Name: HIV-1 Enfekte İnsanlaştırılmış Farelerde Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Keşfedin, HIV-1 enfekte insanlaştırılmış farelerde oral kombinasyonel antiretroviral tedavi yöntemiyle viral RNA replikasyonunu nasıl baskılayabilirsiniz. Bu güvenli ve stres azaltıcı teknik, kronik HIV tedavileri için preklinik kavram kanıtı çalışmalarında değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada kullanılan antiretroviral ilaçları sağladıkları için Dr. Romas Geleziunas ve Jeff Murry'ye ve Gilead'deki insanlara teşekkür ederiz. Bu çalışma NCI 1R01CA239261-01 (Mutfağa), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Viroloji Çekirdeği, Gen ve Hücre Terapisi Çekirdeği ve İnsanlaştırılmış Fare Çekirdeği), U19AI149504 (PI'ler: Mutfak ve Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (Zhen'e), NIAID R2120200174 (PI'ler: Xie ve Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo) tarafından finanse edildi. Bu çalışma UCLA AIDS Enstitüsü, James B. Pendleton Charitable Trust ve McCarthy Aile Vakfı tarafından da desteklendi.

Anonimleştirilmiş insan fetal dokusu ticari olarak edinildi. Hayvan araştırmaları, Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles ve (UCLA) Hayvan Araştırma Komitesi (ARC) tarafından onaylanan protokollere göre, tüm federal, eyalet ve yerel yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Özellikle, tüm deneyler, UCLA ARC Protokol Numarası 2010-038-02B kapsamında Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) ve Uluslararası Laboratuvar Hayvanları Bakımının Değerlendirilmesi ve Akreditasyonu Derneği (AALAC) laboratuvar hayvanlarının barınması ve bakımı için önerilere ve kılavuzlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm ameliyatlar ketamin (100 mg/kg)/ksilazin (5 mg/kg) ve izofluran anestezisi (%2-3 vol) altında yapılmış ve hayvan ağrı ve rahatsızlığını en aza indirmek için tüm çabalar gösterilmiştir.
1. HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış fareler
NOT: İnsanlaştırılmış fareler daha önce 30,31,49'da açıklandığı gibi inşa edilmiştir. Protokol aşağıda kısaca açıklanmıştır.
<ol><li>CD34 + hematopoetik progenitör hücrelerini, üreticinin protokolüne göre anti-CD34 mikroboncukları aracılığıyla insan fetal karaciğerinden arındırın.</li>
	<li>6-8 haftalık NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) erkek ve dişi fareleri anestezi altına alın ve ameliyattan önce alt lökal olarak ışınlayın (2.7 Gy).</li>
	<li>İmplant timus, fetal karaciğer ile aynı donörden türetilen, karaciğer ile birlikte böbrek kapsülünün altında.</li>
	<li>İmplantasyonu takiben, farelere intravenöz olarak 0.5 milyon ila bir milyon CD34 + hücresi enjekte edin.</li>
	<li>8-10 hafta sonra, retro-orbital kanama yoluyla 100 μL fare kanınıtoplayın 50, 5 μL EDTA içeren mikrosantrifüj tüplerine ve 3 dakika boyunca 350 x g'de santrifüj yapın.</li>
	<li>Fareye HIV-1 bulaştıktan sonra viral yükü izlemek için plazmayı -80 ° C'de saklayın. 2 mL% 83 NH4C çözeltisi ekleyin ve kırmızı kan hücrelerini lize etmek için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.</li>
	<li>Lizizi durdurmak için% 10 Fetal Sığır Serumu (FBS) ile 10 mL RPMI ekleyin. 5 dakika boyunca 300 x g'de döndürün.</li>
	<li>Süper natantı aspire edin. Antikor panelli leke hücreleri (bakınız Malzeme Tablosu) ve insan bağışıklık hücresi engraftmanını kontrol etmek için akış sitometrisi ile analiz edin.</li>
	<li>Bir insülin şırıngası kullanarak birHIV-1 suşunun (yani, NFNSXSL9 30,53,54) en az 200 ng p24'ü ile retro-orbital ven enjeksiyonu 51,52 ile dolaşımdaki CD45 + hücrelerinin%50'sinden fazlasını sergileyen fareleri enfekte edin. Akış sitometri analizi ve viral yükü ölçmek için iki haftada bir kan toplayın.</li>
</ol>2. ART ilaçlarının hazırlanması
<ol><li>Bireysel ilaçları tartın; Örneğin, cART ile 10 gıda bardağı yapmak için, bir biyogüvenlik kabinindeki bireysel steril 15 mL santrifüj tüplerine 250 mg FTC (Emtricitabin), 375 mg TDF ve 500 mg RAL veya ELV'yi tartmak için steril hücre kazıyıcıları kullanın.</li>
	<li>250 mg FTC tüpüne 1 mL DMSO ekleyin (250 mg / mL'lik son konsantrasyon), 375 mg TDF tüpüne 1.5 mL DMSO ekleyin (250 mg / mL'lik son konsantrasyon) ve 500 mg RAL veya ELV tüpüne 1mL DMSO ekleyin (500 mg / mL'lik son konsantrasyon). İlaç karışımını tamamen çözünene ve berrak bir çözelti elde edilene kadar karıştırın veya pipetleyin.</li>
	<li>Steril bir şırınga ile çözeltileri sterilize etmek için 0,22 μM gözenek boyutunda hidrofilik PVDF membran filtre kullanın. Bireysel ilaç çözeltileri 12 hafta boyunca -20 ° C'de saklanabilir.</li>
	<li>Kullanıma hazır olduğunda, çözelti netleşene kadar her ilaç çözeltisinin bir alikotunu 37 ° C'de taze olarak çözün. Bir pipet kullanarak iyice karıştırın.</li>
	<li>Ana karışımı oluşturmak için ilaçları birleştirin ve iyice karıştırın: DMSO'da 1 mL FTC, DMSO'da 1,5 mL TDF ve DMSO'da 1 mL ELV veya RAL. NOT: Bu miktar 10 yemek bardağı yapacaktır.</li>
	<li>Bir DietGel Boost cART fincanı yapmak için bir kaba 350 μL cART master mix solüsyonu ekleyin.</li>
	<li>Bardağa 0.75 mL Trimetoprim-Sülfametoksazol (0.48 mg / mL nihai konsantrasyon) ekleyin.</li>
	<li>1 mL steril pipet uçlarını kullanarak iyice karıştırın.</li>
	<li>Aliquot orijinal bardaktan cART içeren gıda kabını, gerektiğinde 60 mm'lik bir Petri kabına mikro spatula ile alın. Fare sayısına göre her kafes için cART içeren yiyecek kabı miktarını hesaplamak için yiyeceği bir ölçekte tartın.</li>
</ol>3. ART ilaçlarının HIV-1 ile enfekte farelere uygulanması
<ol><li>Kafesten düzenli chow'u çıkarın ve cART içeren bir yiyecek kabı ile değiştirin. NOT: Ortalama olarak, bir fare günde 5 g'a kadar yiyecek yiyecektir. Yaklaşık bir yiyecek kabı 2 gün boyunca beş fareye uygulanabilir.</li>
	<li>CART yiyeceklerini haftada üç kez yenileyin.</li>
	<li>Alımı izlemek için kullanılmış bardakları tartın. Tüketimi doğrulamak için fareleri haftalık olarak tartın.</li>
</ol>4. Gerçek zamanlı PCR ile viral yükü izleyin
<ol><li>İnsan bağışıklık hücrelerini (CD4 ve CD8 T hücre seviyeleri) ve BLT farelerinde HIV-1 replikasyonunu her 2 haftada bir retro-orbital kanama ile değerlendirin. Adım 1.5-1.8'deki talimatları izleyerek plazma toplayın.</li>
	<li>8 hafta boyunca oral cART uygulamasından önce ve sırasında HIV-1 ile enfekte olmuş farelerin plazma viral yüklerini izleyin. Bir viral RNA ekstraksiyon kiti kullanarak plazmadan plazma viral RNA'sını çıkarın ve daha önce tarif edildiği gibi primerleri ve probları kullanarak gerçek zamanlı PCR ile ölçün (bakınız Malzeme Tablosu) 27,30,31. Aşağıdaki döngü protokolünü kullanın: 48 °C (15 dakika), 95 °C (10 dakika), ardından 45 döngü için 95 °C (15 sn), 60 °C (1 dakika) bisiklet kullanın.</li>
</ol>5. CD4 / CD8 oranlarını akış sitometrisi ile değerlendirin
<ol><li>1.5-1.8 adımlarını izleyerek iki haftada bir kanamaların periferik kanından tek hücreli süspansiyonlar hazırlayın.</li>
	<li>Yüzey belirteçleri ile leke hücreleri ve akış sitometrisi ile analiz edilir. Akış sitometrisinde aşağıdaki yüzey işaretleyici antikorları 27,30,43,49'u kullanın: CD45 (klon HI30), CD8 (klon SK1), CD3 (klon OKT3), CD4 (klon RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

SK, CDR3 Inc.'in kurucusudur. Geri kalan yazarlar, araştırmanın potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişkinin yokluğunda yapıldığını beyan etmektedir.

Burada, HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış fareler için, yüksek besleyici gıdalar içinde üç antiretroviral ilacı birleştirerek oral bir cART uygulama yöntemi geliştirilmiştir. Günlük enjeksiyonlarla yapılan uygulamayla karşılaştırıldığında, oral teslimatın kullanımı daha kolaydır, uygulama sıklığını sınırlar, hayvan kullanımını azaltır, stresi en aza indirir ve güvenliği artırır55. Bu noktaya kadar, insanlaştırılmış farelerde yapılan sadece birkaç çalışma 24,37,41, fareleri tedavi etmek için...

Kronik insan immün yetmezlik virüsü (HIV) ile enfekte bireylerin yaşam beklentisi, kombinasyonel antiretroviral tedavi (cART) ile anlamlı derecede iyileşmiştir1,2. cART, HIV-1 replikasyonunu başarılı bir şekilde azaltır ve kronik olarak enfekte olmuş katılımcıların çoğunda CD4 + T hücre sayısını normale yükseltir3, bu da genel sağlığın iyileşmesine ve hastalığın ilerlemesini önemli ölçüde azaltmasına neden olur4. Bununla birlikte, gizli HIV-1 rezervuarı, akut enfeksiyon sırasında ART başlatıldığında bile kurulur 5,6,7. Rezervuarlar YÜT sırasında yıllar içinde devam eder ve YÜT kesintisinden sonra hızlı viral geri tepme iyi belgelenmiştir 8,9. ART üzerinde HIV ile yaşayan insanlar ayrıca kardiyovasküler hastalık, kanser ve nöro bozukluklar gibi daha yüksek komorbidite riskine yatkındır10,11,12. Bu nedenle, HIV için fonksiyonel bir tedaviye ihtiyaç vardır. HIV-1 enfeksiyonu için hayvan modelleri, yeni HIV tedavi stratejilerinin geliştirilmesinde ve doğrulanmasında belirgin avantajlar sunmaktadır13,14,15. İnsanlaştırılmış fareler, küçük bir hayvan modeli olarak, farklı dokularda çok soylu insan bağışıklık hücresi resutansiyonu sağlayabilir, bu da HIV enfeksiyonunun yakından incelenmesine izin verir16,17,18,19. İnsanlaştırılmış modeller arasında, insanlaştırılmış kemik iliği-karaciğer-timus (BLT) modeli, kronik HIV-1 enfeksiyonunun yanı sıra HIV-1 enfeksiyonuna karşı fonksiyonel insan bağışıklık tepkilerini başarıyla özetler20,21,22,23,24. Bu nedenle, insanlaştırılmış BLT fare modeli, HIV araştırma alanındaki çeşitli yönleri araştırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. İnsanlaştırılmış BLT fareleri sadece kalıcı HIV-1 enfeksiyonu ve patogenezinin özetlenmesi için iyi kurulmuş modeller değil, aynı zamanda hücre tedavisine dayalı müdahale stratejilerinin değerlendirilmesi için sonuç niteliğinde araçlardır. Mevcut yazarlar ve diğerleri, insanlaştırılmış BLT fareleri modelinin kalıcı HIV-1 enfeksiyonu ve patogenezi25,26,27'yi özetlediğini ve hücre tedavisine dayalı müdahale stratejilerini değerlendirmek için araçlar sağladığını göstermiştir 28,29,30,31,32,33.
Günlük olarak alınan antiretroviral ilaçların kombinasyonlarından oluşan cART rejimleri, başarılı bir şekilde tedavi edilen bireylerde viral yükün uzun süre34 boyunca tespit edilemediği noktaya kadar HIV-1 replikasyonunu baskılar. HIV ile enfekte olmuş insanlaştırılmış farelerin klinik olarak ilgili cART rejimleriyle tedavi edilmesinin sonuçları, HIV-1 ile enfekte olmuş ART ile tedavi edilen bireylerde gözlenenlere benzemektedir22: HIV-1 seviyeleri, cART'nin tespit ve kesinti sınırlarının altında bastırılır ve bu da HIV replikasyonunun gizli rezervuardan geri tepmesine neden olur35. Subkutan (SC)27,36,37 veya intraperitoneal (IP)37,38,39 enjeksiyonu, insanlaştırılmış farelerde cART tedavisinde yaygın olarak kullanılan yoldur. Bununla birlikte, yoğun günlük enjeksiyon, fiziksel kısıtlama40 ile hayvanlara strese neden olur. Ayrıca, keskin nişan kullanırken HIV'e daha fazla maruz kalma nedeniyle araştırmacılar için emek yoğun ve potansiyel olarak güvensizdir. Oral uygulama, HIV-1 ile enfekte olmuş bireyler tarafından alınan cART ilaçlarının emilimini, dağılımını ve atılımını taklit etmek için idealdir. Oral uygulama tipik olarak, antiretroviral ilaçları sterilize edilmiş (farelerin immün yetmezliği nedeniyle gerekli) gıda 24,37,41 veya su42,43,44,45,46 içine koymak için özelleştirilmiş ve sıklıkla zahmetli prosedürleri içerir. Birçok antiretroviral ilaçla kimyasal olarak uyumlu olabilir veya olmayabilir veya farelerin kolayca yiyemeyeceği veya içmeyeceği bir şeyle sonuçlanabilir (bu da vücuttaki doz ve ilaç seviyelerini etkiler). Burada önerilen yeni peroral cART uygulama yöntemi, farklı antiretroviral ilaç türleriyle uyumluluğu, güvenliği ve hazırlık ve uygulama kolaylığı ve günlük enjeksiyondan kaynaklanan hayvan stresi ve kaygısının azaltılması nedeniyle önceki doğum girişimlerini aşmaktadır.
Tenofovir disoproksil fumarat (TDF), Elvitegravir (ELV) ve Raltegravir (RAL) zayıf suda çözünür ilaçlardır. İlginç bir şekilde, TDF'nin biyoyararlanımının artması yağlı gıdalarla gözlenir, bu da lipazların yağlı gıdalarla rekabetçi inhibisyonunun TDF47 için belirli bir koruma sağlayabileceğini düşündürmektedir. Bu nedenle, DietGel Boost bardakları, normal kemirgen chow'una (100 g başına 10 g) ve tipik bir fare yüksek yağlı diyetine (100 g başına 40-60 g) kıyasla, mütevazı yağ içeriğine (100 g başına 20.3 g) dayanarak teslimat yöntemi olarak normal kemirgen chow'unun yerini almak üzere seçilmiştir. Bir bardağın toplam ağırlığı 75 g'dır; Böylece, her fincan 3 gün boyunca beş fare için yeterli miktarda yiyecek ve dolayısıyla ilaç içerecektir.

<table><tbody><tr><td>60 mm petri kabı</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>ART gıdalarını alıntılamak için</td></tr><tr><td>APC anti-insan CD8 Antikor</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>Akış sitometrisi</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>için Akış verilerinin toplanması için</td></tr><tr><td>CD34 mikro boncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>NSG-BLT fare üretimi için</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri</td><td>Falcon</td><td>14-432-22</td><td>ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost'u</td> çözmek için <td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>ART yemeği yapmak için</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gilead'den Hediye</td></tr><tr><td>Edildi Emtricitabine</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gilead'den Hediye Edildi</td></tr><tr><td>FITC anti-insan CD3 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>317306</td><td>Akış sitometrisi için</td></tr><tr><td>Flowjo yazılımı</td><td>FlowJo</td><td></td><td>Akış sitometrisi veri analizi için</td></tr><tr><td>HIV-1 ileri primer: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Viral</td><td>yük RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 probu için Özelleştirilmiş: 5&prime;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Viral</td><td>yük için Özelleştirilmiş RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 ters astar: 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Viral yük RT-PCR için</td><td>Özelleştirilmiş</td></tr><tr><td>İnsan fetal dokusu</td><td>Advanced Bioscience Resources, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fareler, NOD suşu. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>5557</td><td>İnsanlaştırılmış fareleri inşa etmek için</td></tr><tr><td>Pasifik Mavisi anti-insan CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>Akış sitometrisi için</td></tr><tr><td>PerCP anti-insan CD4</td><td>Antikoru Biolegend</td><td>300528</td><td>Akış sitometrisi için</td></tr><tr><td>QIAamp Viral RNA Kitleri Qiagen</td><td></td><td>&nbsp; 52904</td><td>Viral yükü ölçmek için</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td>, Merck'ten</td><td></td> Hediye Edildi</tr><tr><td>Steril hücre sıyırıcılar</td><td>Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>ART gıdalarını alıntılamak için</td></tr><tr><td>TaqMan RNA-CT 1 Adımlı Kit</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4392653</td><td>Plazma viral yük tespiti için</td></tr><tr><td>Tenofovir disoproksil fumarat</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gilead'den</td></tr> <tr><td>Hediye EdildiTrimetoprim-Sülfametoksazol</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>ART gıdalarını steril tutmak için. Her 5 mL çay kaşığı 200 mg Sülfametoksazol, USP 40 mg Trimetoprim, USP NMT %0.5 Alkol içerir</td></tr></tbody></table>

hiv-1 enfekte İnsanlaştırılmış farelerde oral kombinasyonel antiretroviral tedavi

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV-1) pandemisi dünya çapında hız kesmeden yayılmaya devam etmektedir ve şu anda HIV'e karşı bir aşı bulunmamaktadır. Kombinasyonel antiretroviral tedavi (cART) viral replikasyonu baskılamada başarılı olmasına rağmen, rezervuarı HIV ile enfekte bireylerden tamamen yok edemez. HIV enfeksiyonu için güvenli ve etkili bir tedavi stratejisi çok yönlü yöntemler gerektirecektir ve bu nedenle HIV-1 enfeksiyonu için hayvan modellerinin ilerlemesi HIV tedavi araştırmalarının geliştirilmesi için çok önemlidir. İnsanlaştırılmış fareler, HIV-1 enfeksiyonunun temel özelliklerini özetler. İnsanlaştırılmış fare modeli HIV-1 ile enfekte olabilir ve viral replikasyon cART rejimleri ile kontrol edilebilir. Dahası, cART kesintisi, insanlaştırılmış farelerde hızlı bir viral geri tepme ile sonuçlanır. Bununla birlikte, cART'nin hayvana uygulanması etkisiz, zor veya toksik olabilir ve klinik olarak ilgili birçok cART rejimi en uygun şekilde kullanılamaz. Araştırmacılar için potansiyel olarak güvensiz olmasının yanı sıra, cART'nin yaygın olarak kullanılan yoğun bir günlük enjeksiyon prosedürü ile uygulanması, hayvanın fiziksel olarak kısıtlanmasıyla strese neden olur. Bu makalede açıklanan HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış fareleri tedavi etmek için yeni oral cART yöntemi, vireminin tespit seviyesinin altında baskılanmasına, CD4 + restorasyon oranının artmasına ve HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış farelerde genel sağlığın iyileşmesine neden olmuştur.

25 g ağırlığındaki ortalama bir farenin günde 4 g yiyecek tükettiğini varsayarsak, oral alım yoluyla günlük ilaç dozu 2.88 mg / kg TFV, 83 mg / kg FTC ve 768 mg / kg RAL'ye karşılık gelir. Optimize edilmiş gıda rejiminin toksik olup olmadığını ve günlük cART enjeksiyonuna kıyasla genel sağlığı etkileyip etkilemediğini test etmek için, farelerin ağırlığı, oral veya deri altı enjeksiyon yoluyla cART'den önce ve sırasında haftalık olarak izlendi. Her grupta cART uygulamasından önce anlamlı ağırlık farkı yoktu (<strong class...

Bu protokol, insanlaştırılmış farelerde HIV-1 RNA replikasyonunu başarılı bir şekilde baskılayan oral kombinasyonel antiretroviral ilaçlar vermek için yeni bir yöntemi açıklamaktadır.

HIV-1 Enfekte İnsanlaştırılmış Farelerde Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

Bu protokol, insanlaştırılmış farelerde HIV RNA replikasyonunu başarılı bir şekilde baskılayan oral kombinasyon antiretroviral ilaçlar veya ART sağlamak için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Yeni oral ART yöntemi, güvenliği, hazırlık ve uygulama kolaylığı ve günlük enjeksiyondan kaynaklanan hayvan stresinin azalması nedeniyle önceki doğum girişimlerini aşmaktadır. İnsanlaştırılmış farelerde HIV RNA replikasyonunu baskılamak için önerilen oral dağıtım yöntemi, kronik HIV ile enfekte bireylerde ilaç dağıtımını yakından taklit eden yeni tedavi tedavileri geliştirmek için klinik öncesi kavram kanıtı çalışmaları için oldukça değerli olacaktır.Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan bir laboratuvar yöneticisi ve teknisyeni olan Valerie Rezak olacaktır. Bireysel ilaçları tartarak başlayın. Bir biyo-güvenlik kabininde 250 miligram FTC, 375 miligram TDF ve 500 miligram RAL veya ELV'yi bireysel, steril 50 mililitrelik santrifüj tüplerine tartmak için steril hücre kazıyıcıları kullanarak cART ile 10 gıda kabı yapın.Mililitre başına 250 miligramlık bir nihai konsantrasyon oluşturmak için DMSO'yu FTC ve TDF tüpüne ve RAL veya ELV tüpüne mililitre başına 500 miligramlık bir son konsantrasyona ek

oral-combinational-antiretroviral-treatment-hiv-1-infected-humanized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Hümanize fareler kullanılarak tümör spesifik T hücrelerin oluşturulması ve karakterizasyonu burada tanımlanmıştır. İnsan timik doku ve genetiği değiştirilmiş insan hematopoietik kök hücrelerin bağışıklığı baskılanmış farelere nakledilmektedir. Anti-tümör bağışıklık yanıtı in vivo incelenmesi için izin veren bir mühendislik insan bağışıklık sisteminin sulandırma ile sonuçlanır.

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Bu video, insan immün yetmezlik virüsü-1 (HIV-1) ile enfekte insanlaştırılmış fare modelinde oral kombine antiretroviral tedavinin (oral cART) etkinliğini değerlendirmek için bir testi göstermektedir. Nükleozid ters transkriptaz inhibitörleri ve integraz iplikçik transfer inhibitörleri dahil olmak üzere HIV-1'i hedef alan ilaçların bir kombinasyonu, bir besin takviyesi ve antibiyotiklerle birlikte uygulanır. Bu karışımın HIV-1 ile enfekte olmuş insanlaştırılmış fareler tarafından tüketilmesinin...

İnsanlaştırılmış Bir Fare Modelinde HIV-1 Enfeksiyonunu Tedavi Etmek için Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi

Video, insan immün yetmezlik virüsüne (HIV) karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir fare modeli oluşturma tekniğini göstermektedir. İnsan fetal timus dokusu ve tasarlanmış hematopoietik kök hücreler (HSC'ler), bağışıklığı ciddi şekilde baskılanmış bir farenin böbrek kapsülüne implante edilir. HIV'e karşı kimerik antijen reseptörlerini (CAR'lar) eksprese eden HSC'ler, timus dokusu ile birlikte lokalizasyonlarını destekleyen jelatinimsi bir protein karışımı...

HIV'e Karşı Tasarlanmış Bağışıklığa Sahip İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Oluşturma

Bu protokol, HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir kemik iliği/karaciğer/timus fare modeli oluşturma yöntemlerini açıklar.

Insanlaşmış Fare Modelinde HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre Tabanlı Engineered Bağışıklık

Bu iletişim kuralı radyasyon şartına yenidoğan NSG fareler içine insan hematopoetik kök hücre intrahepatic enjeksiyon yoluyla insanlaşmış fareler (hu-NSG) kurmak için bir yöntem sağlar. Hu-NSG fare duyarlı HIV enfeksiyonu ve kombinatorik antiretroviral tedavi (sepet) ve HIV çoğaltma ve gecikme süresi incelemeler için uygun bir patofizyolojik model olarak hizmet vermektedir.

İnsanlaşmış NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) fare modeli HIV çoğaltma ve gecikme süresi çalışmaları için

Bu protokol, hem insan bağışıklık sistemi hem de karaciğer hücreleri ile insanlaşmış fareler kurmak için güvenilir bir yöntem sağlar. İnsan hepatositlerinin intrasplenik enjeksiyonu ve CD34+ hematopoetik kök hücrelerin insplektik enjeksiyonu ile elde edilen çift immünoeksik fareler insan immün yetmezlik virüsü-1 enfeksiyonuna yatkındır ve gözlendiği gibi karaciğer hasarına recapitulate HIV bulaşmış hastalar.

HIV ile ilişkili Karaciğer Patogenezi için Çift İnsanize TK-NOG Fare Modelinin Oluşturulması

Burada insanlaşmış farelerde HIV enfeksiyonu dinamikleri incelenmesi için üç deneysel yaklaşımlar açıklanmıştır. İlk ivedi kronik enfeksiyon olaylarının incelenmesine izin vererken, ikincisi primer enfeksiyon veya viral reaktivasyon sonrası akut olayların incelenmesine izin verir.

Humanized Immunoficient Mouse Modellerinde Kronik, Akut ve Yeniden Aktive HIV Enfeksiyonu

Biz nesil ve insanlaşmış ve insan immün yetmezlik virüs enfekte NOG fare modeli kök hücre nakli, intravajinal insan immün yetmezlik virüsü maruz kalma ve damlacık dijital PCR RNA dayalı değerlendirilmesi için bir protokol geliştirdik Miktar.

Intravajinal HIV Maruziyeti ve HIV Enfeksiyonu Tedavisi için İnsanize NOG Fareler

HIV tropizm viral zarf V3 bölge anlaşılmaktadır. V3 PCR, iç içe geçmiş RT-PCR, sıralı kullanarak üç nüsha olarak amplifiye ve biyoinformatik yazılımı kullanılarak yorumlanır. Örnekleri dizisi G2P puanları düşük olan 1 veya daha fazla (ler) ile non-R5 virüsü olarak sınıflandırılır.

HIV-1 tropizm genotipik Çıkarım kullanarak Nüfus tabanlı Sıralama V3

Sitotoksisite deneyleri, HIV bulaşmış hücrelerin doğal öldürücü hücre litik tepkileri ölçmek için hedef hücreler saflığı ile sınırlıdır. Biz burada, HIV-1 yeteneğini CD4 aşağı modüle yararlanarak HIV-1 ile enfekte birincil T-hücre patlamaların son derece saf bir nüfusun izolasyon göstermektedir.

Hazırlanması ve kullanımı, HIV-1 Enfekte İlköğretim CD4 + T-Hücreleri Hedef Hücreler olarak Natural Killer Hücre Sitotoksik Tahliller

Keşfedin, HIV-1 enfekte insanlaştırılmış farelerde oral kombinasyonel antiretroviral tedavi yöntemiyle viral RNA replikasyonunu nasıl baskılayabilirsiniz. Bu güvenli ve stres azaltıcı teknik, kronik HIV tedavileri için preklinik kavram kanıtı çalışmalarında değerlidir.

HIV-1 Enfekte İnsanlaştırılmış Farelerde Oral Kombinasyonel Antiretroviral Tedavi

Daha fazla video keşfet