Name: Türlerden Agnostik Tek Doku Uygulamaları için Lazer Mikrodiseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-31T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Öğrenin, lazer mikrodiseksiyon ve CEL-Seq2 protokolünü kullanarak C. elegans kuyruk uçlarından transkriptomik veri elde etme yöntemini. Bu teknik, model olmayan türlerde doku spesifik gen ekspresyonu analizini mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, DF'ye NIH (R01GM141395) ve NSF (1656736) hibeleri ve AW'ye NIH bursu (F32GM136170) tarafından finanse edilmiştir. Şekil 1 , BioRender.com yardımıyla oluşturulmuştur.

<ol><li>Haag, E. S., Fitch, D. H. A., Delattre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+%26%2334%3Bthe+worm%26%2334%3B+to+%26%2334%3Bthe+worms%26%2334%3B+and+back+again%3A+the+evolutionary+developmental+biology+of+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">From &#34;the worm&#34; to &#34;the worms&#34; and back again: the evolutionary developmental biology of nematodes.</a> Genetics. 210 (2), 397-433 (2018).</li>
<li>Sommer, R. J., Bumbarger, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+model+systems+in+evolution+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Nematode model systems in evolution and development.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Developmental Biology. 1 (3), 389-400 (2012).</li>
<li>WormBase. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://wormbase.org/#012-3-6">https://wormbase.org/#012-3-6</a> (2022).</li>
<li>WormAtlas. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://wormatlas.org">https://wormatlas.org</a> (2022).</li>
<li>WormBook. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://wormbook.org">http://wormbook.org</a> (2022).</li>
<li>WormBook in Genetics. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/genetics/pages/wormbook">https://academic.oup.com/genetics/pages/wormbook</a> (2022).</li>
<li>Cao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+single-cell+transcriptional+profiling+of+a+multicellular+organism%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Comprehensive single-cell transcriptional profiling of a multicellular organism.</a> Science. 357 (6352), 661-667 (2017).</li>
<li>Kaletsky, R., Murphy, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+C.+elegans+adult+cells+and+tissues+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of C. elegans adult cells and tissues with age.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 177-186 (2020).</li>
<li>Kaletsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analysis+of+adult+Caenorhabditis+elegans+cells+reveals+tissue-specific+gene+and+isoform+expression%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analysis of adult Caenorhabditis elegans cells reveals tissue-specific gene and isoform expression.</a> PLoS Genetics. 14 (8), 1007559(2018).</li>
<li>Packer, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lineage-resolved+molecular+atlas+of+C.+elegans+embryogenesis+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A lineage-resolved molecular atlas of C. elegans embryogenesis at single-cell resolution.</a> Science. 365 (6459), 1971(2019).</li>
<li>Kulkarni, A., Anderson, A. G., Merullo, D. P., Konopka, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+bulk%3A+a+review+of+single+cell+transcriptomics+methodologies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Beyond bulk: a review of single cell transcriptomics methodologies and applications.</a> Current Opinion in Biotechnology. 58, 129-136 (2019).</li>
<li>Von Stetina, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-specific+microarray+profiling+experiments+reveal+a+comprehensive+picture+of+gene+expression+in+the+C.+elegans+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell-specific microarray profiling experiments reveal a comprehensive picture of gene expression in the C. elegans nervous system.</a> Genome Biology. 8 (7), 135(2007).</li>
<li>Baugh, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+homeodomain+protein+PAL-1+specifies+a+lineage-specific+regulatory+network+in+the+C.+elegans+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The homeodomain protein PAL-1 specifies a lineage-specific regulatory network in the C. elegans embryo.</a> Development. 132 (8), 1843-1854 (2005).</li>
<li>Haenni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+C.+elegans+intestinal+gene+expression+and+polyadenylation+by+fluorescence-activated+nuclei+sorting+and+3%27-end-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Analysis of C. elegans intestinal gene expression and polyadenylation by fluorescence-activated nuclei sorting and 3'-end-seq.</a> Nucleic Acids Research. 40 (13), 6304-6318 (2012).</li>
<li>Zhang, S., Banerjee, D., Kuhn, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+larval+cells+from+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of larval cells from C. elegans.</a> PLoS One. 6 (4), 19505(2011).</li>
<li>Emmert-Buck, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection.</a> Science. 274 (5289), 998-1001 (1996).</li>
<li>Hashimshony, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CEL-Seq2%3A+sensitive+highly-multiplexed+single-cell+RNA-Seq%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">CEL-Seq2: sensitive highly-multiplexed single-cell RNA-Seq.</a> Genome Biology. 17, 77(2016).</li>
<li>Yanai, I., Hashimshony, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CEL-Seq2-single-cell+RNA+sequencing+by+multiplexed+linear+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">CEL-Seq2-single-cell RNA sequencing by multiplexed linear amplification.</a> Methods in Molecular Biology. 1979, 45-56 (2019).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Ceron, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+methods%3A+synchronization+and+observation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (64), e4019(2012).</li>
<li>Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+grow+or+not+to+grow%3A+nutritional+control+of+development+during+Caenorhabditis+elegans+L1+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">To grow or not to grow: nutritional control of development during Caenorhabditis elegans L1 arrest.</a> Genetics. 194 (3), 539-555 (2013).</li>
<li>Baugh, L. R., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Starvation+responses+throughout+the+Caenorhabditis+elegans+life+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Starvation responses throughout the Caenorhabditis elegans life cycle.</a> Genetics. 216 (4), 837-878 (2020).</li>
<li>Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbard, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+glp-1+mutants+suggests+receptor+interaction+or+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition.</a> Genetics. 163 (1), 115-132 (2003).</li>
<li>Mok, D. Z., Sternberg, P. W., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologically+defined+sub-stages+of+C.+elegans+vulval+development+in+the+fourth+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Morphologically defined sub-stages of C. elegans vulval development in the fourth larval stage.</a> BMC Developmental Biology. 15, 26(2015).</li>
<li>Lytal, N., Ran, D., An, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+methods+on+single-cell+RNA-seq+data%3A+an+empirical+survey%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Normalization methods on single-cell RNA-seq data: an empirical survey.</a> Frontiers in Genetics. 11, 41(2020).</li>
<li>Vieth, B., Ziegenhain, C., Parekh, S., Enard, W., Hellmann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((powsimR%3A+power+analysis+for+bulk+and+single+cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">powsimR: power analysis for bulk and single cell RNA-seq experiments.</a> Bioinformatics. 33 (21), 3486-3488 (2017).</li>
<li>Bolkova, J., Lanctot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+gene+expression+analysis+in+Caenorhabditis+elegans+using+single+molecule+RNA+FISH%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative gene expression analysis in Caenorhabditis elegans using single molecule RNA FISH.</a> Methods. 98, 42-49 (2016).</li>
<li>Ji, N., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+molecule+fluorescent+in+situ+hybridization+%28smFISH%29+of+C.+elegans+worms+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Single molecule fluorescent in situ hybridization (smFISH) of C. elegans worms and embryos.</a> WormBook. , 1-16 (2012).</li>
<li>Lee, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+RNA+fluorescence+in+situ+hybridization+%28smFISH%29+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">Single-molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) in Caenorhabditis elegans.</a> Bio-Protocol. 7 (12), 2357(2017).</li>
<li>Baird, S. E., Chamberlin, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+briggsae+methods%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis briggsae methods.</a> WormBook. , 1-9 (2006).</li>
<li>Felix, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscheius+tipulae%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Oscheius tipulae.</a> WormBook. , 1-8 (2006).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+transgenesis+efficiency+and+CRISPR-associated+tools+through+codon+optimization+and+native+intron+addition+in+Pristionchus+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Improving transgenesis efficiency and CRISPR-associated tools through codon optimization and native intron addition in Pristionchus nematodes.</a> Genetics. 216 (4), 947-956 (2020).</li>
<li>Fernandes Povoa, E. E., Ebbing, A. L. P., Betist, M. C., vander Veen, C., Korswagen, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+dissociation+protocol+for+FACS-based+isolation+of+rare+cell+types+from+Caenorhabditis+elegans+L1+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">An optimized dissociation protocol for FACS-based isolation of rare cell types from Caenorhabditis elegans L1 larvae.</a> MethodsX. 7, 100922(2020).</li>
<li>Han, M., Wei, G., McManus, C. E., Hillier, L. W., Reinke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+C.+elegans+germ+nuclei+exhibit+distinct+genomic+profiles+of+histone+modification+and+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Isolated C. elegans germ nuclei exhibit distinct genomic profiles of histone modification and gene expression.</a> BMC Genomics. 20 (1), 500(2019).</li>
<li>Steiner, F. A., Henikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type-specific+affinity+purification+of+nuclei+for+chromatin+profiling+in+whole+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell type-specific affinity purification of nuclei for chromatin profiling in whole animals.</a> Methods in Molecular Biology. 1228, 3-14 (2015).</li>
<li>Ebbing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+C.+elegans+males+and+hermaphrodites+identifies+sex-specific+differences+in+gene+expression+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of C. elegans males and hermaphrodites identifies sex-specific differences in gene expression patterns.</a> Developmental Cell. 47 (6), 801-813 (2018).</li>
<li>Rödelsperger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+nematodes+identifies+sperm+cells+as+a+source+of+genomic+novelty+and+rapid+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of nematodes identifies sperm cells as a source of genomic novelty and rapid evolution.</a> Molecular Biology and Evolution. 38 (1), 229-243 (2021).</li>
<li>Amini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimised+protocol+for+isolation+of+RNA+from+small+sections+of+laser-capture+microdissected+FFPE+tissue+amenable+for+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing.</a> BMC Molecular Biology. 18 (1), 22(2017).</li>
</ol>

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Yöntemin kritik adımları Doğru şekilde gerçekleştirilirse, burada açıklanan yöntem, nispeten az sayıda lazerle disseke edilmiş numune içeren sağlam RNA profilleri elde edecektir (bu örnekte 70 kuyruk ucu). Bununla birlikte, gelişmekte olan hayvanlardan alınan örnekler için, sıkı senkronizasyon, numuneler arasındaki değişkenliği azaltmak için kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, protokol solucan eşitlemesi için ambar kapatma yöntemini önerir. Burada, araştırmacı bireyler arasındaki yaş farkını belirleyeb...

Nematodlar – özellikle Caenorhabditis elegans model sistemi ile ilgili rabditid nematodlar – birçok nedenden dolayı evrimsel gelişim biyolojisi (EDB) için harika bir hayvan grubudur 1,2. Avantajları arasında az sayıda hücre, tanımlanmış ve tutarlı hücre soyları, şeffaflık ve kültür ve hayvancılık kolaylığı sayılabilir. Ayrıca, birden fazla tür için yüksek kaliteli genomlar ve C. elegans için kapsamlı moleküler genetik araçlar ve gelişim, genetik, anatomi ve fizyoloji hakkında bilgi 3,4,5,6 dahil olmak üzere birçok kaynak mevcuttur.
Diğer birçok organizmada olduğu gibi, tek dokularda veya tek hücrelerde transkriptom dinamiklerini karakterize etme yeteneği, C. elegans 7,8,9,10'daki gelişim analizinde devrim yaratmıştır. Nematodlar arasındaki tek hücreli transkriptomları karşılaştırabilmek, bu organizmaları kullanarak EDB'yi benzer şekilde dönüştürecektir. Örneğin, bu tür karşılaştırmalar, gen düzenleyici ağların korunan karakterler (özellikler), ayrılan karakterler veya bağımsız olarak evrimleşen karakterler için nasıl geliştiğine dair fikir verecektir.

Bununla birlikte, belirli dokuları veya hücreleri nematodlardan izole etmek en büyük zorluklardan biridir. Birçok organizma için, tek hücreler dokulardan ayrılabilir ve tarafsız bir şekilde toplanabilir veya bir floresan proteininin dokuya özgü ekspresyonu ile etiketlenebilir ve floresan ile aktive edilmiş hücre sıralama (FACS) 11 ile sıralanabilir. C. elegans'ta, hücrelerin yüksek verimli (HTP) izolasyonu çoğunlukla embriyolarla sınırlandırılmıştır, çünkü sert dış kütikül (ve hidrostatik iskelet) larvalardan ve yetişkinlerden hücre izolasyonunu engellemiştir. Bu zorluğun üstesinden gelmek için, bazı yöntemler, dokuya özgü mRNA etiketleme12 gibi tüm C. elegans solucanlarında genetik araçlar ve bir hücre tipi13'ü etkileyen vahşi tip ve mutantlar arasındaki diferansiyel ekspresyon karşılaştırmalarını kullanmıştır. Daha yeni yöntemler, çekirdek14'ü veya tüm hücreleri 8,9,15 izole etmek için kütikülü çözerek zorluğun üstesinden gelmiştir. Bununla birlikte, hücre izolasyonu ve hücre kültürü, hücrelerin doğal gelişimsel veya anatomik bağlamlarından (örneğin, hücre-hücre sinyallemesinden ve hücre dışı matrisle temastan uzak) uzaklaştırılmasının belirgin dezavantajlarına sahiptir ve bunların gen ekspresyon profilini etkilemesi beklenmektedir15. Dahası, genetik araçlar ve dokuya özgü belirteçler türe özgüdür (yani, sadece C. elegans'ta kullanılabilirler).
LMD, hücrelerin doğal bağlamını bozmadan dokuları izole etmek için alternatif bir yöntem sunar. EDB için önemli ölçüde LMD, bu türlerin genomu veya tüm transkriptom dizileri mevcutsa, türe özgü genetik araç setlerine ihtiyaç duymadan farklı türlerin homolog dokularından transkriptomların karşılaştırılmasına da izin verir. LMD, doğrudan mikroskobik gözlem yoluyla dokuları hedeflemeyi ve ilgilenilen dokuyu kesmek ve hasat etmek (yakalamak) için mikroskopun optiğine entegre edilmiş bir lazer mikroışını kullanmayı içerir16. LMD'nin sınırlamaları, çok HTP yaklaşımlarına elverişli olmamasıdır (bu protokolde açıklandığı gibi kuyruk uçları için transkripsiyon profilleri ~ 70 numune ile sağlam olmasına rağmen), bazı numunelerin diseksiyonu zor olabilir ve kesikler lazerin hassasiyeti ve mikroskopta görselleştirilebilecek şeylerle sınırlıdır.
Bu protokolün amacı, LMD'nin, ardından tek dokulu RNA-Seq'in, nematodlardan evre ve dokuya özgü transkriptom verilerini elde etmek için nasıl kullanılabileceğini tanımlamaktır. Spesifik olarak, kuyruk uçlarını C. elegans'ın dördüncü aşama larvalarından (L4) izole etmek için LMD'yi gösterir. Bununla birlikte, bu yöntem diğer dokulara ve elbette farklı türlere uyarlanabilir.
C. elegans'ta, hem erkeklerde hem de hermafroditlerde kuyruk ucunu yapan 4 hücre vardır. Erkeklerde L4 aşamasında - ancak hermafroditlerde değil - kuyruk ucu hücreleri şekillerini değiştirir ve ön ve içe doğru göç eder. Bu süreç aynı zamanda diğer tüm rabditid nematod türlerinde değil, bazılarında da görülür. Bu nedenle, kuyruk ucu cinsel dimorfik morfogenezin evrimi için iyi bir modeldir. Konumu nedeniyle, kuyruk ucunun LMD tarafından izole edilmesi de kolaydır.
Kuyruk uçlarından transkriptom profilleri elde etmek için, mevcut protokol tek hücreler için geliştirilmiş bir RNA-seq yöntemi olan CEL-Seq2'yi kullanır17,18. Bu yöntemin LMD türevi dokular için birçok avantajı vardır. CEL-Seq2, mRNA okumalarının doğrudan nicelleştirilmesine, doğrusal amplifikasyonu sağlamak için in vitro transkripsiyona ve bireysel doku örneklerinin çoğullanmasına izin veren barkodlamaya izin vermek için benzersiz moleküler tanımlayıcılar (UMI'ler) kullanarak oldukça hassas ve verimlidir. CEL-Seq2'nin tek sınırlaması, geri kazanılan okumaların mRNA'ların 3' ucuna önyargılı olması ve bu nedenle çoğu izoformun ayırt edilememesidir.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 0.5 ve mikro; LMD 500 ve mikro için M PEN membran cam kızaklar RNase içermeyen</td><td>Leica</td><td>11600288</td><td></td></tr><tr><td>; L PCR tüpleri (nükleaz içermez)</td> <td>Axygen</td><td>732-0675</td>, <td>kuyruk uçlarını</td></tr><tr><td>40x objektifli Bileşik mikroskobu kesmek için ve solucanların</td><td>yaşını kontrol etmek için</td><td>DIC</td><td></td> Masaüstü</tr> nemlendirici, <tr><td>iletilen ışık tabanlı</td><td></td><td></td>herhangi bir Diseksiyon mikroskobu, tüm solucan işleri için herhangi biri<td></td></tr>, <tr><td></td><td></td> cam pasteur pipetleri, herhangi bir solucan penası kolu <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solucanların yaşını kontrol etmek için</td><td>herhangi bir</td><td></td> <td>cam slaytlar ve lameller</td></tr><tr><td>LMD6 mikrodiseksiyon sistemi</td><td>Leica</td><td>kuyruk</td><td>uçlarını kesmek için</td>çoklu</tr><tr><td>LoBind tüpleri 0,5 mL</td><td>22431005</td><td></td><td>WormBook</td></tr> Metanolde <tr><td>M9 Tampon</td><td></td><td></td><td>Tarifi</td></tr><tr><td>%99,8</td> <td>Sigma</td><td>Solucanları düzeltmek için</td><td>322415</td></tr><tr><td>NGM büyüme ortamı</td><td>ABD Biyolojik</td><td>N1000</td><td>Tamponları ve tuzları eklenmelidir: WormBook</td></tr><tr><td>P10 pipet değişken hacmindeki</td> tarif<td>, örneğin Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000 pipet değişken hacmi</td>, <td>örneğin Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 pipet değişken hacmi</td>, <td>örneğin Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları 1.000 ve mikro; L</td><td>herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet ucu 1-10 ve mikro; L filtrelenmiş</td><td>herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>platin iridyum tel</td><td>Tritech</td><td>PT-9010</td><td>solucan toplama</td></tr><tr><td>steril ve nükleaz içermeyen 1 mL santrifüj tüpleri</td><td>yapmak için herhangi</td><td></td><td></td></tr><tr>bir<td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P9416</td><td>Solucanların pipet uçlarına yapışmasını önlemek için M9 tamponuna çok küçük bir miktar ekleyin,</td></tr><tr><td>havalandırmalı 6 mm plastik Petri kapları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> CEL-Seq2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4200 için Yüksek hassasiyetli RNA ve DNA tespiti için reaktifler içeren TapeStation Sistemi</td><td>Aligent</td><td></td><td>otomatik elektroforez sistemi</td></tr><tr><td>AMPure XP boncukları</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63880</td><td>DNA temizleme boncukları</td></tr><tr><td>Boncuk bağlama tamponu&nbsp; %20 PEG8000, 2,5 M NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CEL-Seq2 primerleri (bakınız Tablo S1)</td><td>Sigma Genosys Mastercycler Nexus GX2 Eppendorf</td><td>6335000020</td><td>200 & mikro için programlanabilir kapaklı ve bloklu termal döngüleyici; l tüpler.</td></tr><tr><td>DNA Polimeraz I (E. coli)</td><td>İnvitrojen</td><td>18052-025</td><td></td></tr><tr><td>dNTP karışımı 10 mM</td><td>any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli PCR Ürün Temizleme için DNA ligaz</td><td>Invitrogen</td><td>18052-019</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ExoSAP-IT</td><td>Affymetrix</td><td>78200</td><td>eksonükleaz çözeltisi</td></tr><tr><td>MEGAscript T7 Transkripsiyon Kiti</td><td>Ambion</td><td>AM1334</td><td>Adım 4.6.1 için</td></tr><tr><td>Nükleaz içermeyen herhangi</td><td></td><td></td><td></td></tr> bir <tr><td>Phusion Yüksek Kaliteli PCR Master Karışımı, HF Tamponu</td><td>ile NEB</td><td>M0531</td>, <td>PCR karışım adımı, 4.9.7</td></tr>, <tr><td>rastgele heksamer RT astarı, GCCTTGGCACCCGAGAATTCCA , NNNNNN,</td><td>IDT,</td><td></td> rastgele RNA Parçalanma tamponu olan <td>6 nükleotidli bir astar</td></tr>, <tr><td></td><td>NEB</td><td>E6150S</td><td></td></tr><tr><td>RNA Parçalanma durdurma tamponu</td><td>NEB</td><td>E6150S</td><td></td></tr><tr><td>RNA PCR İNDEKSI Primerleri (RPI1&ndash; RPI48)</td>Protokol <td>adımı 4.9.7'de</td> <td>Illumina, NEB veya IDT</td><td></td> RPIX, Illumina</tr><tr><td>RNAClean XP boncukları</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63987</td><td></td></tr><tr><td>RNase AWAY Yüzey Dekontaminantı</td><td>Thermo Scientific</td><td>7000TS1</td><td>veya diğer benzer ürünlerden</td></tr> elde edilebilen diziler <tr><td>RNaseH ( E. coli)</td> <td>Invitrogen</td><td>18021-071</td><td></td></tr><tr><td>RNaseOUT Rekombinant Ribonükleaz İnhibitörü</td><td>Invitrogen</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>İkinci iplikçik tamponu</td><td>Invitrogen</td><td>10812-014</td><td></td></tr><tr><td>Superscripit II</td><td>Invitrogen</td><td>18064-014</td><td>ters transkriptaz</td></tr></tbody></table>

türlerden agnostik tek doku uygulamaları için lazer mikrodiseksiyonu

Laser Microdissection for Species-Agnostic Single-Tissue Applications

Tek hücreli metodolojiler, spesifik hücre tiplerinin transkriptomlarının analizinde devrim yaratmıştır. Bununla birlikte, genellikle floresan proteinlerin dokuya özgü ekspresyonunu yönlendiren destekleyiciler gibi türe özgü genetik "araç setleri" gerektirirler. Ayrıca, bireysel hücreleri izole etmek için dokuları bozan protokoller, hücreleri doğal ortamlarından uzaklaştırır (örneğin, komşulardan sinyal verme) ve stres tepkilerine veya doğal gen ekspresyon durumlarından başka farklılıklara neden olabilir. Mevcut protokolde, lazer mikrodiseksiyonu (LMD), erkek kuyruk ucu morfogenezi sırasında gen ekspresyonunun incelenmesi için bireysel nematod kuyruk uçlarını izole etmek için optimize edilmiştir.
LMD, hücresel bozulmaya veya türe özgü araç setlerine ihtiyaç duymadan hayvanın bir kısmının izole edilmesine izin verir ve bu nedenle herhangi bir türe uygulanabilir. Daha sonra, CEL-Seq2 gibi tek hücreli RNA-seq kütüphanesi hazırlama protokolleri, LMD ile izole edilmiş tek dokulara uygulanabilir ve türler için iyi açıklamalı bir genom veya transkriptomun mevcut olması koşuluyla, standart boru hatları kullanılarak analiz edilebilir. Bu tür veriler, bu dokunun farklı türlerdeki gelişiminin altında yatan transkriptomların ne kadar korunduğunu veya farklı olduğunu belirlemek için kullanılabilir.
Sınırlamalar, ilgilenilen dokuyu ve örneklem büyüklüğünü kesme yeteneğini içerir. Bir güç analizi, %80 güç için koşul başına 70 kadar az kuyruk ucunun gerekli olduğunu göstermektedir. Aynı gelişim aşamasında bu sayıda hayvanı elde etmek için gelişimin sıkı senkronizasyonu gereklidir. Böylece, hayvanları 1 saatlik aralıklarla senkronize etmek için bir yöntem de açıklanmaktadır.

Lazer yakalama mikrodiseksiyonunu takiben, erkeklerin ve hermafroditlerin 4 zaman noktasında bireysel kuyruk uçları (L3 Yumurtadan 22 saat sonra; L4 24, 26 ve 28 saat sonra kapak) CEL-Seq2 protokolü kullanılarak RNA dizilimi için hazırlandı. CEL-Seq2 astarları, belirli bir numuneden (bu durumda bireysel bir kuyruk ucundan) gelen sıralama okumalarının biyoinformatik olarak tanımlanmasını sağlayan benzersiz barkodlar içerir. Bu yöntemle toplam 557 kuyruk ucu (4 gelişimsel zaman noktasında 266 hermafrodit ve 291 erkek, cins...

RNA dizilimi için bireysel nematod dokularını izole etmek için lazer mikrodiseksiyonu kullanan bir protokol tanımlanmıştır. Protokol, türe özgü genetik araç setleri gerektirmez ve gen ekspresyon profillerinin tek doku örnekleri düzeyinde farklı türler arasında karşılaştırılmasına izin verir.

Türlerden Agnostik Tek Doku Uygulamaları için Lazer Mikrodiseksiyonu

Single-cell methodologies have revolutionized the analysis of the transcriptomes of specific cell types. However, they often require species-specific ...

Lazer yakalama mikrodiseksiyonunu, küçük bireysel doku örnekleri için transkriptomik veri setleri oluşturmak üzere CEL-Seq2 adı verilen tek hücreli bir RNA arama protokolü ile birleştiriyoruz. Bu teknik, geleneksel hücre sıralama yöntemleri kullanılarak çalışılamayan dokulardaki veya türlerdeki gen ekspresyonunu incelememizi sağlar. Ek olarak, toplu RNA-seq yaklaşımından daha fazla özgüllük sağlar.Burada bu tekniği C.elegans dördüncü larva evre erkeklerinin ve hermafroditlerin dört hücreli kuyruk uçları için gösterdik. Ancak bu yaklaşımın güzelliği, model olmayan türlere bile uygulanabilmesidir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora öğrencisi Bayan Raya Jallad ve şu anda Chattanooga, Tennessee'deki Baylor okulunda biyomedikal bilim adamı olan Dr. Antonio Herrera olacak.Bir ila iki mililitre M9 tamponunu fışkırtmadan plakanın duvarına hafifçe pipetleyerek başlayın. Solucanları yerinden çıkarmak için plakayı döndürün. Deliklerin açılmasını önlemek için pipet ucunu agarın kenarındaki plakanın duvarına yerleştirerek tüm sıvıyı ve solucanları çıkarın ve atın.Bu video, anneler ve larvalar çıkarılmadan önce plakayı göstermektedir. Anneler ve larvalar çıkarıldıktan sonra sadece embriyolar bırakılmalıdır. L1 larva, kuluçkadan sonra bir saat kadar görünmeye başlayacaktır.Ardından plakayı 25 santigrat dereceye yerleştirin. Bir saat sonra, plakayı inkübatörden çıkarın. Bir mililitre M9 tamponunu agarın üzerine dikkatlice bırakın ve L1'leri yerinden çıkarmak için plakayı döndürün, ancak embriyoları değil.Tüpü ve pipeti L1'leri doğrudan tohumlanmış bir plakanın bakteriyel çimine santrifüj edin. Solucanları 25 santigrat derecede tutun. 30 ila 50 X büyütmede bir diseksiyon mikroskobu altında, erkekleri ve hermafroditleri senkronizasyon plakalarından ayrı oturmamış plakalara toplamaya başlayın.Erkekler, hermafrodit kuyruklarının sivri şekli ve koyu rengine kıyasla erkek kuyruklarının şişkin şekli ve daha açık rengi ile hermafroditlerden ayırt edilir. %0,01 deterjan içeren M9 tamponu ile önceden yıkanmış bir pipet ucu kullanarak solucanları plakadan bir ila iki mililitre M9 tamponu ile yıkayın. Solucanları bir mililitrelik santrifüj tüpüne aktarın, bir dakika döndürün ve bir mililitre M9 tamponu ekleyin.Yine, bir dakika boyunca döndürün. Bir mililitre buz gibi soğuk% 70 metanol ekleyin ve iyice karıştırın. Yıkamayı bir mililitre metanol ile tekrarlayın, iyice karıştırın.Bir dakika boyunca döndürün ve 500 mikrolitre% 70 metanol ekleyin. Karıştırın ve bir saat ila bir gece boyunca dört santigrat derecede saklayın. Pipet, bir polietilen naftalat veya PEN membranlı cam kızağın kaplanmış tarafına 20 mikrolitre sabit solucanlar.Metanolün buharlaşmasını bekleyin. Sahne alanının üzerindeki plastik kalkanı çıkarın ve membran kızaklarını yüklemek için yukarı doğru okla boşaltma düğmesine tıklayın. Kızağın tamamen kuru olduğundan emin olun, membran aşağı bakacak şekilde çevirin ve slaytı yerleştirin.Örneği değiştir penceresinde devam'ı tıklatın. Slayt tutucu hareket edecektir. Ardından, ekranın altındaki plastik kalkanı değiştirin, hangi slayt tutucunun slaytı içerdiğini seçin ve tüpleri yüklemek için aşağı ok ile boşaltma düğmesine tıklayın.Tepsiyi dışarı çekin ve tüp bloğunu çıkarın. Dört adet 500 mikrolitrelik PCR tüpünün tüp kapaklarını tutucuya yerleştirin ve tüpü altına katlayın. Bloğu tepsiye geri döndürün ve tepsiyi mikroskop aşamasına geri kaydırın.Toplayıcı aygıtı değiştir açılır penceresinde, PCR tüpleri'ni seçin ve Tamam'ı tıklatın. Kollektör cihazı tüp kapaklarının altındaki ekranın sol alt köşesindeki boş tüp konumuna tıklayın ve mikroskop kontrol panelinde iletilen ışık parlak alan aydınlatması için TLBF'yi seçin. 2.5X lensi kullanarak, solucanlar ve PEN membranın yüzey yapısı görünene kadar odağı ayarlayın.20X lense geçin ve sahne alanını solucanların olmadığı bir bölgeye taşıyın. Odağı, zardaki kabarcık benzeri yapılar, lazeri doğru odak düzlemine odaklamak için sarımsı bir renge sahip olacak şekilde ayarlayın ve ardından lazer parametrelerini ayarlayın. Kuyruk uçları için, güç 45 diyafram açıklığı 30 hız 20 ile başlayın.Lazer kontrol panelinde kalibre et'i seçin ve talimatları izleyin. Ardından, toplayıcı cihaz tüp kapaklarındaki ekranın alt kısmında A konumuna tıklayın, ekranın sağ tarafında tek bir şekil seçin, ardından çizin ve kesin. Ardından noktadan noktaya seçin ve bir çizgi çizin.Lazerin membranı kesmesi için kesmeye başla'yı tıklayın. Bir solucan bulun ve hareket etmek ve kesmek için geçiş yapın. Kuyruğu kesmek için fareyi kullanın.Numuneyi toplamak için, noktadan noktaya işleviyle çekme ve kesme ayarına geçin ve bir membran bölümünün kesimini tamamlamak için şekil çizin. Ekranın altındaki toplayıcı cihaz tüp kapağında bir sonraki tüpü seçin ve bir sonraki kuyruk ucunu kesin. Dört kuyruk kesildikten sonra, aşağı doğru okla boşalt'a tıklayarak tüp rafını boşaltın.Membran kesitlerini diseksiyon mikroskobu altında bulun ve çıkış yönündeki numune işlemeye devam edin. Burada CEL-Seq2 ile RNA dizilimi. Pipet 1,2 mikrolitrelik bir CEL-Seq2 astar ana karışımı doğrudan numunenin üzerine gelir ve tüpü kapatın.Astar numarası ile etiketleyin ve numuneyi dondurmak için tüp kapağını doğrudan bir kuru buz parçasının üzerine yerleştirin, böylece RNA bozulmasını önleyin. Tüm örnekler toplanana kadar tekrarlayın. Sonunda tüpleri eksi 70 santigrat derecede saklayın.C.elegans L3 hermafroditleri ve yumurtadan çıktıktan 21 ila 23 saat sonra erkekler, diseksiyon mikroskobu altında kuyruklarının morfolojisi ile ayırt edilebilir. Hermafrodit masalı dar, erkeklerinki şişmiş ve net görünüyor. Bu görüntülerde PEN membran slayt yapısının ve solucan kuyruğunun görünümü gösterilmektedir.Burada mikroskoptaki 20X ve 40X lensler için odak doğrudur. Parçalanmış kuyruk tarafsız bir şekilde kesilmiş PEN zarı burada görülebilir. Kesimdeki boşluğu kapattıktan sonra, membran parçası kızağın altındaki tüp kapağına düşecektir.Burada disseke edilmiş bir kuyruk ucu içeren bir PEN membran bölümüne sahip bir tüp kapağı gösterilmektedir. Grafik görüntü, farklı zaman noktaları ve cinsiyetler için bireysel kuyruk ucu başına doğal kütüğe dönüştürülmüş benzersiz moleküler tanımlayıcıyı veya UMI sayımlarını temsil eder. PowsimR yazılımı, çeşitli ekspresyon seviyelerinde diferansiyel eksprese veya DE genlerini tespit etmek için kaç bağımsız numunenin gerekli olduğunu belirlemek için kullanılır.Buradaki grafik görüntü, koşul başına farklı örneklem boyutlarını içeren dört farklı simülasyon için iki koşul arasındaki DE genlerini tespit etmek için gerçek pozitif oranı temsil eder. Kesikli çizgi, %80 gerçek pozitif oranı gösterir. Yanlış keşif oranı ve aynı dört simülasyon burada gösterilmiştir.Kesikli çizgi, %10 yanlış keşif oranını gösterir. Grafikler, durum başına 70 kuyruk ucundan oluşan bir örneklem büyüklüğünün, çok düşük ekspresyon seviyelerine sahip genler hariç, DE genlerini tespit etmek için yeterli olduğunu göstermiştir. Doğru senkronizasyon için, plakada sadece embriyoların bulunduğundan emin olun.Numune kaybına karşı emin olmak için, astarın pipeti doğrudan kapaktaki PEN membran bölümüne karıştırın ve kapağı kapatırken son derece nazik olun. Türlerden bağımsız olduğu için, bu protokolü gen düzenleyici ağların farklı türlerdeki homolog yapılar için nasıl geliştiğini keşfetmek için kullanabiliriz.

laser-microdissection-for-species-agnostic-single-tissue-applications

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Memeli Doku Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon

Video, 3D organotipik ko-kültür modelinin mikron düzeyinde hassasiyetle lazer diseksiyonunu açıklamaktadır. 3D organotipik modellerde, fibroblastlar gibi stromal bileşenler, kanser epitel hücreleri ile 3 boyutlu olarak birlikte kültürlenir. 3D model, invazyon ve kanser-stroma etkileşimlerinin yakın fizyolojik koşullarda incelenmesini sağlayan deneysel bir araç olarak hizmet eder.

Lazer Mikrodiseksiyon: İstilacı Kolorektal Kanser hücrelerini 3D Organotipik Kültür Modelinden İzole Etme Tekniği

Bu videoda, lazer yakalama mikrodiseksiyonu kullanılarak heterojen bir hücre popülasyonundan tek bir hücre elde etme tekniği açıklanmaktadır. İzole edilen tek hücre, daha ileri genomik çalışmalar veya kanser araştırmaları için kullanılabilir.

Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu Kullanılarak Tek Hücre Örneklemesi: Heterojen Bir Hücre Popülasyonundan Hedef Hücreleri Hasat Etme Tekniği

SIVQ-LCM lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) işlemi sürücü, bir bilgisayar algoritması, Mekansal Değişmeyen Vektör Nicelemek (SIVQ) sürdürür yenilikçi bir yaklaşımdır. SIVQ-LCM akışı büyük ölçüde araştırma ve klinik ortamlarda hem de uygulamaları ile, Mikrodiseksiyon hızını ve doğruluğunu artırır.

ArcturusXT Instrument için SIVQ-LCM Protokolü

Diseksiyon yaygın doku içindeki DNA, RNA ve protein incelenmesi için kullanılmıştır. Lazer yakalama mikroskobu (LCM) en sık kullanılan yöntem, ancak, yeni bir freze tekniği, mesodissection, son zamanlarda kullanılabilir. Biz mesodissected formalin sabit parafin Mycobacterium tuberculosis granülomlarının gömülü doku slaytlar RNA çıkarma göstermektedir.

Kurtarma Bir Roman Mikrodiseksiyon Yaklaşımı<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</emAkciğer granülomlara Gömülü Formalinle Sabit Parafin dan&gt; Özel Transkript

Bireysel dopamin nöronlarının izolasyon ya da doğrudan veya dolaylı olarak immunohistokimyasal ile ventral tegmental alan lazer yakalama mikrodiseksiyon kullanılarak gösterilmiştir. Kızılötesi lazer kullanarak cam slayt doku izolasyonu ve bir kızılötesi ve morötesi lazer kombinasyonu kullanılarak membran slaytlar arasındaki parametreler tartışılmıştır.

Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon - Bireysel Dopamin Nöronlar İzolasyonu ve Tüm ventral tegmental Area bir Gösteri

Burada, transkripsiyonel profilleme için belirli bitki hücre tiplerinin lazer destekli mikrodiseksiyonu için bir protokol sunuyoruz. Protokol farklı türler ve hücre tipleri için uygun olsa da, odak noktası, turpgil cinsi Boechera'da eşeyli ve apomiktik üreme için önemli olan dişi germ hattının son derece erişilemez hücreleridir.

Bireysel Hücre Tiplerinin transkripsiyonel Profiling için bir alet olarak lazer destekli mikrodiseksiyon (LAM)

Lazer mikrodisesi ( LMD) glioma heterojenite ve invazyon aracılık yolları ortaya çıkarmak için kullanılabilecek hassas ve son derece tekrarlanabilir bir tekniktir. Burada lazer LMD kullanarak glioma dokusundan ayrık alanları izole etmek ve ardından transkripsiyonanalizi yapmak için optimize edilmiş bir protokol tanımlıyoruz.

İntratümöral Heterojenite, Oncostreams ve Invasion'ın Mekansal ve Moleküler Karakterizasyonu için Glioma Alt Bölgelerinin Lazer Yakalama Mikrodizması

Bu protokol, lazer mikrodiseksiyonu kullanarak histoloji ile çözülmüş hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesi için lekeli, ince doku kesiti görüntülerinden patoloji onaylı ilgi alanlarının yapay zeka odaklı segmentasyonu için yüksek verimli bir iş akışını açıklamaktadır. Bu strateji, ilgilenilen hücre popülasyonlarını gösteren sınırların doğrudan lazer mikroskoplara aktarılmasını sağlayan yeni bir algoritma içerir.

Tümör Mikroçevresinin Mikro Ölçekli Proteomik Analizi için Endüstriyelleşmiş, Yapay Zeka Rehberliğinde Lazer Mikrodiseksiyonu

Oral submukoz fibroz dokularının lazer yakalama mikrodiseksiyonu, morfolojik ve mekansal bilgilerle multi-omik verilerin analizi için ilgilenilen histolojik bölgelerden hücrelerin hassas bir şekilde çıkarılmasına izin verir.

Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu ile Oral Submukoz Fibrozis Örneklerinden Morfolojik ve Mekansal Bilgilerle Hücrelerin İzolasyonu

Bu protokol, paraformaldehit sabitlenmiş, Optimal Kesme Sıcaklığı bileşen gömülü fare karaciğer dokusunun tanımlı histolojik bölgelerinden RNA'yı lazer yakalama mikrodiseksiyonu kullanarak izole etme yöntemini tanımlar; böylece hedefe yönelik aşağı akım gen ekspresyonu analizi mümkün olur.

RNA analizi için paraformaldehit sabitli fare karaciğer dokusunun lazer yakalama mikrodiseksiyonu

Öğrenin, lazer mikrodiseksiyon ve CEL-Seq2 protokolünü kullanarak C. elegans kuyruk uçlarından transkriptomik veri elde etme yöntemini. Bu teknik, model olmayan türlerde doku spesifik gen ekspresyonu analizini mümkün kılar.

Türlerden Agnostik Tek Doku Uygulamaları için Lazer Mikrodiseksiyonu

Daha fazla video keşfet