C. elegans Picks, Spatula ve Neşterleri Sterilize Etmek için Alevsiz Bir Yöntem
4 Mart 2022
Bu makalede, solucan toplamaları, spatulaları ve neşterleri açık alev yerine bir mikro yakma fırını kullanarak sterilize etmek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Bu protokol, açık alev ihtiyacını ortadan kaldıran C.Elegans ile kullanım için aseptik bir teknik sunar. Bu tekniğin başlıca avantajları, açık alevi ortadan kaldırarak güvenlik tehlikelerini azaltması ve gaz hatları olmayan laboratuvar alanlarında ve laminer akış davlumbazlarında kullanılabilmesidir. Aletleri yanlara dokunmadan sterilizasyon alanının içine ve dışına taşımak zor olabilir, ancak bir kılavuz eklemek ve elinizi stabilize etmek hareketi kolaylaştırır.
Mikro yakma fırınına bir döngü tutucu aksesuar kılavuzu takarak başlayın ve dış namluya kırpın. Mikro yakma fırınını uygun şekilde standart bir 120 veya 230 voltluk elektrik prizine takın. Mikro yakma fırınını Yüksek ayara getirin ve 800 ila 825 santigrat derece arasında optimum bir sıcaklığa ulaşmak için 10 ila 20 dakika ısınmasına izin verin.
Aleti kılavuz boyunca kaydırarak yanlara dokunmadan silindirik sterilizasyon alanına yerleştirin. Aleti sterilizasyon alanında beş ila yedi saniye tutun. Kılavuz boyunca geriye doğru kaydırarak yanlara dokunmadan aleti çıkarın.
Toplamalar için, yanmasını önlemek için bir solucana dokunmadan önce cihazın üç ila beş saniye soğumasını bekleyin. Solucanları topladıktan sonra, toplama üzerindeki solucanları yakmak için toplama kabına beş ila yedi saniye boyunca tekrar yerleştirin. Kauçuk boru kullanarak gaz hattına bir Bunsen brülörü bağlayın.
Boruyu sıkıca sabitlediğinizden ve brülörü baş üstü nesnelerden uzağa yerleştirdiğinizden emin olun. Gaz hattındaki düğmeyi çevirerek gazı açın. Brülörü bir forvet veya çakmak kullanarak ateşleyin.
Mavi bir koni görünene kadar gaz düğmesini ve hava girişini kullanarak alevi ayarlayın. Toplamayı, spatulayı veya neşteri kırmızı parlayana kadar alevin içinde tutun. Toplamalar için, yanmasını önlemek için bir solucana dokunmadan önce cihazın üç ila beş saniye soğumasını bekleyin.
Solucanları topladıktan sonra, toplama üzerindeki solucanları yakmak için toplama işlemini aleve yeniden yerleştirin. Kültür OP50 Luria suyundaki E.coli bakterileri, 37 santigrat derece çalkalayıcıda gece boyunca bulunur. Gece kültüründen sonra, kültürü steril suda 1:100 oranında seyreltin.
Bir Bunsen brülörü veya bir mikro yakma fırını kullanılarak sterilize edilmiş bir solucan kepçesini bakteriyel çözeltiye batırın, yeniden sterilize edin ve 100 mikrolitre steril suda döndürün. Pozitif kontrol için, toplayıcıyı bakteriyel çözeltiye batırın, steril suya batırın ve negatif kontrol için, toplayıcıyı bakteriyel çözeltiye batırmadan sterilize edin ve ardından steril suya çevirin. 10 mikrolitre suyu 10 santimetrelik bir Luria suyu agar Petri kabına yerleştirin, steril bir hücre dağıtıcı kullanarak suyu yayın ve kapak açıkken 24 saat boyunca oda sıcaklığında inkübe edin.
Kuluçka döneminden sonra kolonileri manuel olarak sayın. Bağıl kontaminasyon oranı, numune başına koloni sayısı sayılarak ölçülmüştür. Negatif kontrol plakalarında sıfır koloni bulundu.
Standart hatası 0.3 koloni olan ortalama 4.7 koloni sayısı, Bunsen brülörü toplamaları sterilize etmek için kullanıldığında elde edildi. Mikro yakma fırını durumunda standart hata 1.2 koloni olan ortalama 3.3 koloni sayısı gözlenmiştir. Bununla birlikte, pozitif kontrol koşulunda ortalama 298.3 koloni sayısı elde edildi.
Böylece, mikro yakma fırını, Bunsen brülörü için eşit derecede etkili sterilite sonuçları elde etti. Bu prosedürü takiben, C.Elegans'ın toplanmasını veya parçalanmasını içeren herhangi bir yöntem gerçekleştirilebilir. Bu nedenle, çok çeşitli araştırma sorularına uygulanabilir.
Genel Bakış
Bu makale, C. elegans içeren deneylerde kullanılan aletlerin sterilizasyonu için bir protokol sunar, özellikle geleneksel açık alevler yerine bir mikro-yakma cihazı kullanır. Bu teknik laboratuvar güvenliğini artırır ve gaz hattı olmayan ortamlar da dahil olmak üzere çeşitli ortamlarda etkili bir şekilde kullanılabilir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Mikrobiyal sterilizasyon teknikleri
- Laboratuvar ortamlarında güvenlik protokolleri
- Nematod araştırmalarında uygulamalar
Arka Plan
- Mevcut yöntemler, açık alevler nedeniyle güvenlik tehlikeleri yaratır
- Alternatif sterilizasyon tekniklerine duyulan ihtiyaç
- Kontaminasyonu önlemede sterilizasyonun önemi
Kullanılan Yöntemler
- Sterilzasyon için mikro-yakma cihazının kullanımı
- C. elegans üzerinde uygulama
- Kontaminasyonu ölçmek için koloni sayım analizi
Ana Sonuçlar
- Mikro-yakma cihazı, Bunsen yakıcılarıyla karşılaştırılabilir sterilite sonuçları üretir
- Negatif kontrol örneklerinde en düşük kolonizasyon gözlenirken, pozitif kontroller önemli düzeyde kontaminasyon göstermiştir
- Ortalama koloni sayımları, her iki yöntemle de etkili sterilizasyon olduğunu gösterir
Sonuçlar
- Bu çalışma, mikro-yakma cihazının C. elegans araştırmalarında aletlerin sterilizasyonu için uygun bir alternatif olduğunu gösterir.
- Laboratuvar prosedürlerinde güvenlik ve steriliteyi artırmak, güvenilir biyolojik araştırmalar için kritik öneme sahiptir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Reliable sterilization of laboratory instruments is critical for maintaining experimental integrity in early discovery and screening workflows. The adoption of a flame-free micro-incinerator for sterilizing C. elegans picks, spatulas, and scalpels reduces operational hazards and expands laboratory compatibility, supporting reproducible research in diverse R&D environments. This approach enables safer, standardized workflows essential for scalable biopharma discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables contamination-free manipulation of model organisms for hypothesis-driven studies.
- Supports functional target validation by ensuring aseptic transfer and handling of biological samples.
- Reduces confounding variables in mechanistic studies by minimizing microbial contamination risk.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of validated biological systems for downstream screening assays.
- Improves assay reproducibility by standardizing instrument sterilization across experiments.
- Enables reliable quantitative readouts by reducing contamination-driven assay variability.
Translational & Preclinical Research
- Maintains integrity of disease-relevant model systems by preventing cross-contamination.
- Supports continuity from discovery to preclinical validation by ensuring consistent aseptic technique.
- De-risks translational workflows by providing robust sterility controls in organism handling.
Pipeline & Workflow Integration
This flame-free sterilization method integrates into early discovery, screening, and preclinical workflows where aseptic manipulation of model organisms is required.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring uncontaminated sample transfer and manipulation.
- Screening: Standardizes instrument preparation for reproducible, scalable assay development.
- Analytics: Provides quantitative contamination assessment via colony counting, supporting data-driven decision-making.
- Translational Research: Preserves model fidelity for downstream translational studies when supported by organism-based assays.
- Enterprise Reuse: Offers a reusable, flame-free sterilization capability adaptable across laboratory settings.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by minimizing contamination-related artifacts.
- Operational Value: Enhances laboratory safety and enables use in facilities without gas infrastructure.
- Strategic Value: Supports scalable, standardized workflows for efficient portfolio progression.
- Portfolio Impact: Reduces risk of experimental failure due to contamination, supporting robust advancement decisions.
Implementation Considerations
- Requires basic laboratory training in aseptic technique and instrument handling.
- Needs access to an infrared micro-incinerator and compatible electrical outlets.
- Demands cross-team standardization of sterilization timing and handling protocols.
- Adaptable to various model systems where instrument sterilization is critical.
- Instrument insertion and removal technique must avoid contact with sterilization chamber sides to maintain efficacy.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:34
Prepare the Micro-Incinerator
1:02
Sterilize the Pick, Spatula, or Scalpel
1:37
Comparative Method: Sterilization of Instruments Using a Bunsen Burner
2:20
Experiment
3:19
Results: Bacterial Counts Across Sterilization Methods
4:03
Conclusion
