Name: Bir renk reaksiyonuna dayalı bakteriyel hareketliliğin görselleştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 44 s
Description: Öğrenin bakteri hareketliliğini TTC yarı katı agar yöntemiyle görselleştirmeyi. Staphylococcus aureus ve Escherichia coli örneklerinde patojenite araştırmaları için basit, güvenilir bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Jiangsu Yüksek Öğretim Kurumlarının Öncelikli Akademik Program Geliştirme (PAPD) ve Çin İlaç Üniversitesi Öğretim Reformu Araştırma Projesi (2019XJYB18) tarafından desteklenmiştir.

1. Yarı katı ortamın hazırlanması
<ol><li>Geleneksel yarı katı agar
	<ol><li>Geleneksel yarı katı agarı, temel bileşenleri kullanarak bakteriyel motilite, test ortamı tarifine göre hazırlayın11. 10 g Triptoz, 15 g NaCl, 4 g agar'ı yeterince damıtılmış suda çözün, pH'ı 7.2 ± 0.2'ye ayarlayın ve nihai hacmi 1.000 mL'ye ayarlayın.</li>
		<li>Agar'ı 121 ° C'de 20 dakika boyunca otoklavlayın ve 3 cm yüksekliğinde yarı katı bir ortam olarak 10 mL test tüplerine dağıtın.</li>
	</ol></li>
	<li>TTC'li geleneksel yarı katı agar
	<ol><li>Geleneksel yarı katı ortamı otoklavladıktan sonra, 50 ° C'ye soğutun, 100 mL ortama 5 mL steril% 1 TTC çözeltisi ekleyin, karıştırın ve 3 cm yüksekliğinde bir yarı katı ortam oluşturmak için 10 mL test tüplerine dağıtın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Bakteri suşları
NOT: Seksen suş su ortamından izole edilmiş ve Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae ve Aeromonas hydrophila dahil olmak üzere otomatik bir bakteri tanımlama cihazı (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanılarak tanımlanmıştır (Tablo 1). Staphylococcus aureus (Malzeme Tablosuna bakınız) negatif hareketsiz bir kontrol olarak kullanılmıştır; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Salmonella typhimurium (Malzeme Tablosuna bakınız) pozitif kontrol suşları olarak kullanılmıştır.
<ol><li>Motilitenin analizi için kullanılacak test bakteri suşlarını tanımlayın.</li>
	<li>Negatif hareketsiz kontrolleri ve hareketli pozitif kontrol suşlarını dahil edin.</li>
</ol>3. TTC ile güçlendirilmiş bakteriyel motilitenin gözlemlenmesi
<ol><li>Agar plakalarından tek test bakteri kolonilerini seçin ve aşılama iğneleri kullanarak delinerek yukarıdaki iki yarı katı ortama (adım 1.1.2 ve 1.2.1) aşılayın.</li>
	<li>Sonuçları gözlemlemek için tüpleri inkübatörde 37 ° C'de 24-48 saat boyunca kültürleyin.</li>
	<li>Büyüme durumunu gözlemleyin: sadece delinme çizgisi kırmızıysa, bakterileri hareketsiz (-) olarak karakterize edin. Kırmızı renk delinme çizgisi12 boyunca hafifçe dışa doğru yayılırsa, bakterileri hareketli (+) olarak karakterize edin.</li>
</ol>4. Farklı agar konsantrasyonlarının bakteriyel motiliteye etkisi
<ol><li>% 0.3,% 0.5 ve% 0.8 agar içeren yarı katı ortamlar hazırlayın ve yukarıda açıklandığı gibi delinerek aşılayın. 24-48 saatlik inkübasyondan sonra sonuçları gözlemleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Jordan, E. O., Caldwell, M. E., Reiter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Bacterial motility.</a> Journal of Bacteriology. 27 (2), 165(1934).</li>
<li>Lai, S. L., Hou, H., Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+motility+and+its+role+during+initial+stage+of+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial motility and its role during initial stage of pathogenesis.</a> Journal of Microbiology. 26 (5), in Chinese 68-70 (2006).</li>
<li>Ding, S. S., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+flagella-dependent+motility+and+biofilm+in+bacteria+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Microbiologica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Relationship between flagella-dependent motility and biofilm in bacteria - A review.</a> Acta Microbiologica Sinica. 49 (4), in Chinese 417-422 (2009).</li>
<li>Zeng, J., Wang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+mechanism+of+bacterial+resistance+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the mechanism of bacterial resistance and tolerance.</a> Chinese Journal of Antibiotics. 45 (2), 113-121 (2020).</li>
<li>Xu, M., Zhou, M. X., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+the+mechanism+of+bacterial+flagellum+motility%2C+adhesion+and+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Progress in the mechanism of bacterial flagellum motility, adhesion and immune escape.</a> Chinese Journal of Veterinary Science. 37 (2), 369-375 (2017).</li>
<li>Leboffe, M. J., Pierce, B. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeboffe%2C+MJ+%22Microbiology%3A+laboratory+theory+and+application.+Third+edition%22">Microbiology: laboratory theory and application. Third edition</a>. , Morton Publishing Company. Colorado. (2015).</li>
<li>Ball, R. J., Sellers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+motility+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Improved motility medium.</a> Applied Microbiology. 14, 670-673 (1966).</li>
<li>An, S., Wu, J., Zhang, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+dispersal+by+a+cyclic-di-GMP+phosphodiesterase+with+a+putative+hypoxia-sensing+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Modulation of Pseudomonas aeruginosa biofilm dispersal by a cyclic-di-GMP phosphodiesterase with a putative hypoxia-sensing domain.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (24), 8160-8173 (2010).</li>
<li>Chouhan, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+site-directed+mutagenesis+at+the+GGEEF+domain+of+the+biofilm+forming+GGEEF+protein+from+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Effect of site-directed mutagenesis at the GGEEF domain of the biofilm forming GGEEF protein from Vibrio cholerae.</a> AMB Express. 6 (1), 2(2016).</li>
<li>McLaughlin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+colorimetric+microplate+test+of+phage+lysis+in+Salmonella+enterica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Simple colorimetric microplate test of phage lysis in Salmonella enterica.</a> Journal of Microbiological Methods. 69 (2), 394-398 (2007).</li>
<li>Difco Laboratories. Difco manual: Dehydrated culture media and reagents for microbiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Difco+Laboratories%22">Difco Laboratories</a>. , Detroit. (1984).</li>
<li>Tittsler, R. P., Sandholzer, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+semi-solid+agar+for+the+detection+of+bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">The use of semi-solid agar for the detection of bacterial motility.</a> Journal of Bacteriology. 31 (6), 575(1936).</li>
<li>Qian, Y., Tian, X. Y., Zhang, S. Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explore+the+influencing+factors+of+bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Care+Today%22%5BJournal%5D)">Explore the influencing factors of bacterial motility.</a> Health Care Today. 6, 50-51 (2018).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filamentous+Phytophthora+pathogens+deploy+effectors+to+interfere+with+bacterial+growth+and+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Filamentous Phytophthora pathogens deploy effectors to interfere with bacterial growth and motility.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 581511(2020).</li>
<li>Kühn, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+arrangement+of+several+flagellins+within+bacterial+flagella+improves+motility+in+different+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Spatial arrangement of several flagellins within bacterial flagella improves motility in different environments.</a> Nature Communication. 9 (1), 5369(2018).</li>
<li>Mitchell, A. J., Wimpenny, J. W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+agar+concentration+on+the+growth+and+morphology+of+submerged+colonies+of+motile+and+non-motile+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The effects of agar concentration on the growth and morphology of submerged colonies of motile and non-motile bacteria.</a> Journal of Applied Microbiology. 83 (1), 76-84 (2010).</li>
<li>Xu, A., Zhang, M., Du, W., Wang, D., Ma, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+mechanism+for+how+sigma+factor+AlgT+and+transcriptional+regulator+AmrZ+inhibit+twitching+motility+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A molecular mechanism for how sigma factor AlgT and transcriptional regulator AmrZ inhibit twitching motility in Pseudomonas aeruginosa.</a> Environmental Microbiology. 23 (2), 572-587 (2021).</li>
<li>Bartley, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+and+invasion+of+Neisseria+meningitidis+to+host+cells+is+related+to+surface+hydrophobicity%2C+bacterial+cell+size+and+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Attachment and invasion of Neisseria meningitidis to host cells is related to surface hydrophobicity, bacterial cell size and capsule.</a> PLoS One. 8, 55798(2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Bakteriyel motilitenin semisolid medium yöntemi ile saptanması birçok faktörden etkilenmektedir13,14. Oksijen (agar yüzeyinde aerobik, yarı katı ortam ile tüpün dibinde aerobik olmayan), pH ve sıcaklık gibi bakteriyel büyüme koşulları, bakteriyel flagella'nın canlılığını etkileyebilir, bu da hareketliliğin azalmasına ve hatta hareketlilik kaybına neden olabilir15. Ek olarak, hareketlilikleri olarak bazı mukus tipi bakteriler, podokonjugatl...

Bakteriyel motilite, bakteriyel patojenite, biyofilm oluşumu ve ilaç direncinde kritik bir rol oynar1. Bakteriyel motilite, patojenite ile yakından ilişkilidir ve konakçı hücrelerin erken enfeksiyonu sırasında bakteriyel kolonizasyon için gereklidir2. Biyofilm oluşumu, bakterilerin katı ortamın yüzeyine motiliteyle yapıştığı bakteriyel motiliteyle yakından ilişkilidir. Bakteriyel motilitenin uzun zamandır biyofilm oluşumu ile pozitif ilişkili olduğu düşünülmektedir. Biyofilme bağlı yüksek derecede bakteriyel ilaç direnci, insan sağlığı için tehdit oluşturan kalıcı enfeksiyonlara yol açabilir 3,4,5. Bu nedenle, bakteriyel motiliteyi tespit etmek önemlidir. Bakteriyel motilite, esas olarak, canlı haldeki farklı bakteri formlarının hareketliliğini incelemek için kullanılır, bu da dolaylı olarak flagella'nın varlığını veya yokluğunu belirleyebilir ve bu nedenle bakterilerin tanımlanmasında önemli bir role sahiptir.
Bakteriyel motiliteyi tespit etmek için doğrudan ve dolaylı yöntemler vardır6. Flagellalı bakteriler motiliteyi gösterdiğinden, flagella'nın varlığını veya yokluğunu tespit ederek bakterilerin dolaylı olarak hareketli olup olmadığını tespit etmek mümkündür. Örneğin, bakterilerin hareketli olduğunu göstermek için elektron mikroskobu ve flagellar boyama ile hareketliliği dolaylı olarak tespit etmek mümkündür. Süspansiyon düşürme ve yarı katı delinme yöntemleri gibi doğrudan yöntemlerle tespit etmek de mümkündür. 
Lisans mikrobiyoloji laboratuvarlarında bakteriyel motiliteyi tespit etmek için yaygın olarak kullanılan yarı katı delinme yöntemi, bakterilerin üreme yönüne göre, bakterileri% 0.4-0.8 agar içeren yarı katı agar ortamındaki delinmeye aşılar. Bakteriler etrafa yayılmak için delinme çizgisi boyunca büyürse, flagella'nın varlığını ve dolayısıyla hareketliliği gösteren bulut benzeri (fırça benzeri) büyüme izleri ortaya çıkar. Delinme çizgisi büyüme izleri yoksa, bakteri ne kamçılanır ne de hareketlidir. 
Bununla birlikte, bu yöntemin dezavantajları vardır: bakteriler renksiz ve şeffaftır, kamçı aktivitesi canlı bakterilerin fizyolojik özelliklerinden ve diğer faktörlerden ve agar konsantrasyonundan ve test tüpünün küçük çapından etkilenir. Dahası, aerobik bakteriler sadece agar yüzeyinde büyüme için uygundur ve bakteriyel hareketliliğin gözlemlenmesini etkiler. Bu nedenle, bu deneyi geliştirmek için, TTC7,8,9,10'un kırmızı bir ürününün oluşumunu katalize etmek için hücre içi dehidrojenazlar kullanan mevcut doğrudan delinme yönteminden daha güvenilir ve sezgisel bir bakteri hareketliliğini belirlemek için ortama 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) (renksiz) eklenmiştir.

<table><tbody><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>ATCC25922</td><td>Pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td>ATCC27853</td><td>Pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Salmonella typhimurium</td><td>ATCC</td><td>ATCC14028</td><td>Pozitif kontrol</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>ATCC25923</td><td>Negatif hareketsiz kontrol</td></tr><tr><td>Triptoz</td><td>&nbsp; OXOID</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>TTC Sigma</td><td>298-96-4</td><td></td></tr><tr><td>VITEK 2 otomatik mikrobiyal tanımlama sistemi</td><td>Bio M&eacute; Rieux</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Belediyesi

bir renk reaksiyonuna dayalı bakteriyel hareketliliğin görselleştirilmesi

Visualizing Bacterial Motility Based on a Color Reaction

Bakteriyel motilite, bakteriyel patojenite, biyofilm oluşumu ve ilaç direnci için çok önemlidir. Bakteriyel motilite, birçok patojenik türün istilası ve / veya yayılması için çok önemlidir. Bu nedenle, bakteriyel motiliteyi tespit etmek önemlidir. Oksijen, pH ve sıcaklık gibi bakteriyel büyüme koşulları, bakteriyel büyümeyi ve bakteriyel flagella ekspresyonunu etkileyebilir. Bu, hareketliliğin azalmasına ve hatta motilitenin kaybına neden olabilir, bu da bakteriyel motilitenin yanlış değerlendirilmesine neden olabilir. Canlı bakterilerin hücre içi dehidrojenazları ile 2,3,5-trifenil tetrazolyum klorürün (TTC) renk reaksiyonuna dayanarak, TTC, bakteriyel motilitenin tespiti için geleneksel yarı katı agar'a eklenmiştir. Sonuçlar, bakteriyel hareketliliğin tespiti için bu TTC yarı katı agar yönteminin basit, kullanımı kolay ve büyük ve pahalı aletler içermediğini göstermiştir. Sonuçlar ayrıca en yüksek hareketliliğin% 0.3 agar ile hazırlanan yarı katı ortamda gözlendiğini göstermiştir. Geleneksel yarı katı ortam ile karşılaştırıldığında, sonuçların değerlendirilmesi daha kolay ve daha doğrudur.

Motilitenin tespiti için hem standart suşlar hem de izole suşlar karşılaştırılmış ve sonuçlar Tablo 1'de gösterilmiştir. Flagella'nın yokluğu nedeniyle, Staphylococcus aureus ve Klebsiella pneumoniae , hem geleneksel hem de TTC yarı katı ortamlarda aşılanmış çizgi boyunca büyüdü. Buna karşılık, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli ve Salmonella typhimurium , TTC yarı katı ortamda 24 saat boyunca kültürlendikten sonra aşılanmış çizginin etrafında her yönde ...

Burada, bir renk reaksiyonuna dayalı bakteriyel motiliteyi tespit etmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntemin temel avantajları, değerlendirilmesi kolay ve daha doğru olması ve özel ekipman gerektirmemesidir.

Bir renk reaksiyonuna dayalı bakteriyel hareketliliğin görselleştirilmesi

Bacterial motility is crucial for bacterial pathogenicity, biofilm formation, and drug resistance. Bacterial motility is crucial for the invasion and/or ...

Bakteriyel motilitenin tespiti önemlidir çünkü motilite patojenite için çok önemlidir. Burada tarif edilen protokol, bakteri hareketliliğinin tespiti için güvenilir bir yöntemdir, çünkü TTC'nin canlı bakterilerin hücre içi dehidrojenazları ile renk reaksiyonuna dayanmaktadır. Bakteri hareketliliğini tespit etmek için TTC yarı katı agar yöntemi basittir, kullanımı kolaydır ve büyük ve pahalı aletler içermez.Yöntem, klinik mikrobiyologlar veya araştırmacılar tarafından patojenik bakterileri araştırmak için kullanılabilir. Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan kıdemli bir deneyci olan Xiyi Zhuang olacak. Başlamak için, yeterli miktarda damıtılmış suya 10 gram Triptoz, 15 gram sodyum klorür ve dört gram agar ekleyerek geleneksel yarı katı ortamı hazırlayın.PH'ı 7.2'ye ayarlayın ve son hacmi 1.000 mililitreye yükseltin. Ortamı 121 santigrat derecede 20 dakika otoklavlayın ve ortamı üç santimetre yüksekliğe kadar 10 mililitrelik test tüplerine dağıtın. TTC ortamını hazırlamak için, otoklavlanmış geleneksel ortamı 50 santigrat dereceye soğutun, ardından 100 mililitre ortama beş mililitre steril% 1 TTC çözeltisi ekleyin.Ortamı karıştırın ve üç santimetre yüksekliğe kadar 10 mililitrelik te

visualizing-bacterial-motility-based-on-a-color-reaction

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, chemoeffectors istikrarlı konsantrasyon gradyanlar bakteriyel kemotaksis soruşturma için bir mikroakışkan aygıt geliştirme açıklar.

Kararlı Konsantrasyon Degradeler Bakteriyel Kemotaksis miktarının mikroakışkan Aygıt

Kaynak: Morales-Soto, N. ve ark., Bakteriyel Yüzey Hareketlilik Testlerinin Hazırlanması, Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, yumuşak agar üzerinde yüzey hareketliliğini gözlemlemek için yeşil floresan proteini eksprese eden bakterileri kullanan bir oğul testini göstermektedir. Hızlandırılmış görüntüleme, koordineli genişlemeyi ve dal oluşumunu yakalayarak bakteriyel yüzey hareketliliğini vurgular.

Bakteriyel Yüzey Hareketliliğini Görselleştirmek için Oğul Verme Testi

Kaynak: Chu, W. ve Zhuang, X. Bir Renk Reaksiyonuna Dayalı Bakteri Hareketliliğini Görselleştirme. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, hareketli ve hareketsiz suşları görsel olarak ayırt ederek bakteri hareketliliğini değerlendirmek için redoks boya bazlı yarı katı agar testini göstermektedir.

Redoks Boya Takviyeli Yarı Katı Ortam Kullanılarak Bakteri Hareketliliğinin Görselleştirilmesi

Kaynak: Yarringto, K. D., ve diğerleri. Tek Hücreli Türler Arası Bakteri Etkileşimlerinin Kinetik Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, canlı hücre görüntüleme için bir agaroz pedi altında hareketli ve hareketsiz bakteriler kullanan bir ortak kültür sisteminin hazırlanmasını göstermektedir. Hareketli bakterilerin kimyasal cezbedicileri nasıl tespit ettiğini ve hareketsiz kolonileri nasıl istila ettiğini göstererek bakteri etkileşimlerini ortaya çıkarır.

Tek Hücreli Bakteri Etkileşimlerinin Görselleştirilmesi

Kaynak: Scheidweiler, D. ve diğerleri. Akışkan Cihazların Mikroskopi ve Akış Sitometrisi ile Birleştirilerek Gözenekli Ortamlarda Mikrobiyal Taşınımı Mekansal Ölçeklerde İncelemek. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, rastgele düzenlenmiş sütunlardan oluşan gözenekli bir matriks aracılığıyla bakteri hareketliliğini ölçmek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Fluoresan etiketli bakteriler cihaza dahil edilir, gözenekli matriksin içinden gözlem kanalına ilerlerken mikroskopi ile...

Mikrofluidik Cihaz Kullanarak Bakteriyel Hareketliliğin Değerlendirilmesi

Sürü hareketliliği fiziksel ve çevresel faktörlerden etkilenir. Sürü tahlili hazırlama ve veri toplama ile yaygın olarak ilişkilendirilen zorlukları aşmak için iki aşamalı bir protokol ve yönergeler açıklıyoruz. Mevcut analiz tekniklerinin sağlamadığı sürü davranışı hakkında ayrıntılı bilgi elde etmek için makroskopik bir görüntüleme tekniği kullanılmaktadır.

Bakteriyel Yüzey Motilite Tahliller hazırlanması, Görüntüleme ve miktarının belirlenmesi

Son bulgular, bakteriyel kamçı motorlarının çeşitli çevresel sinyalleri algıladığını ve yanıt olarak yeniden şekillendiğini göstermektedir. Burada tartışılan boncuk tahlillerinin, çevresel stres faktörlerine hücresel adaptasyonda yeniden şekillenmenin rolünü açıklamaya yardımcı olması beklenmektedir.

Kuyruktaki Motor fonksiyonların Biyofiziksel Karakterizasyonu

Birçok bakteri, çevrelerinde gezinmek ve hem bireysel hem de kolektif olarak elverişli çevreyi kolonileştirmek için flagella tahrikli hareketliliği kullanır. Burada, yüzmeye ve kaynayan hareketliliklere katkıda bulunan bileşenleri / yolları tanımlamak için hareketliliği bir seçim aracı olarak kullanan üç yerleşik yöntemin kullanılması gösterilmiştir.

Bir Seride Üç Yerleşik Teknik Uygulayarak Escherichia coli'de Flagella Odaklı Hareketliliği Araştırmak

Bu canlı-bakteriyel hücre görüntüleme protokolü zaman içinde tek hücre düzeyinde birden fazla bakteri türü arasındaki etkileşimlerin görselleştirilmesiiçin izin verir. Hızlandırılmış görüntüleme, tek tek kültür veya ortak kültürdeki her bakteri türünün gözlemlenmesine olanak sağlar ve bireysel hücre hareketliliği ve canlılığı da dahil olmak üzere çok türler arası bakteri topluluklarındaki türler arası etkileşimleri sorgular.

Tek Hücreli Türler Arası Bakteri Etkileşimlerinin Kinetik Görselleştirilmesi

Çift yönlü mitotik kinesin-5 Cin8, hareketlilikleri sırasında bölünen ve birleşen kümelerde birikir. Kümelerdeki birikim ayrıca Cin8'in hızını ve yönlülüğünü de değiştirir. Burada, saflaştırılmış Cin8-GFP ile motilitesi tahlilleri ve tek moleküllerin ve Cin8 kümelerinin hareketli özelliklerinin analizi için bir protokol açıklanmaktadır.

Tek Moleküllerin Motilitesi ve S. cerevisiae Hücrelerinden Saflaştırılmış Çift Yönlü Kinesin-5 Cin8 Kümeleri

Bu protokol, Pseudomonas aeruginosa'da çeşitli motilite tiplerinde yer alan genetik faktörleri tanımlamak için hızlı ve etkili bir yöntem sunar.

Pseudomonas aeruginosa'da Motilite Fenotiplerini Gözlemlemek için Yüksek Verimli Yöntem

Öğrenin bakteri hareketliliğini TTC yarı katı agar yöntemiyle görselleştirmeyi. Staphylococcus aureus ve Escherichia coli örneklerinde patojenite araştırmaları için basit, güvenilir bir protokol sunar.

Bir renk reaksiyonuna dayalı bakteriyel hareketliliğin görselleştirilmesi

Daha fazla video keşfet