Sepsisin Çekal Ligasyonu ve Delinmeye Bağlı Fare Modelinde Güvenilir Bir Biyobelirtecin Değerlendirilmesi
9 Aralık 2022
Bu protokol, bir fare sepsis modelinde çekal ligasyon ve ponksiyonun (CLP) operatif ayrıntılarını sunar. CLP, sepsisin hayvan modelini oluşturmak için en yaygın kullanılan tekniklerden biridir. Bu nedenle, güvenilir araştırma sonuçlarının elde edilmesi için standartlaştırılmış bir CLP protokolü gereklidir.
Bu çalışmanın temel amacı, sepsisin güvenilir kan biyobelirteçlerini değerlendirmek için çekal ligasyon ve delinmeye bağlı sepsisin fare modelini kullanmaktır. Çekal ligasyon ve ponksiyon veya kısaca CLP, klinik olarak ilgili bir sepsis modelidir. CLP, sepsis araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir modeldir.
Sitrüllinlenmiş histon H3 veya CitH3, sepsis kaynaklı NETosis'ten kaynaklanır. Önceki çalışmamız, CitH3'ün sepsisin güvenilir bir tanısal biyobelirteci olduğunu göstermektedir. Erkek C57BL/6 fareleri seçin.
Fareyi tartın ve% 1.5 izofluran soluyarak fareyi anestezi altına alın. Fareyi bir ısıtma yastığına sabitleyin. Karnına tüy dökücü krem uygulayın ve kremi ve saçları çıkarmadan önce bir dakikadan fazla bekletmeyin.
Kemirgen hayvan cerrahisi için uygun steril cerrahi aletler hazırlayın. Karın derisini iyotla en az üç kez dezenfekte edin. Ameliyat bölgesini uygun steril cerrahi perde ile örtün.
Karın duvarında, linea alba boyunca yaklaşık iki santimetrelik bir kesi yapmak için steril cerrahi makas kullanın. Çekumu peritoneal boşluktan steril cımbızla tanımlayın ve izole edin. Çekumun 75 hacmini 4-0 ipek dikişle bağlayın.
Mezenterik kan damarlarını yağlamayın. Dikkat edilmesi gereken, çekum ligatının farklı yüzdesi sepsisin şiddetini belirler. %25'i düşük dereceli sepsise, %50'si orta dereceli sepsise ve %75'i yüksek dereceli sepsise yol açar.
Çekumu, kuyruk ucu ile ligasyon arasındaki orta noktada 21 gauge iğne ile bir kez içinden ve içinden delin. Dışkıyı nüfuz deliklerinden çekumdan yavaşça sıkın. Dikkat edilmesi gereken, periton boşluğuna sıkılan dışkı miktarı tutarlı olmalıdır, çünkü dışkı aynı zamanda sepsisin şiddetini de belirler.
Çekumu ve dışkıyı karın boşluğuna nazikçe değiştirin. Karın kas tabakasını ve cilt tabakasını 6-0 ipek dikişle kapatın. Kesini iyotla dezenfekte edin.
Ketoprofen enjeksiyonu, kilogram başına beş miligram, çekumu önlemek için karnın sol alt çeyreğinde yapılmalıdır. Tamamen iyileşene kadar fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fare, sıcaklık kontrollü bir odaya yerleştirilir ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlanır.
Hayvanlar, sunulan çalışmamıza dayanarak önceden tanımlanmış son noktalarımızla ilgili sepsis semptomları ile aşırı dozda karbondioksit ile ötenazi yapılacaktır. Fareler rastgele sahte grup, CLP grubu ve CLP artı Cl-amidin veya YW3-56 tedavi grubuna ayrılır. Sahte gruptaki fareler, çekum ligasyonu ve delinmesi hariç tüm CLP prosedürlerini alırlar.
Periferik kanı ameliyat sonrası 24 saatte toplayın ve santrifüjleme yoluyla serum hazırlayın. CitH3 konsantrasyonu, batı lekelenmesi ve kendi geliştirdiği bir ELISA kiti ile belirlendi. Şekil ikide gösterildiği gibi, sahte grupta CitH3 saptanmadı.
CLP sokulmasından sonra CitH3 seviyeleri yükseldi ve PAD inhibisyonu ile önemli ölçüde zayıfladı. Verilerimize dayanarak, dolaşımdaki CitH3'ün sepsisin güvenilir bir tanısal biyobelirteci olduğu sonucuna vardık.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, bir sepsis fare modelinde sekal ligasyon ve perforasyonun (CLP) operatif ayrıntılarını sunmaktadır. CLP, sepsis hayvan modeli oluşturmak için en yaygın kullanılan tekniklerden biridir ve güvenilir araştırma sonuçları için standartlaştırılmış bir protokol gerektirir.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Biyoloji
- Sepsis Araştırmaları
Arka Plan
- Sekal ligasyon ve ponksiyon (CLP), sepsis için klinik açıdan ilgili bir modeldir.
- CLP, sepsis araştırmalarında yaygın olarak kullanılır.
- Güvenilir biyobelirteçler, sepsisin teşhis edilmesi için gereklidir.
- Sitrülline histone H3 (CitH3), sepsisle tetiklenen NETosis ile ilişkilidir.
Çalışmanın Amacı
- Bir fare modeli kullanarak sepsis için güvenilir kan biyobelirteçlerini değerlendirmek.
- Araştırma tutarlılığı için standardize edilmiş bir CLP protokolü oluşturmak.
- Sepsiste CitH3'ün tanısal potansiyelini araştırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Çalışma için erkek C57BL/6 farelerin seçimi.
- Sekal ligasyon ve punksiyon yoluyla sepsisin indüklenmesi.
- İndüksiyon sonrası kan biyobelirteçlerinin değerlendirilmesi.
- Tanısal güvenilirliği değerlendirmek için CitH3 seviyelerinin karşılaştırılması.
Ana Sonuçlar
- CitH3'ün güvenilir bir tanısal biyobelirteç olduğunun gösterilmesi.
- Tutarlı sonuçlar veren standardize edilmiş CLP protokolü.
- Modelde sepsis kaynaklı NETozisin tanımlanması.
- Gelecekteki sepsis araştırmaları için fare modelinin doğrulanması.
Sonuçlar
- CLP modeli, sepsisin incelenmesinde etkilidir.
- CitH3, sepsis teşhisi için gelecek vaat eden bir biyobelirteç görevi görür.
- Standartlaştırılmış protokoller, araştırmanın güvenilirliğini artırır.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Endüstriyel Uygunluğu
Güvenilir erken biyobelirteçler, sepsis ilaç keşfindeki riskleri azaltmak ve preklinik modellerden klinik araştırmalara geçişte translasyonel sürekliliği sağlamak açısından kritik öneme sahiptir. Kuantitatif CitH3 ölçümü ile birleştirilen CLP kaynaklı fare modeli, sepsiste hedef doğrulaması ve mekanistik sorgulama için standartlaştırılmış bir platform sunar. Bu yaklaşım, keşif sürecindeki temel kırılma noktalarında öngörüsel güveni ve portföy önceliklendirmesini destekler.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Klinik olarak ilgili bir hayvan modeli kullanarak sepsis patofizyolojisinin titiz bir şekilde hipotez test edilmesini sağlar.
- NETozis'in mekanistik bir biyobelirteci olarak CitH3'ü nicelleştirerek fonksiyonel hedef doğrulamasını destekler.
- Aday hedeflerin biyolojik risklerinin azaltılmasını ve daha ileri geliştirme çalışmaları için önceliklendirilmesini kolaylaştırır.
Tarama ve Assay Geliştirme
- Sepsis mekanizmalarını hedefleyen aday terapötiklerin değerlendirilmesi için tekrarlanabilir bir sistem sunar.
- CitH3 için valide edilmiş ELISA ve western blot analizleri aracılığıyla biyobelirteç kantifikasyonunu standartlaştırır.
- Deneysel gruplar arasında müdahale etkilerinin güvenilir bir şekilde karşılaştırılmasına olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Preklinik biyobelirteç okumalarını sepsis için klinik tanısal ihtiyaçlarla uyumlu hale getirir.
- Hayvan modeli bulgularından insan translasyonel biyobelirteç stratejilerine geçişteki sürekliliği destekler.
- Güçlü ve hastalıkla ilgili son noktalar belirleyerek translasyonel riski azaltır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model ve biyobelirteç iş akışı, sepsis araştırmalarında erken keşif, öncü bileşik tanımlama ve preklinik doğrulama aşılları arasında köprü kurmaktadır.
- Keşif Biyolojisi: Sepsis kaynaklı NETosis için mekanistik hipotez testlerini ve yolak açıklığa kavuşturulmasını sağlar.
- Tarama: Standardize edilmiş analiz geliştirme ve bileşik değerlendirmesi için kantitatif CitH3 okumaları sunar.
- Analitik: Müdahale etkinliğini ve hastalık şiddetini karşılaştırmak için tekrarlanabilir biyobelirteç ölçümleri sağlar.
- Translasyonel Araştırma: Preklinik biyobelirteç verilerinin klinik tanı stratejileriyle uyumlandırılmasını kolaylaştırır.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Devam eden sepsis araştırmaları ve terapötik değerlendirmeler için yeniden kullanılabilir, standardize edilmiş bir platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Sepsis hedeflemesine yönelik doğrulamada öngörü güvenilirliğini artırır ve mekanistik belirsizlikleri azaltır.
- Operasyonel Değer: Araştırma ekipleri ve çalışmalar genelinde tekrarlanabilirliği ve standardizasyonu geliştirir.
- Stratejik Değer: Erken dönem biyobelirteç odaklı triyajı mümkün kılarak, devam/tamam karar verme sürecini ve sermaye verimliliğini iyileştirir.
- Portföy Etkisi: Sepsis programlarının riskle ayarlanmış önceliklendirmesini ve ilerletilmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Hayvan cerrahisi, biyobelirteç analizi geliştirme ve kantitatif analiz konularında uzmanlık gerektirir.
- Valide edilmiş ELISA kitlerine, western blotting altyapısına ve standartlaştırılmış hayvan tesislerine erişim gereklidir.
- CLP prosedür değişkenlerinin ve biyobelirteç ölçüm protokollerinin ekipler arası titiz bir şekilde standartlaştırılmasını gerektirir.
- Diğer hastalık modellerine veya türlere adaptasyon, protokol optimizasyonu ve validasyon gerektirebilir.
- Sınırlamalar arasında cerrahi tekniğe bağlı model değişkenliği ve tutarlı son nokta kriterlerine olan ihtiyaç yer almaktadır.
