Name: Küçükbaş Gözde İntravitreal Enjeksiyonlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 37 s
Description: Öğrenin, koyun gözünde intravitreal enjeksiyon protokolü ile retinal dejenerasyon için gen tedavisi nasıl uygulanır. Bu yöntem, insan gözü modelinde invaziv olmayan bir tedavi sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu protokolün oluşturulmasında ve Murray ve ark.15 tarafından tanımlanan enjeksiyonların gerçekleştirilmesinde Dr. Steve Heap'e (BVSc, CertVOphthal) verdiği yardım için teşekkür etmek ister. Yazarlar ayrıca CureKids New Zealand, Canterbury Tıbbi Araştırma Vakfı, Neurogene Inc ve Batten Hastalığı Destek ve Araştırma Derneği'nden gelen fonları da kabul ediyorlar.

Tüm deneysel protokoller Lincoln Üniversitesi Hayvan Etiği komitesi tarafından onaylanmıştır ve araştırmalarda hayvanların bakımı ve kullanımı için ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzları ve Yeni Zelanda Hayvan Refahı Yasası (1999) ile uyumludur. Borderdale koyunlarıdoğum 14'te teşhis edildi ve Lincoln Üniversitesi araştırma çiftliklerinde tutuldu. 3 aylık üç homozigot (CLN5-/-) koyun, sol göze tek bir IVT enjeksiyonu yapıldı ve tedavi edilmeyen sağ göz iç kontrol görevi gördü. Elektroretinografi ve patoloji verileri tarihsel sağlıklı ve etkilenmiş kontrol verileriyle karşılaştırıldı. Bu çalışmada kullanılan viral vektör, tavuk beta etkisi (CBh) promotörü ve kodon ile optimize edilmiş küçükbaş hayvan CLN5 (scAAV9 / CBh-oCLN5opt) içeren, kendi kendini tamamlayan adeno ilişkili bir virüs serotip 9 idi. Viral vektör, Kuzey Carolina Vector Core, NC, ABD Üniversitesi tarafından sağlanmıştır.
1. Ameliyat öncesi
<ol><li>Cerrahi kiti otoklav edin (Şekil 1).</li>
	<li>Koyunları ameliyattan önce 24 saat boyunca oruç tutun.</li>
	<li>Ameliyattan önce canlı ağırlıkları kaydedin.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig01.jpg"> Resim 1: İntravitreal cerrahi kit. IVT cerrahisi için gerekli aletler arasında (1) göz kapaklarını açık tutmak için bir spekulum ve (2) bulber konjonktivayı kavramak ve gözü döndürmek için bir çift kavisli burun forseps bulunur. (3) Düz bir burun hemostatı, bulber konjonktivayı kavramak ve göz yörüngesine geri dönmüşse gözü yerinde tutmak için alternatif bir araç olarak da dahil edilir. Bu kit ameliyattan önce otoklavlanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. Cerrahi prosedür
<ol><li>Hayvanı kısıtlayın ve elektronik makaslar kullanarak, yünü boynun bir tarafından juguler damar üzerinde tıraş edin.</li>
	<li>Juguler oluğun tabanına basınç uygulayarak juguler veni tıkayın ve yükseltilmiş damarı görselleştirin.</li>
	<li>Uygun miktarda diazepam (0.3 mg / kg) ve ketamin (7.5 mg / kg) steril bir şırıngaya çekin ve steril bir 20 G iğne takın. İğneyi juguler damara yerleştirin ve kanın göbeğe girdiğinden ve iğnenin damarın içinde olduğundan emin olmak için yavaşça pistona geri çekin. Doğrulandıktan sonra, intravenöz (juguler) uygulama yoluyla indükleyin.</li>
	<li>İndüksiyondan hemen sonra, hayvanı dorsal yassılığa yerleştirin, boynu uzatın ve larinksi görselleştirmek için bir laringoskop kullanarak dili yukarı ve ileri doğru tutun. Hayvan nefes verirken ses telleri arasına nazikçe bir endotrakeal tüp (koyunun büyüklüğüne bağlı olarak 6.0-9.0 boyutu) yerleştirerek endotrakeal entübasyon yapın. Endotrakeal manşeti hemen şişirin ve tüpü alt çenenin etrafında bir bağ ile sabitleyin. Tüpten hava akışını onaylayın.</li>
	<li>Koyunları ameliyat masasına aktarın ve yanal yassılığa yerleştirin.</li>
	<li>Endotrakeal tüpü% 100 oksijende izofluran verilmesi için derhal anestezik makinenin hortumlarına bağlayın. Başlangıçta% 3 -% 4 izofluran ile başlayın ve daha sonra bakım için% 2 -% 3'e düşürün. Koyunların kendiliğinden havalandırılmasını gözlemleyin.</li>
	<li>İşlem boyunca kalp (nabız) hızını, solunum hızını, oksijen doygunluğunu, son gelgit CO2 seviyelerini ve rektal vücut ısısını izleyin. Anestezi uygulanan koyunlarda bu parametrelerin fizyolojik değerleri için Tablo 1'e bakınız (değişken, ancak kılavuz olarak kullanın).</li>
	<li>Cerrahi bir ameliyat arabasına büyük, steril, kare bir örtü yerleştirin, ardından steril aletler yerleştirin.</li>
	<li>Steril, federe bir cerrahi örtüyü enjekte edilecek gözün üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Gözü% 1-5 povidon-iyot çözeltisi ile sulamak için steril bir 20 mL şırınga kullanarak gözü aseptik olarak dezenfekte edin.</li>
	<li>Göze lokal anestezik olarak 1-2 damla Alcaine% 0.5 W / V oftalmik solüsyon uygulayın.</li>
	<li>Gözü açık tutmak için göz kapaklarına bir Nopa Barraquer-Colibri göz spekulumu (10 mm) takın.</li>
	<li>Forseps ile gözün dorsolateral kısmındaki bulber konjonktivayı kavrayın ve göz küresini ventromedial olarak döndürün.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>Farkında</td>
			<td>Anestezi uygulanmış</td>
			<td>Önerilen kritik müdahale noktası</td>
		</tr><tr><td>Kalp atış hızı (atım/dak)</td>
			<td>50-80 (dinlenme) ila 280 (aktif)</td>
			<td>50-80</td>
			<td>&lt;50, &gt;100</td>
		</tr><tr><td>Solunum hızı (nefes/dk)</td>
			<td>15-40 (dinlenme) ila 350 (aşırı ısınmış)</td>
			<td>10-30</td>
			<td>&lt;8, &gt;40</td>
		</tr><tr><td>Oksijen doygunluğu (mm Hg)</td>
			<td>95-100</td>
			<td>98-100</td>
			<td>&lt;90</td>
		</tr><tr><td>Son gelgit CO2 (mm Hg)</td>
			<td>35-45</td>
			<td>35-45</td>
			<td>&gt;55</td>
		</tr><tr><td>Vücut ısısı (°C)</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>&lt;36, &gt;40</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Anestezi uygulanan koyunlarda izlenecek parametrelerin fizyolojik değerleri.
3. Viral hazırlık
<ol><li>AAV vektör alikotlarını kullanana kadar -80 ° C'de saklayın.</li>
	<li>Ameliyat gününde, buzda IVT teslimatı için gerekli sayıda şişeyi çözün.</li>
	<li>Uygulamadan hemen önce, viral vektör aliquot'u vorteksleyin ve içeriği toplamak için 10 s boyunca 400 × g'de santrifüj yapın.</li>
	<li>Her viral vektör aliquotunu steril filtrelenmiş 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde istenen doza 100 μL'lik son hacimde seyreltin. steril filtre pipet uçlarını kullanarak steril 1,5 mL düşük protein bağlayıcı mikrosantrifüj tüpünde vektör seyreltmeleri hazırlayın. Viral vektörle temas eden tüm sarf malzemelerini dezenfektan çözeltisine atın ( Malzeme Tablosuna bakınız). NOT: Orijinal yayında15 terapötik ajanın dozu (AAV9. CLN5) 1.9 x 1010 viral genom idi. Önerilen dozaj, uygulanan terapötik ajana bağlı olarak değişecektir; bu nedenle, burada sunulan standart protokole bir dozaj dahil edilmemiştir.</li>
	<li>AAV vektör preparatının tam 100 μL'sini, derhal enjeksiyon için iğneye kalıcı olarak tutturulmuş 28 G x 1/2 ile steril, düşük ölü alanlı 1 mL şırıngaya çekin. Hazırlıktan enjeksiyona kadar geçen sürenin 2 dakikadan az olduğundan emin olun.</li>
</ol>4. Viral uygulama
<ol><li>İğneyi gözün lateral tarafındaki skleraya yaklaşık 7 mm posterior olarak yerleştirin ve lensten kaçınmak için posterioral olarak açılı olarak yerleştirin (Şekil 2 ve Şekil 3). 100 μL'lik tek enjeksiyonu, retina yüzeyini rahatsız etmeden retinaya mümkün olduğunca yakın bir bolus olarak uygulayın.</li>
	<li>Spekulum ve perdenin çıkarılmasından önce gözü yaklaşık 10-15 mL% 1-5 povidon-iyot çözeltisi ve ardından 10 mL salin ile durulayın.</li>
	<li>Koyunları ters çevirin ve gerekirse diğer gözle tekrarlayın.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig02.jpg"> Şekil 2: Göz küresinin ventromedial dönüşü. (A) Bulber konjonktivayı dişsiz forseps ile kavrayın ve (B) enjeksiyon için gözün dorsolateral yüzeyini açığa çıkarmak için ventromedial olarak (yani buruna doğru) döndürün. Kısaltmalar: V = ventral, D = dorsal, M = medial, L = yanal. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig03.jpg"> Şekil 3: Enjeksiyon yeri ve derinliği. İğne, göz küresinin dorsolateral yönüne enjekte edilir ve iğne milinin tam uzunluğu (0,5 inç / 12,7 mm) göze yerleştirilir. Lensten kaçınmak için iğnenin gözün arka tarafına doğru açısına dikkat edin ve retinaya mümkün olduğunca yakın enjekte edin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
5. Postoperatif yönetim
<ol><li>İşlemin tamamlanması üzerine, izofluran gazı inhalasyon anestezisini durdurun, hattı% 100 oksijenle yıkayın, hortumu endotrakeal tüpten ayırın ve koyunları iyileşme odasına aktarın.</li>
	<li>Koyunları sternal yassılığa yerleştirin, bacaklar altına sıkışmış olarak ve tamamen iyileşene kadar izleyin. Hayvanın ağzının herhangi bir tıkanıklıktan arındırıldığından emin olun.</li>
	<li>Yutma refleksi gözlendiğinde, endotrakeal tüpün manşetini kısmen söndürün ve tüpü ağızdan yavaşça çıkarın.</li>
	<li>Arka ekstremitenin biseps femoris kasına, boynun yan tarafında veya omzun arkasında deri altı antibiyotiklere intramüsküler bir nonsteroidal anti-enflamatuar uygulayın ve% 0.5 kloramfenikol göz küresinin yüzeyine düşer.</li>
	<li>Koyunlar yardımsız durabildiğinde su ve yiyecek (lucerne peletleri ve saman) sağlayın.</li>
	<li>Ameliyat sonrası 7 gün boyunca% 0.5 kloramfenikol göz damlası günde 2-3 damla uygulayın.</li>
	<li>Koyunları ameliyattan yaklaşık 24 saat sonra açık hava padokuna dönmeden önce gece boyunca içeride tutun.</li>
	<li>3 hafta boyunca günlük rektal sıcaklıkları kaydedin. Nabız veya solunum hızı, gıda tüketimi, nörodavranış, vücut ısısı, kilo, duruş, göz sağlığı ve klinik hastalık belirtilerindeki değişiklikleri izleyin. Herhangi bir yan etki belirtisi varsa uygun veteriner tedavisi isteyin.</li>
</ol>6. İn vivo etkinliğin değerlendirilmesi
<ol><li>IVT enjeksiyonunun amacı görmeyi korumaksa, retina hücre fonksiyonunu değerlendirmek için labirent testi veya elektroretinografi (ERG) veya retina yapısını değerlendirmek için optik koherens tomografi (OCT) gibi yöntemlerle in vivo etkinliği izleyin. NOT: Bu etkinlik ölçümleri IVT gen terapisi11,15,16'yı takiben iyi tanımlanmıştır.</li>
</ol>7. Postmortem doku analizi
<ol><li>İntravitreal enjeksiyon ameliyatını takiben uygun bir son noktada onaylanmış bir yöntemle koyun ötenazisi uygulayın. NOT: İntravenöz veteriner ötenazi ilaçları veya servikal omurgaya nüfuz eden bir esir cıvata ve ardından hızlı ekssanguinasyon gibi önerilen ötenazi yöntemleri, başka bir yerde detaylandırılmıştır15,16.</li>
	<li>Cerrahi keskin/künt kavisli makas kullanarak koyun gözü kürelerini hasat edin. Göz yuvası açıklığını arttırmak için lateral ve medial kanthus kesin ve daha sonra göz küresini soketten serbest bırakmak için konjonktival kıvrımları, bağ dokusunu, kasları ve optik siniri sistematik olarak kesin.</li>
	<li>Daldırma-sabitleme bozulmamış, enüklee göz küreleri 2 saat boyunca% 10 formalin içinde, ardından Bouin çözeltisinde 4 saat boyunca postfiksasyon ile yeterli perfüzyona izin vermek için sklerada küçük (0.5 cm) bir kesim yapılır. Alternatif olarak, göz kürelerini Davidson'un çözeltisine daldırarak 48 saat boyunca sabitleyin.</li>
	<li>Göz dokusunun kesitlerini rutin parafin balmumu gömme ve 3-5 μm'de kesitleme yoluyla işleyin. NOT: Hematoksilin ve eozin (H&amp;E) boyama ve immünohistokimyasal analiz için boyama prosedürleri daha önce15,16 olarak tanımlanmıştır.</li>
	<li>Postmortem dokudaki etkinliği, toplam retina kalınlığı, retina tabakası kalınlığı, dış nükleer tabaka hücresel sıralarının sayıları ve retinal hücre tipleri, retinal glia veya ilgilenilen proteinler için immünohistokimyasal boyama gibi ölçümlerle değerlendirin. NOT: Bu analizlere ilişkin protokoller için öncekiyayınlara bakınız 15,16.</li>
</ol>

<ol><li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%3A+More+than+meets+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((update+on+intravitreal+injections%3A+Euretina+expert+consensus+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li>
<li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392(2021).</li>
<li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mutation%22%5BJournal%5D)">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li>
<li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease%3A+A+retrospective+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li>
<li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670(2022).</li>
<li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Data+in+Brief%22%5BJournal%5D)">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188(2021).</li>
<li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume%2C+and+retina+and+lens+weights+in+G%C3%B6ttingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in Göttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li>
<li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li>
<li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+%28c.571%2B1G%3EA%29+leading+to+excision+of+exon+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G>A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li>
<li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600(2021).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li>
<li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li>
<li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li>
<li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li>
<li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li>
<li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li>
<li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -Y., Kim, S. -W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li>
<li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li>
<li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li>
<li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+retinal+gene+therapy%3A+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li>
<li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371(2019).</li>
<li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections%3A+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344(2021).</li>
<li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreally+injected+fluid+dispersion%3A+Importance+of+injection+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li>
<li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li>
<li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Retinal+Physician%22%5BJournal%5D)">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

İntravitreal enjeksiyonlar, insan oftalmolojisinde en yaygın cerrahi prosedürlerden biridir ve koyunların retinasına AAV aracılı gen terapilerinin uygulanmasında etkili olduğu kanıtlanmıştır. Daha önce AAV9'un etkinliğini göstermiştik. CLN5 gen tedavisi, CLN5 NCL15 ile koyunlarda retinal disfonksiyon ve dejenerasyonun azaltılmasında intravitreal olarak sağlandı. Bu uygulama yolunun insan NCL hastalarına çevrilmesinin de faydalı olacağı umulmaktadır.
Bir koyun gözüne küç...

Retinaya terapötik ajanlar vermek için intravitreal (IVT), subretinal, suprakoroidal, perioküler veya topikal uygulama dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılabilir. Her uygulama yolu, kan-retina bariyeri veya iç ve dış sınırlayıcı membranlar gibi engellerin aşılmasını içerir ve verilen ilaca ve spesifik retinal hedefe bağlı olarak değişen etkinlik oranlarına sahiptir 1,2.
IVT ilaç dağıtımı, gözün arka odasını kaplayan jelatinimsi bir madde olan gözün vitreus mizahına enjeksiyonu içerir. Vitröz mizahın birincil işlevi, göz küresinin şeklini korumak ve lens ve retina gibi oküler dokuları yerinde tutmaktır. Vitröz mizah, az miktarda kollajen, hyaluronik asit ve diğer kollajenöz olmayan proteinler içeren büyük ölçüde sudan oluşur3. IVT enjeksiyonu, yaşa bağlı makula dejenerasyonu, diyabetik makula ödemi, diyabetik retinopati, retinal ven tıkanıklığı ve çeşitli kalıtsal retina distrofileri dahil olmak üzere çok çeşitli oküler durumları tedavi etmek için rutin olarak kullanılan basit ve yaygın bir prosedürdür 4,5.
Nöronal seroid lipofussinozlar (NCL; Batten hastalığı), beyin ve retinada ciddi dejenerasyona neden olan ölümcül lizozomal depo hastalıkları grubudur. Şu anda, ağırlıklı olarak çocukları etkileyen, ancak farklı başlangıç yaşlarına ve hastalık şiddetine sahip olan farklı genlerdeki (CLN1-8, CLN10-14) mutasyonlardan kaynaklanan 13 bilinen NCL varyantı vardır6. NCL'ler, bilişsel ve motor gerileme, nöbetler ve görme kaybı gibi ortak ilerleyici semptomları paylaşır. NCL'nin tedavisi yoktur; Bununla birlikte, beyne yönelik enzim replasman tedavisi şu anda CLN2 hastalığı7,8 için klinik çalışmalardadır ve AAV aracılı gen terapisi, CLN5 gen terapisi için klinik bir araştırmanın 2022'de başlaması beklenen klinik çalışmalarla klinik öncesi çalışmalarda büyük umut vaat etmiştir 9,10.
Diğer birçok tür, kediler, köpekler, koyunlar ve inekler de dahil olmak üzere doğal olarak oluşan NCL formları geliştirir. NCL'nin iki küçükbaş hayvan modeli şu anda Yeni Zelanda'da aktif olarak çalışılmaktadır: Borderdale koyunlarında bir CLN5 hastalık modeli ve Güney Hampshire koyunlarında bir CLN6 hastalık modeli. Etkilenen koyunlar, retina atrofisi ve görme kaybı da dahil olmak üzere insan hastalığının klinik ve patolojik özelliklerinin çoğunu sergiler10,11. CLN5 hastalığı olan koyunlarda beyne yönelik CLN5 gen terapisi beyin atrofisini ve klinik düşüşü önleyebilse veya durdurabilse de, tedavi edilen koyunlar hala vizyonlarını kaybeder9. Bu, görüşü korumak ve daha iyi bir yaşam kalitesini korumak için retinayı tedavi etme ihtiyacını vurguladı ve koyunlarda oküler gen tedavisi için bir protokol oluşturulmasına yol açtı.
Koyun gözü, göz küre boyutları, vitreus hacmi ve retinal yapı10,12,13'teki benzerliği nedeniyle insan gözünün iyi bir modelini temsil eder. Bu yazıda IVT'nin küçükbaş göze küçük hacimli (≤100 μL) terapötik viral vektörün verilmesi için cerrahi protokol detaylandırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Kalıcı olarak takılmış 0,5 inç iğneli 1 mL düşük ölü alan güvenlik şırıngası</td><td>Fisher Scientific, Auckland, Yeni Zelanda</td><td>05-561-28</td><td>Covidien Monoject Tuberculin Güvenlik şırıngası veya benzeri</td></tr><tr><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323</td><td>Kullanmadan önce sterilize etmek için otoklav tüpleri</td></tr><tr><td>Gaz tezgahlı ve monitörlü anestezi makinesi&nbsp;</td><td>Hyvet Anestezi, Christchurch, Yeni Zelanda</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotikli göz damlası&nbsp;</td><td>Teva Pharma Ltd, Auckland, Yeni Zelanda</td><td></td><td>Ticari adı: Chlorafast (% 0.5 kloramfenikol)</td></tr> <tr><td>BrightMount artı solma önleyici montaj ortamı</td><td>Abcam, Cambridge, Birleşik Krallık</td><td>ab103748</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4 & prime; , 6-diamidino-2-fenilindol dihidroklorür)</td> <td>Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, Amerika Birleşik Devletleri</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>Diazepam yatıştırıcı</td><td>Ilium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td></td><td>5 mg / mL</td></tr><tr><td>Endotrakeal tüpler</td><td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, Birleşik Krallık</td><td></td><td>Standart, manşetli. Koyun boyutuna bağlı olarak 7, 7.5 veya 8 bedenler</td></tr><tr><td>Göz spekulumu</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>KP151/14</td><td>Nopa Barraquer-Colibri (10 mm)</td></tr><tr><td>Fenestrated cerrahi örtü</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, Yeni Zelanda</td><td>DI583</td><td>Veya benzeri&nbsp;</td></tr><tr><td>Filtre Uçları</td><td>Interlab, Auckland, Yeni Zelanda</td><td></td><td>10, 200 ve 1.000 &mikro; L&nbsp;</td></tr><tr><td>Formaldehit çözeltisi (%37)</td><td>Fisher Scientific, Auckland, Yeni Zelanda</td><td>AJA809-2.5PL</td><td>%0,9 NaCl ile damıtılmış suda %10'a kadar oluşturun</td></tr><tr><td>Keçi tavşan karşıtı Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen Carlsbad, CA, ABD&</td><td>nbsp; A-11012</td><td>1:500</td></tr><tr><td>İzofluran</td> anestezik seyreltmede kullanım <td>Attane, Bayer Hayvan Sağlığı, Auckland, Yeni Zelanda</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin HCl anestezik/analjezik</td><td>PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, Yeni Zelanda</td><td></td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>Laringoskop (veteriner)</td><td>KaWe Medical, Danimarka</td><td></td><td>Miller C bıçak, boyut 2</td></tr><tr><td>İğneler&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>302025</td><td>BD Hipodermik İğneler veya benzeri</td></tr><tr><td>Steroid olmayan antienflamatuar</td><td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, Yeni Zelanda</td><td>49402/008</td><td>Ticari adı: Metacam 20 (20 mg / mL meloksikam)</td></tr> <tr><td>Dişli olmayan forseps</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>AB864 / 16</td><td>Veya benzeri&nbsp;</td></tr><tr><td>Dişsiz hemostat</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>AA150 / 12</td><td>Veya benzeri&nbsp;</td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Yeni Zelanda</td><td>16210072</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen (tıbbi)</td> <td>BOC Gazı, Christchurch, Yeni Zelanda</td><td></td><td>D2 silindiri, gaz kodu 180</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Yeni Zelanda</td><td>10010023</td><td>Steril, filtrelenmiş</td></tr><tr><td>Povidon-İyot çözeltisi</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>005835</td><td>Ticari adı: Betadine (%10 povidon-iyot)</td></tr><tr><td>Tavşan önleyici glial fibriler asidik protein (GFAP)</td><td>Dako, Glostrup, Danimarka</td><td>Z0334</td><td>1:2.500</td></tr> <tr><td>seyreltmede kullanınTavuk beta etki (CBh) promotörü ve kodon için optimize edilmiş küçükbaş hayvan içeren kendi kendini tamamlayan adeno-ilişkili virüs serotipi 9 CLN5</td><td>University of North Carolina Vector Core, NC, ABD.</td><td>scAAV9/CBh-oCLN5opt</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür %0.9 IV Çözelti</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>AHB1322</td><td>Ticari adı: Salin solüsyonu&nbsp;</td></tr><tr><td>Subkutan antibiyotikler</td><td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, Yeni Zelanda</td><td></td><td>Ticari adı: Duplocillin LA (150.000 IU/mL prokain penisilin ve 115.000 IU/mL benzatin penisilin)</td></tr><tr><td>Cerrahi keskin künt kavisli makas&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda</td><td>SSSHBLC130</td><td></td></tr><tr><td>Terumo Şırınga Luer Kilidi</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, Yeni Zelanda</td><td>SH159/SH160</td><td>Steril şırıngalar; İndüksiyon ilaçlarının hazırlanması için 10 mL, salin hazırlamak için 20 mL</td></tr><tr><td>Virkon Dezenfektan Tozu</td><td>EBOS Group Ltd, Christchurch, Yeni Zelanda</td><td>28461115</td><td></td></tr></tbody></table>

küçükbaş gözde İntravitreal enjeksiyonlar

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

Terapötik ajanların retinaya verilmesi için intravitreal (IVT), subretinal, suprakoroidal, perioküler veya topikal uygulama dahil olmak üzere çeşitli yöntemler vardır. IVT ilaç dağıtımı, gözün arka odasını dolduran ve göz küresinin şeklini koruyan jelatinimsi bir madde olan gözün vitreus mizahına bir enjeksiyon içerir. IVT yolu subretinal doğumdan daha az spesifik olarak hedeflenmiş olmasına rağmen, çok daha az invazivdir ve bir dizi oküler hastalık için klinik ortamlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. 
Daha önce adeno ilişkili virüs (AAV) aracılı bir gen terapisi ürününün (AAV9) intravitreal olarak verilmesinin etkinliğini göstermiştik. CLN5), doğal olarak oluşan CLN5 nöronal seroid lipofuscinosis (NCL) formuna sahip koyunlarda. Etkilenen koyunların bir gözünde IVT gen terapisi verilirken, diğer tedavi edilmeyen göz iç kontrol görevi gördü. Tedavi edilen gözde tedaviden 15 ay sonrasına kadar retinal yapı ve fonksiyon korunurken, tedavi edilmeyen gözde postmortem muayene sırasında giderek azalan fonksiyon ve ciddi atrofi görüldü. Koyun çalışmalarına dayanarak, CLN5 gen terapisi ürünü, Eylül 2021'de Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç İdaresi tarafından aday bir araştırma yeni ilacı (IND) olarak temizlendi. Bu yazıda IVT'nin küçükbaş göze terapötik viral vektör verilmesi için cerrahi protokol detaylandırılmıştır.

CLN5 NCL'li koyunlarda retinal disfonksiyon ve dejenerasyonun azaltılmasında bir CLN5 gen terapisi vektörünün IVT verilmesinin etkinliği daha önce bu araştırma grubu15 tarafından gösterilmiştir. Etkilenen koyunlara, bir AAV serotip 9 (AAV9) vektöründe (AAV9) paketlenmiş tek bir 100 μL IVT CLN5 enjeksiyonu yapıldı. CLN5) bir göze, kontralateral göz tedavi edilmemiş bir iç kontrol görevi görür. Görme, enjeksiyon yaşından (3 ay) son dönem hastalığına (18 ay) kadar aylık olarak değerlendirildi. Retina...

Koyun gözünde intravitreal enjeksiyonlar, retinaya viral aracılı gen tedavisi vermek amacıyla yapıldı.

Küçükbaş Gözde İntravitreal Enjeksiyonlar

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

İntravitreal enjeksiyonlar, retinaya terapötik ajanlar vermek için kullanılabilir. İnsan gözünün bir modeli olarak koyun gözüne intravitreal enjeksiyonlar için bir protokol burada sunulmuştur. İntravitreal enjeksiyonlar diğer oküler enjeksiyonlardan çok daha az invazivdir.İntravitreal enjeksiyonlar, bir gen terapisi ürünü sunmak ve koyunlarda retinal dejenerasyonu doğal olarak oluşan nöronal seroid lipofuscinoses ile tedavi etmek için başarıyla kullanılabilir. Koyunlar anestezi altına alındıktan sonra, enjekte edilecek gözü, 20 mililitrelik bir şırınga kullanarak% 1 ila% 5 povidon iyot çözeltisi ile sulayarak aseptik olarak dezenfekte etmeye başlayın. Ardından, gözün üzerine steril, federe bir cerrahi örtü yerleştirin.Gözü açık tutmak için göz kapaklarına bir göz spekulumu yerleştirin. Forseps ile gözün dorsal lateral kısmındaki bulber konjonktivayı kavrayın ve göz küresini ventromedial olarak döndürün. İğneyi gözün yanal tarafındaki skleranın yaklaşık yedi milimetre arkasına yerleştirin ve lensten kaçınmak için arkaya doğru açılı olarak yerleştirin.100 mikrolitrelik tek enjeksiyonu, retina yüzeyini rahatsız etmeden, retinaya mümkün olduğunca yakın bir bolus olarak uygulayın. Spekulumun çıkarılmasından ve örtülmeden önce gözü yaklaşık 10 ila 15 mililitre 1 ila 5% povidon iyot çözeltisi ve ardından 10 mililitre salin ile durulayın. Elektroretinografi analizi, tedavi edilen gözde korunmuş retina fonksiyonunu gösterirken, tedavi edilmeyen göz CLN5'ten etkilenen hayvanlara benzer şekilde azalmıştır.Retinal histoloji, tedavi edilen gözde, merkezi retinadaki sağlıklı kontrol hayvanlarıyla karşılaştırılabilir toplam retina kalınlığı ile normale yakındı. Buna karşılık, tedavi edilmeyen retinanın kalınlığı CLN5'ten etkilenen hayvanlarla karşılaştırılabilirdi. Glial fibriler asidik proteinin veya retinal stres ve astroglianın bir belirteci olan GFAP'nin ekspresyonu, tedavi edilen gözlerde tedavi edilmeyen gözlere göre daha düşüktü, bu da hastalıkla ilişkili inflamasyonun tedaviden sonra azaldığını gösteriyordu.Koyun gözüne intravitreal enjeksiyonlar için bir protokol oluşturulmasıyla, koyun artık intravitre olarak verilen birçok terapötik ajanın güvenliğini ve etkinliğini test etmek için kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intravitreal enjeksiyon, göz hastalıkları veya lokal tedavi doğrudan uygulama olarak görsel bilimler araştırma yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Bu video cam pipet yardımıyla 1 ml şırınga kullanarak intravitreal enjeksiyon için bir protokol gösterdi. Masif kanama ve lens hasarı önlemek konusunda yararlı ipuçları verilmiştir.

Oküler Hastalıkları Model kurulması için intravitreal enjeksiyon

Kaynak: Park, S. W., et al. Farelerde Gen Tedavisi için Viral Vektörlerin Limbal Yaklaşım-Subretinal Enjeksiyonu Retinal Pigment Epiteli. J. Vis. Uzm. (2015)Video, bir fare modelinde viral vektörlerin retina pigment epiteline (RPE) subretinal enjeksiyonu için yöntemi açıklamaktadır. Anestezi ve göz hazırlığından hassas lentiviral vektör dağıtımına kadar prosedürü detaylandırarak RPE'de gen entegrasyonunu ve ekspresyonunu sağlar.

Bir Fare Modelinde Viral Vektörlerin Retina Pigment Epiteline Subretinal Enjeksiyonu

Tavşanlar, göz içi ilaçların farmakokinetiğini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Tavşan gözleri kullanarak göz içi ilaçların farmakokinetik çalışmalarını yürütmek için bir yöntem tarif ediyoruz.

Göziçi İlaçların Farmakokinetik Çalışmaları Tavşan Gözlerinde Kullanımı

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Retina pigment epitel hücreleri hücre-replasman tedavisi için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu gelişmiş form olarak hizmet verebilir. Bu iletişim kuralı coğrafi Atrofi büyük gözlü modeli ve hastalık bu modeline insan embriyonik kök hücre kaynaklı retina pigment epitel hücrelerinin nakli subretinal nesil açıklar.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

Burada bakteriyel endoftalmitin fare modelinde intravitreal enjeksiyon ve sonraki bakteriyel nicel bir yöntem tanımladık. Bu protokol, konak bağışıklık yanıtlarını ve bakteriyel ve konak gen ekspresyonunu ölçmek için genişletilebilir.

Bakteriyel Endoftalmitin Fare Modelinde İntravitreal Enjeksiyon ve Enfeksiyon Parametrelerinin Niceliği

Bu yazıda, subkonjonktival enjeksiyon, mikroenjeksiyon iğneleri ile birlikte infüzyon/geri çekilme şırınga pompası ve gaz geçirmez çıkarılabilir şırıngadan oluşan bir enjeksiyon sistemi kullanılarak farelerde oküler dokular için geçerli bir vektör dağıtım yöntemi olarak gösterilmiştir. Bu enjeksiyon sistemi diğer göz içi uygulama yolları için de uyarlanabilir.

Küçük Hayvan Modellerinde Adeno İlişkili Virüs Vektörlerinin Subkonjonktival Uygulaması

Bu protokol, merkezi bir kornea insizyonu ve ön kamaraya uzun bir tünel kullanılarak sıçanlarda intrakameral enjeksiyon için bir tekniği tanımlar. Bu enjeksiyon yöntemi, yanlışlıkla doku hasarına neden olma riskini en aza indirir ve böylece hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği artırır.

Yan Etki Riski Düşük Olan Sıçanlarda İntrakameral Enjeksiyon

Bu protokol, enjeksiyonlar için sıçan optik sinirine erişmek için transkonjonktival bir yaklaşım kullanan benzersiz bir tekniği tanımlar.

Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım

Bu çalışma, terapötiklerin yetişkin sıçanın retina ve optik sinirlerine verilmesi için bir metodoloji sunmaktadır. Ek olarak, yetişkin bir sıçanda optik sinir ve retinanın yukarıdan aşağıya blok koleksiyonu için benzersiz bir doku elde etme yöntemi tanıtılmıştır.

Erişkin Sıçanlarda Oküler Terapötik Uygulama ve İleri Doku Alımı

Öğrenin, koyun gözünde intravitreal enjeksiyon protokolü ile retinal dejenerasyon için gen tedavisi nasıl uygulanır. Bu yöntem, insan gözü modelinde invaziv olmayan bir tedavi sunar.

Küçükbaş Gözde İntravitreal Enjeksiyonlar

Daha fazla video keşfet