Name: İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Üretilen İzojenik Böbrek Glomerulus Çipi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-04T13:15:00.000+00:00
Duration: 10 min 23 s
Description: Keşfedin, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden türetilmiş izojenik böbrek glomerulus çipi ile hastaya özgü hastalık modellemesi ve nefrotoksisite testi yapmayı. Bu yöntem, böbrek hassas tıbbını ilerletmek için kişiselleştirilmiş tedavi geliştirmede kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Duke Üniversitesi'ndeki Pratt Mühendislik Okulu, Duke Tıp Bölümü'ndeki Nefroloji Bölümü, Biyomedikal Araştırmalarda Whitehead Bursu ve S. Musah için Genentech Araştırma Ödülü tarafından desteklenmiştir. Y. Roye, Duke Üniversitesi-Alfred P. Sloan Vakfı Bursu ve Duke Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nden William M. "Monty" Reichert Yüksek Lisans Bursu'na sahiptir. DU11 (Duke Üniversitesi klon #11) iPS hücre hattı, Duke iPSC Çekirdek Tesisi'nde üretildi ve bize Duke Üniversitesi'ndeki Bursac Laboratuvarı tarafından sağlandı. Yazarlar N. Abutaleb, J. Holmes, R. Bhattacharya ve Y. Zhou'ya teknik yardım ve yararlı tartışmalar için teşekkür eder. Yazarlar ayrıca Musah Lab üyelerine makale hakkındaki yararlı yorumları için teşekkür eder. Yazarlar, Segura Lab'a bir Acuri C6 akış sitometresinin hediyesi için teşekkür ediyor.

<ol><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+disease+model+of+diabetic+nephropathy+in+a+glomerulus-on-a-chip+microdevice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">A disease model of diabetic nephropathy in a glomerulus-on-a-chip microdevice.</a> Lab on a Chip. 17 (10), 1749-1760 (2017).</li>
<li>Musah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+induced-pluripotent-stem-cell-derived+human+podocytes+reconstitute+kidney+glomerular-capillary-wall+function+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip.</a> Nature Biomedical Engineering. 1 (5), 1-12 (2017).</li>
<li>Petrosyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+glomerulus-on-a-chip+to+recapitulate+the+human+glomerular+filtration+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A glomerulus-on-a-chip to recapitulate the human glomerular filtration barrier.</a> Nature Communications. 10 (1), 3656(2019).</li>
<li>Hass, R., Kasper, C., Böhm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+%28MSC%29%3A+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Communication and Signaling. 9, 12(2011).</li>
<li>Altschuler, S. J., Wu, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity%3A+when+do+differences+make+a+difference%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity: when do differences make a difference.</a> Cell. 141 (4), 559-563 (2010).</li>
<li>Da Sacco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+source+of+cultured+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A novel source of cultured podocytes.</a> PloS One. 8 (12), 81812(2013).</li>
<li>Singh, V. K., Kalsan, M., Kumar, N., Saini, A., Chandra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+applications+in+regenerative+medicine%2C+disease+modeling%2C+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: applications in regenerative medicine, disease modeling, and drug discovery.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 3, 2(2015).</li>
<li>Ebert, A. D., Liang, P., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells+as+a+disease+modeling+and+drug+screening+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cardiovascular+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells as a disease modeling and drug screening platform.</a> Journal of cardiovascular pharmacology. 60 (4), 408-416 (2012).</li>
<li>Patsch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+vascular+endothelial+and+smooth+muscle+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature Cell Biology. 17 (8), 994-1003 (2015).</li>
<li>Musah, S., Dimitrakakis, N., Camacho, D. M., Church, G. M., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+into+mature+kidney+podocytes+and+establishment+of+a+Glomerulus+Chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human induced pluripotent stem cells into mature kidney podocytes and establishment of a Glomerulus Chip.</a> Nature Protocols. 13 (7), 1662-1685 (2018).</li>
<li>Burt, M., Bhattachaya, R., Okafor, A. E., Musah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guided+differentiation+of+mature+kidney+podocytes+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+under+chemically+defined+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Guided differentiation of mature kidney podocytes from human induced pluripotent stem cells under chemically defined conditions.</a> Journal of Visualized Experiments. (161), e61299(2020).</li>
<li>Roye, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+personalized+glomerulus+chip+engineered+from+stem+cell-derived+epithelium+and+vascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">A personalized glomerulus chip engineered from stem cell-derived epithelium and vascular endothelium.</a> Micromachines. 12 (8), 967(2021).</li>
<li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Podocin+localizes+in+the+kidney+to+the+slit+diaphragm+area%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Podocin localizes in the kidney to the slit diaphragm area.</a> The American Journal of Pathology. 160 (1), 131-139 (2002).</li>
<li>Ruotsalainen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephrin+is+specifically+located+at+the+slit+diaphragm+of+glomerular+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Nephrin is specifically located at the slit diaphragm of glomerular podocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7962-7967 (1999).</li>
<li>Privratsky, J. R., Newman, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PECAM-1%3A+regulator+of+endothelial+junctional+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">PECAM-1: regulator of endothelial junctional integrity.</a> Cell and Tissue Research. 355 (3), 607-619 (2014).</li>
<li>Menon, M. C., Chuang, P. Y., He, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerular+filtration+barrier%3A+components+and+crosstalk%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The glomerular filtration barrier: components and crosstalk.</a> International Journal of Nephrology. 2012, 749010(2012).</li>
<li>Abutaleb, N. O., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+characterization+of+human+iPSC-derived+vascular+endothelial+cells+under+physiological+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Differentiation and characterization of human iPSC-derived vascular endothelial cells under physiological shear stress.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100394(2021).</li>
<li>Pammolli, F., Magazzini, L., Riccaboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+productivity+crisis+in+pharmaceutical+R%26D%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">The productivity crisis in pharmaceutical R&D.</a> Nature Reviews. Drug Discovery. 10 (6), 428-438 (2011).</li>
<li>Atchison, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iPSC-derived+endothelial+cells+affect+vascular+function+in+a+tissue-engineered+blood+vessel+model+of+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">iPSC-derived endothelial cells affect vascular function in a tissue-engineered blood vessel model of Hutchinson-Gilford progeria syndrome.</a> Stem Cell Reports. 14 (2), 325-337 (2020).</li>
</ol>

SM, insan iPS hücrelerinden podosit farklılaşması ile ilgili bir patent üzerinde mucittir. Diğer yazarın açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yazıda, izojenik bir insan iPS hücre hattından vasküler endotel ve glomerüler epitel (podositler) elde etmek için bir protokol ve bu hücrelerin böbrek glomerulusunun yapısını, doku-doku arayüzünü ve moleküler filtrasyon fonksiyonunu taklit eden bir çip üzerinde 3D organ sistemi oluşturmak için kullanımını özetlemekteyiz. Bu glomerulus çipi, birlikte seçici filtre moleküllerine bir bariyer sağlayan endotel ve glomerüler epitel ile donatılmıştır. 
Bu protokolü uyarlamak isteyen araştırmacılar...

Çip üzerinde organ cihazları, belirli organların yapısını ve işlevini modelleyen doku-doku arayüzleri oluşturmak için moleküler ve mekanik stimülasyonun yanı sıra vaskülarizasyon kullanan dinamik 3D in vitro modellerdir. Böbreğin glomerulusunu (glomerulus çipleri) özetlemeyi amaçlayan daha önce kurulmuş çip üzerinde organ cihazları, hayvan hücre hatları1 veya heterojen kaynakların insan birincil ve ölümsüzleştirilmiş hücre hatlarından oluşuyordu 2,3. Genetik olarak heterojen hücre kaynaklarının kullanımı, hastaya özgü yanıtlar ve hastalığın genetiği veya mekanizmaları üzerine yapılan çalışmaları önemli ölçüde sınırlayan varyasyonlar ortaya koymaktadır 4,5. Bu zorluğun ele alınması, in vitro modellerin mühendisliği için daha doğru bir mikro ortam sağlamak için korunmuş moleküler ve genetik profillere sahip belirli bireylerden kaynaklanan izojenik hücre hatlarının mevcudiyetine bağlıdır 2,3,6. İnsan kökenli izojenik hücre hatları, insan iPS hücre kültüründeki ilerlemeler nedeniyle artık kolayca üretilebilir. İnsan iPS hücreleri tipik olarak invaziv olmayan bir şekilde kaynaklandığından, süresiz olarak kendi kendini yenileyebildiğinden ve hemen hemen her hücre tipine farklılaşabildiğinden, glomerulus çipi 7,8 gibi in vitro modellerin kurulması için çekici bir hücre kaynağı olarak hizmet ederler. Glomerüler filtrasyon bariyeri, kan filtrasyonu için birincil bölgedir. Kan önce vasküler endotel, glomerüler bazal membran ve son olarak podositler adı verilen özel epitel yoluyla süzülür. Filtrasyon bariyerinin her üç bileşeni de moleküllerin seçici filtrasyonuna katkıda bulunur. Burada, tek bir insan iPS hücre kaynağından vasküler endotel ve glomerüler epitel ile arayüz oluşturan çip üzerinde organ cihazı oluşturmak için bir protokol sunulmaktadır. Bu protokol, glomerüler filtrasyon bariyerini özetlemek için izojenik ve vaskülarize bir çip mühendisliği yapmak için özellikle yararlı olsa da, aynı zamanda diğer kişiselleştirilmiş çip üstü organ türlerini ve izojenik bir 'çip üzerinde vücut' sistemi gibi çok organlı platformları geliştirmek için bir plan sağlar.
Burada açıklanan protokol, insan iPS hücrelerinin iki ayrı soya - lateral mezoderm ve mezoderm hücrelerine - daha sonra sırasıyla vasküler endotel ve glomerüler epitel olarak farklılaşmasıyla başlar. Yanal mezoderm hücreleri üretmek için, insan iPS hücreleri bazal membran matrisi 1 kaplı plakalar üzerine tohumlandı ve Wnt aktivatörü, CHIR 99021 ve güçlü mezoderm indükleyicisi, kemik-morfogenetik 4 (BMP4) ile desteklenen N2B27 ortamında 3 gün boyunca (ortam değişimi olmadan) kültürlendi. Ortaya çıkan lateral mezoderm hücreleri daha önce brachyury (T), karışım çiftli benzeri homeobox (MIXL) ve eomesodermin (EOMES)9 ekspresyonu ile karakterize edildi. Daha sonra, lateral mezoderm hücreleri, manyetik aktive hücre sıralama (MACS) kullanılarak VE-Kadherin ve / veya PECAM-1 ekspresyonuna göre sıralanan vasküler endotel hücrelerini indüklemek için VEGF165 ve Forskolin ile desteklenmiş bir ortamda 4 gün boyunca kültürlendi. Elde edilen vasküler endotel hücreleri (viEC), mikroakışkan cihazda tohumlanmaya hazır olana kadar bazal membran matrisi 3 kaplı şişeler üzerinde kültürlenerek genişletildi.
Mezoderm hücreleri üretmek için, insan iPS hücreleri bazal membran matrisi 2 kaplı plakalar üzerine tohumlandı ve Activin A ve CHIR99021 içeren bir ortamda 2 gün boyunca kültürlendi. Elde edilen mezoderm hücreleri, daha öncetarif edildiği gibi HAND1, goosecoid ve brachury (T) ekspresyonu ile karakterize edildi 2,10,11. Ara mezoderm (IM) hücre farklılaşmasını indüklemek için, mezoderm hücreleri BMP-7 ve CHIR99021 ile desteklenmiş bir ortamda 14 gün boyunca kültürlendi. Elde edilen IM hücreleri, Wilm Tümörü 1 (WT1), eşleştirilmiş kutu geni 2 (PAX2) ve tek atlanan ilişkili protein 1 (OSR-1) 2,10,11'i eksprese eder.
İki kanallı polidimetilsiloksan (PDMS) bazlı mikroakışkan çip, glomerüler filtrasyon bariyerinin yapısını in vitro olarak özetlemek için tasarlanmıştır. İdrar kanalı 1.000 μm x 1.000 μm (g x y) ve kılcal kanal boyutu 1.000 μm x 200 μm (g x y) şeklindedir. Döngüsel gerilme ve gevşeme döngüleri, akışkan kanalların her iki tarafında bulunan içi boş odalar tarafından kolaylaştırıldı. Hücreler, idrar ve kılcal kanalları ayıran esnek, PDMS membranına (50 μm kalınlığında) tohumlandı. Membran, hücreler arası sinyalleşmeyi teşvik etmeye yardımcı olmak için altıgen gözeneklerle (7 μm çaplı, 40 μm aralıklı) donatılmıştır (Şekil 1A)2,12. IM indüksiyonu tamamlanmadan iki gün önce, mikroakışkan çipler bazal membran matrisi 2 ile kaplandı. viEC'ler, IM indüksiyonu tamamlanmadan 1 gün önce Endotel Bakım ortamı kullanılarak mikroakışkan çipin kılcal kanalına tohumlandı ve çip, ECM kaplı PDMS membranının bazal tarafında hücre yapışmasını sağlamak için baş aşağı çevrildi. IM indüksiyonunun tamamlandığı gün, hücreler, çip içinde podosit farklılaşmasını indüklemek için BMP7, Activin A, CHIR99021, VEGF165 ve tüm trans Retinoik Asit ile desteklenmiş bir ortam kullanılarak mikroakışkan çipin idrar kanalına tohumlandı. Ertesi gün, ortam rezervuarları Podosit İndüksiyon ortamı ve Endotel Bakım ortamı ile dolduruldu ve yongalara 0.4 Hz'de% 10 mekanik gerinim ve sıvı akışı (60 μL / s) uygulandı.
Hücreselleştirilmiş mikroakışkan çipler, Podosit İndüksiyon ortamı (idrar kanalında) ve Endotel Bakım ortamı (vasküler kanalda) kullanılarak 5 gün daha kültürlendi. Elde edilen böbrek glomerulus çipleri, hem podosit hem de endotel hücreleri için bakım ortamında 7 güne kadar kültürlendi. Farklılaşmış podositler, podocin ve nefrin13,14 dahil olmak üzere soya özgü proteinleri pozitif olarak ifade ederken, viEC'ler, hepsi glomerüler filtrasyon bariyerinin bütünlüğünü korumak için gerekli moleküller olan PECAM-1 ve VE-Cadherin'i pozitif olarak ifade etti. . Podositlerin ve viEC'lerin her ikisinin de doku olgunlaşması ve fonksiyonu için de önemli olan en bol glomerüler bazal membran proteini olan kollajen IV'ü salgıladığı bulunmuştur.
Glomerulus yongalarındaki filtrasyon bariyerinin üç bileşenli sisteminin - endotel, bazal membran ve epitel - molekülleri seçici olarak filtrelediği ve kemoterapötik, nefrotoksik ilaç tedavisine yanıt verdiği bulunmuştur. İlaç tedavisinden elde edilen sonuçlar, glomerulus çipinin nefrotoksisite çalışmaları ve hastalık modellemesi için kullanılabileceğini göstermiştir. Bu protokol, izojenik iPS hücre türevlerinden fonksiyonel bir mikroakışkan böbrek glomerulus çipinin mühendisliği için genel kılavuz sağlar. Tasarlanan çipin aşağı akış analizleri, araştırmacı tarafından istenildiği gibi gerçekleştirilebilir. İlaca bağlı glomerüler yaralanmayı modellemek için glomerulus çipinin kullanımı hakkında daha fazla bilgi için, önceki yayınlara bakın 2,12.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Antikorlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488- ve Alexa Fluor 594 konjuge ikincil antikorlar</td><td>Thermo / Life Technologies</td><td>A32744; A32754; A-11076; A32790; A21203; A11015</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen IV</td><td>Termo / Yaşam Teknolojileri</td><td>14-9871-82</td><td></td></tr><tr><td>Nefrin</td><td>Progen</td><td>GP-N2</td><td></td></tr><tr><td>PECAM-1</td><td>R& D Sistemleri</td><td>AF806</td><td></td></tr><tr><td>Podocin</td><td>Abcam</td><td>ab50339</td><td></td></tr><tr><td>VE-Cadherin</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-9989</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>bazal membran matrisleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning Fibronektin, İnsan</td><td>Corning</td><td>356008</td><td>Bazal membran (3)</td></tr><tr><td>iMatrix-511 Laminin-E8 (LM-E8) parçası</td><td>Iwai Kuzey Amerika</td><td>N8922012</td><td>Bazal membran matrisi (2)</td></tr><tr><td>Matrigel hESC onaylı matris, 5 mL'lik flakon</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td>Bazal membran matrisi (1); partiden partiye varyasyon gösterebilir</td></tr><tr><td><güçlü>Hücreler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DU11 insan iPS hücreleri</td><td></td><td></td><td>DU11 (Duke Üniversitesi klonu # 11) iPS hücre hattı, Duke iPSC Çekirdek Tesisinde üretildi ve bize Duke Üniversitesi'ndeki Bursac Laboratuvarı tarafından sağlandı. Hat test edildi ve mikoplazma (Kasım 2021'deki son test) ve karyotip anormallikleri (Temmuz 2019)</td></tr> içermediği bulundu<tr><td><güçlü>Kültür ortamı büyüme faktörleri ve ortam takviyeleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5M EDTA, pH 8.0</td><td>Invitrojen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serumundan Albümin, Texas Red konjuge</td><td>Thermo / Life Technologies</td><td>A23017</td><td></td></tr><tr><td>All-trans retinoik asit (500 mg)</td> <td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>72262</td><td></td></tr><tr><td>B27 serumsuz takviye</td><td>Thermo / Life Technologies</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>A Vitamini içermeyen B-27 takviyesi (50x)</td><td>Thermo / Life Technologies</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Stemgent</td><td>04-0004</td><td>Partiden partiye değişiklik gösterebilir</td></tr><tr><td>CultureBoost-R</td><td>Hücre Sistemleri</td> ile eksiksiz orta kit <td>4Z0-500-R</td><td>Podosit bakım ortamı</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX takviyeli DMEM/F12</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>10565042</td><td>Glutaminli</td></tr> <tr><td>DMEM/F12Forskolin (Adenilil siklaz aktivatörü)</td><td>Abcam</td><td>ab120058</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX takviyesi</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>35050061</td><td>glutamin takviyesi</td></tr><tr><td>Isı ile inaktive edilmiş FBS</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Heparin solüsyonu</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Aktivin A</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>PHC9544</td><td></td></tr><tr><td>İnsan BMP4</td><td>Preprotech</td><td>120-05ET</td><td></td></tr><tr><td>İnsan BMP7</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>PHC9544</td><td></td></tr><tr><td>İnsan VEGF</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>PHC9394</td><td></td></tr><tr><td>Inulin-FITC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3272</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR1 orta</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>05850</td><td>İnsan iPS hücre kültürü ortamı (CCM). Üreticiye göre 5x takviye ekleyin. İnsan iPS CCM, -20 ° C'de 6 aya kadar saklanabilir.</td></tr><tr><td>N-2 Takviyesi (100x)</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Nörobazal ortam</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>21103049</td><td>Lateral mezoderm bazal ortam</td></tr><tr><td>PBS (Fosfat tamponlu salin)</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin, sıvı (100x)</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>KAYA inhibitör (Y27632)</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td></td></tr><tr><td>StemPro-34 SFM</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>10639011</td><td>Endotel hücre kültürü ortamı (CCM). Üreticiye göre ek ekleyin. Endotelyal CCM, 4 ° C'de iki haftaya kadar saklanabilir; C veya -20 derece & derece; 6 aya kadar C.</td></tr><tr><td>TGF-Beta inhibitörü (SB431542)</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>72234</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Enzimler ve diğer reaktifler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>A1110501</td><td>Hücre ayırma tamponu</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2438</td><td></td></tr><tr><td>Etanol çözeltisi, %70 (hacim/hacim), biyoteknoloji sınıfı</td><td>VWR</td><td>97065-058</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>28906</td><td></td></tr><tr><td>Steril damıtılmış su</td><td>Termo/Yaşam Teknolojileri</td><td>15230162</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97062-208</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripsin EDTA, %0.05Termo</td><td>/Yaşam Teknolojileri</td><td>25300-120</td><td></td></tr> <tr><td>(Orb) Hub modülü</td><td>ORB-HM1'i</td><td></td><td>taklit et</td></tr><tr><td>100 mm x 15 mm yuvarlak petri kabı</td><td>Fisherbrand</td><td>FB087579B</td><td></td></tr><tr><td>120 x 120 mm kare hücre kültürü kabı</td><td>VWR</td><td>688161</td><td></td></tr><tr><td>Accuri C6</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aspirasyonlu pipetler, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Corning</td><td>29442-462</td><td></td></tr><tr><td>Aspirasyon Ünitesi</td><td>SP Bel-Art</td><td>F19917-0150</td><td></td></tr><tr><td>Avanti J-15R Santrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>B99516</td><td></td></tr><tr><td>Konik santrifüj tüpü, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Konik santrifüj tüpü, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>EVOS M7000</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>AMF7000</td><td>Sabit ve lekeli görüntülerin alınması için floresan mikroskop Hücre.</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>VWR</td><td>100503-092</td><td></td></tr><tr><td>Heracell VIOS 160i CO2 inkübatörü</td><td>Thermo/Life Technologies</td><td>51030403</td><td></td></tr><tr><td>AxioCam 503 kamera ile donatılmış Ters Zeiss Axio</td><td>Gözlemcisi Carl Zeiss Mikroskopi</td><td>491916-0001-000 (mikroskop) ; 426558-0000-000(kamera)</td><td></td></tr><tr><td>Kimberly-Clark nitril eldiven</td><td>VWR</td><td>40101-346</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes, büyük</td><td>VWR</td><td>21905-049</td><td></td></tr><tr><td>Leoca SP8 Dik Konfokal Mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medya rezervuarı (POD Taşınabilir Modül)</td><td>POD-1'i</td><td></td>taklit <td>edin</td></tr><tr><td>Mikroplaka çalkalayıcı</td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td></td></tr><tr><td>Organ çipi</td><td>Taklit</td><td>S-1 Çip</td><td></td></tr><tr><td>Organ çipi tutucu</td><td>AK-CCR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P10'u taklit edin hassas bariyerli pipet uçları</td><td>Denville Scientific</td><td>P1096-FR</td><td></td></tr><tr><td>P100 bariyerli pipet uçları</td><td>Denville Scientific</td><td>P1125</td><td></td></tr><tr><td>P1000 bariyerli pipet uçları</td><td>Denville Scientific</td><td>P1121</td><td></td></tr><tr><td>P20 bariyerli pipet uçları</td><td>Denville Scientific</td><td>P1122</td><td></td></tr><tr><td>P200 bariyerli pipet uçları</td><td>Denville Scientific</td><td>P1122</td><td></td></tr><tr><td>Plazma Asher</td><td>Quorum teknolojisi</td><td>K1050X RF</td><td>Bu Plazma Aşındırıcı/Asher/Temizleyici, Duke Üniversitesi'nin Paylaşılan Malzeme Enstrümantasyon Tesisi'nin (SMiF) bir parçası olarak kullanıldı.</td></tr><tr><td>Hücre süzgeci geçmeli kapaklı yuvarlak tabanlı polistiren test tüpü</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet, 10 mL, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Corning</td><td>356551</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet, 25 mL, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Corning</td><td>356525</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet, 5 mL, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Corning</td><td>356543</td><td></td></tr><tr><td>Steriflip, 0.22 & mikro; m, PES</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGP00525</td><td></td></tr><tr><td>Steril Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Thomas Scientific</td><td>1138W14</td><td></td></tr><tr><td>T75cm2 havalandırma kapaklı hücre kültürü</td><td>şişesi Corning</td><td>430641U</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü ile tedavi edilmiş 12 oyuklu plakalar</td><td>Corning</td><td>353043</td> Doku kültürü ile tedavi edilmiş 6 oyuklu plakalar Corning 353046 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vakum modülatörü ve perstaltik pompa (Zoe Kültür Modülü)</td><td>ZOE-CM1</td><td>Organ Çipi Biyoreaktörünü</td> <td>Taklit Edin</td></tr><tr><td>VE-Cadherin CD144 anti-insan antikoru - APC konjuge</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-126-010</td><td></td></tr><tr><td>Geniş eğimli hücre kaldırıcı</td><td>Corning</td><td>3008</td><td></td></tr><tr><td>MACS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD144 MicroBeads, insan</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-857</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Mikro Boncuk Kiti, insan</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>LS sütunları</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden Üretilen İzojenik böbrek glomerulus Çipi

Isogenic Kidney Glomerulus Chip Engineered from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Kronik böbrek hastalığı (KBH), ABD yetişkin nüfusunun% 15'ini etkilemektedir, ancak hedefe yönelik tedavilerin kurulması, insan biyolojik yanıtlarını ve nefrotoksisiteyi doğru bir şekilde tahmin edebilen fonksiyonel modellerin eksikliği ile sınırlandırılmıştır. Böbrek hassas tıbbındaki gelişmeler bu sınırlamaların üstesinden gelmeye yardımcı olabilir. Bununla birlikte, daha önce kurulmuş olan insan böbrek glomerulusunun in vitro modelleri - kan filtrasyonu için birincil bölge ve birçok hastalık ve ilaç toksisitesinin kilit bir hedefi - tipik olarak sınırlı fonksiyonel özelliklere ve eşsiz genetik geçmişlere sahip heterojen hücre popülasyonlarını kullanır. Bu özellikler, hastaya özgü hastalık modellemesi ve terapötik keşif için uygulamalarını önemli ölçüde sınırlar. 
Bu yazıda, izojenik ve vaskülarize mikroakışkan böbrek glomerulus çipi mühendisliği için tek bir hastadan insan kaynaklı pluripotent kök (iPS) hücre kaynaklı glomerüler epitel (podositler) ve vasküler endoteli entegre eden bir protokol sunulmaktadır. Ortaya çıkan glomerulus çipi, soya özgü belirteçleri eksprese eden, bazal membran proteinleri üreten ve böbreğin glomerüler filtrasyon bariyerine benzeyen bir doku-doku arayüzü oluşturan kök hücre kaynaklı endotel ve epitel hücre katmanlarından oluşur. Tasarlanmış glomerulus çipi, molekülleri seçici olarak filtreler ve ilaca bağlı böbrek hasarını özetler. İzojenik hücre tiplerini kullanarak böbrek glomerulusunun yapısını ve işlevini yeniden oluşturma yeteneği, böbrek hastalığını hastaya özgüllükle modelleme ve böbrek hassas tıbbı ve ilgili uygulamalar için çip üzerindeki organların faydasını geliştirme fırsatı yaratır.

Burada, glomerulusun fonksiyonel bir 3D in vitro modelinin, izojenik bir insan iPS hücresi kaynağından vaskülarize edilebileceğini ve epitelize edilebileceğini gösteriyoruz. Spesifik olarak, bu protokol, insan iPS hücre teknolojisinin, özellikle de özel hücre tiplerine farklılaşma yeteneklerinin, insan böbreğinin yapısını ve işlevini hastaya özgü düzeyde modellemek için mikroakışkan cihazlarla entegre edilebilen böbrek glomerüler epiteli (podositler) ve vasküler endotel (viECs) üretmek için nasıl uygulanacağına ...

Burada, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden farklılaşan genetik olarak eşleşen epitel ve vasküler endotel hücrelerini entegre ederek böbrek glomerüler filtrasyon bariyerinin yapısını ve işlevini özetleyen kişiselleştirilmiş bir çip üzerinde organ sistemi tasarlamak için bir protokol sunulmaktadır. Bu biyomühendislik sistemi, böbrek hassas tıbbını ve ilgili uygulamaları ilerletebilir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Üretilen İzojenik Böbrek Glomerulus Çipi

Chronic kidney disease (CKD) affects 15% of the U.S. adult population, but the establishment of targeted therapies has been limited by the lack of ...

İzojenik glomerulus çipi, hastaya özgü hastalık modellemesi ve nefrotoksisite testi ve gelişmiş hassas tıp uygulamalarına olanak sağlayacaktır. Glomerüler epitel ve endotel, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin veya IPSC'lerin tek bir popülasyonundan türetilir. IPSC'ler sınırsız kendini yenilemeye sahiptir ve hemen hemen her hücre tipine farklılaşabilir.Bu teknik, patolojik hücresel fenotipleri ve hastalıkları değerlendirmek için kullanılabilir. Hastaya özgü organ çipi, ilaç taraması ve mekanik çalışmalar için bir platform olarak da hizmet edebilir. Bu model, belirli bir hastaya kişiselleştirilmiş bir çip sistemi üzerinde bir vücudun geliştirilmesine uygulanabilir.Bu sistem, klinik testlerden önce hastaya özgü yanıtları tahmin etme potansiyeline sahiptir. İdrar kanalına nazikçe 25 mikrolitre bazal membran matris 2 çözeltisi ve çipin kılcal kanalına 20 mikrolitre ekleyerek başlayın. İki steril 15 mililitrelik konik tüp kapağı alın ve 500 mikrolitre steril damıtılmış su ile doldurun.Kurumasını önlemek için kapağı Petri kabına yerleştirin ve kapağı kabın üzerine yerleştirin. Gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İlerlemede, ortamı% 90 akıcılıkta 15 günlük bir vasküler endotel hücresi kültürü içeren T75 şişelerinden aspire edin.Beş mililitre hücre ayrılma tamponu ekleyin ve beş ila yedi dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra hücreleri 15 mililitrelik bir konik tüpe aktarın ve beş mililitre DMEM / F-12 ekleyin. Beş dakika boyunca 200 kez G'de santrifüj.Süpernatantı çıkarın ve hücreleri 300 mikrolitre endotel bakım ortamında yeniden askıya alın. Yaklaşık 2 milyon hücre elde etmek için hücreleri hemositometre ile sayın. Bir P200 bariyer ucu kullanarak, mikroakışkan çipin hem üst hem de alt kanallarını 200 mikrolitre DMEM / F-12 ile yıkayın ve aynı anda çıkışın çevresinden aspire edin.Aspiratöre bağlı P200 bariyer ucu ile çipi alt kanalın çıkışından uzakta sıkıca tutun. Vasküler endotel hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini çipin kılcal kanalına sıkıca enjekte edin ve ortamı çıkışın çevresinden dikkatlice aspire edin. Mikroskop altında kabarcıklar veya düzensiz bir tohumlama yoğunluğu olup olmadığını kontrol edin.Çipi yavaşça ters çevirin, böylece hücreler esnek PDMS membranının bazal tarafına yapışabilir. Çipi tutucu kartuşa yerleştirin ve membranın kurumasını önlemek için kartuşa üç mililitre PBS ekleyin. Çipi üç saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Mikroskop altındaki alt kanalda, esnek PDMS membranına bağlı bir birleşik hücre tabakası olup olmadığını kontrol edin. Kılcal kanal çıkışının çevresinden aspire olurken alt kanalın girişine 200 mikrolitre endotel bakım ortamı ekleyerek bağlanmamış hücreleri yıkayın. Çipi tekrar tutucu kartuşa yerleştirin ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Ertesi gün, kılcal kanalı 200 mikrolitre endotel bakım ortamı ile hafifçe yıkayın. İdrar kanalını 200 mikrolitre DMEM/F-12 ile yıkayın ve giriş ve çıkış portlarına 50 mikrolitre DMEM/F-12 bırakın. Ara mezoderm hücrelerini ilerleterek, 12 kuyucuk plakasının her bir kuyucuğundan ara mezoderm indüksiyon ortamını bir mililitre Tripsin EDTA ile değiştirin ve beş dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Bir hücre kaldırıcı kullanarak hücreleri nazikçe kazıyın ve pipetleme kullanarak hücreleri ayırın. Her bir oyuğa iki mililitre Tripsin nötralizasyon çözeltisi ekleyin ve hücreleri 50 mililitrelik bir konik tüpe aktarın. DMEM / F-12 ile hücre süspansiyonunun hacmini 50 mililitreye kadar yapın ve beş dakika boyunca 200 kez G'de santrifüj yapın.Süpernatantı aspire edin ve yaklaşık 3 milyon hücre elde etmek için hücreleri 500 mikrolitre ara mezoderm indüksiyon ortamında yeniden askıya alın. Hücreleri bir hemositometre ile sayın. Çipi tutun ve ortamı prizin çevresinden dikkatlice aspire ederken çipin idrar kanalına 25 mikrolitre hücre süspansiyonunu sıkıca enjekte edin.Kabarcıklar veya düzensiz hücre tohumlama yoğunluğu olup olmadığını kontrol edin. Talaş tutucu kartuşuna üç mililitre PBS ekleyin ve üç saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Kuluçkadan sonra, her iki kanalı da kendi hücre kültürü ortamlarından 200 mikrolitre ile yıkayın.Boş P200 bariyer uçlarını idrar ve kılcal kanalların her iki çıkışına da takın. Pipet 200 mikrolitre endotel bakım maddesi ve yarısını kılcal kanal girişine enjekte edin. Pipet ucunu girişin içine, kanalın hem girişi hem de çıkışı ortamla doldurulmuş pipet uçlarına tutturulacak şekilde serbest bırakın.İdrar kanalı girişi için bu prosedürü 200 mikrolitre ara mezoderm bakım ortamı ile tekrarlayın. Cipsleri gece boyunca 37 santigrat dereceye gömülü uçlarla inkübe edin. Çipleri organ çipi biyoreaktörüne bağlamak için, önce kanallardan P200 uçlarını çıkarın.Kurumayı önlemek için idrar ve kılcal kanalların giriş ve çıkışına ilgili ortamın damlacıklarını ekleyin. İdrar giriş rezervuarına üç mililitre sıcak podosit indüksiyon ortamı ve kılcal giriş rezervuarına üç mililitre sıcak endotel bakım ortamı ekleyin. İlgili ortamın 300 mikrolitresini doğrudan çıkış portu üzerinden çıkış rezervuarlarına ekleyin.Baklaları tepsiye ve organ çipi biyoreaktörüne kaydırın. İki dakika boyunca prime döngüsünü seçmek ve başlatmak için döner kadranı kullanın. Bölmenin alt tarafında, dört akışkan bağlantı noktasının tümünde küçük damlacıklar olup olmadığını görsel olarak kontrol edin.Bölmenin alt tarafı ile mikroakışkan çip bağlantı noktaları arasında sıvıdan sıvıya temas sağlamak için, çip taşıyıcısını yavaşça bölmenin içine kaydırın. Çip taşıyıcı tırnağını yavaşça içeri ve yukarı doğru bastırın. Çipin yüzeyinden fazla ortamı aspire edin.Organ çipi biyoreaktör akış hızını saatte 60 mikrolitreye ayarlayın. Döngüsel gerinimi 0,4 hertz'de %10'a ayarlayın. Düzenleme döngüsünü seçmek ve iki saat boyunca çalıştırmak için organ çipi biyoreaktörü üzerindeki döner kadranı kullanın.Çıkış rezervuarlarını ortam seviyesinde bir artış olup olmadığını görsel olarak inceleyin. Düzenleme döngüsünü seçmek için organ çipi biyoreaktörü üzerindeki döner kadranı kullanın. Kültürün 17. gününden sonra, günlük olarak idrar kanalı çıkış rezervuarlarından ortamı limandan çapraz olarak uzaklaştırın, ancak rezervuarda bir miktar ortam tutun.İdrar kanalı giriş rezervuarını beş gün boyunca her iki günde bir üç mililitreye kadar podosit indüksiyon ortamı ile doldurun. Beş gün sonra, ortamı idrar kanalından aspire edin, ancak rezervuarda bir miktar ortam tutun. İdrar kanalı giriş haznesini günlük olarak üç mililitre podosit bakım ortamı ile doldurun.Benzer şekilde, ortamı kılcal kanal çıkışından aspire edin ve giriş rezervuarlarını günlük olarak endotel bakım ortamı ile doldurun. Bu protokolü kullanarak, insan kaynaklı pluripotent kök hücreler, vasküler endotel hücrelerini ve podositleri çoğaltarak glomerulusun fonksiyonel bir in vitro modelini geliştirmek için kullanıldı. Podosit indüksiyonu ve vasküler endotel yayılımından sonraki 21. günde, çiplerin içindeki hücreler, podositler için Podocin ve Nefrin, vasküler endotel hücreleri için VE Cadherin ve PECAM-1 gibi soy tanımlama belirteçlerini eksprese etti.Hem podosit hem de vasküler endotel hücre katmanları, böbrek glomerulusunda en bol GBM proteini olan Kollajen IV'ü eksprese etti. Glomerulus yongaları, kılcal damardan idrar kanalına inülin gibi küçük molekülleri seçici olarak filtrelerken, albümin gibi büyük proteinlerin kılcal kanaldan ayrılmasını önleyerek seçici bir moleküler filtrasyon fonksiyonu gösterdi. Dört ila yedi günlerinde endotel indüksiyonu sırasında, hücre sayısındaki bir artış ikincil bir hücre tabakasına neden olabilir, ancak aşırı tohumlama, farklılaşmayı engelleyebilecek agregasyona neden olabilir.PDMS çip bileşenlerinin yetersiz bağlanması, sıvı akış yolunda tıkanma veya filtrasyon bariyerinin tehlikeye girmesi durumunda üriner ve kılcal kanallar arasında beklenmeyen sıvı çapraz akışı gözlenebilir. Endotel ve epitel tohumları ekerken ve cipsleri 15. günden itibaren korurken, her adımda kanallardaki hava kabarcıklarını görsel olarak incelemek önemlidir. İzojenik glomerulus çipinde, terapötik potansiyellerini veya toksisite seviyelerini test etmek için klinik olarak ilgili ilaç adayları uygulanabilir.Bu teknik şimdi insan böbrek hastalığının genetik temelini anlamak ve kişiselleştirilmiş terapötikler geliştirmek için fırsatlar sunuyor.

isogenic-kidney-glomerulus-chip-engineered-from-human-induced

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu videoda, tanımlanmış kimyasal koşullar altında hücre farklılaşması yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden insan böbrek podositlerini türetme protokolünü açıklıyoruz. Üretilen podositler, nefrotoksisite testi ve hastalık modellemesi için kullanılabilir.

İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Böbrek Podositlerinin Türetilmesi: Olgun Böbrek Podositlerinin Kök Hücrelerden Yönlendirilmiş Farklılaşması İçin Bir Prosedür

Burada sunulan, insan böbrek podositlerinin yüksek verimli (%&gt;90) ve genetik manipülasyonlardan veya alt popülasyon seçiminden bağımsız olarak indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden türetülmesi için kimyasal olarak tanımlanmış bir protokoldür. Bu protokol 26 gün içinde istenen hücre tipini üretir ve nefrotoksisite testi ve hastalık modellemesi için yararlı olabilir.

Olgun Böbrek Podositlerinin Kimyasal Olarak Tanımlanmış Koşullar Altında İnsan kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Rehberli Farklılaşması

Burada, insan pluripotent kök hücrelerinden (hPSC'ler) böbrek organoidleri üretmek için bir protokol tarif ediyoruz. Bu protokol iki hafta içinde böbrek organoidleri üretir. Elde edilen böbrek organoidleri, paralel ilaç testi yaklaşımları için büyük ölçekli iplikçi şişelerinde veya çok kuyulu manyetik karıştırma plakalarında kültürlenebilir.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Böbrek Organoidleri Üretmek için Basitleştirilmiş Bir Yöntem

Burada, tavuk embriyolarının selomik boşluğunda böbrek organoidlerinin transplantasyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, 8 gün içinde organoidlerin vaskülarizasyonunu ve gelişmiş olgunlaşmasını indükler ve bu süreçleri verimli bir şekilde incelemek için kullanılabilir.

Tavuk Embriyolarında İntralomik Transplantasyon Yoluyla Böbrek Organoidlerinin Etkin Vaskülarizasyonu

Bu makalede, dermal fibroblastlardan hastaya özgü podositlerin epizomal yeniden programlanması yoluyla insan kaynaklı pluripotent kök hücrelere (hiPSC'ler) ve ardından podositlere farklılaşması için iki aşamalı bir protokol açıklanmaktadır.

Cilt Biyopsilerinden Hasta Kaynaklı Podositlerin Üretimi

Bu protokol, süspansiyon kültürü koşulları kullanılarak indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) böbrek organoidleri üretmek için kapsamlı ve etkili bir yöntem sunar. Bu çalışmanın birincil vurgusu, başlangıç hücre yoğunluğunun ve WNT agonist konsantrasyonunun belirlenmesinde yatmaktadır, böylece böbrek organoid araştırmalarıyla ilgilenen araştırmacılara fayda sağlamaktadır.

İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Süspansiyonda Böbrek Organoidlerinin Üretilmesi

Bu protokol, geliştirme, genişleme ve hESC ve iPSCs türetilen NK hücreleri, in vivo görüntüleme açıklar.

Geliştirme, Genişleme ve<em&gt; In vivo</em&gt; İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) den İnsan NK Hücrelerinin İzleme ve ve Bağlı Pluripotent Kök Hücre (iPSCs)

İndüklenmiş pluripotent kök hücre (iPSC) türevi miyojenik progenitörler, kas distrofilerini tedavi etmek için hücre tedavisi stratejileri için adaylar vaat ediyor. Bu protokol, akut ve kronik kas yenilenmesinin fare modellerinde iPSC türevi mezoangioblastların (bir tür kas progenitörleri) engraftasyonunu ve farklılaşmasını değerlendirmek için gereken transplantasyon ve fonksiyonel ölçümleri açıklar.

Kas Yenilenmesinin Fare Modellerinde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre türevi Mezoangioblast benzeri Miyojenik Progenitörlerin Nakli

Biz mRNA ifade biyolojik kapaklarini türetilmiş hücre (PDC) vitamin C (C vitamini) ve 1,25-dihidroksi vitamin D [1,25-(OH)2D3] tarafından indüklenen araştırmak için bir protokol mevcut. Buna ek olarak, PDC osteocytes, kondrosit ve adiposit ayırt etmek yeteneği değerlendirmek.

Yalıtım insan alveoler kapaklarini ve Osteojenik etkinlik kapaklarini türetilmiş hücre D vitamini etkileri Mezenkimal kök hücrelerin

Hücre yeniden programlama, pluripotent hücre durumunu düzenleyen ve koruyan anahtar genlerin tanıtılmasını gerektirir. Açıklanan protokol, insan dermal fibroblastlarından viral/entegre yöntemler olmadan ancak modifiye edilmeyen RNA'lar (NM-RNA) kullanarak hücresel savunma mekanizmalarını azaltan immün kaçırma faktörleri ile birlikte indüklenen pluripotent kök hücrelerin (iPSCs) kolonilerinin oluşmasını sağlar.

Erişkin İnsan Dermal Fibroblastlarının Abdominal Deriden İzolasyon ve İndüklenen Pluripotent Kök Hücrelerin Indüklenen Alacalı Kök Hücrelerin Indükleyici Olmayan Yöntemle Üretilmesi

Keşfedin, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden türetilmiş izojenik böbrek glomerulus çipi ile hastaya özgü hastalık modellemesi ve nefrotoksisite testi yapmayı. Bu yöntem, böbrek hassas tıbbını ilerletmek için kişiselleştirilmiş tedavi geliştirmede kullanılabilir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Üretilen İzojenik Böbrek Glomerulus Çipi

Daha fazla video keşfet