Name: Preadipositlerin Broiler Civciv Embriyolarından İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Keşfedin, broiler civciv embriyolarından preadiposit izolasyonu ve adipojenik farklılaşma yöntemini. Oil Red O boyama ile lipid birikimini analiz ederek erken yağ gelişimini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu protokolü destekledikleri ve optimize ettikleri için UT AgResearch ve Hayvan Bilimi Bölümü'ne teşekkür eder. Bu çalışma USDA hibesi ile finanse edildi.

<ol><li>Fryar, C. D., Carroll, M. D., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFryar%2C+CD+%22Prevalence+of+overweight%2C+obesity%2C+and+severe+obesity+among+children+and+adolescents+aged+2-19+years%3A+United+States%2C+1963-1965+through+2015-2016%22">Prevalence of overweight, obesity, and severe obesity among children and adolescents aged 2-19 years: United States, 1963-1965 through 2015-2016</a>. , (2018).</li>
<li>Siegel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+modern+broiler+and+feed+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">Evolution of the modern broiler and feed efficiency.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 375-385 (2014).</li>
<li>Zuidhof, M. J., Schneider, B. L., Carney, V. L., Korver, D., Robinson, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth%2C+efficiency%2C+and+yield+of+commercial+broilers+from+1957%2C+1978%2C+and+2005%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Growth, efficiency, and yield of commercial broilers from 1957, 1978, and 2005.</a> Poultry Science. 93 (12), 2970-2982 (2014).</li>
<li>Poulos, S. P., Dodson, M. V., Hausman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+models+for+differentiation%3A+preadipocytes+and+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell line models for differentiation: preadipocytes and adipocytes.</a> Experimental Biology and Medicine. 235 (10), 1185-1193 (2010).</li>
<li>Vilaboa, S. D. -A., Navarro-Palou, M., Llull, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+influence+on+stromal+vascular+fraction+cell+yield+obtained+from+human+lipoaspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Age influence on stromal vascular fraction cell yield obtained from human lipoaspirates.</a> Cytotherapy. 16 (8), 1092-1097 (2014).</li>
<li>Speake, B. K., Noble, R. C., McCartney, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+changes+in+lipid+composition+and+lipoprotein+lipase+activity+during+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29-Lipids+and+Lipid+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific changes in lipid composition and lipoprotein lipase activity during the development of the chick embryo.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Lipids and Lipid Metabolism. 1165 (3), 263-270 (1993).</li>
<li>Chen, P., Suh, Y., Choi, Y. M., Shin, S., Lee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+regulation+of+adipose+tissue+growth+through+hyperplasia+and+hypertrophy+in+the+embryonic+Leghorn+and+broiler%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Developmental regulation of adipose tissue growth through hyperplasia and hypertrophy in the embryonic Leghorn and broiler.</a> Poultry Science. 93 (7), 1809-1817 (2014).</li>
<li>Farkas, K., Ratchford, I. A., Noble, R. C., Speake, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+size+and+docosahexaenoic+acid+content+of+adipocytes+during+chick+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Changes in the size and docosahexaenoic acid content of adipocytes during chick embryo development.</a> Lipids. 31 (3), 313-321 (1996).</li>
<li>Claver, J. A., Quaglia, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+morphology%2C+development%2C+and+function+of+blood+cells+in+nonmammalian+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Exotic+Pet+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative morphology, development, and function of blood cells in nonmammalian vertebrates.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 18 (2), 87-97 (2009).</li>
<li>Corning Cell Counter Demo Video. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=JWjckEHO6Wg">https://www.youtube.com/watch?v=JWjckEHO6Wg</a> (2022).</li>
<li>Nema, R., Khare, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+cell+culture%3A+Advance+technology+for+modern+research%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Bioscience+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">An animal cell culture: Advance technology for modern research.</a> Advances in Bioscience and Biotechnology. 3 (3), 219-226 (2012).</li>
<li>Regassa, A., Kim, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oleic+acid+and+chicken+serum+on+the+expression+of+adipogenic+transcription+factors+and+adipogenic+differentiation+in+hen+preadipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International%22%5BJournal%5D)">Effects of oleic acid and chicken serum on the expression of adipogenic transcription factors and adipogenic differentiation in hen preadipocytes.</a> Cell Biology International. 37 (9), 961-971 (2013).</li>
<li>Temkin, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+crude+oil%2Fdispersant+mixture+and+dispersant+components+on+PPAR+%CE%B3+activity+in+vitro+and+in+vivo%3A+identification+of+dioctyl+sodium+sulfosuccinate+%28DOSS%3B+CAS%23+577-11-7%29+as+a+probable+obesogen%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Health+Perspectives%22%5BJournal%5D)">Effects of crude oil/dispersant mixture and dispersant components on PPAR γ activity in vitro and in vivo: identification of dioctyl sodium sulfosuccinate (DOSS; CAS# 577-11-7) as a probable obesogen.</a> Environmental Health Perspectives. 124, 112-119 (2016).</li>
<li>Hausman, D. B., Park, H. J., Hausman, G. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHausman%2C+DB+%22Adipose+Tissue+Protocols%22">Adipose Tissue Protocols</a>. , Springer. 201-219 (2008).</li>
<li>Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+to+maximize+differentiation+of+human+preadipocytes+and+improve+metabolic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">A modified protocol to maximize differentiation of human preadipocytes and improve metabolic phenotypes.</a> Obesity. 20 (12), 2334-2340 (2012).</li>
<li>Church, C. D., Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+study+of+adipocyte+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Isolation and study of adipocyte precursors.</a> Methods in Enzymology. 537, 31-46 (2014).</li>
<li>Akbar, N., Pinnick, K. E., Paget, D., Choudhury, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+adipocyte-derived+extracellular+vesicles+using+filtration+and+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human adipocyte-derived extracellular vesicles using filtration and ultracentrifugation.</a> Journal of Visualized Experiments. (170), e61979(2021).</li>
<li>Perlman, D., Giuffre, N. A., Brindle, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Fungizone+in+control+of+fungi+and+yeasts+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Use of Fungizone in control of fungi and yeasts in tissue culture.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 106 (4), 880-883 (1961).</li>
<li>Kuhlmann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prophylactic+use+of+antibiotics+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">The prophylactic use of antibiotics in cell culture.</a> Cytotechnology. 19 (2), 95-105 (1995).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Black+swimming+dots+in+cell+culture%3A+the+identity%2C+detection+method+and+judging+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Black swimming dots in cell culture: the identity, detection method and judging criteria.</a> bioRxiv. , 366906(2018).</li>
<li>Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+animal+cells%3A+a+manual+of+basic+technique+and+specialized+applications%22">Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications</a>. , John Wiley & Sons. 163-186 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Her ne kadar iyi tanımlanmış birkaç protokol preadipositlerin izolasyonunu bildirmiş olsa da14,15,16,17, embriyonik preadipositler için izolasyon optimize edilmiştir, bu da piliç civcivlerinde erken yaşam yağ büyümesi ve gelişiminin fonksiyonel analizleri için kullanılabilir. Bu protokol, yüksek diferansiyasyon potansiyeline sahip yüksek canlılık embriyonik adiposit progenitörleri verir. Ayrı...

Obezite hem yetişkinler hem de çocuklar için küresel bir sağlık tehdididir. Aşırı kilolu veya obez olan çocukların yetişkinler gibi obez olma olasılığı yaklaşık beş kat daha fazladır ve bu da onları kardiyovasküler hastalık, diyabet ve diğer birçok komorbidite için önemli ölçüde artmış risk altına sokar. 2-5 yaş arası ABD'li çocukların yaklaşık% 13.4'ünde obezite1 vardır, bu da aşırı vücut yağı biriktirme eğiliminin yaşamın çok erken dönemlerinde harekete geçirilebileceğini göstermektedir. Çok farklı nedenlerden dolayı, aşırı yağ dokusunun birikmesi, piliç (et tipi) tavuklar için bir endişe kaynağıdır. Modern piliçler inanılmaz derecede verimlidir, ancak yine de fizyolojik olarak gerekli olandan daha fazla lipit biriktirir 2,3. Bu eğilim, yumurtadan çıktıktan kısa bir süre sonra başlar ve en pahalı üretim bileşeni olan yemi, kas büyümesinden uzaklaştırarak etkili bir şekilde boşa harcar. Bu nedenle, hem çocuklar hem de piliç tavukları için, çok farklı nedenlerle de olsa, yağ dokusu gelişimini etkileyen faktörleri anlamaya ve yaşamın erken dönemlerinde yağ genişlemesini sınırlamanın yollarını belirlemeye ihtiyaç vardır.
Adipositler, olgun, lipit depolayan yağ hücreleri geliştirmek için farklılaşmaya uğrayan preadipositlerden, yağ dokusundan türetilmiş kök hücrelerden oluşur. Bu doğrultuda preadipositler in vitro obezite çalışmaları için değerli bir deneysel modeldir. Yağ depolarının stromal vasküler fraksiyonundan izole edilen bu hücreler, adiposit farklılaşmasını ve metabolizmasını kontrol eden moleküler yolakların temel bir anlayışını sağlayabilir 4,5. Civciv embriyoları, gelişimsel çalışmalarda olumlu bir deneysel modeldir, çünkü yumurtaların istenen programda kültürlenmesi, embriyoların bir dizi gelişim aşamasını gözlemlemek için annenin fedakarlığı olmadan embriyo elde edilmesini sağladığı için deneysel manipülasyonu kolaylaştırır. Ayrıca, daha büyük hayvan modellerine göre embriyo elde etmek için karmaşık cerrahi prosedürler ve uzun süreler gerekli değildir. Bu nedenle, civciv embriyosu, yağ dokusu gelişiminin en erken aşamalarından preadiposit elde etmek için bir fırsat sunar. Subkutan yağ dokusu, embriyonik gün 12 (E12) civarında civcivde, uyluk çevresinde bulunan açıkça tanımlanmış bir depo olarak görünür hale gelir. Bu depo, olgun adipositler 6,7 oluşturmak için gelişimsel ipuçları altında aktif olarak farklılaşmaya uğrayan oldukça proliferatif preadipositler bakımından zenginleştirilmiştir. Adipojenik farklılaşma süreci tavuklar ve insanlar arasında karşılaştırılabilir. Bu nedenle, civciv embriyolarından izole edilen preadipositler, insanlar ve kümes hayvanları ile ilgili çalışmalar için çift amaçlı bir model olarak kullanılabilir. Bununla birlikte, preadipositlerin verimi, hücreler olgun adipositlere dönüştükçe yaşlanmayla birlikte azalır5.
Mevcut protokol, piliç civciv embriyolarında adipojenik farklılaşma ve adiposit hipertrofisinin zirvede olduğu aşamada (E16-E18) preadipositlerin yağ dokusundan izolasyonunu optimize eder8. Bu prosedür, tavuk diyeti gibi gelişmekte olan embriyonun ovo'da maruz kaldığı faktörlerin adiposit gelişimi ve adipojenik potansiyel ex vivo üzerindeki etkilerini değerlendirebilir. Ayrıca, çeşitli manipülasyonların (örneğin, hipoksi, besin ilaveleri, farmakolojik agonistler ve antagonistler) adipogenez veya adiposit progenitörlerinin çeşitli 'omes'leri (örneğin, transkriptom, metabolom, metilom) üzerindeki etkisini test edebilir. Yağ oluşumunun en erken aşamasının bir temsili olarak, bu protokol kullanılarak elde edilen hücreler, kümes hayvanları ve insanlarla ilgili çalışmalar için değerli modellerdir.

<table><tbody><tr><td>1 mL Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>Z683825</td><td>Tek Kanallı Pipet, 100 - 1000 & mikro; L</td></tr><tr><td>1 mL Pipet Ucu</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-402</td><td></td></tr><tr><td>%100 İzopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A426P4</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>25 mL Şişe</td><td>Pyrex</td><td>4980-25</td><td></td></tr><tr><td>%37 Formaldehit</td><td>Fisher Scientific</td><td>F75P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>6 Kuyulu Plaka</td><td>Şahin</td><td>353046</td><td>Doku Kültürü ile Tedavi Edilmiş</td></tr><tr><td>96 Kuyulu Tahlil Plakası</td><td>Costar</td><td>3632</td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyulu Plaka, Siyah Alt</td><td>Costar</td><td>3603</td><td>Doku Kültürü ile Tedavi</td></tr><tr><td>Edilmiş AdipoRed</td><td>Lonza</td><td>PT-7009</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Gibco</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Tezgah Üstü Silecek (Kimtechwiper)</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Yukarı & Yukarı</td><td>NDC</td><td>1167300334 %20 Çalışma Çözümü</td></tr><tr><td>Hücre Sayacı</td><td>Corning</td><td>6749</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci, 40 & m</td><td>SPL</td><td>93040</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5702</td><td></td></tr><tr><td>Tavuk Serumu</td><td>Gibco</td><td>16110082</td><td></td></tr><tr><td>Konik Santrifüj Tüpleri, 15 mL</td><td>VWR</td><td>10025-690</td><td></td></tr><tr><td>Konik Santrifüj Tüpleri, 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoviyal</td><td>Nunc</td><td>343958</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Forseps, 100 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Cerrahi Makas, 115 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-6839</td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış Su</td><td>Millipore</td><td>SYNSV0000</td><td>İhtiyaca Göre Ayrıştırılır</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>HyClone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>2701</td><td>%70 Çalışma Çözümü</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Mikroskobu</td><td>EVOS</td><td>M7000</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Plaka Okuyucu</td><td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>Folyo</td><td>Reynolds</td><td></td><td>Reynolds Wrap Ağır Hizmet Tipi Alüminyum Folyo, 125 SQ. FT.</td></tr><tr><td>Dondurma Kabı</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Jelatin</td><td>Millipore</td><td>4055</td>% <td>2% Çalışma</td></tr><tr><td>Çözeltisi Hematositometre (Sayma Odası)</td> <td>Corning</td><td>480200</td><td>0.1 mm derinliğinde</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Fisher Scientific</td><td>6845</td><td></td></tr><tr><td>Alet Sterilizatörü</td><td>VWR</td><td>B1205</td><td></td></tr><tr><td>Linoleik Asit-Oleik Asit-Albümin</td><td>Sigma</td><td>L9655</td><td>1x Çalışma Solüsyonu</td></tr><tr><td>Mikroskobu</td><td>Evos</td><td>AMEX1000</td><td></td></tr><tr><td>Çok Kanallı Pipet</td><td>Thermo Scientific</td><td>4661070</td><td>12 Kanallı Pipetleyiciler, 30 - 300 & mikro; L</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-7907</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma</td><td>S-3139</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue</td><td>Invitrogen</td><td>R37605</td><td></td></tr><tr><td>Yağ Kırmızı O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Çalkalayıcı</td><td>IKA</td><td>KS130BS1</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt Havlu</td><td>Tork</td><td>RK8002</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm Parafilm</td><td>M</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Steptomisin (P / S)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>1x Çalışma Solüsyonu</td></tr><tr><td>Petri kapları, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Petri kapları, 60 mm</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Plaka Çalkalayıcı</td><td>VWR</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lizis Tamponu</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>Reaktif Tutucu</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Beher, 100 mL</td><td>Pyrex</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre Plaka Okuyucu</td><td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>Steril Gazlı Bez</td><td>McKesson</td><td>762703</td><td></td></tr><tr><td>Düz Forseps, 120 mm</td><td>Roboz Cerrahi</td><td>RS-4960</td><td></td></tr><tr><td>Düz Makas, 140 mm</td><td>Roboz Cerrahi</td><td>RS-6762</td><td></td></tr><tr><td>T-25 Şişe</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Doku Kültürü</td></tr> ile <tr><td>Tedavi Edilmiş Doku Kültürü İnkübatörü</td><td>Thermo Scientific</td><td>50144906</td><td></td></tr><tr><td>Doku Süzgeci, 250 & m</td><td>Pierce</td><td>87791</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi Leke</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td>%0.1 Çalışma Solüsyonu</td></tr><tr><td>Cımbız, 110 mm</td><td>Roboz Cerrahi</td><td>RS-5035</td><td></td></tr><tr><td>Tip 1 Kollajenaz</td><td>Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Su</td><td>Banyosu Fisher Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Grade 1 Filtre Kağıdı</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr></tbody></table>

preadipositlerin broiler civciv embriyolarından İzolasyonu

Isolation of Preadipocytes from Broiler Chick Embryos

Primer preadipositler, adiposit farklılaşmasını ve metabolizmasını kontrol eden moleküler yolları anlamak için değerli bir deneysel sistemdir. Tavuk embriyoları, preadipositleri yağ gelişiminin en erken aşamasından izole etme fırsatı sağlar. Bu birincil hücre, preadiposit proliferasyonunu ve adipojenik farklılaşmayı etkileyen faktörleri tanımlamak için kullanılabilir, bu da onları çocukluk çağı obezitesi ve kümes hayvanlarında aşırı yağ birikiminin kontrolü ile ilgili çalışmalar için değerli bir model haline getirir. Doğum sonrası yağ dokusunun hızlı büyümesi, piliç tavuklarında kas büyümesinden uzaklaştırılarak yemi etkili bir şekilde boşa harcar. Bu nedenle, yağ dokusu gelişiminin en erken aşamalarını anlama yöntemleri, bu eğilimi düzenlemek ve yaşamın erken dönemlerinde yağ genişlemesini sınırlamanın yollarını belirlemek için ipuçları sağlayabilir. Bu çalışma, ticari piliç (et tipi) civciv embriyolarının yağ dokusunun gelişmesinden izole edilen preadipositlerin izolasyonu, primer kültürü ve adipojenik farklılaşması için etkili bir yöntem geliştirmek üzere tasarlanmıştır. Prosedür, yüksek canlılığa (~% 98) sahip hücreler üretmek ve olgun adipositlere farklılaşmak için artan kapasite sağlamak için optimize edilmiştir. Bu basit embriyonik preadiposit izolasyonu, kültürü ve farklılaşması yöntemi, erken yaşamda yağ büyümesi ve gelişiminin fonksiyonel analizlerini destekler.

Primer preadipositler morfolojik olarak fibroblastlara benzer, düzensiz, yıldız benzeri şekillere ve merkezi bir çekirdeğe sahiptir (Şekil 2A-C). Hücreler doku kültürü plastiğine kolayca yapışır ve bağlanmadan hemen sonra çoğalmaya başlar. Ortamda yağ asitleri sağlandığında lipit damlacıklarını hızla farklılaştırır ve biriktirirler (Şekil 3D). Burada temsil edilen izolasyonlarda bildirilen canlılık (boya hariç tutulmasına dayana...

Bu protokol, piliç embriyolarında preadipositlerin yağ dokusundan izole edilmesi için basit bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, yüksek verim, primer kültür ve preadipositlerin adipojenik farklılaşması ile izolasyonu sağlar. Yağ Kırmızı O boyama ve lipid / DNA boyası, farklılaşma ortamı ile indüklenen izole hücrelerin adipojenik yeteneğini ölçtü.

Preadipositlerin Broiler Civciv Embriyolarından İzolasyonu

Primary preadipocytes are a valuable experimental system for understanding the molecular pathways that control adipocyte differentiation and metabolism. ...

Primer preadipositler, adiposit metabolizmasını kontrol eden moleküler yolları anlamak için değerli bir deneysel sistemdir. Tavuk embriyoları, preadipositleri adiposit gelişiminin en erken aşamasından izole etme fırsatı sağlar. Bu yöntem, civcivlerde erken yaşam yağ büyümesi ve gelişme embriyosunun fonksiyonel analizi için kullanılabilecek olgun adiposite farklılaşma kapasitesi ve yüksek canlılığa sahip hücreler üretmek için optimize edilmiştir.Adipojenik farklılaşma süreci, tavuklar ve insanlar arasında oldukça karşılaştırılabilir. Bu nedenle, izole preadipositler, insanlar ve kümes hayvanları ile ilgili çalışmalar için çift önerilen bir model olarak kullanılabilir. Embriyo gövdesini% 70 etanol ile temizlemeye başlamak için.Daha sonra sindirimden sonraki adımlarda filtrasyon sırasında paraziti önlemek için, tüyleri çıkarmak için cilt yüzeyini steril gazlı bezle nazikçe ovalayın. Daha sonra femoral yağ depolarının çiftini ortaya çıkarmak için bacaklar ve karın bölgesi arasındaki cildi kesin. Cildi bacağın etrafında tutmak ve femoral deri altı yağını nazikçe çıkarmak için bir elinizle kavisli forseps kullanın.diğer taraftan. Daha sonra, depoyu yavaşça bacaktan uzaklaştırmak için kavisli forseps kullanın. Dokuları beş mililitre toplama ortamı içeren 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve yağ yastığının diğer tarafı için diseksiyonu tekrarlayın.Şimdi, toplanan yağ yastıklarını sterilizasyon çözeltisi içeren 60 milimetrelik bir Petri kabına aktarın ve kabı birkaç kez döndürerek kısa bir süre durulayın. Daha sonra yağ pedlerini PBS içeren 60 milimetrelik bir Petri kabına aktararak sterilizasyon çözeltisini durulayın. Plakayı yavaşça döndürün ve bir kez daha PBS ile yıkayın.Yağ dokularının sindirimi için, bunları önceden ısıtılmış enzimatik çözelti içeren 15 milimetrelik bir tüpe aktarın. Daha sonra tüpe bir çift uzun düz makas batırın ve sonunda çözeltideki yağ dokularını mümkün olduğunca küçük parçalara ayırın. Kıyılmış dokuyu ve enzimatik çözeltiyi 25 mililitrelik otoklavlanmış bir şişeye aktarın.Şişeyi parafin filmle sarın ve şişeyi sindirim için 37 santigrat derecede bir yörüngesel çalkalayıcı inkübatöre yerleştirin. Sindirimden sonra, iyice karıştırmak için yavaşça yukarı ve aşağı pipetleyin. Ardından, pipetleme yoluyla 250 mikrometrelik bir doku süzgecinden 15 mililitrelik bir tüpe filtreleyerek sindirilmemiş doku ve döküntü parçalarını çıkarın.Şimdi, şişeyi dört mililitre büyüme ortamı ile durulayarak şişeye yapışmış hücreleri çıkarın ve hücre süspansiyonunu aynı 15 mililitrelik tüpe filtreleyin. Daha sonra, filtrede sıkışmış hücreleri çıkarmak için büyüme ortamını tekrar pipetleyerek, süzgeci durulayın. Hücre fraksiyonunu peletlemek ve hücre peletini rahatsız etmeden süpernatantı aspire etmek için oda sıcaklığında beş dakika boyunca 300 kez G'de santrifüj yapın.Peleti bir mililitre kırmızı kan hücresi lizis tamponunda nazikçe yeniden askıya alın, pipetleyerek, iyice karıştırın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca inkübe edin. Daha sonra hücreleri içeren tüpe beş mililitre büyüme ortamı ekleyerek hücreleri seyreltin ve pipetleyerek, hafifçe karıştırın. Şimdi, hücreleri 40 mikrometrelik bir hücre süzgecine pipetleyin ve 50 mililitrelik yeni bir tüpe filtreleyin.Daha sonra süzgeci ilave beş mililitre büyüme ortamı ile durulayın ve oda sıcaklığında yedi dakika boyunca 300 kez G'de santrifüj yaparak hücreleri toplayın. Süper natantı dikkatlice aspire edin. Kalan hücre peletini pipetleme ile bir mililitre büyüme ortamında yeniden askıya alın Hücre yoğunluğunu ve canlılığını belirlemek için, pipetleme yoluyla her numunenin 10 mikrolitresini tripan mavisi içinde karıştırın.Karışımın 10 mikrolitresini hemositometreye yükleyin ve hücreleri sayın. 24, 48 ve 72 saat sonra preadipositlerin analizi normal hücre morfolojisi ve sayısı gösterdi. Preadipositlerin adipojenik indüksiyonu lipid damlacıklarının hızlı farklılaşmasını ve birikimini gösterdi.İzolasyon sırasında preadipositlerin agresif kullanımı hücre hasarına ve düşük hücre sayısına neden olmuştur. Önleyici tedbirler alınmasına rağmen mikrobiyal kontaminasyon gözlenebilir. Yağ kırmızısı O ile lipit boyaması, preadipositlerin adipojenik indüksiyon altında hızla lipit damlacıkları geliştirmeye başladığını ve birikimin 24, 48 ve 72 saat içinde gözlemlendiği gibi zamanla ilerlediğini göstermiştir.Hücre sayısına göre lipid birikimi lipid ve DNA boyaları kullanılarak ölçüldü. Hem lipid birikimi hem de hücre proliferasyonu zamanla artmıştır. Düşük hücre sayısı veya hasarlı hücreler, doku fraksiyonları çok uzun süre sindirildiğinde gözlenebilir.Bu nedenle, bir buçuk saatlik sindirimin aşılmaması önerilir. İzole preadipositler gen ekspresyon çalışmaları için kullanılabilir. cDNA sentezinde ve takip qPCR veya RNAseq'te kullanılmak üzere yeterli RNA elde edilebilir.

isolation-of-preadipocytes-from-broiler-chick-embryos

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makale, izole etmek için bir yöntem ve kültür bıldırcın veya tavuk HH14...

Kuş Embriyonik Kapak Progenitör Hücreler izolasyonu ve Kültür

Bu video, tümör taşıyan koryoallantoik membranın tavuk embriyosundan izolasyonunu göstermektedir. Hasat edilen CAM, daha sonraki sonraki uygulamalar için kullanılabilir.

Civciv Korioallantoik Membran Hasadı: Tavuk Yumurtasından Tümör Grefti Taşıyan Korioallantoik Membranı İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Hücre kültürü modelleri çevre koşulları üzerinde ayrıntılı kontrol sağlar ve böylece nöronal hücre biyolojisi sayısız yönlerini aydınlatmak için güçlü bir platform sağlar. Biz civciv embriyolardan duyusal nöronlar, izole ayırmak ve kültür bir, hızlı, ucuz ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Katmanlarından hazırlanması ve immunositokimya detayları da sağlanmıştır.

Civciv Embriyolar itibaren İzolasyon ve Disosiye Duyu Nöronlar Kültür

Burada, Kromatin immunoprecipitation (ChIP) ve ChIP-seq Kütüphane hazırlık Protokolü düşük-bereket tavuk embriyonik örnekleri küresel epigenomic profilleri oluşturmak için açıklar.

Kromatin Immunoprecipitation (ChIP) protokolü için düşük-bereket embriyonik örnekleri

Bu makalede embriyonik dokulardan saf formu ex vivo chimeric organları için bir araya getirilebilen bıldırcın ve tavuk embriyolar izole etmek için bir yöntem sağlar.

Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu

Bu rapor, birincil kahverengi ve beyaz preadipositlerin yenidoğan farelerden eşzamanlı izolasyonu için bir protokol açıklanmaktadır. İzole hücreler kültürde yetiştirilebilir ve tamamen olgun beyaz ve kahverengi adipozitlere farklılaşmaya teşvik edilebilir. Yöntem, kültürdeki primer yağ hücrelerinin genetik, moleküler ve fonksiyonel olarak karakterizeini sağlar.

Primer Beyaz ve Kahverengi Preadipositlerin Yenidoğan Farelerden İzolasyonu ve Farklılaşması

Bu, kanser metastazının baskılayıcılarını veya sürücülerini taramak için etkili bir yöntemdir. Bir ifade kütüphanesi ile transdüklenen hücreler, metastatik koloniler oluşturmak için tavuk chorioallantoic membran vaskülatürüne enjekte edilir. İnvazivliği azalmış veya artmış koloniler, fenotiplerini doğrulamak için ekscised, genişletilmiş, reenjected ve son olarak, yüksek verim sıralaması kullanılarak analiz edilir.

Hızlı ve Nicel Intravital Chick Chorioallantoic Membran Modeli Kullanılarak Metastatik Regülatörlerin Keşfi

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Burada, kuş preovulatuar foliküllerinde yumurta sarısı, granüloza hücreleri ve teka hücrelerini ayırmak için bir protokol açıklıyoruz. Bu hassas işleme, bu katmanların üreme işlevindeki rolüne ilişkin kritik araştırmalara olanak tanıyarak, gelişmiş tarımsal verim ve biyomedikal içgörüler için foliküler gelişim, hormonal düzenleme ve hastalık araştırmalarının anlaşılmasına yardımcı olur.

Aşağı Akış Uygulamaları için Kuş Preovulatuar Folikül Granüloza ve Teka Hücre Katmanlarının Ayrılması

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Keşfedin, broiler civciv embriyolarından preadiposit izolasyonu ve adipojenik farklılaşma yöntemini. Oil Red O boyama ile lipid birikimini analiz ederek erken yağ gelişimini inceleyin.

Preadipositlerin Broiler Civciv Embriyolarından İzolasyonu

Daha fazla video keşfet