Name: Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Sendromu Tedavisinde Vajinoplasti Sırasında Laparoskopik Oosit Elde Edilmesi ve Kriyoprezervasyonda (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Keşfedin Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser sendromunda laparoskopik vajinoplasti sırasında oosit elde etme ve kriyoprezervasyon yöntemini. Bu yaklaşım minimal invaziv cerrahi ile gelecekteki fertilite seçeneklerini korur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma için özel bir fon alınmadı.

MRKHS için üçüncül sevk merkezindeki (IRCCS San Raffaele Üniversite Hastanesi, Milano, İtalya) yerel etik komite, Temmuz 2017'de uygulanmadan önce protokolü bilgilendirdi ve onayladı. Tüm hastalar veya veliler, vajinoplasti sırasında laparoskopik oosit alımı ve kriyoprezervasyonu, anonimleştirilmiş klinik/laboratuvar verilerinin bilimsel amaçlarla kullanılması için imzalı bilgilendirilmiş onam vermiştir.
1. Takım kompozisyonu
<ol><li>Deneyimli bir laparoskopik cerrah, deneyimli bir vajinal cerrah, bir kısırlık uzmanı, özel bir psikolog ve kararlı bir hemşireden oluşan özel bir ekip belirleyin.</li>
	<li>Prosedürün tüm kurulumu ve performansı sırasında hastaya bir ekip olarak yardımcı olun.</li>
</ol>2. Tanısal çalışma ve danışmanlık
<ol><li>Yumurtalıkların görüntülenmesi ve Antral Folikül Sayısının (AFC) tahmini için hastaya transabdominal pelvik ve abdominal ultrasonografi yapın. Kontrollü yumurtalık stimülasyonu için gonadotropin başlangıç dozunu optimize etmek için anti-Müllerian-hormonun (AMH) kan seviyelerini değerlendirin. Dokuların / gametlerin kriyoprezervasyonu için ulusal/yerel protokollere göre bulaşıcı hastalıklar (HIV-Ab, HCV-Ab, HBV-Ab, RPR-TPHA) için serolojik testler yapın.</li>
	<li>Cerrahi olmayan ve cerrahi vajinoplasti de dahil olmak üzere MRKHS'nin hem cinsel hem de üreme yönleri, taşıyıcı annelik ile ilgili maliyetler ve mevzuat, deneysel bir program bağlamında uterus transplantasyonuna bakış açısı, yumurta geri kazanımı için mevcut farklı yaklaşımlar ve oosit kriyoprezervasyonunun canlı doğum oranları açısından performansı hakkında hastaya danışmanlık yapmak.</li>
	<li>Hastaya prosedür boyunca onu desteklemek için psikolojik değerlendirme sunun ve duygusal istikrarı, bağlılığı ve gelecekteki annelik arzusunu değerlendirin. Eşlik eden laparoskopik oosit alımı, gamet kriyoprezervasyonu ve laparoskopik vajinoplasti için imzalı, bilgilendirilmiş onam alın. Reşit olmayan bir hasta söz konusu olduğunda, klinik değerlendirmeleri, akraba bilgilendirilmiş onamını da imzalayan ebeveynlerin huzurunda yapın.</li>
</ol>3. Cerrahi prosedürün ve kontrollü yumurtalık stimülasyonunun planlanması
<ol><li>Eşzamanlı laparoskopik oosit alımı, gamet kriyoprezervasyonu ve laparoskopik vajinoplasti prosedürünü, klinik ekibin (yukarıya bakınız) ve oosit vitrifikasyonu yapan laboratuvar personelinin mevcudiyetini dikkate alarak planlayın.</li>
	<li>Ameliyat gününden itibaren -14. günde kontrollü yumurtalık stimülasyonuna (COS) başlayın, n = 12 günlük planlanan COS süresini ve yumurtlamayı tetikleyen ile yumurta alımı ve vitrifikasyonu arasında ihtiyaç duyulan 36 saati dikkate alın.</li>
	<li>COS'un beklenenden farklı bir süre gerektirmesi durumunda, ameliyatı buna göre yeniden planlayın.</li>
</ol>4. Kontrollü yumurtalık stimülasyonu: başlangıç dozu, doz ayarlamaları ve izleme, son oosit olgunlaşmasını tetikleme
<ol><li>COS'u, doğurganlığın korunması için "rastgele başlangıç" protokolleri bağlamında yaygın olarak yapıldığı gibi, yumurtalık döngüsünün herhangi bir aşamasında başlatın.</li>
	<li>Hastanın AFC ve AMH'sine bağlı olarak folikül uyarıcı hormon (FSH) / insan menopozal gonadotropininin (hMG) başlangıç dozunu seçin ve hastaya günlük kendi kendine uygulanan deri altı enjeksiyonlarına devam etmesini söyleyin. Daha sonra yumurtalık yanıtına bağlı olarak bireyselleştirilmiş doz ayarlamaları yapın.</li>
	<li>Seri transabdominal ultrason ve eşlik eden E2 ve P ölçümleri (gün 1, gün 6, gün 8, gün 10 ve gün 12) ile yumurtalık yanıtını izleyin.</li>
	<li>Son oosit matürasyonunu, 0.2 mL'lik bir Gn-RH-analogunun (Triptorelin) deri altı uygulamasıyla tetikler.</li>
</ol>5. Klinik prosedür (laparoskopi): yumurta geri kazanımı
<ol><li>Hastayı, karın ve perineye mükemmel eşzamanlı erişim sağlayan modifiye dorsal litotomi pozisyonunda konumlandırın. Genel anesteziyi indükleyin ve rutin intraoperatif antibiyotik profilaksisine göre intravenöz olarak 2 g Sefazolin uygulayın. İntravezikal Foley kateterini konumlandırın.</li>
	<li>Bir peri-umbilikal Veress iğnesi ile pnömoperitoneum oluşturun, laparoskopun yerleştirilmesi için bir adet 10 mm göbek trokarı ve sağ ve sol üst kadranlarda iki adet 5 mm trokar konumlandırın. Laparoskopik görme altında, transvajinal geri alma için yaygın olarak kullanılan bir aspirasyon pompasına bağlı 17 G tek lümenli bir iğneyi, sırasıyla sağ ve sol yumurtalıkların delinmesi için sağ ve sol trokarlardan kullanın.</li>
	<li>Foliküllerin maruz kalmasını kolaylaştırmak için yumurtalıkları laparoskopik forseps ile kaldırın ve tutun. Birbirine yakın olan birden fazla folikülü aspire ederken, yumurtalık korteksinin transfiks sayısını ve doğal kanama riskini azaltmak için iğne ucunu yumurtalıkta tutun.</li>
</ol>6. Klinik prosedür (laparoskopi): vajinoplasti
NOT: Vajinoplasti basamakları, Davydov'un laparoskopik modifiye tekniğine kıyasla değişmeden kalır12.
<ol><li>Peritoneal ipliği iki ilkel uterus boynuzu arasında enine kaldırıp keserek ve daha sonra insizyonu önden, lateral ve posteriordan uzatarak periton diseksiyonu.</li>
	<li>Her hemipelviste polidioksanon sentetik emilebilir (PDS) 2-0 monofilamentte, mesanenin üstündeki mobilize peritondan, yuvarlak ligament, tubal istmus, uteroovarian ligament ve lateral peritoneal yaprağın ardışık transfiksasyonu ile bir çanta ipi sütürüne başlayın. Daha sonra, iki sütüre mezorektumun lateral yönünü ve rektal serozanın ön yönünü, rektosigmoid bileşkenin hemen altına dahil edin.</li>
	<li>Perineal yaklaşımda vajinal gamzeyi açığa çıkarın ve H şeklinde bir kesi yapın ve vezikorektal boşluğun keskin ve künt diseksiyonu ile neovajinal bir boşluk oluşturun. Daha sonra, disseke edilmiş periton kenar boşluklarını vajinal vestibulumun kenarına doğru çekin. PDS 3-0'da peritonel-vestibüler anastomoz için pozisyon kesilmiş dikişler. Son olarak, periton kaplı neovajinaya parafin kaplı bir gazlı bez yerleştirin.</li>
</ol>7. IVF laboratuvarı: Yumurta alımından bir gün önce
<ol><li>Beklenen folikül sayısına göre HEPES ile 9 mL Quinn's Advantage Medium (% 5 insan serum albümini [HSA] ile desteklenmiş) içeren 2 ila 5 yuvarlak tabanlı tüp hazırlayın ve bunları gece boyunca 37 ° C'de inkübe edin.</li>
	<li>Embriyo kültürü için 0,5 mL mineral yağ ile kaplanmış 0,5 mL/kuyucuk Döllenme Ortamı (% 5 HSA ile desteklenmiş) içeren bir veya iki adet 4 delikli yemek hazırlayın ve kontrollü bir atmosferde (% 6 CO2,% 5 O2) gece boyunca inkübe edin.</li>
	<li>6 mL mineral yağ ile kaplanmış 9 (30 μL) damla Sürekli Tek Kültür (CSCM) ortamı (% 10 serum ikame takviyesi [SSS] ile desteklenmiş) içeren bir tabak hazırlayın. Kontrollü bir atmosferde gece boyunca 37 ° C'de kuluçkaya yatırın (% 6 CO 2,% 5 O2).</li>
</ol>8. IVF laboratuvarı: yumurta toplama prosedürü
<ol><li>Foliküler aspiratların toplanacağı 10 IU / mL'lik son konsantrasyonda heparin ile HEPES (% 5 HSA ile desteklenmiş) ile Quinn'in Avantaj Ortamının bir çözeltisini hazırlayın.</li>
	<li>Rutin transvajinal oosit alımı13'e benzer şekilde, foliküler aspiratları 10 mL yuvarlak dipli tüplerde toplayın, taşınabilir bir inkübatörde sıcak tutun (37 ° C) ve hemen embriyoloji laboratuvarına yaklaşık 10 dakikalık bir taşıma süresi ile taşınır.</li>
	<li>Kümülüs-oosit komplekslerini (COC) tanımlamak için foliküler sıvıyı önceden ısıtılmış steril 90 mm Petri kabında inceleyin. Bir COC tespit edildikten sonra, HEPES ile (% 5 HSA ile desteklenmiş) 1 mL önceden ısıtılmış Quinn'in Avantaj Ortamı ile doldurulmuş merkezi bir kuyucukta durulayın.</li>
	<li>Tüm COC'ler toplandığından, bunları Döllenme Ortamını içeren 4 kuyucuklu kaba yerleştirin ve kapağı ve alt kısmı hastanın kimliğiyle ilgili verilerle etiketleyin.</li>
	<li>Onları kontrollü bir atmosferde 37 ° C'de inkübe edin (% 6 CO 2,% 5 O2).</li>
	<li>Laboratuvar personelinin ikinci bir üyesi tarafından prosedürün iki kez kontrol edildiğinden emin olun.</li>
</ol>9. Oosit inudasyonu
<ol><li>Yumurtlama sonrası 38 saat içinde kümülüs / korona hücrelerinin çıkarılmasını sağlayın.</li>
	<li>10 IU / mL'lik son konsantrasyonda Hyaluronidaz ile HEPES (% 5 HSA ile desteklenmiş) ile Quinn'in Avantaj Ortamının bir çözeltisini hazırlayın.</li>
	<li>Hyaluronidaz içeren HEPES (% 5 HSA ile desteklenmiş) ve 1 mL önceden ısıtılmış HEPES tamponlu ortam (% 5 HSA ile desteklenmiş) ile 1 mL önceden ısıtılmış Quinn's Advantage Medium içeren bir merkezi kuyucuk tabağı hazırlayın.</li>
	<li>Yumurta denudasyon kaplarını hasta tanımlama verileriyle etiketleyin.</li>
	<li>Kümülüs hücrelerini bir cam Pasteur pipetle dağıtmak için enzimi içeren merkezi kuyucuğa COC'leri yerleştirin ve COC'leri içeren çözeltiyi 30 saniyeye kadar yukarı ve aşağı doğru yavaşça pipetleyin.</li>
	<li>Yumurtaları, sadece HEPES tamponlu ortam içeren ikinci merkezi kuyucuk kabına taşıyın ve minimum miktarda enzimin yerini aldığınızdan emin olun.</li>
	<li>İç çapları azalan (170-140 μm) inkar edici pipetler kullanarak kalan korona hücrelerini çıkarın.</li>
	<li>İlk polar cismin ekstrüzyonu ile karakterize metafaz II (MII) oositlerini metafaz I oositlerden (MI) ve germinal veziküllerden (GV) ayırarak oosit olgunlaşma aşamasını değerlendirin.</li>
	<li>MII oositlerini, 6 mL mineral yağ ile kaplanmış dokuz (30 μL) damla Sürekli Tek Kültür (CSCM) ortamı (% 10 serum ikame takviyesi [SSS] ile desteklenmiş) içeren bir IVF kültürü 60 mm Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Onları kontrollü bir atmosferde 37 ° C'de inkübe edin (% 6 CO 2,% 5 O2).</li>
</ol>10. Yumurta vitrifikasyonu
<ol><li>MII oositlerinin vitrifikasyonunu, oosit inudasyonundan hemen sonra, vitrifikasyon kitinin üreticisi tarafından sağlanan protokolü izleyerek gerçekleştirin.</li>
	<li>Oda sıcaklığına getirin (25-27 °C): denge çözeltisi (ES), vitrifikasyon çözeltisi (VS) ve yıkama çözeltisi (WS), işlemden yaklaşık 30 dakika önce. NOT: Üreticiler tarafından bildirildiği üzere, ES, M-199 HEPES tamponlu Ortamda %7,5 DMSO, %7,5 etilen glikol, %20 dekstran serum takviyesi (DSS), Gentamisin içerir; VS, M-199 HEPES tamponlu bir Ortamda %15 DMSO, %15 etilen glikol, 0,5 M sakaroz, %20 DSS, Gentamisin ve M-199 HEPES tamponlu Ortamda %20 DSS, Gentamisin içerir.</li>
	<li>Bir kriyocihaz için, plastik bir tutamağa tutturulmuş ince bir şeffaf film şeridinden oluşan Cryotop kullanın.</li>
	<li>Kriyocihazları hastanın adı, doğum tarihi, kimliği, kriyoprezervasyon tarihi ve tek bir cihaza yüklenen oosit sayısı ile etiketleyin.</li>
	<li>Vitrifikasyon kabını hastanın adı ve kimliği ile etiketleyin.</li>
	<li>Bir tanık operatörün kriyocihazlar ve çanak üzerindeki doğru hasta verilerini kontrol ettiğinden emin olun.</li>
	<li>Bir soğutma kutusunu en üste kadar taze sıvı azotla doldurun ve dağılmayı ve buharlaşmayı en aza indirmek için kullanana kadar örtün.</li>
	<li>Manipülasyon sırasında yumurtalara zarar vermemek için iç çapı 170 μm olan bir striptizci pipet kullanın.</li>
	<li>Kullanmadan önce içeriği karıştırmak için her bir ES, VS ve WS şişesini hafifçe sallayın.</li>
	<li>60 mm'lik bir Petri kabının kapağını bir damla 50 μL WS1 ile hazırlayın (Şekil 1A).</li>
	<li>Orta buharlaşmayı sınırlamak için kullanımdan hemen önce damlaları yerleştirin.</li>
	<li>Oosit kabını inkübatörden alın ve MII oositlerini (bir seferde 3'e kadar) kültür kabından 50 μL WS'ye minimum hacimli ortamla aktarın.</li>
	<li>WS2, ES1 ve ES2'nin 50 μL damlalarını yakın mesafede dağıtın ve oositleri WS1 damlasından WS2 damlasına aktarın (Şekil 1B).</li>
	<li>ES1'in düşüşünü WS2'ye birleştirin ve her iki çözeltinin kendiliğinden karışması için 2 dakika bekleyin.</li>
	<li>Ardından, ES2 damlasını daha önce birleştirilmiş damlalarla birleştirin ve 2 dakika daha bekletin.</li>
	<li>Son olarak, yeni bir 100 μL ES3 damlasını daha önce birleştirilmiş damlalarla birleştirin ve 1 dakika daha bekletin.</li>
	<li>Yumurtaları 10 dakika boyunca 100 μL'lik bir ES4 damlasına yerleştirin (Şekil 1C).</li>
	<li>İki adet 50 μL VS damlası ve bir adet 100 μL VS dağıtın (Şekil 1D).</li>
	<li>Yumurtaları sırayla 60 sn boyunca üç damla VS'ye taşıyın, böylece oositler ~ 20 s boyunca her damlada kalır.</li>
	<li>60 sn inkübasyonun bitiminden önce yaklaşık 10 s kaldığında, kriyocihazı mikroskop altına yerleştirin.</li>
	<li>Yumurtaları pipetin ucunda taşıyın ve minimum VS miktarı ile kriyocihazın üzerine yerleştirin.</li>
	<li>VS'nin fazlalığını aspire edin, oositleri ince bir VS tabakası ile örtün.</li>
	<li>Kriyocihazı doğrudan sıvı azotun içine daldırın ve hızla hareket ettirin. Cihazı sıvı azot içinde tutun ve koruyucu kapakla örtün.</li>
	<li>Kriyocihazı bir depolama sisteminde (örneğin, visiotube) saklayın ve kriyojenik tanka yerleştirin. Kriyoprezervasyon verilerini laboratuvar veri tabanına ve sayfasına kaydeder.</li>
</ol>11. Yatarak ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Ameliyattan 48 saat sonra idrar kateteri ve vajinal parafin kaplı gazlı bezi çıkarın.</li>
	<li>Çıkarıldıktan sonra hastaların neovajinalarını dijital olarak keşfedin ve hastaya dijital keşfin nasıl yapılacağı konusunda talimat verin. Daha sonra, vajinal kalıbı (9 cm uzunluğunda ve 2 cm çapında) östrojen jeli ile (epitelizasyonu desteklemek için) kaplayın ve hastaya kalıbın nasıl yerleştirileceği ve korunacağı konusunda talimat verin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası 3. günden başlayarak ve takip eden her gün, hastaya kalıbın nasıl yerleştirileceği ve günde en az 2 saat boyunca yerinde nasıl tutulacağı konusunda talimat verin.</li>
	<li>Herhangi bir komplikasyon meydana gelmezse, hastayı ameliyat sonrası 5-6. günde taburcu edin.</li>
</ol>12. Ayakta ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Hastaya, hastanede kalış süresince kullanılan aynı kalıpla (9 cm uzunluğunda ve 2 cm çapında) ve daha sonra daha büyük bir kalıpla (11 cm uzunluğunda ve 2,5 cm çapında) 2 ay boyunca neovajinal dilatasyonun nasıl yapılacağı konusunda talimat verin.</li>
	<li>3 aylık ziyaretten sonra, hastanın cinsel aktiviteye başlamasına izin verin ve cinsel ilişkinin olmadığı günlerde kalıpları kullanmaya devam etmesini sağlayın.</li>
</ol>13. Takip
<ol><li>Takip ziyaretlerini prosedürden 1, 3, 6 ve 12 ay sonra planlayın.</li>
	<li>Her takip ziyaretinde, dilatasyon egzersizlerine uyumu değerlendirin ve hastaya günlük yaşam aktiviteleri, ağrı, idrar semptomları veya cinsel işlev bozukluğunda herhangi bir sınırlama yaşayıp yaşamadığını sorun (ameliyattan sonraki üçüncü aydan sonraki ziyaretten itibaren). Adneksanın vajinal genişliğini, uzunluğunu, süspansiyonunu ve hareketliliğini ölçmek için her takip ziyaretinde jinekolojik muayene yapın.</li>
</ol>

<ol><li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACOG+Committee+Opinion+No.+728%3A+M%C3%BCllerian+Agenesis%3A+Diagnosis%2C+Management%2C+And+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">ACOG Committee Opinion No. 728: Müllerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li>
<li>Reichman, D. E., Laufer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+Fertility+counseling+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: Fertility counseling and treatment.</a> Fertility and Sterility. 94 (5), 1941-1943 (2010).</li>
<li>Ben-Rafael, Z., Bar-Hava, I., Levy, T., Orvieto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplifying+ovulation+induction+for+surrogacy+in+women+with+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Simplifying ovulation induction for surrogacy in women with Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 13 (6), 1470-1471 (1998).</li>
<li>Beski, S., Gorgy, A., Venkat, G., Craft, I. L., Edmonds, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+surrogacy%3A+a+feasible+option+for+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Gestational surrogacy: a feasible option for patients with Rokitansky syndrome.</a> Human Reproduction. 15 (11), 2326-2328 (2000).</li>
<li>Brännström, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. 385 (9968), 607-616 (2015).</li>
<li>Sreenivas, K., Campo-Engelstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+and+international+surrogacy+laws%3A+implications+for+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Domestic and international surrogacy laws: implications for cancer survivors.</a> Cancer Treatment and Research. 156, 135-152 (2010).</li>
<li>Soderstrom-Anttila, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogacy%3A+outcomes+for+surrogate+mothers%2C+children+and+the+resulting+families-a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">Surrogacy: outcomes for surrogate mothers, children and the resulting families-a systematic review.</a> Human Reproductive Update. 22 (2), 260-276 (2016).</li>
<li>Wood, E. G., Batzer, F. R., Corson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+gonadotrophins%2C+optimal+method+for+oocyte+retrieval+and+pregnancy+outcome+in+patients+with+vaginal+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to gonadotrophins, optimal method for oocyte retrieval and pregnancy outcome in patients with vaginal agenesis.</a> Human Reproduction. 14 (5), 1178-1181 (1999).</li>
<li>Raziel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+in+vitro+fertilization+outcome+in+typical+and+atypical+forms+of+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Surrogate in vitro fertilization outcome in typical and atypical forms of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 27 (1), 126-130 (2012).</li>
<li>Egarter, C., Huber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+stimulation+and+retrieval+of+oocytes+in+patient+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Successful stimulation and retrieval of oocytes in patient with Mayer-Rokitansky-Küster syndrome.</a> Lancet. 1 (8597), 1283(1988).</li>
<li>Candiani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+retrieval+during+laparoscopic+vaginoplasty+to+reduce+invasiveness+in+the+treatment+of+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Minimally+Invasive+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Oocyte retrieval during laparoscopic vaginoplasty to reduce invasiveness in the treatment of Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (1), 74-79 (2020).</li>
<li>Fedele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+neovagina+by+Davydov%27s+laparoscopic+modified+technique+in+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Creation of a neovagina by Davydov's laparoscopic modified technique in patients with Rokitansky syndrome.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 202 (1), 1-6 (2010).</li>
<li>ESHRE Working Group on Ultrasound in ART et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound%3A+oocyte+pick+up%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Human Reproduction Open. 2019 (4), (2019).</li>
<li>Callens, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+surgical+and+non-surgical+treatments+for+vaginal+hypoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">An update on surgical and non-surgical treatments for vaginal hypoplasia.</a> Human Reproductive Update. 20 (5), 775-801 (2014).</li>
<li>Sönmezer, M., Gülümser, Ç, Sönmezer, M., Sükür, Y. E., Atabekoğlu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+ultrasound+guided+oocyte+retrieval+using+vaginal+ultrasound+probe%3A+Definition+of+the+technique%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology+Research%22%5BJournal%5D)">Transabdominal ultrasound guided oocyte retrieval using vaginal ultrasound probe: Definition of the technique.</a> The Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 47 (2), 800-806 (2021).</li>
<li>Raju, G. A., Haranath, G. B., Krishna, K. M., Prakash, G. J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Singapore+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li>
<li>Liszewska-Kapłon, M., Strózik, M., Kotarski, Ł, Bagłaj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Clinical+and+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li>
<li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+%28MRKHS%29%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152(2016).</li>
<li>Bean, E. J., Mazur, T., Robinson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+sexuality%2C+psychological+effects%2C+and+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+and+Adolescent+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: sexuality, psychological effects, and quality of life.</a> Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology. 22 (6), 339-346 (2009).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacağı herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol, vajinoplasti ve oosit geri kazanımı prosedürlerini birleştirerek MRKHS tedavisinde invazivliği azaltır. Bu amaçla, COS'un zamanlamasının, cerrahi prosedürün ve oosit vitrifikasyonunun verimli bir şekilde planlanmasını sağlamak için özel bir ekibin atanması çok önemlidir.
Bu kombine laparoskopik yöntemin en faydalı olması beklenen MRKHS hastaları, pelvik duvarlar14 boyunca lateral olarak yerleştirilmiş ekstrapelvik yumurtalıklar veya karaciğer ve safra keses...

4-10.000 kadında yaklaşık 1 insidansı ile MRKHS, primer amenore vakalarının% 15'inin nedenidir. MRKHS, vajina ve uterusun üst segmentinin konjenital yokluğu ile karakterizedir, idrar yolu ve iskelet anomalileri ise değişken olarak ilişkilidir. Daha spesifik olarak, genellikle 1-2 cm derinliğe sahip bir vajinal tonoz mevcuttur ve iki ilkel uterus boynuzubulunabilir 1.
Geçmişte, MRKHS'ye olan birincil tıbbi ilgi, genellikle cerrahi olmayan veya cerrahi yaklaşımlarla bir neovajinanın inşasını gerektiren normal cinsel ilişkiyi sağlamaktı2. Bununla birlikte, üreme tıbbındaki ilerlemeler şu anda MRKHS hastalarında taşıyıcı annelik 3,4 veya daha yakın zamanda uterus nakli5 ile genetik anneliğe izin vermektedir. Rahim nakli hala deneysel bir prosedür olmakla birlikte, taşıyıcı annelik dünya çapında birçok ülkede mevcuttur6 ve bildirilen obstetrik ve psikososyal sonuçlar standart in vitro fertilizasyon ve oosit bağışı7 ile karşılaştırılabilir.
Hem taşıyıcı annelik hem de uterus transplantasyonu oosit geri kazanımı ve in vitro fertilizasyon gerektirir, ancak MRKHS'li hastalarda yumurta toplamanın nasıl yapılacağı konusunda fikir birliği yoktur. Transvajinal yaklaşım, vajinoplastiden sonra bile yetersiz vajinal elastikiyeti8, yumurtalıkların atipik yerleşimi9 veya yumurtalıklar ile vajinal manşet arasındaki aşırı mesafe 4,10 nedeniyle mümkün olmayabilir. Bu olgularda laparoskopik oosit alımı cerrahi erişim açısından en uygun yaklaşımı oluşturmaktadır. Bununla birlikte, çoğu MRKHS hastası şu anda laparoskopik neovajinoplastiye maruz kaldığından, vajinoplasti11 ameliyatı sırasında laparoskopik oosit geri alımı yapılmasını ve ardından gelecekteki kullanım için oosit kriyoprezervasyonunun yapılmasını ve böylece MRKHS hastalarının cinsel ve üreme fonksiyonlarının tedavisini birleştirirken invazivliği en aza indirmeyi öneriyoruz.
Hastaların demografik verileri Şimdiye kadar yirmi üç MRKH hastası bu protokolle tedavi edildi. Hastaların anamnestik, enstrümantal ve laboratuvar bulguları Tablo 1'de özetlenmiştir. Tablo 1'de belirtilmediği sürece eşlik eden konjenital anomali saptanmadı.

<table><tbody><tr><td>< güçlü > Oosit alma prosedürü< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td> Ekipman</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< alt > 2 < / alt > O < alt > 2 < / alt > Kuluçka makinesi</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka</td><td>Makinesi Termo Bilimsel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Başlığı</td><td>Cooper Cerrahi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portatif kuvöz</td><td>Cooper Cerrahi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14 mL Polistiren Yuvarlak Tabanlı Boru</td><td>Falcon</td><td>352057</td> 4 kuyulu çanak Nunc 144444 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri kabı</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petri çanak</td><td>Nunc</td><td>FA9150360</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini Normal Salin içinde 100 mg / ml (% 5)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>Embriyo kültürü için mineral yağ</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kuyulu</td><td>Bulaşık Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s Avantaj Döllenme ortamı SAGE</td><td>Origio</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td>ile s Avantaj ortamı</tr><tr><td>Steril cam pastör pipetleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Oosit denudasyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 İnkübatör</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet ayarlanabilir sap set</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka Makinesi</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer Akış Davlumbaz</td><td>Cooper Cerrahi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 kuyulu</td><td>çanak Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Continuos tek kültür) ortamı</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>90165</td><td></td></tr><tr><td>Normal Salin içinde 100 mg/mL İnsan Albümini (%5)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td></td></tr><tr><td>IVF kültürü 60 mm petri kabı</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>Embriyo kültürü için mineral yağ</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kuyulu</td><td>Bulaşık Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s HEPES Origio</td><td></td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>Serum İkame Takviyesi</td> ile Advantage ortamı <td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>99193</td><td></td></tr><tr><td>Steril cam pastör pipetleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıyırma pipet uçları (140 &mu; m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>Sıyırma pipet uçları (170 &mu; m)</td> <td>Aşçı</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Oosit vitrifikasyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm Petri kabı</td><td>NUNC</td><td>150255</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri kabı</td><td>NUNC</td><td>150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petri kabı</td><td>NUNC</td><td>150360</td><td></td></tr><tr><td>Kitazato</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Soğutma rafı için KonteynerKriyocihaz/kriyotop</td><td>Kitazato</td><td>81111</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik zamanlayıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet</td><td>COOK</td><td>K- 1000</td><td></td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>Lab Yazıcı LabXpert</td><td>Brady</td><td>XSL-86-461</td><td></td></tr><tr><td>Uçlar 20-200 ve mikro; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2160G</td><td></td></tr><tr><td>İpuçları 2-20 ve mikro; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2139-HR</td><td></td></tr><tr><td>Visotubes</td><td>Cryo Bio System</td><td>20</td><td></td></tr><tr><td>Vitrifikasyon Dondurma Kiti</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-SO</td><td></td></tr><tr><td>Vitrifikasyon Çözdürme kiti</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-SO</td><td></td></tr></tbody></table>

mayer-rokitansky-kuster-hauser sendromu tedavisinde vajinoplasti sırasında laparoskopik oosit elde edilmesi ve kriyoprezervasyonda

Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

Laparoskopik vajinoplasti için planlanan ve biyolojik annelik isteği olan Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Sendromu (MRKHS) hastalarında, kriyoprezervasyon için eş zamanlı laparoskopik oosit alımının yapılmasını öneriyoruz. Laparoskopinin başlangıcında oosit alımı takip edilir. Sağ ve sol 5 mm trokarlar yerleştirilir, bu sayede sırasıyla sağ ve sol yumurtalıkların delinmesi için 17 G'lik bir yumurta aspirasyon iğnesi kullanılır. Foliküllerin maruziyetini kolaylaştırmak için yumurtalıklar mobilize edilir ve laparoskopik forseps ile tutulur.
Birbirine yakın birden fazla folikülü aspire ederken, yumurtalık korteksinin transfiks sayısını azaltmak ve doğal kanama riski nedeniyle iğne ucu yumurtalıkta tutulur. Sonraki adımlar, vajinoplasti için Davydov laparoskopik modifiye tekniğine kıyasla değişmemiştir. Ameliyattan önce, gonadotropin hormonu salgılayan hormon (Gn-RH) antagonist protokolü ile kontrollü over stimülasyonu yapılır ve buna eşlik eden oosit elde etme ve vajinoplasti prosedürü, son foliküler olgunlaşma tetikleyicisinden 36 saat sonra planlanır. Foliküler sıvı, transvajinal oosit alımı sırasında kullanılan aynı 10 mL steril tüplerde toplanır ve bir ısınma bloğunda (37 °C) olgun (metafaz II) oositlerin vitrifiye edildiği yardımcı üreme laboratuvarına aktarılır.
Bu olguda, MRKH'li 23 kadından oluşan bir seride, oositler başarıyla alındı ve tüm hastalarda kriyokorundu; Vajinoplasti daha sonra modifikasyon yapılmadan yapıldı ve yatan ve ayakta tedavi sonrası bakım (üriner kateter çıkarma günü, hastaneden taburcu günü, dilatör kullanımı ve takipte konfor) etkilenmedi. Bir hastada postoperatif bir komplikasyon meydana geldi (ameliyat sonrası 5. günde gelişen ateş ve transabdominal ultrasonda intraperitoneal sıvı tespiti) ve konservatif tedaviden sonra düzeldi. MRKH hastalarında cerrahi vajinoplasti yapmak ve yumurta geri kazanımını geciktirmek yerine, bu yaklaşım her iki prosedürü tek bir laparoskopide birleştirerek cerrahi invazivliği ve anesteziyolojik riskleri en aza indirir.

Tablo 2'de hastaların yumurtalık stimülasyon verileri yer alırken, başlıca cerrahi ve fonksiyonel sonuçlar Tablo 3'te açıklanmıştır. Oosit redüksiyonu ve vajinoplastinin eşlik eden laparoskopik prosedürleri tüm hastalarda başarılı bir şekilde birleştirildi. Ortalama 11.4 ± 5.4 (ortalama ± SD) oosit alındı ve 9.6 ± 4.3 MII oosit kriyokorundu (Tablo 3). YÜT uygulanan hastalarda oosit kriyoprezervasyonu ile ilgili deneyimlerimize göre, intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu sır...

Özel bir ekip, Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser hastalarına laparoskopik vajinoplasti sırasında kontrollü yumurtalık stimülasyonu ve oosit kriyoprezervasyonu yapma seçeneği sunabilir.

Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Sendromu Tedavisinde Vajinoplasti Sırasında Laparoskopik Oosit Elde Edilmesi ve Kriyoprezervasyonda

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

Yaklaşımımız, gelecekteki fertilite tedavileri için laparoskopik vajinoplasti ve oosit geri kazanımını birleştirerek Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser sendromunun tedavisinde invaziv hastalığı en aza indirmeye izin vermektedir. Yaklaşımımızın temel avantajları, tek bir anestezi gereksinimi ve genç Rokitansky hastalarında transvajinal oosit geri kazanımının imkansızlığının üstesinden gelinmesidir. Prosedür, infertilite ünitemizin kıdemli jinekoloğu Diana Delprato ve yardımlı üreme laboratuvarımızdan iki kıdemli klinik embriyolog olan Alessandra Alteri ve Greta Cermisoni tarafından gösterilecektir.Ameliyat gününden itibaren 14. günde kontrollü yumurtalık stimülasyonuna başlayın. Seri transabdominal ultrasonografi ve eşlik eden östradiol ve progesteron ölçümleri ile yumurtalık yanıtını izleyin. Açık teknikle pnömoperitoneum oluşturun.Laparoskopun yerleştirilmesi için bir adet 10 milimetrelik göbek trokarı ve orta, sağ ve sol alt kadranlara üç adet beş milimetrelik trokar yerleştirin. Laparoskopik görme altında, sırasıyla sağ ve sol yumurtalığın delinmesi için merkezi ve sol trokarlardan transvajinal geri alma için yaygın olarak kullanılan bir aspirasyon pompasına bağlı 17 gauge tek lümenli bir iğne kullanın. Foliküllerin maruz kalmasını kolaylaştırmak için yumurtalıkları laparoskopik forseps ile kaldırın ve tutun.Birbirine yakın olan birden fazla folikülü aspire ederken, yumurtalık korteksinin transfiks sayısını ve doğal kanama riskini azaltmak için iğne ucunu yumurtalıkta tutun. Peritoneal ipliği iki ilkel uterus boynuzu arasında enine kaldırıp keserek ve daha sonra insizyonu yanal, ön ve posteriordan uzatarak periton diseksiyonu. Perineal yaklaşımda vajinal gamzeyi açığa çıkarın ve H şeklinde bir kesi yapın ve vezikorektal boşluğun keskin ve künt diseksiyonu ile neo-vajinal bir boşluk oluşturun.Daha sonra, disseke edilmiş periton kenar boşluklarını vajinal vestibulumun kenarına doğru çekin. Peritoneal vestibüler anastomoz için polidioksanon sentetik emilebilir 3-0'da pozisyon kesilmiş sütürler. Her hemipelviste polidiokson sentetik emilebilir 2-0 monofilamentte bir kese ipi sütürü, yuvarlak ligament, tubal istmus, utero-over ligament ve lateral periton yaprağının bağ transfiksasyonu ile mesanenin üzerindeki mobilize peritondan başlayın.Daha sonra, iki sütüre mezorektumun lateral yönünü ve rektal serosa'nın anterior yönünü rektosigmoid bileşkenin hemen altına dahil edin. Son olarak, periton kaplı neovajinaya parafin kaplı bir gazlı bez yerleştirin. Foliküler aspiratları portatif bir inkübatörde sıcak tutulan 10 milimetrelik yuvarlak dipli tüplerde toplayın ve yaklaşık 10 dakikalık bir taşıma süresi ile derhal embriyoloji laboratuvarına taşıyın.Tüm kümülüs oosit kompleksleri toplandığından, bunları döllenme ortamını içeren dört kuyucuklu kaba yerleştirin ve kapağı ve tabanı hastanın kimliğiyle ilgili verilerle etiketleyin. Bunları% 6 karbondioksit ve% 5 oksijen içeren kontrollü bir atmosferde 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Laboratuvar personelinin ikinci bir üyesi tarafından prosedürün iki kez kontrol edildiğinden emin olun.Yumurtlama tetikleyicisinden sonraki 38 saat içinde kümülüs korona hücrelerinin çıkarılmasını gerçekleştirin. Kümülüs oosit komplekslerini, kümülüs hücrelerini bir cam Pasteur pipet ile dağıtmak için enzimi içeren merkezi kuyucuğa yerleştirin ve kümülüs oosit komplekslerini içeren çözeltiyi 30 saniyeye kadar yukarı ve aşağı doğru yavaşça pipetleyin. Yumurtaları, sadece HEPES tamponlu ortam içeren ikinci merkezi kuyucuk kabına taşıyın ve minimum miktarda enzimin yerini aldığınızdan emin olun.İç çapları azalan inkar edici pipetler kullanarak kalan korona hücrelerini çıkarın. Metafaz II oositleri ayırarak oosit olgunlaşma aşamasını değerlendirin. Metafaz II oositlerini, altı milimetre mineral yağ ile kaplanmış dokuz damla sürekli tek kültür ortamı içeren bir IVF kültürü 60 milimetrelik Petri kabına aktarın.Bunları% 6 karbondioksit ve% 5 oksijen içeren kontrollü bir atmosferde 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Bir soğutma kutusunu en üste kadar taze sıvı azotla doldurun ve dağılmayı ve buharlaşmayı en aza indirmek için kullanılana kadar örtün. Manipülasyon sırasında yumurtalara zarar vermemek için iç çapı 170 mikrometre olan bir striptizci pipet kullanın.İçeriği kullanmadan önce karıştırmak için her bir denge çözeltisi, vitrifikasyon çözeltisi ve yıkama çözeltisi şişesini yavaşça sallayın. 60 mililitrelik bir Petri kabının kapağını bir damla 50 mikrolitre yıkama çözeltisi ile hazırlayın. Orta buharlaşmayı sınırlamak için kullanımdan hemen önce damlaları yerleştirin.Oosit kabını inkübatörden alın ve metafaz II oositlerini kültür kabından minimum hacimli bir ortam ile 50 mikrolitre yıkama çözeltisine aktarın. 50 mikrolitrelik damla yıkama çözeltisi iki, denge çözeltisi bir ve denge çözeltisi ikisini yakın mesafede dağıtın ve oositleri damla yıkama çözeltisinden damla yıkama çözeltisi iki'ye aktarın. Denge çözeltisinin damlasını bir yıkama çözeltisi ile iki yıkama çözeltisine birleştirin ve her iki çözeltinin kendiliğinden karıştırılması için iki dakika bekleyin.Ardından, denge çözeltisinin iki damlasını daha önce birleştirilmiş damlalarla birleştirin ve iki dakika daha bekletin. Son olarak, 100 mikrolitrelik yeni bir denge çözeltisi damlasını daha önce birleştirilmiş damlalarla birleştirin ve bir dakika daha bekletin. Yumurtaları 10 dakika boyunca 100 mikrolitrelik denge çözeltisi dördüne yerleştirin.İki adet 50 mikrolitrelik vitrifikasyon çözeltisi damlası ve bir adet 100 mikrolitrelik vitrifikasyon çözeltisi dağıtın. Yumurtaları sırayla 60 saniye boyunca üç damla vitrifikasyon çözeltisine taşıyın, böylece oositler yaklaşık 20 saniye boyunca her damlada kalır. 60 saniyelik inkübasyonun bitiminden yaklaşık 10 saniye kala kriyocihazı mikroskop altına yerleştirin.Yumurtaları pipetin ucunda taşıyın ve minimum miktarda vitrifikasyon çözeltisi ile kriyocihazın üzerine yerleştirin. Aşırı vitrifikasyon çözeltisini aspire edin, yumurtaları ince bir vitrifikasyon çözeltisi tabakası ile örtün. Kriyocihazı doğrudan sıvı azotun içine daldırın ve hızla hareket ettirin.Cihazı sıvı azotta tutun ve koruyucu bir kapakla örtün. Oosit redüksiyonu ve vajinoplastinin eşlik eden laparoskopik prosedürleri tüm hastalarda başarılı bir şekilde birleştirildi. Ortalama 11.4 5.4 oosit alındı ve 9.6 4.3 M2 oosit kriyo-korundu.Toplam ortalama ameliyat süresi 114 17 dakika idi. İntraoperatif kan kaybı tüm hastalarda önemsizdi ve intraoperatif advers olay gözlenmedi. Ameliyat sonrası üçüncü günde, hastalar günlük dilatör kullanımına başladılar ve 6.0 1.0 gününde taburcu edildiler.Yumurtalık içindeki foliküllerin dikkatli bir şekilde aspire edilmesi tavsiye edilir, optimal erişim ve geri alımı sağlamak için yumurtalıkların otomatik mobilizasyonuna gereken dikkat gösterilir.

laparoscopic-oocyte-retrieval-cryopreservation-during-vaginoplasty

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Jinekolojik operasyondan önce in vitro olgunlaşma (IVM) (OP-IVM), oosit alımını takiben IVM'yi rutin jinekolojik cerrahi ile birleştirir ve doğurganlığın korunması için geleneksel IVM uygulamalarının bir uzantısı olarak hizmet eder.

OP-IVM: Oosit Alımından Sonra In vitro Olgunlaşmayı Jinekolojik Cerrahi ile Birleştirmek

Oosit kriyoprezervasyonu, postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak çeşitli uluslararası bilim toplumları tarafından kabul edilmektedir. Uygun klinik ve laboratuvar stratejileri, doğurganlık koruma tedavilerinin maksimum etkinliğini, verimliliğini ve güvenliğini sağlar.

Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri

Ağır yumurtalık disfonksiyonu olan hastalar için yumurtalık foliküllerinin ilaçsız in vitro aktivasyonu (IVA) için laboratuvar prosedürlerinin ayrıntılarını sunuyoruz. Bu yöntem yumurtalık hiperstimülasyonu başına alınabilir oosit sayısını artırabilir ve bu hastalar için doğurganlık korumasına fayda sağlayabilir.

Şiddetli Yumurtalık Disfonksiyonu Olan Hastalarda Doğurganlığın Korunması

Bu protokol, yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu yoluyla doğurganlığın korunmasına ihtiyaç duyan 25 yaşın altındaki hastalarda yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi için bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem şunları içerir: (1) kortikal örneklerde yumurtalık rezervinin histolojik değerlendirmesi, (2) bir referans veri seti ile karşılaştırma ve (3) Z-skorlarının hesaplanması.

Doğurganlığın Korunması Uygulanan Genç Hastalarda Yumurtalık Rezervini Değerlendirmek için Z-Skorları

Yaygın olarak kullanılan yavaş dondurma protokolüne alternatif bir kriyoprezervasyon yöntemi olarak yumurtalık dokusunun vitrifikasyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Camsı bir agregasyon durumu elde etmek için yumurtalık korteks dokusunun vitrifikasyonu

Burada, IVF gözlem sürecini hızlandırmak, granüloza hücresinin çıkarılması için gereken süreyi azaltmak, dış elementlere oosit maruziyetini en aza indirmek ve embriyo gelişimini engellememek için yumurta alımını takiben kümülüs-oosit komplekslerinin bir kısmının derhal çıkarılması için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Kümülüs-Oosit Komplekslerinin Hemen Kısmi Uzaklaştırılması: İn Vitro Fertilizasyonun Hızlı Gözlemi İçin Rafine Bir Yaklaşım

Mevcut iyi üretim uygulamaları (cGMP) yönergelerine uygun olarak hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanarak insan amnion epitel hücrelerini (hAEC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol açıklıyoruz.

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Bu protokol, temporal lob epilepsi (TLE) hastalarında mesial ağ ölçümlerinin evrimini izlemek için bir prosedürü tanımlar. İntrakraniyal kayıtların veri analizi için yeni bir sayısal teknikle birleştirilmesine dayanır. Özellikle, foramen ovale kayıtlarının ağ analizleri için bir protokol sunuyoruz.

İlaca dirençli Temporal Lob Epilepsi Hastalarında Foramen Ovale Elektrot Kayıtları Ağ Analizi

Burada, brakiyal pleksus, subklavyen ven ve arterin basısı sonucu oluşan torasik outlet sendromunun tedavisi için birinci kaburganın transaksiller rezeksiyonu protokolü sunulmaktadır.

Torasik Outlet Sendromunun Tedavisi için Transaksiller Birinci Kaburga Rezeksiyonu

Burada, terminal üreteri tedavi etmeden önce göbek ligamentini ön keserek cerrahi görüş alanını artırmak ve total transperitoneal laparoskopik neparoskopik nefroskopik nefroskopik cerrahinin zorluğunu azaltmak için bir protokol sunuyoruz.

Üst İdrar Yolu Ürotekeral Karsinomu için Total Transperitoneal Laparoskopik Nefroskopik Nefroureterektomi Sırasında Terminal Üreterinin Teknik Modifikasyonu

Keşfedin Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser sendromunda laparoskopik vajinoplasti sırasında oosit elde etme ve kriyoprezervasyon yöntemini. Bu yaklaşım minimal invaziv cerrahi ile gelecekteki fertilite seçeneklerini korur.

Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Sendromu Tedavisinde Vajinoplasti Sırasında Laparoskopik Oosit Elde Edilmesi ve Kriyoprezervasyonda (Video) | JoVE Journal

Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Sendromu Tedavisinde Vajinoplasti Sırasında Laparoskopik Oosit Elde Edilmesi ve Kriyoprezervasyonda

Daha fazla video keşfet