>6. Isınma ve reperfüzyon
<ol><li>Tüm tek kullanımlık eldivenleri çıkarın ve oda sıcaklığını 25 ° C'ye yükseltin. Venöz drenaj tüpünün kesilmesini sürdürürken membran oksijenatör ventilasyonunu geri yükleyin. Rezervuardaki kanın yavaşça sıçanın vücuduna geri döndüğünden emin olmak için makaralı pompayı açın.</li>
	<li>Vantilatörünü açın. Rezervuardaki kan seviyesi 1 cm'de kaldığında, drenaj tüpünü gevşetin ve kanı sağ atriyumdan rezervuara yavaşça boşaltın.</li>
	<li>Isıtma lambasını, ısıtma yastığını ve su deposunu açın. Öncelikle su tankının sıcaklığını 25 ° C'ye ayarlayın ve ardından çıkış sıcaklığını sıçanın rektal sıcaklığına göre zamanında ayarlayın. NOT: Isıtma lambası, sıçan göğüs boşluğundaki büyük kan damarlarına yönlendirilmeli ve dokuların yanmasını önlemek için belirli bir mesafede tutulmalıdır. Çıkış sıcaklığı ile sıçanın rektal sıcaklığı (<10 ° C) arasındaki sıcaklık farkına dikkat edin. Gerekirse, kan gazını test edin ve ardından ventilatör parametrelerini buna göre ayarlayın ve bikarbonat, elektrolitler vb. Uygulayın.</li>
	<li>Rektal sıcaklık 34 °C'ye döndükten sonra ısıtma lambasını çıkarın. NOT: Bu adım, hızlı yeniden ısınma sürecinin bir devamı olarak, yavaş olmalıdır. Bu aşamada, sevofluran buharlaştırıcının, mekanik vantilatörün ve makaralı pompanın ekipman parametreleri, CPB'nin başlangıcındaki seviyelere geri yüklenebilir.</li>
</ol>7. CPB'den vazgeçmek
<ol><li>Makaralı pompa akış hızını yavaşça ve kademeli olarak azaltın ve akış hızı 1 mL / dak'ya düşene kadar venöz drenaj hızını ayarlayın. NOT: Her akış hızı ayarı 3-5 dakika boyunca gözlemlenmelidir.</li>
	<li>Rezervuarı çevre ile temas halinde tutun (rezervuar kapağını çıkararak). Devrede kalan kanı 1 mL/dak akış hızıyla aşılayın.</li>
	<li>Membran oksijenasyonunu ve makaralı pompayı durdurun.</li>
	<li>Derin anestezi altında bir süre mekanik ventilasyondan sonra sıçanı ötenazileştirin. NOT: Bu bir terminal yordamıdır. CPB'den ayrılma ve ötenazi arasındaki süre, farklı çalışma protokollerine göre değişir. Yaraları iyot ve alkolle dezenfekte etmeyi ve ardından ötenaziden önce kontaminasyonu önlemek için her kanüllenmiş bölgeyi nemli gazlı bezle örtmeyi unutmayın. Anestezi derinliğini arttırmak için sevoflurane çıkış konsantrasyonunu arttırın.</li>
</ol>

<ol><li>Lewis, F. J., Taufic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closure+of+atrial+septal+defects+with+the+aid+of+hypothermia%3B+experimental+accomplishments+and+the+report+of+one+successful+case%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Closure of atrial septal defects with the aid of hypothermia; experimental accomplishments and the report of one successful case.</a> Surgery. 33 (1), 52-59 (1953).</li>
<li>Miler, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiler%2C+RD+%22Miller%27s+Anesthesia.%2C+eighth+edition%22">Miller's Anesthesia., eighth edition</a>. , Saunders. Philadephia, US. (2015).</li>
<li>Gocoł, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+deep+hypothermia+in+cardiac+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The role of deep hypothermia in cardiac surgery.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 18 (13), 7061(2021).</li>
<li>Zhu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+surgery+for+renal+or+adrenal+tumor+with+vena+cava+thrombus%3A+A+single-institution+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiothoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">The role of deep hypothermic circulatory arrest in surgery for renal or adrenal tumor with vena cava thrombus: A single-institution experience.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 13 (1), 85(2018).</li>
<li>Poon, S. S., Estrera, A., Oo, A., Field, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+moderate+hypothermic+circulatory+arrest+with+selective+antegrade+cerebral+perfusion+superior+to+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+elective+aortic+arch+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Interactive+Cardiovascular+and+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Is moderate hypothermic circulatory arrest with selective antegrade cerebral perfusion superior to deep hypothermic circulatory arrest in elective aortic arch surgery.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 23 (3), 462-468 (2016).</li>
<li>Giuliano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+profile+in+a+canine+model+of+hypothermic+circulatory+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Inflammatory profile in a canine model of hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Surgical Research. 264, 260-273 (2021).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperoxia+management+during+deep+hypothermia+for+cerebral+protection+in+circulatory+arrest+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22ASAIO+Journal%22%5BJournal%5D)">Hyperoxia management during deep hypothermia for cerebral protection in circulatory arrest rabbit model.</a> ASAIO Journal. 58 (4), 330-336 (2012).</li>
<li>Jungwirth, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurologic+outcome+after+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+rats%3A+Description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Neurologic outcome after cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest in rats: Description of a new model.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 131 (4), 805-812 (2006).</li>
<li>Engels, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+rat+model+for+the+investigation+of+the+systemic+inflammation+response+and+induced+organ+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">A cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest rat model for the investigation of the systemic inflammation response and induced organ damage.</a> Journal of Inflammation. 11, 26(2014).</li>
<li>Chen, Q., Sun, K. P., Huang, J. S., Wang, Z. C., Hong, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+attenuates+neuroinflammation+after+deep+hypothermia+with+circulatory+arrest+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Resveratrol attenuates neuroinflammation after deep hypothermia with circulatory arrest in rats.</a> Brain Research Bulletin. 155, 145-154 (2020).</li>
<li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triptolide+improves+neurobehavioral+functions%2C+inflammation%2C+and+oxidative+stress+in+rats+under+deep+hypothermic+circulatory+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">Triptolide improves neurobehavioral functions, inflammation, and oxidative stress in rats under deep hypothermic circulatory arrest.</a> Aging. 13 (2), 3031-3044 (2021).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+target+to+reduce+microglial+inflammation+and+neuronal+damage+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel target to reduce microglial inflammation and neuronal damage after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 159 (6), 2431-2444 (2020).</li>
<li>Pinto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+isoform+of+superoxide+dismutase+has+a+significant+impact+on+cardiovascular+ischaemia+and+reperfusion+injury+during+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">The extracellular isoform of superoxide dismutase has a significant impact on cardiovascular ischaemia and reperfusion injury during cardiopulmonary bypass.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (6), 1035-1044 (2016).</li>
<li>Hirao, S., Masumoto, H., Itonaga, T., Minatoya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+recovery+cardiopulmonary+bypass+model+without+transfusion+or+inotropic+agents+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A recovery cardiopulmonary bypass model without transfusion or inotropic agents in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e56986(2018).</li>
<li>Ha, J. Y., Kim, J. S., Kim, S. E., Son, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+activation+of+mitophagy+and+autophagy+by+staurosporine+protects+against+dopaminergic+neuronal+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Simultaneous activation of mitophagy and autophagy by staurosporine protects against dopaminergic neuronal cell death.</a> Neuroscience Letters. 561, 101-106 (2014).</li>
<li>Yamamoto, A., Yue, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+its+normal+and+pathogenic+states+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Autophagy and its normal and pathogenic states in the brain.</a> Annual Review of Neuroscience. 37, 55-78 (2014).</li>
<li>You, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+cardiopulmonary+bypass+model%3A+Application+of+a+miniature+extracorporeal+circuit+composed+of+asanguinous+prime%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Extra-Corporeal+Technology%22%5BJournal%5D)">Rat cardiopulmonary bypass model: Application of a miniature extracorporeal circuit composed of asanguinous prime.</a> Journal of Extra-Corporeal Technology. 37 (1), 60-65 (2005).</li>
<li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+chlorogenic+acid+treatment+on+neuroinflammation+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest+may+be+mediated+through+CYLD%2FNF-%CE%BAB+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of chlorogenic acid treatment on neuroinflammation after deep hypothermic circulatory arrest may be mediated through CYLD/NF-κB signaling.</a> Brain Research. 1767, 147572(2021).</li>
<li>Li, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+profiles+of+circular+RNAs+in+the+rat+hippocampus+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Differential expression profiles of circular RNAs in the rat hippocampus after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Artificial Organs. 45 (8), 866-880 (2021).</li>
<li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+versus+fast+rewarming+after+hypothermic+circulatory+arrest%3A+effects+on+neuroinflammation+and+cerebral+oedema%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardiothoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Slow versus fast rewarming after hypothermic circulatory arrest: effects on neuroinflammation and cerebral oedema.</a> European Journal of Cardiothoracic Surgery. 58 (4), 792-780 (2020).</li>
<li>Engelman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Society+of+Thoracic+Surgeons%2C+The+Society+of+Cardiovascular+Anesthesiologists%2C+and+The+American+Society+of+ExtraCorporeal+Technology%3A+Clinical+practice+guidelines+for+cardiopulmonary+bypass--Temperature+management+during+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">The Society of Thoracic Surgeons, The Society of Cardiovascular Anesthesiologists, and The American Society of ExtraCorporeal Technology: Clinical practice guidelines for cardiopulmonary bypass--Temperature management during cardiopulmonary bypass.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (2), 748-757 (2015).</li>
<li>Jenke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AdipoRon+attenuates+inflammation+and+impairment+of+cardiac+function+associated+with+cardiopulmonary+bypass-induced+systemic+inflammatory+response+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">AdipoRon attenuates inflammation and impairment of cardiac function associated with cardiopulmonary bypass-induced systemic inflammatory response syndrome.</a> Journal of the American Heart Association. 10 (6), 018097(2021).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Kanülasyon, sıçanlarda DHCA oluşturmak için en temel prosedürdür. Kanülasyondan önce, arteri 0.5 mL% 2 lidokain ile ıslatmak kanülasyonu kolaylaştıracaktır. Kanülasyondan sonra, mikrotrombüs oluşumunu önlemek için eksternal juguler ven yoluyla 500 IU/kg heparin ile heparinizasyon gereklidir17. Bu heparin dozunun aktif pıhtılaşma süresi (ACT) hedefine >480 sn ulaşabileceğini defalarca bulduk. Yeniden ısınma dönemi en zor kısımdır. Deneyimizde sıcaklığın 18 ° C'den 34 ° C'ye yükselmesi 60 d...

Derin hipotermik dolaşım durması (DHCA) 1953 yılından beri kalp cerrahisinde kullanılmaktadır1. DHCA, vücuda kan akışını küresel olarak kesmeden önce hastanın çekirdek sıcaklığını derin hipotermik seviyelere (15-22 ° C) düşürmeyi içerir2. Dolaşım durması nispeten kansız bir çalışma alanı sağlayabilir. Derin hipotermi, özellikle beyinde ve miyokardda metabolizmayı azaltır, bu da iskemiye karşı etkili bir koruma yöntemidir3. DHCA, kompleks konjenital kalp hastalığı, aort ark hastalığı ve hatta vena kava trombüsü 4,5 olan böbrek veya adrenal tümörler için yapılan ameliyatlar sırasında yaygın olarak uygulanır. Bu nedenle, DHCA hayvan modellerinin oluşturulması, prosedürün iyileştirilmesi ve klinik ortamlarda komplikasyonların önlenmesi için önemli bir referans sağlar.
Modeller köpekler6, tavşanlar7 ve diğer hayvanlarla kurulabilse de, çalışabilirlikleri ve düşük maliyetleri nedeniyle sıçanların kullanılması tercih edilir. DHCA sıçan modeli ilk kez 2006 yılında Jungwirth ve ark.8 tarafından tanımlanmıştır. Dolaşım durması süresinin nörolojik sonuçlar üzerinde etkili olduğu bulundu. O zamandan beri, DHCA sıçan modelleri geniş çapta araştırılmıştır. DHCA'nın sistemik inflamatuar yanıt sendromunu (SIRS)9 tetikleyebileceği açıklığa kavuşturulmuştur. Daha sonraki çalışmalarda, farmakologlar, SIRS tarafından indüklenen DHCA ile ilişkili nöroinflamasyonun resveratrol10 ve triptolid11 ile zayıflatılabileceğini bulmuşlardır. Ekibimiz ayrıca, DHCA ile ilişkili nöroinflamasyonun, soğuk indüklenebilir RNA bağlayıcı protein12'yi inhibe ederek zayıflatılabileceğini bulmuştur. Kardiyovasküler sistemde, süperoksit dismutaz, DHCA13 sırasında iskemi / reperfüzyon (I / R) yaralanmaları üzerinde kardiyoprotektif bir etkiye sahiptir. Bu sonuçlar, DHCA ile ilişkili patofizyolojik süreçlerin anlaşılmasını genişletti ve DHCA'nın sonuçlarını iyileştirmek için yeni yönler sundu. Bununla birlikte, DHCA sonrası endotoksemi, oksidatif stres ve otofaji ile ilgili sonuçlar yetersizdir. DHCA, kardiyopulmoner bypass (CPB)14 ile aynı operasyonel teknolojiyi kullanır, ancak yönetim stratejisi farklıdır ve DHCA'yı üretme adımları çeşitli ekipler arasında farklılık gösterir 8,9,10,11. Bu çalışma, sıçanlarda DHCA prosedürünün oluşturulması için bir yöntem sağlamayı amaçlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Isı Eşanjörü</td><td>Xi' bir Xijing Tıbbi Cihaz Co, Ltd</td><td>Hayvan-M</td><td></td></tr><tr><td>Membran Oksijenatör</td><td>Dongguan Kewei Tıbbi Alet Co, Ltd</td><td>Micro-M Monitör</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Chengdu Techman Co., Ltd</td><td>BL-420s</td><td></td></tr><tr><td>Makaralı Pompa</td><td>Changzhou Prefluid Technology Co., Ltd</td><td>BL100</td><td></td></tr><tr><td>SD Sıçan</td><td>HFK Bioscience Co., Ltd.</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Sevoflurane</td><td>Maruishi İlaç Co, Ltd</td><td>H20150020</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Makinesi</td><td>Hangzhou Huayuan Pet Products Co., Ltd.</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Buharlaştırıcı</td><td>SPACECABS/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vantilatör</td><td>Şangay Alcott Biotech Co., Ltd</td><td>ALC-V8S</td><td></td></tr><tr><td>Su Deposu</td><td>Maquet Kritik Bakım AB</td><td>Jostra HCU20-600</td><td></td></tr></tbody></table>

sıçanlarda derin hipotermik dolaşım tutuklamasının kurulması

Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats

Derin hipotermik dolaşım durması (DHCA), kompleks konjenital kalp hastalığı ve aort ark hastalığı için ameliyatlar sırasında rutin olarak uygulanır. Bu çalışma, sıçanlarda DHCA kurulması için bir yöntem sağlamayı amaçlamaktadır. DHCA sürecinin vital bulgular üzerindeki etkisini değerlendirmek için, kontrol olarak dolaşım durması olmadan normal bir sıcaklık kardiyopulmoner bypass (CPB) sıçan modeli kullanılmıştır. Beklendiği gibi, DHCA vücut ısısında ve ortalama arteriyel kan basıncında önemli bir düşüşe neden oldu. Kan gazı analizi, DHCA'nın laktik asit seviyelerini arttırdığını, ancak kan pH'ını ve hemoglobin, hematokrit, Na +, Cl-, K + ve glikoz konsantrasyonlarını etkilemediğini göstermiştir. Ayrıca, normal sıcaklık CPB sıçanları ile karşılaştırıldığında, iletim elektron mikroskobunun sonuçları, DHCA sıçanlarında hipokampal otofagozomlarda hafif bir artış göstermiştir.

Kontrol grubu olarak, dolaşım durması olmayan normal sıcaklıktaki CPB (NtCPB) sıçanları, tüm prosedür boyunca stabil bir ortalama arteriyel kan basıncı (MAP) ve vücut ısısı gösterirken, DHCA sıçanlarının MAP'si kalp durması sırasında azalmıştır (p &lt; 0.01, Şekil 3A). DHCA sıçanlarının sıcaklığı soğutma aşamasında hızla düştü ve yeniden ısınma aşamasında kademeli olarak iyileşti. Sıçanları DHCA devrelerinden ayırırken, DHCA sıçanlarının sıcaklığı normale döndü (<strong class="xfig"...

Bu protokol, sıçanlarda sistemik inflamatuar yanıt sendromu, iskemi/reperfüzyon hasarı, oksidatif stres, nöroinflamasyon vb. araştırmaları için uygulanabilecek derin hipotermik dolaşım durmasının kurulmasını sağlar.

Sıçanlarda Derin Hipotermik Dolaşım Tutuklamasının Kurulması

Deep hypothermic circulatory arrest (DHCA) is routinely applied during surgeries for complex congenital heart disease and aortic arch disease. The present ...

Sıçanlarda derin hipotermik dolaşım durmasının kurulması. Derin hipotermik dolaşım durması olan DHCA, kompleks konjenital kalp hastalığı ve aort ark hastalığı ameliyatları sırasında rutin olarak uygulanır. Bu çalışma, sıçanlarda DHCA kurulması için bir yöntem sağlamayı amaçlamaktadır.Protokoller kurumsal bir inceleme aldı ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi, Fuwai Hastanesi, Çin Tıp Bilimleri Akademisi'nden onay aldı. Hazırlık çalışmaları. CPB devrelerinin, morf damlalığından, makaralı pompadan, ısı eşanjöründen, membran oksijenatörden, bağlantı tüpünden modifiye edilmiş bir rezervuar ve devreye bağlı bir su tankı içerdiğinden emin olun ve bir mililitre heparin sodyum ve bir mililitre salin ile 12 mililitre hidroksi nişasta yapar, makaralı pompa yavaşça dönerken, devreyi 40 mililitre astarlama çözeltisi ile astarlayın.İki, anestezi ve kanülasyon. Tüpü vantilatör ve yan parametrelerle bağlayın. Elektrikli bir ısıtma battaniyesi ve sağa koyun ve bantla sağa bakın.Kuruluğu önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Sağ kasık bölgesindeki, sağ servikal bölgedeki ve kuyruktaki saçları tıraş makinesi ile tıraş edin. Daha sonra cildi aldehit ve alkolle dezenfekte edin.Cildi ve sol kasık bölgesini kesin ve sol femoral ven ve arteri açığa çıkarmak için kas ve doku yumuşak kemiğini diseke edin. Arteri dikkatlice ayırın. 22 gauge intravenöz kateteri sol femoral artere kanüle edin.İpek ile bağlı arter ve kateter. Pıhtılaşmayı önlemek için kanülü yıkamak için heparin içeren salin kullanın. Kan basıncını izlemek için kateteri pres sensörüne bağlayın.Kuyruğun derisini kesin ve daha sonra cerrahi alanın ortasındaki kuyruk arterini ortaya çıkarmak için kuyruk arterinin yüzeysel türlerini kesmek için bir neşter kullanın. Kuyruk arterini 22 gauge intravenöz kateter ile kanüle edin. Arter ve kateteri ipek ile ilişkilendirin.Pıhtılaşmayı önlemek için kateteri yıkamak için heparin içeren salin kullanın. Sağ juguler damarın derisini kesin, ardından damarı açığa çıkarmak için kas ve dokuyu ayırın. Sağ dış juguler venin içine 16 gauge ev yapımı çok yaşlılık intravenöz kateter yerleştirin ve dikkatlice sağ inferior vena kava veya sağ atriyuma koyun.Kontaminasyonu önlemek için sağ dış damarın her kanüllenmiş bölgeyi nemli toplarla kapladığı heparin sodyum uygulayın. Üçüncüsü, devreyi kuyruk arterindeki kateterle bağlayın ve pompayı dakikada bir ila iki mililitre düşük hızda tutun. Daha sonra rezervuarı sağ dış juguler vendeki kateter ile bağlayın.Rezervuarda her zaman yaklaşık bir santimetrelik bir kan seviyesi olduğundan emin olun. Su deposunu açın ve önce su sıcaklığını 37 santigrat olarak ayarlayın. Kan basıncı sabit kaldıktan sonra, akış pompasını dakikada 80 ila 100 mililitreye kadar yavaşça artırın.Dört, soğutma. Oda sıcaklığını yaklaşık 20 santigrat dereceye ayarlayın. Bu tek kullanımlık eldivenlere buz küpleri koyun ve sonra sağ başa ve yanlara koyun.Tankın sıcaklığının, pirincin rektal sıcaklığına göre gerçek zamanlı olarak önerildi. Ventilatörün ilgili parametrelerini kan gazı analizi sonuçlarına göre uygun şekilde değiştirin. Beş, derin hipotermi dolaşım durması.Daha sonra rektal sıcaklık 15 ila 20. santigrat dereceye düşer. Buz torbasını değiştirin ve dolaşım durması sırasında derin hipoterminin korunmasını sağlamak için eldivenleri atın. Makaralı pompayı durdurun.Rezervuarı çevre ile temas halinde tutun ve kanı yavaşça dış juguler damardan rezervuara boşaltın. Kan basıncı reformuna dikkat edin. Kan basıncı ve kalp atışı olmadığından, drenajı durdurun ve rezervuarı kapalı tutun.Vantilatörünü kapatın. Altı, ısınma ve reperfüzyon. Tüm tek kullanımlık eldivenleri çıkarın ve oda sıcaklığını 25 santigrat dereceye yükseltin.Venöz drenaj tüpünün kesilmesini sürdürürken hafıza oksijen interventilasyonunu geri yükleyin. Rezervuardaki kanın yavaşça doğru gövdeye geri döndüğünden emin olmak için makaralı pompayı açın. Rezervuardaki kan seviyesi bir santimetre kaldıktan sonra ventilatörü açın.Drenaj tüpünü kullanarak kanı sağ atriyumdan rezervuara yavaşça boşaltın. Isıtma lambasını, ısıtma yastığını ve su deposunu açın. Su deposunun sıcaklığını 25 santigrat dereceye ayarlayın.Ardından zamanında sol sıcaklığa ayarlayın. Rektal sıcaklık 34 santigrat dereceye döndükten sonra ısıtma lambasını çıkarın. Yedi, CPB'den ayrılıyor.Pompa akış hızının silindirini yavaşça ve kademeli olarak azaltın ve vena cinsi hızını dakikada bir mililitreye düşürerek akış hızına ayarlayın. Rezervuarı çevre ile temas halinde tutun. Kalan kanı dakikada bir mililitre akış hızına sahip bir devrede demleyin.Hafızada oksijenlenmesini ve makaralı pompayı durdurun. Bir süre mekanik ventilasyon ve derin bir anesteziden sonra ötenazi. Temsili sonuçlar.Kontrol grubu olarak, normal sıcaklık CPB, NtCPB, sıçan. Dolaşım durması olmadan, tüm prosedür boyunca stabil bir ortalama arter kan basıncı MAP ve vücut ısısı gösterdi. DHCA sıçanlarının MAP'si kalp durması sırasında azalırken.DHCA sıçanlarının sıcaklığı soğutma aşamasında hızlı bir şekilde düştü ve döner fazda kademeli olarak iyileşti. DHCA devresinin sütten kesilmesi, DHCA sıçanlarının sıcaklığı normale döndü. Yukarıdaki veriler, DHCA prosedürümüzün kliniklerdeki hastaların gerçek sıcaklık ve MAP değişikliklerini taklit ettiğini göstermiştir.DHCA işlemcisinin ve yükselişinin etkisi kan gazı analizi ile araştırıldı. Birincil çözelti ile tam kan temasından sonra, hemoglobin konsantrasyonu her iki grupta da desilitter başına altı gramdan yüksekti. DHCA yüzeyinden sütten kesilerek, CPB devresinde kalan kanın sağa doğru yeniden infüze edilmesi nedeniyle desilitter başına dokuz grama yükseldi.Hematokrit HCT, HB'ye benzer bir eğilim gösterdi. DHCA reperfüzyonundan sonra laktat asidi hızlı bir şekilde artmıştır ve bu DHCA grubunda daha belirgindi. DHCA prosedüründen sonra pH azaldı, bu da büyük olasılıkla laktat asit birikiminin bir sonucuydu. Tüm deney boyunca, sodyum, klorür, potasyum iyonları ve glikoz konsantrasyonu her 10 noktada önemli farklılıklar göstermedi.Bu sonuç, DHCA'nın sadece laktat asidine artmış asidi indüklediğini, ancak kan pH'ını ve hemoglobin, hematokrit, sodyum iyonları, klorür iyonları, potasyum iyonları ve glikoz konsantrasyonunu etkilemediğini göstermektedir. DHCA'nın nöronal otofaji üzerindeki etkisini değerlendirmek için, transmisyon elektroskobunu kullandık ve şaşırtıcı bir şekilde DHCA sıçanlarının hipokampüsündeki otofagozomların sayısını bulduk ve arttırdık. Yukarıdaki veriler, DHCA modelimizin kliniklerdeki hastaların gerçek sıcaklık ve MAP değişikliklerini taklit ettiğini göstermiştir.Bu model sistemik inflamatuar yanıt sendromunu, nöroinflamasyonu vb. araştırmak için uygulanabilir.

establishment-of-deep-hypothermic-circulatory-arrest-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Perioperatif ve yoğun bakım ile ilgili akut böbrek hasarı için güçlü bir model sundu. Neredeyse, klinik AKI, histolojik ve fonksiyonel değişiklikleri çoğaltmak mümkündür kardiyak arrest ile indüklenen tüm vücut hipoperfüzyon kullanma.

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Sistemik hipotansiyon ile birlikte iki taraflı karotis tıkanıklığı tekrarlanabilir şiddeti ile hipokampus hasar görebilir, sıçan küresel beyin iskemi üretir. Hayvanlar üzerinde beyin hasarı tahmin modelleri ile engelli, onlar expediently kurtarmak ve ölüm oranları nispeten düşüktür.

2-Gemi Tıkanıklığı / Hipotansiyon: Küresel Beyin İskemi Rat Modeli

Uzaktan iskemik önkoşullama (RIP) zarar strese karşı koşullandırma dokuların bir yöntemdir. Biz 5-10 dakika bir tansiyon aleti manşet şişirilerek, arka bacak uzaktan iskemi bir yöntem kurduk. RIP nöroprotektif yetenekleri kemirgenlerde retina dejenerasyonu modelinde gösterilmiştir.

Uzaktan Ekstremite İskemik Önkoşullanma: Kemirgenler Bir Nöroprotektiftir Tekniği

Bu makale, ani kardiyak arrest ve konvansiyonel kardiyopulmoner resüsitasyon atağını simüle eden göğüs kompresyonu, ventilasyon ve elektrik şoklarının verilmesi yoluyla elektrikle indüklenen ventriküler fibrilasyon ve resüsitasyonun bir sıçan modelini açıklamaktadır. Model, kardiyak arrestin patofizyolojisi hakkında bilgi toplanmasını ve yeni resüsitasyon stratejilerinin araştırılmasını sağlar.

Konvansiyonel Kapalı göğüs Tekniği ile Rat Ventriküler Fibrilasyon Modeli ve Resüsitasyon

Bu kağıt, Kardiyopulmoner bypass farelerde gerçekleştirmek açıklar. Bu yeni modeli moleküler mekanizmaları organ hasarı dahil incelenmesi kolaylaştıracaktır.

Kardiyopulmoner baypas gerektirmeyen bir fare modeli: yeni bir yaklaşım

Burada, kan nakli ya da bir fare inotropic ajanlar olmadan basit kurtarma Kardiyopulmoner bypass modeli tanımlamak için bir iletişim kuralı mevcut. Bu model birden fazla organ sekel Kardiyopulmoner baypas uzun vadeli bir çalışma sağlar.

Kan nakli veya Sıçanlarda Inotropic ajanlar olmadan kurtarma Kardiyopulmoner Bypass modeli

Burada sunulan tek bir darbe ile elektrikstimülasyon yoluyla bir sıçan modelinde akut pontin enfarktüsü kurmak için bir protokoldür.

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Bu makalede, sıçanlarda tüm vücut kısa süreli hipotermi indüksiyonunun iki yöntemi açıklanmaktadır. İlk, hızlı indüksiyon yöntemi, sıcaklıkta hızlı bir düşüş için fanlar ve etanol spreyi kullanarak aktif soğutmayı istihdam eder. İkinci yöntem kademeli bir soğutma yöntemidir. Bu, izofluran anestezisinin kombinasyonu ve homeotermik ısı paspasındaki sıcaklık ayarlarının azaltılması kullanılarak elde edilir. Bu, herhangi bir harici soğutma cihazı kullanmadan çekirdek vücut sıcaklığında kademeli bir...

Klinik Alaka düzey ve Mekanizmaları inceleyen Çalışmalar için Modeller Kullanan Sıçanlarda Kısa Süreli Hipotermi İndüksiyonu

Bu çalışma, üç farklı akciğer bağışı modelinin (beyin ölümü sonrası bağış, dolaşım sonrası ölüm bağışı ve hemorajik şok sonrası bağış) kurulduğunu göstermektedir. Bu olaylarla ilişkili enflamatuar süreçleri ve patolojik bozuklukları karşılaştırır.

Akciğer Transplantasyonunda Deneysel Organ Bağışı Modellerinin İncelenmesi

Bu protokol, sıçanlarda, femur damarlarının sıkıştırılması ve bağlanması yoluyla yüzeysel inferior epigastrik damarlardan kan akışının iyi bir şekilde görselleştirilmesine ve manipüle edilmesine izin veren fasyokutanöz fleplerin toplanmasını, dikilmesini ve izlenmesini açıklar. Bu, iskemik ön koşullandırmayı içeren çalışmalar için kritik öneme sahiptir.

Bir sıçan modelinde iskemik ön koşullandırma etkilerini incelemek için yüzeysel inferior epigastrik arter aksiyel flep

Amaç, EVLP boyunca 4 saat boyunca tutarlı akciğer fonksiyonunu sürdürebilen sıçanlarda yeni bir ex vivo akciğer perfüzyonu (EVLP) modeli geliştirmek ve endüstriye EVLP'yi kemirgen modellerine uygulamak için sağlam bir yöntem sunacak uygulama özellikleri sağlamaktır.

Dolaşım Ölümü Sonrası Sıçan Akciğerleri için Yeni Bir Ex Vivo Akciğer Perfüzyon Sisteminin Kurulması

Öğrenin sıçanlarda derin hipotermik dolaşım tutuklaması kurma yöntemini. Bu protokol kardiyovasküler fizyoloji ve nöroinflamasyon araştırmaları için güvenilir bir model sunar.

Sıçanlarda Derin Hipotermik Dolaşım Tutuklamasının Kurulması

Daha fazla video keşfet