Name: Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Keşfedin büyük hayvan modellerinde kalp diseksiyonu ve histolojik örnekleme tekniklerini. Bu yöntem kardiyovasküler hastalık araştırmalarında gözlemci tutarlılığını artırır ve deneysel sonuçların tekrarlanabilirliğini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deneysel protokol biyoetik anlaşma (2022'den itibaren No. 311) aldı ve hem ulusal (2014 tarihli 43 sayılı Kanun) hem de Avrupa (2010'dan itibaren 63 sayılı AB Direktifi) mevzuatına uygun olarak Tarım Bilimleri ve Veterinerlik Üniversitesi Cluj-Napoca Biyoetik Kurulu tarafından onaylandı. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler ve araçlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakınız.
1. Nekropsi protokolü
NOT: Sunulan tüm türler için aynı nekropsi protokolünün kullanılması tavsiye edilir, çünkü daha kolay erişim 2,12. Aşağıdaki adımlar, orta büyüklükte bir köpekte gerçekleştirilen nekropsi'yi temsil eder. Farklı konularda nekropsiler yaparken adımları uyarlayın.
<ol><li>Konuyu tartın ve sol tarafındaki nekropsi tablasının üzerine yerleştirin (Şekil 1A). Konunun dış incelemesine devam edin (cutis ve mukozaların incelenmesi ve palpasyonuyla, renk, tutarlılık ve hacimdeki tüm değişiklikleri not ederek).</li>
	<li>Bir bıçak (veya neşter) kullanın ve sağ aksillada 7 cm'lik bir kesi yapın (Şekil 1A).</li>
	<li>Koxofemoral kavşağı bulun (Şekil 1A,B). Kapsülü bir bıçakla açın. Femur başının bağını kesin (Şekil 1B).</li>
	<li>Aksilla kraniyalindeki deri insizyonunu mandibuler simfize ve kaudal olarak perineye uzatmak için bıçağı kullanın (Şekil 1B).</li>
	<li>Cildi neşterle çıkarın ve torasik ve abdominal duvarı ventral orta hattan vertebral enine süreçlerin seviyesine kadar maruz bırakın (Şekil 1B).</li>
	<li>Neşter ve forseps ile, karın duvarından bir flep oluşturun, ventrocaudal sağ kostal kemere. Karın boşluğunu makasla açın - sağ hipokondriyumun kaudal yönünü takip edin (Şekil 1B).</li>
	<li>Kesiyonu sağ paralomber bölge boyunca kaudal olarak eksternal iliak tepeye kadar uzatın. Daha sonra, insizyonu linea alba'nın kasık yerleştirilmesine kadar uzatın.</li>
	<li>Kısaca, karın organlarını in situ olarak inceleyin (organların renk, kıvam, hacim ve pozisyonundaki değişiklikleri not ederek).</li>
	<li>Neşter ve forseps ile diyaframı en yüksek noktada delin (Şekil 1B).</li>
	<li>Kemik kesici forseps kullanarak sağ göğüs kafesini iki uzunlamasına kesitle çıkararak göğüs boşluğuna girin. Kaburgaların parasternal kıkırdaklı segmentini kesitleyin. Daha sonra, kaburgaların dorsal segmentini, kostovertebral eklemlere proksimal olarak kesitleyin (Şekil 1C).</li>
	<li>Kalbi yerinde inceleyin (Şekil 1C). Boyuta, konuma, renge, bitişik dokularla bağlantılara ve palpasyonla, tutarlılıktaki herhangi bir değişikliğe dikkat edin9. NOT: Bir tromboz veya konjenital kalp hastalığı varsa, kalp in situ olarak diseke edilmelidir (bu yaklaşım büyük damarların tam olarak incelenmesine izin verir).</li>
	<li>Perikardiyal boşluğu, tabandan kalbin tepesine kadar uzunlamasına bir kesitle incelemek ve açmak için makas kullanın. Perikard boşluğunu ve epikardı inceleyin (renk, tutarlılık ve hacimdeki değişiklikleri fark ederek)12.</li>
	<li>Kalbi makasla serbest bırakın, aort, pulmoner gövde ve her iki vena kavanın enine bölümlerini verin. Sağ atriyuma girişten en az 1 cm yukarıda superior vena kava kesitini korumak için crista terminalis11,13'tür.</li>
	<li>Organın dış konturunu, epikardın görünümünü, epikardın şeffaflığı ile miyokardın görünümünü ve büyük damarların dış görünümünü inceleyin (Şekil 2A). NOT: Genel olarak, perikardın açılması ve incelenmesi, türler arasında bazı farklılıklar göstermektedir. Perikard boşluğunun incelenmesi, genel perikardiyal içeriğin perikardının şeffaflığı yoluyla harici bir muayene ve değerlendirme ile başlar 1,2. Bir kedi veya köpekte, perikard tipik olarak yaklaşık 0.25 mL / kg ince, berrak, yarı saydam ila açık sarı sıvıiçerir 9. Herhangi bir patolojik efüzyon varsa, steril bir şırınga veya vakumlayıcı tüp ile toplanmalıdır.</li>
</ol>2. Diseksiyon protokolü
NOT: Kalp için her biri çeşitli avantajlara sahip çeşitli nekropsi teknikleri kullanılır. Bu protokol için en çok kullanılan tekniklerden ikisi seçildi: 1) valflerin ve endokardın daha iyi incelenmesini sağlayan vetürlerin çoğu için kullanılan bir protokol olan "giriş-çıkış yöntemi" 2,11,12,16 ve 2) tipik olarak kediler veya küçük boyutlu köpekler için kullanılan "dört odacıklı diseksiyon" / "ekokardiyografik düzlem" tekniği1, 17.
<ol><li>Kardiyak diseksiyon için "giriş-çıkış yöntemi" 2,11,12,16 <ol><li>Kalbi atriyal yüzü yukarı bakacak şekilde yerleştirin (Şekil 2A).</li>
		<li>Kaudal vena kavadan sağ atriyuma doğru geniş bir şekilde kesmek için makas ve dişsiz forseps kullanın (Şekil 2B). Crista terminals/sinoatriyal düğümü (SA nodu) ortaya çıkarmak için sağ auriküler uzantıya doğru kesime devam edin. Triküspid kapağı dorsal görünümden kontrol edin.</li>
		<li>Sağ atriyumdan sağ ventrikül ve interventriküler septum arasındaki kavşağa kadar bir kesit kesin (Şekil 2C). Sağ atriyoventriküler kapağı görüntüleyin.</li>
		<li>İnterventriküler septum boyunca sağ ventrikülsüz duvarı kesitleyin. Pulmoner gövdenin orijinine kadar bölüme devam edin (Şekil 2C,D).</li>
		<li>Kordae tendineae ve papiller kaslar dahil olmak üzere sağ atriyoventriküler kapakları iyice inceleyin (Şekil 2D). chordae tendineae kesin.</li>
		<li>Forsepsleri pulmoner gövdeden geçirin ve gövdeyi uzunlamasına kesin (Şekil 2E). Pulmoner çıkış yolunu, pulmoner gövde orijinini ve semilunar kapakları inceleyin.</li>
		<li>Sol atriyumu pulmoner damarlardan sol kulak kepçesinin ucuna kadar kesin (Şekil 2F). Biküspid (mitral) kapağı dorsal görünümden kontrol edin.</li>
		<li>Kalbi interventriküler septum aşağı bakacak şekilde yerleştirin (Şekil 2F). Ventrikül serbest duvarında ventrikül tabanından kardiyak tepeye kadar büyük bir kesi yapın. Sol atriyoventriküler kapağı tamamen görüntüleyin.</li>
		<li>Sol atriyoventriküler kapağın tepesinin kordae tendineasını kesin.</li>
		<li>Forsepsleri sol ventrikül çıkış yolundan geçirin ve aortu açmak için kılavuz olarak kullanın (Şekil 2G).</li>
		<li>Tüm kan pıhtılarını çıkarmak için tuzlu su çözeltisi kullanın. Tüm kan pıhtıları çıkarıldıktan sonra, kalp ağırlığını vücut kütlesi veya standart kalp ağırlığı tabloları ile değerlendirin ve karşılaştırın (Tablo 1)11,13.</li>
		<li>Kalbi tartın.</li>
		<li>Sadece SA düğümü ilgi çekici ise, sol ventrikül muayenesinden sonra, tüm kalbi 24 saat boyunca% 10 nötr tamponlu formalin (NBF) içine yerleştirin ve crista terminallerini örneklemek için sağ atriyumu kesin. NOT: Bu teknikle, sol ve sağ ventriküller kolayca takdir edilebilir. Sol ve sağ ventrikül duvar kalınlığı arasındaki oran, türlere ve cinslere göre küçük farklılıklarla 3: 1'dir; hayvan fetüs kalbi için oran 1: 112'dir.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Histoloji için örnekleme protokolü16
<ol><li>Bir neşterle, sağ atriyumu, triküspid kapağı ve sağ ventrikül serbest duvarını içeren iki uzunlamasına paralel kesim (yaklaşık 5 mm arayla) yapın (Şekil 2I)</li>
	<li>Sol atriyum, mitral kapak, dorsal papiller kas ve sol ventrikülü içeren iki uzunlamasına paralel kesim (yaklaşık 5 mm arayla) yapın (Şekil 2H).</li>
	<li>Kalbin dorsal üst-üçte birinde, interventriküler septum, sağ atriyum, aort, aort kapağı ve triküspid kapak dahil olmak üzere bir çizgiyi takip ederek kalbin tabanını enine kesitleyin (Şekil 2J).</li>
	<li>Aort tabanını ve interventriküler septumu içeren iki uzunlamasına paralel kesi yapın (Şekil 2J).</li>
	<li>Crista terminallerinin etrafındaki sağ atriyumu kesin ve SA düğümünün altı parçasını elde etmek için kristanın uzunlamasına ekseni üzerinde (yaklaşık 3-4 mm aralıklı) enine yönlendirilmiş birkaç paralel kesit sağlayın (Şekil 3, Şekil 4I ve Şekil 5H).</li>
	<li>Elde edilen dokuları histolojik kasetlerde kesin. NOT: Önerilen engelleme protokolü: adım 3.1.-histolojik blok 1 (Şekil 6 bu bloktan elde edilen slaytı gösterir.), adım 3.2.-histolojik blok 2 (Şekil 7 bu bloktan elde edilen slaytı gösterir), adım 3.4.-histolojik blok 3 (Şekil 8 bu bloktan elde edilen slaytı gösterir), adım 3.5.-histolojik blok 4 (Şekil 9 bu bloktan elde edilen slaytı gösterir).</li>
	<li>Dokuları en az 48 saat boyunca% 10 NBF'ye batırın.</li>
</ol>4. Koroner arterlerin örneklenmesi 3,10,14
<ol><li>Koroner arterleri kardiyak parakonal oluktan diseke etmek için forseps ve neşter kullanın (Şekil 4K). Koroner arteri gece boyunca% 10 NBF'de sabitleyin.</li>
	<li>Gerekirse,% 8 formik asit ve hidroklorik asidin 1: 1'lik bir karışımında yeterince kireçlenin.</li>
	<li>3 mm aralıklarla birden fazla enine kesim yapın. Bölümleri bir kasete yerleştirin ve ardından kaseti gömene kadar% 10 NBF'ye yerleştirin. NOT: Domuzlar, özellikle koroner kalp hastalığı söz konusu olduğunda, insanlar için kardiyak bir model olarak kullanılabilir. Bu nedenle koroner arterlerin ek örnekleri ve histolojik kesitleri önerilmektedir 3,10,14.</li>
</ol>5. Kalbin "dört odacıklı"/"ekokardiyografik düzlem" diseksiyon tekniği 1,17
NOT: Dört odacıklı diseksiyon tekniği, standart görünüm1'i elde etmek için tabandan kalbin tepesine kadar bir kesimden oluşur. "Dört odacıklı" teknik en iyi sabit dokulara uygulanır.
<ol><li>Tüm kalbi en az 48 saat boyunca% 10 NBF'ye yerleştirin.</li>
	<li>Kalp en az 48 saat boyunca %10 NBF'de sabitlendikten sonra (Şekil 10A), biri kraniyal kava-sağ atriyum-triküspid kapak-sağ ventrikülden, ikincisi pulmoner ven-sol atriyum-mitral kapak-sol ventrikülden olmak üzere iki dişsiz düz diseksiyon forsepsi yerleştirin (Şekil 10B).</li>
	<li>Forseps kolları arasındaki boşluğu, tabandan kalbin tepesine kadar kesme bıçağı için kılavuz olarak kullanın (Şekil 10C). Adım 5.2'de açıklanan bölümden yaklaşık 5 mm ayrı olarak ilave bir uzunlamasına kesit sağlayın. aortu içeren kardiyak segmentte.</li>
	<li>Transversal bir insizyon ile, kalp tabanını tepeden tamamen ayırın. Her doku segmentini histolojik bir kasete yerleştirin. NOT: Önerilen blokaj protokolü: kardiyak apeks-histolojik blok 5 (Şekil 11A bu bloktan elde edilen slaytı gösterir), kardiyak baz-histolojik blok 6 (Şekil 11B bu bloktan elde edilen slaytı gösterir).</li>
	<li>Kasetleri gömene kadar %10 NBF içine yerleştirin. Tüm kardiyak örnekleri% 10 NBF'de (doku hacminin 10 katından fazla) sabitleyin, rutin olarak parafin balmumu, 4 μm kalınlığında kesit ve daha önce tarif edilen bir protokol10'u izleyerek hematoksilin ve eozin boyası (H & E boyası) ile boyanın. NOT: Miyokarditten şüpheleniliyorsa, "mikrobiyolojik ve viral çalışmalar için steril cerrahi malzeme ve steril numune kabı ile steril koşullar altında bir parça taze kalp dokusu tutulmalıdır"13.</li>
</ol>6. Fotoğraflı belgeler
NOT: Fotografik dokümantasyon, nekropsi incelemesinde isteğe bağlı bir adımdır. Bununla birlikte, fotoğraf ve video kayıtlarının "normal ve anormal anatominin doğru bir şekilde belgelendirilmesi"3 için gereklidir.
<ol><li>Doğru fotoğrafik dokümantasyon için, "kalp dokularının ilerleyici diseksiyonu"13 yaparken dijital görüntüler alın. Fotoğrafik dokümantasyon ve fotoğraf15 genel görünüm-ön ve arka kılavuzlarına bakınız; kalbin bir dilimi; ve şüpheli lezyonlar.</li>
</ol>

<ol><li>Ashworth, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshworth%2C+M+%22Pathology+of+Heart+Disease+in+the+Fetus%2C+Infant+and+Child%3A+Autopsy%2C+Surgical+and+Molecular+Pathology%22">Pathology of Heart Disease in the Fetus, Infant and Child: Autopsy, Surgical and Molecular Pathology</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (2019).</li>
<li>Barone, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarone%2C+R+%22Anatomie+Compar%C3%A9e+des+Mammif%C3%A8res+Domestiques%3A+Angiologie%22">Anatomie Comparée des Mammifères Domestiques: Angiologie</a>. Vigot, , Lyon. (2011).</li>
<li>Basso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+autopsy+investigation+of+sudden+cardiac+death%3A+2017+update+from+the+Association+for+European+Cardiovascular+Pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Guidelines for autopsy investigation of sudden cardiac death: 2017 update from the Association for European Cardiovascular Pathology.</a> Virchows Archiv. 471 (6), 691-705 (2017).</li>
<li>Bishop, S. P. Chapter 37 - Necropsy Techniques for the Heart and Great Vessels. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBishop%2C+SP+%22Textbook+of+Canine+and+Feline+Cardiology%3A+Principles+and+Clinical+Practice%2C.2nd+ed%22">Textbook of Canine and Feline Cardiology: Principles and Clinical Practice,.2nd ed</a>. Fox, P. R., Sisson, D., Moïse, N. S. , W. B. Saunders. Philadelphia, PA. 846-848 (1999).</li>
<li>Joseph, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ratio+between+the+heart-weight+and+body+weight+in+various+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">The ratio between the heart-weight and body weight in various animals.</a> Journal of Experimental Medicine. 10 (4), 521-522 (1908).</li>
<li>Keenan, C. M., Vidal, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+morphologic+evaluation+of+the+heart+in+the+laboratory+dog+and+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Standard morphologic evaluation of the heart in the laboratory dog and monkey.</a> Toxicologic Pathology. 34 (1), 67-74 (2006).</li>
<li>Latimer, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+in+body+and+organ+weights+in+the+newborn+dog+and+cat+compared+with+that+in+the+adult%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Variability in body and organ weights in the newborn dog and cat compared with that in the adult.</a> The Anatomical Record. 157 (3), 449-456 (1967).</li>
<li>Lee, J. C., Taylor, F. N., Downing, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+ventricular+weights+and+geometry+in+newborn%2C+young%2C+and+adult+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">A comparison of ventricular weights and geometry in newborn, young, and adult mammals.</a> Journal of Applied Physiology. 38 (1), 147-150 (1975).</li>
<li>McDonough, S. P., Southard, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcDonough%2C+SP+%22Necropsy+Guide+for+Dogs%2C+Cats%2C+and+Small+Mammals%22">Necropsy Guide for Dogs, Cats, and Small Mammals</a>. , John Wiley & Sons. 9(2016).</li>
<li>Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aProphet%2C+EB+%22Laboratory+Methods+in+Histotechnology%22">Laboratory Methods in Histotechnology</a>. , Armed Forces Institute of Pathology-American Registry of Pathology. Washington, DC. 29-58 (1992).</li>
<li>Robinson, W. F., Robinson, N. A. Chapter 1 - Cardiovascular System. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobinson%2C+WF+%22Jubb%2C+Kennedy+%26+Palmer%27s+Pathology+of+Domestic+Animals%2C+6th+ed%22">Jubb, Kennedy & Palmer's Pathology of Domestic Animals, 6th ed</a>. Grant Maxie, M., Saunders, W. B. 3, 12-49 (2016).</li>
<li>Tabaran, A. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTabaran%2C+AF+%22Autopsie+et+Medecine+Legale%3A+Guide+de+Travaux+Pratiques%22">Autopsie et Medecine Legale: Guide de Travaux Pratiques</a>. , Academic Press. 21-86 (2020).</li>
<li>Autopsypathology.net. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://autopsypathology.net/wpcontent/uploads/2016/02/rcpath_cardiacdeath_jul2015.pdf">http://autopsypathology.net/wpcontent/uploads/2016/02/rcpath_cardiacdeath_jul2015.pdf</a> (2021).</li>
<li>Pathology.ucla.edu. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://pathology.ucla.edu/workfiles/Education/Residency%20Program/Gross%20Manual/Endomyocardial%20Biopsy%20(EMB).pdf">http://pathology.ucla.edu/workfiles/Education/Residency%20Program/Gross%20Manual/Endomyocardial%20Biopsy%20(EMB).pdf</a> (2021).</li>
<li>Arbeitsgruppen Sudden Cardiac Death. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.sgrm.ch/medizin/arbeitsgruppen/sudden-cardiac-death.html">http://www.sgrm.ch/medizin/arbeitsgruppen/sudden-cardiac-death.html</a> (2021).</li>
<li>Toxpath.org. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.toxpath.org/Trimming-N-Collection-Training.asp">https://www.toxpath.org/Trimming-N-Collection-Training.asp</a> (2021).</li>
<li>YouTube.com. , Available from: 
 <a target="_blank" href="httpswwwyoutubecomwatchvxkJ2WGqi2Qw&t2494s">httpswwwyoutubecomwatchvxkJ2WGqi2Qw&t2494s</a> (2021).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Mevcut protokolü gerçekleştirirken, tutarlı sonuçlar için birkaç kritik adım dikkatlice düşünülmelidir. Genç hayvanlarda, kardiyak ölçümler yetişkinlerdekilerden farklıdır (ventriküler duvar kalınlığı dahil) ve genellikle kalp, vücut ağırlığının daha büyük bir bölümünü temsil eder11,12. Ventriküler hipertrofinin derecesi, genel bir ağırlık formülü uygulanarak, sol ventrikül ile septum arasındaki oran, normal koşullar altında olgun hayvanlarda 2.8-4.0 olması gerek...

Kardiyak duvar kalınlığının değerlendirilmesine müdahale edebilen karmaşık anatomi ve erken titizlik nedeniyle, kalbin brüt muayenesi zordur ve teknikle ilgili çeşitli veya yorumlama hatalarına eğilimlidir. Bu, interspesifik morfolojik varyasyonlar ve birçok klinik, majör kardiyak patolojinin (erken koroner kalp hastalıkları, fibroz, arterit ve amiloidoz vakaları dahil) özünde histolojik patolojiler olan herhangi bir büyük değişiklikle ilişkili olmadığı gerçeğiyle güçlendirilmiştir. Standartlaştırılmış bir diseksiyon ve histolojik numune toplama protokolü, gözlemciler arasında tutarlılık ve aynı zamanda kardiyovasküler hastalıkların deneysel çalışmalarının karşılaştırılabilirliğini ve tekrarlanabilirliğini sağlayabilir.
Örnekler iki köpekten (Canis lupus familiaris) (3 yaşında, erkek bir Fransız Bulldog ve 8 yaşında, dişi karışık cins), bir kediden (Felis catus) (6 yaşında, erkek bir Avrupa stenografisi), bir evcil domuzdan (Sus scrofa domesticus) (1 yaşında, erkek Büyük Beyaz) ve bir (Bos taurus) (2 aylık, dişi Holstein) toplandı. Seçilen türlerin her biri, farklı bir hastalık için kardiyovasküler bir model olarak özel bir kullanıma sahiptir; örneğin, köpekler aritmi modellemesi için tercih edilen bir modeldir; HCM prevalansının en yüksek olduğu türler olduğu için hipertrofik kardiyomiyopati (HCM) için kediler tercih edilir; domuzlar akut miyokard enfarktüsü için bir model olarak kullanılır; ruminantlar, çayırlarda kolayca bulunabilen toksinlere maruz kalmaları nedeniyle zehirlenme için bir model olarak kullanılır11.
Bu yazıda, deneysel kardiyovasküler hastalıklarda kalbin brüt ve histolojik incelemesini iyileştirmek için tasarlanmış bir nekropsi protokolü ve kalbin iki diseksiyon protokolü sunulmuştur. Açıklanan protokoller, veterinerlik ders kitapları 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, dergi literatürü 3,13,14, resmi belgeler 15 ve web seminerlerinden alınan bilgilere dayanarak geliştirilmiştir 16 ,17. Bu çalışmada kullanılan örnekler, rutin otopsi teşhisi için USAMV Cluj-Napoca Patoloji Bölümü'ne sunulan kadavralardan toplanmıştır.

<table><tbody><tr><td>% 0.9 tuzlu su çözeltisi</td><td>B. BRAUN MELSUNGEN AG</td><td></td> W04479004 <td>Kalpteki tüm kanı ve kan pıhtılarını yıkamak için kullanılır.</td></tr><tr><td>% 10 nötr tamponlu formalin (NBF)</td> <td>&nbsp; Q Yolu</td><td>11699404</td><td>Histopatoloji örneklerinin toplanması için malzemeler.</td></tr><tr><td>Kemik kesme forseps</td><td>HELEN SRL</td><td>LS109HV</td><td>Kemik kesmek için sağlam alet.</td></tr><tr><td>Kesme tahtası</td><td>Ambition</td><td>86304</td><td>Daha kolay bir manipülasyon ve organları kesmek için.</td></tr><tr><td>Kireç çözücü çözelti</td><td>Thermo Scientific TBD-2</td><td>6764004</td><td>1: 1 oranında %8 formik asit ve hidroklorik asit karışımıdır.</td></tr><tr><td>Dijital fotoğraf makinesi</td><td>Canon Inc.</td><td>PowerShot SX540 HS</td><td>Fotoğrafik ve videografik belgeleme için.</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>MKD-Medicale</td><td>15-430</td><td>Diseksiyon aletleri.</td></tr><tr><td>Histolojik kasetler</td><td>&nbsp; Q Path</td><td>720-2215</td><td>Histopatoloji örneklerinin toplanması için malzemeler. Boyutlar: 3 & kez; 2,5 & kez; 0,4 cm</td></tr><tr><td>Bıçak</td><td>TEHNO FOOD COM SERV SRL</td><td>D2006/15</td><td>Yumuşak dokuyu kesmek için keskin bıçak.</td></tr><tr><td>Lateks eldivenler</td><td>MKD-Medicale</td><td>SANTEX-S</td><td>Koruma ekipmanı.</td></tr><tr><td>Maske</td><td>MKD-Medicale</td><td>21221</td><td>Koruma ekipmanı.</td></tr><tr><td>Petri kapları</td><td>MKD-Medicale</td><td>0598-1V</td><td>Yardımcı test numunelerinin toplanması için malzemeler.</td></tr><tr><td>Plastik alıcılar</td><td>Corning Gosselin</td><td>TP200-02</td><td>Histopatoloji örneklerini toplamak için malzemeler.</td></tr><tr><td>Terazi</td><td>ESPERANZA</td><td>MEEKS008</td><td>Organları tartmak için.</td></tr><tr><td></td><td>Beyaz Terazi 72</td><td></td><td>Konuları tartmak için.</td></tr><tr><td>Neşter</td><td>MKD-Medicale</td><td>10322E</td><td>Yumuşak dokuyu kesmek için keskin bıçak.</td></tr><tr><td>Makas</td><td>MKD-Medicale</td><td>13-260</td><td>Diseksiyon aletleri.</td></tr><tr><td>Ovma</td><td>MKD-Medicale</td><td>410100-52</td><td>Koruma ekipmanı.</td></tr><tr><td>Şırıngalar</td><td>MKD-Medicale</td><td>10573EU</td><td>Yardımcı test numunelerinin toplanması için malzemeler.</td></tr></tbody></table>

diseksiyon teknikleri ve kardiyovasküler hastalıklar için büyük hayvan modellerinde kalbin histolojik Örneklemesi

Dissection Techniques and Histological Sampling of the Heart in Large Animal Models for Cardiovascular Diseases

Standart brüt muayene ve örnekleme, büyük hayvanlarda yürütülen kardiyovasküler hastalıkların deneysel çalışmalarının tekrarlanabilirliği ve başarısında kilit unsurlardır. Kalbin karmaşık anatomisi, türler arası farklılıklar ve telafi edici ve patolojik reaksiyon türleri göz önüne alındığında, tutarlı protokollerin uygulanması zordur. Çoklu diseksiyon protokollerinin kullanımı genellikle sektörün deneyimine uyacak şekilde uyarlanır ve kişisel tercihler deneysel ve gözlemciler arası değişkenlik kaynağı olmaya devam eder. Burada amaç, kardiyovasküler hastalıkların modelleri olarak yaygın olarak kullanılan bazı türlerde (köpekler, domuzlar, ruminantlar ve kediler dahil) kalbin ana anatomik özelliklerini ve yer işaretlerini, diseksiyon protokollerini ve histolojik örnekleme standartlarını sunmaktır.
Burada iki standart brüt muayene protokolü sunulmaktadır. Birincisi, kalpten ve büyük damarlardan (köpeklerde, ruminantlarda ve domuzlarda sıklıkla kullanılan) fizyolojik kan akış yönünü takip eden giriş-çıkış yöntemi ve ikincisi, dört odacıklı diseksiyon tekniği (kedilerde örneklenmiştir). Her iki teknik de belirli deneysel koşullarda herhangi bir türe uyarlanabilir. Örnekleme protokolleri tüm ilgi alanlarını (sinoatriyal düğüm, ventriküller, interventriküler septum, atriyum, kapakçıklar ve aort) içerir ve uygun şekilde gerçekleştirilirse, deneysel çalışmaların hem tekrarlanabilirliğini hem de güvenilirliğini arttırır.

Bu protokol, anatomik özellikleri görselleştirmek ve dört farklı türde (köpek, kedi, domuz ve) kalbin histolojik incelemesi için örnekler toplamak için kullanıldı. Nekropsi protokolü, yukarıda belirtilen türlerin her birinde tekrarlandı, ancak sadece köpeklerde gösterildi. Nekropsi protokolü, vücudun (Şekil 1A) (deri, keşfedilebilir lenf düğümleri ve dış mukoza dahil) kapsamlı bir dış muayenesiyle, toplam ağırlığın ölçülmesiyle ve hayvanın genel durumunun puanlanmasıyla başlar. Dış muayenede...

Karmaşık anatomi nedeniyle, kardiyak örnekler için sürekli tekrarlanabilir bir diseksiyon ve hasat protokolünün uygulanması zor olabilir. Bu yazıda bazı standart kardiyak diseksiyon protokollerinin temel unsurları sunulmakta ve hem brüt inceleme yaklaşımları hem de histopatolojik inceleme için yaygın olarak kullanılan örnekleme alanları vurgulanmaktadır.

Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi

The standard gross examination and sampling are key elements in the reproducibility and success of experimental studies of cardiovascular diseases carried ...

Türler ve bireyler arasındaki kalpteki yapısal farklılıkların yanı sıra literatürdeki tutarsızlıklar, kalp anatomisinin tam olarak anlaşılmasını ve katı metodolojiye bağlılığı gerektirmektedir. Bu teknik, gözlemci homojenliğini artırabilir ve deneysel kardiyovasküler hastalık araştırmalarının karşılaştırılabilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırabilir. Bu tekniğe aşina olmayan bir kişi, kalbin tüm bileşenlerini tanımlamakta zorluk çekebilir.Benim tavsiyem, kalbin anatomisini tanımak için biraz zaman harcamak. Kalbin karmaşık anatomisini anlamak zor olduğundan, yöntemin görsel bir sunumu gereklidir. Başlamak için, konu hayvanı sol tarafındaki nekropsi masasına yerleştirmeden önce tartın.Daha sonra, cutis ve mukozayı inceleyerek ve palpe ederek, renk, tutarlılık ve hacimdeki tüm değişiklikleri not ederek konunun harici bir incelemesini yapın. Daha sonra, bir bıçak kullanarak, sağ aksillada yedi santimetrelik keskin bir kesi yapın. Koxofemoral kavşağı bulduktan sonra, kapsülü bir bıçakla açın ve femur başının bağını kesin.Aksilla kraniyalindeki deri insizyonunu mandibuler simfizise ve kaudal olarak peroneuma uzatın. Cildi neşterle çıkarın, torasik ve abdominal duvarı ventral orta hattan vertebral enine süreçlerin seviyesine maruz bırakın. Daha sonra, neşter ve forseps kullanarak, karın duvarından sağ kostal kemere ventrocaudal bir flep oluşturun.Daha sonra, sağ hipokondriyumun kaudal yönünü takip ederek, karın boşluğunu makasla açın. İnsizyonu sağ paralomber bölge boyunca kaudal olarak eksternal iliak tepeye kadar uzatmaya devam edin. Daha sonra, insizyonu linea alba'nın kasık yerleştirilmesine kadar uzatın ve renk, kıvam, hacim ve pozisyonlarındaki herhangi bir değişikliği not etmek için karın organlarını in situ olarak kısaca inceleyin.Daha sonra, neşter ve forseps kullanarak, diyaframı en yüksek noktada delin. Daha sonra kemik kesici forseps kullanarak, önce parasternal kıkırdaklı segmenti ve daha sonra kaburgaların dorsal segmentini kostovertebral eklemlere proksimal kesitleyerek sağ göğüs kafesini çıkarın. Büyüklüğünü, rengini, konumunu ve bitişik dokularla bağlantılarını not etmek için kalbi yerinde inceleyin.Ayrıca, palpasyonla tutarlılıkta herhangi bir değişiklik olup olmadığına bakın. Daha sonra, makas kullanarak, perikardiyal boşluğu, tabandan kalbin tepesine kadar uzunlamasına bir kesitle açın. Perikard boşluğunu ve epikardın renk, tutarlılık ve hacimdeki herhangi bir değişiklik olup olmadığını inceleyin.Daha sonra, makas kullanarak, superior vena kavasını sağ atriyuma girişten en az bir santimetre yukarıda keserek, crista terminalis'i koruyarak ve aort, pulmoner gövde ve her iki vena kavanın enine bölümlerini vererek kalbi serbest bırakın. Organın dış konturunu, epikardın görünümünü, miyokardın görünümünü epikardın şeffaflığı ile ve büyük damarların dış görünümünü inceleyin. Kardiyak diseksiyon için giriş-çıkış yöntemini gerçekleştirmek için, kalbi atriyal yüzü yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve makas ve dişsiz forseps kullanarak, kaudal vena kavadan sağ atriyuma geniş ölçüde kesin.Crista terminalis veya sinoatriyal düğümü ortaya çıkarmak için kalbi sağ auriküler uzantıya kestikten sonra, triküspid kapağı dorsal görünümden inceleyin. Daha sonra, sağ atriyumdan sağ ventrikül ve intraventriküler septum arasındaki kavşağa kadar bir kesit keserek, sağ atriyoventriküler kapağı görüntüleyin. Daha sonra, sağ ventrikül serbest duvarını intraventriküler septum boyunca pulmoner gövdenin kökenine kadar kesitleyin.Kordae tendinea ve papiller kaslar dahil olmak üzere sağ atriyoventriküler kapakları iyice inceledikten sonra, chordae tendineae kesildi. Daha sonra, forsepsleri pulmoner gövde boyunca yerleştirin ve pulmoner çıkış yolunu, pulmoner gövde kökenini ve semilunar kapakları incelemek için gövdeyi uzunlamasına kesin. Biküspid kapağı dorsal görünümden incelemek için, sol atriyumu pulmoner damarlardan sol kulak kepçesinin ucuna kadar kesin.Daha sonra, kalbi interventriküler septum aşağıya bakacak şekilde yerleştirin ve ventrikül serbest duvarında ventrikül tabanından kardiyak tepeye kadar büyük bir kesi yapın. Daha sonra, sol atriyoventriküler kapağın cuspunun kordae tendineasını kesin. Son olarak, forseps sol ventrikül çıkış yolundan yerleştirerek aortu açın.Tüm kan pıhtılarını çıkarmak ve kalbi tartmak için salin kullanın. Histoloji için numune almak için, ilk olarak, sağ atriyumu, triküspid kapağı ve sağ ventrikül serbest duvarını içeren bir neşterle, yaklaşık beş milimetre arayla iki uzunlamasına paralel kesim yapın. Daha sonra, sol atriyum, mitral kapak, dorsal papiller kas ve sol ventrikülü içeren iki benzer paralel kesim yapın.Kalbin dorsal üst üçte birinde, interventriküler septum, sağ atriyum, aort, aort kapağı ve triküspid kapak dahil olmak üzere bir çizgiyi takip ederek kalbin tabanını enine kesitleyin. Ve aort tabanını ve interventriküler septumu içeren iki paralel uzunlamasına kesik yapın. Ardından, crista terminallerinin etrafındaki sağ atriyumu kesin.Sinoatriyal düğümün altı parçasını elde etmek için, kristanın uzunlamasına ekseni üzerinde enine yönlendirilmiş, yaklaşık üç ila dört milimetre aralıklarla birkaç paralel bölüm yapın. Daha sonra, elde edilen dokuları histolojik kasetlerde kesin ve dokuları en az 48 saat boyunca% 10 nötr tamponlu formalin içine daldırın. Koroner arterleri örneklemek için, koroner arterleri parakonal oluktan ayırmak ve gece boyunca% 10 nötr tamponlu formalin içinde sabitlemek için forseps ve neşter kullanın.Gerekirse, dokuyu% 8'lik formik asit ve hidroklorik asidin bire bir karışımında dekalsifiye edin. Ardından, yaklaşık üç milimetre arayla birkaç enine kesim yapın. Bölümleri histolojik bir kasete yerleştirin ve kaseti gömmek için% 10 nötr tamponlu formalin içine koyun.Kalbi en az 48 saat boyunca% 10 nötr tamponlu formalinde sabitledikten sonra, iki dişsiz düz diseksiyon forsepsleri yerleştirin. Biri kraniyal kava, sağ atriyum, triküspid kapak ve sağ ventrikülden geçer. Diğeri pulmoner ven, sol atriyum, mitral kapak ve sol ventrikül yoluyla.Forseps arasındaki boşluğu kılavuz olarak kullanarak, tabandan kalbin tepesine kadar kesmek için bir kesme bıçağı kullanın. Yaklaşık beş milimetre arayla, aortu içeren kardiyak segmentin uzunlamasına bir bölümünü kesin. Daha sonra, kalp tabanını tepeden tamamen ayırın.Her doku segmentini histolojik bir kasete yerleştirdikten sonra, kasetleri gömene kadar% 10 nötr tamponlu formalin içine yerleştirin. Bu protokol, kalbin dış özelliklerinin ve iç yapılarının başarılı bir şekilde görselleştirilmesini sağladı. Bu tekniği kullanarak, kalp dokusu örnekleri köpekler ve kediler gibi farklı hayvanlardan histolojik çalışmalar için başarıyla toplanabilir.Kalbi serbest bırakırken her zaman dikkatli olun, çünkü bazı ilgi çekici yapılara zarar verebilir. Ayrıca, sinoatriyal düğümün diseksiyonu, toplanması ve gömülmesi sırasında. Bu yöntem aritmi modellemesi, hipertrofik kardiyomiyopati, miyokard enfarktüsü ve kardiyak zehirlenmeyi teşhis etmek için oluşturulmuş olmasına rağmen, herhangi bir kardiyak durumu teşhis etmek için kullanılabilir.

dissection-techniques-histological-sampling-heart-large-animal-models

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Langendorff aygıtını içeren çoğu çalışma, daha büyük memeliler için sistemlerin artan karmaşıklığı nedeniyle küçük hayvan modelleri kullanır. İnsanlar da dahil olmak üzere bir dizi türde kullanıma ve nispeten kolay veri toplamaya izin veren büyük hayvan modelleri için bir Langendorff sistemini tanımlıyoruz.

Büyük Hayvan Modelleri için bir İzole Çalışma Kalp Sistemi

Aort patolojisi ciddi morbidite ve mortaliteye yol açabilir, bu nedenle hastalığın ilerlemesi ve potansiyel tedavilerin araştırılması gereklidir. Burada, araştırmacılara kardiyovasküler hastalık araştırmalarında yardımcı olmak için murin aortunu izole etmek ve eksize etmek için bir protokol sunuyoruz.

İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği

İzole çalışan kalp modelleri, yükleme koşullarının, kalp atış hızının ve ilaçların miyokard performansı ve oksijen tüketimi üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılabilir. Çeşitli koşullar altında sistolik ve diyastolik performans ve oksijen tüketiminin incelenmesine izin veren bir kemirgen sol kalp çalışma modelinin hazırlanması için yöntemleri açıklıyoruz.

Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare

Bu çalışmanın amacı, kardiyak dinamiği n çevirisel bir hayvan modeli kullanarak araştırmak için bir yöntem oluşturmaktır. Açıklanan deneysel yaklaşım, izole, bozulmamış bir domuz kalp modelindeki elektriksel aktiviteyi değerlendirmek için elektrofizyolojik bir çalışma ile birlikte çift emisyonlu optokardiografi içerir.

Ex Vivo Langendorff perfüzyonlu Kalplerin Optokardiyografi ve Elektrofizyoloji Çalışmaları

Bu protokol, aktif olarak kasıtlı bir kardiyak trabecula ex vivo'dansarkom, kalsiyum ve makroskopik geometrik verilerin bir koleksiyonunu sunar. Bu eşzamanlı ölçümler üç görüntüleme yönteminin entegrasyonu ile mümkün olmaktadır.

Kardiyak Trabeculae Ex Vivo'nun Eşzamanlı Brightfield, Floresan ve Optik Tutarlılık Tomografik Görüntülemesi

İskemik kalp hastalığı için miyokard gen tedavisi, gelecekteki terapötikler için büyük umut vaat etmektedir. Burada, iskemik kalpte gen tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için büyük bir hayvan modeli sunuyoruz.

İskemik Kalpte Gen Tedavisinin Etkinliğini Değerlendirmek İçin Büyük Hayvan Modeli

Burada, kollajen seçici kontrast artırımı ile sağlıklı ve patolojik büyük memeli tüm kalplerinin yüksek çözünürlüklü mikro bilgisayarlı tomografi görüntülerini elde etmek için bir protokol sunuyoruz.

Kronik Hastalığı Olan Büyük Memeli Kardiyak Modellerinin Kontrastlı Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntülemesinde Doku Hazırlama Teknikleri

Bu protokol, murin pulmoner venlerinin mikroskopi kılavuzluğunda izolasyonunu ve immünofloresan boyamasını gösterir. Sol atriyum, pulmoner venler ve ilgili akciğerleri içeren doku örnekleri hazırlıyoruz ve bunları kardiyak Troponin T ve Connexin 43 için boyuyoruz.

Murin Pulmoner Venlerde Miyokard Kılıflarının Mikrodiseksiyonu ve İmmünofloresan Boyanması

Bu protokol, mikroskobik ve makroskopik ölçekleri kapsayan insan kalplerinden elde edilen örnekleri analiz etmek için kapsamlı bir boru hattı sunar.

İnsan Kalbinin Çok Ölçekli Üç Boyutlu Anatomik Çalışması için Boru Hattı

Keşfedin büyük hayvan modellerinde kalp diseksiyonu ve histolojik örnekleme tekniklerini. Bu yöntem kardiyovasküler hastalık araştırmalarında gözlemci tutarlılığını artırır ve deneysel sonuçların tekrarlanabilirliğini sağlar.

Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi

Daha fazla video keşfet