Name: Genç Yetişkin ve Yaşlı Gerbil Cochleaede İmmünoetiketleme ve Şerit Sinapslarının Sayılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-21T14:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Öğrenin genç ve yaşlı gerbil koklealarında immünoetiketleme ve şerit sinaps sayımı yöntemini. Bu protokol, yaşlanmaya bağlı işitme kaybı araştırmalarında sinaptik bütünlüğü değerlendirmek için hızlı ve nicel veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Lichun Zhang'a yöntemin kurulmasına yardımcı olduğu için ve görüntüleme tesislerinin kullanımı için Oldenburg Carl von Ossietzky Üniversitesi, Floresan Mikroskopi Hizmet Birimi'ne teşekkür eder. Bu araştırma Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Alman Araştırma Vakfı) tarafından Almanya'nın Mükemmellik Stratejisi -EXC 2177/1 kapsamında finanse edilmiştir.

<ol><li>Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise-induced+and+age-related+hearing+loss%3A+new+perspectives+and+potential+therapies+%5Bversion+1%3B+peer+review%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Noise-induced and age-related hearing loss: new perspectives and potential therapies [version 1; peer review.</a> F1000Research. 6 (927), (2017).</li>
<li>Heeringa, A. N., Koeppl, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+cochlea%3A+Towards+unraveling+the+functional+contributions+of+strial+dysfunction+and+synaptopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing%22%5BJournal%5D)">The aging cochlea: Towards unraveling the functional contributions of strial dysfunction and synaptopathy.</a> Hearing. 376, 111-124 (2019).</li>
<li>Liberman, L. D., Wang, H., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposing+gradients+of+ribbon+size+and+AMPA+receptor+expression+underlie+sensitivity+differences+among+cochlear-nerve%2Fhair-cell+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Opposing gradients of ribbon size and AMPA receptor expression underlie sensitivity differences among cochlear-nerve/hair-cell synapses.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (3), 801-808 (2011).</li>
<li>Khimich, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+cell+synaptic+ribbons+are+essential+for+synchronous+auditory+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hair cell synaptic ribbons are essential for synchronous auditory signalling.</a> Nature. 434 (7035), 889-894 (2005).</li>
<li>Pangršič, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+requires+otoferlin-dependent+efficient+replenishment+of+synaptic+vesicles+in+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hearing requires otoferlin-dependent efficient replenishment of synaptic vesicles in hair cells.</a> Nature Neuroscience. 13 (7), 869-876 (2010).</li>
<li>Meyer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synapse+number%2C+structure+and+function+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tuning of synapse number, structure and function in the cochlea.</a> Nature Neuroscience. 12 (4), 444-453 (2009).</li>
<li>Zhang, L., Engler, S., Koepcke, L., Steenken, F., Koeppl, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+gradients+of+ribbon+volume+and+AMPA-receptor+patch+volume+in+cochlear+afferent+synapses+on+gerbil+inner+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Concurrent gradients of ribbon volume and AMPA-receptor patch volume in cochlear afferent synapses on gerbil inner hair cells.</a> Hearing Research. 364, 81-89 (2018).</li>
<li>Steenken, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+decline+in+cochlear+ribbon+synapses+and+its+relation+to+different+metrics+of+auditory-nerve+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Age-related decline in cochlear ribbon synapses and its relation to different metrics of auditory-nerve activity.</a> Neurobiology of Aging. 108, 133-145 (2021).</li>
<li>Merchan-Perez, A., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+differences+among+afferent+synapses+on+cochlear+hair+cells%3A+Correlations+with+spontaneous+discharge+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural differences among afferent synapses on cochlear hair cells: Correlations with spontaneous discharge rate.</a> Journal of Comparative Neurology. 371 (2), 208-221 (1996).</li>
<li>Furman, A. C., Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise-induced+cochlear+neuropathy+is+selective+for+fibers+with+low+spontaneous+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Noise-induced cochlear neuropathy is selective for fibers with low spontaneous rates.</a> Journal of Neurophysiology. 110 (3), 577-586 (2013).</li>
<li>Gilels, F., Paquette, S. T., Zhang, J., Rahman, I., White, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+of+Foxo3+causes+adult+onset+auditory+neuropathy+and+alters+cochlear+synapse+architecture+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mutation of Foxo3 causes adult onset auditory neuropathy and alters cochlear synapse architecture in mice.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (47), 18409-18424 (2013).</li>
<li>Yin, Y., Liberman, L. D., Maison, S. F., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olivocochlear+innervation+maintains+the+normal+modiolar-pillar+and+habenular-cuticular+gradients+in+cochlear+synaptic+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Olivocochlear innervation maintains the normal modiolar-pillar and habenular-cuticular gradients in cochlear synaptic morphology.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 15 (4), 571-583 (2014).</li>
<li>Paquette, S. T., Gilels, F., White, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise+exposure+modulates+cochlear+inner+hair+cell+ribbon+volumes%2C+correlating+with+changes+in+auditory+measures+in+the+FVB%2FnJ+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Noise exposure modulates cochlear inner hair cell ribbon volumes, correlating with changes in auditory measures in the FVB/nJ mouse.</a> Scientific Reports. 6 (1), 25056(2016).</li>
<li>Reijntjes, D. O. J., Köppl, C., Pyott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+gradients+in+inner+hair+cell-auditory+nerve+fiber+pre-+and+postsynaptic+proteins+differ+across+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Volume gradients in inner hair cell-auditory nerve fiber pre- and postsynaptic proteins differ across mouse strains.</a> Hearing Research. 390, 107933(2020).</li>
<li>Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-neuron+labeling+in+the+cat+auditory+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-neuron labeling in the cat auditory nerve.</a> Science. 216 (4551), 1239-1241 (1982).</li>
<li>Bourien, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+auditory+nerve+fibers+to+compound+action+potential+of+the+auditory+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Contribution of auditory nerve fibers to compound action potential of the auditory nerve.</a> Journal of Neurophysiology. 112 (5), 1025-1039 (2014).</li>
<li>Sergeyenko, Y., Lall, K., Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cochlear+synaptopathy%3A+An+early-onset+contributor+to+auditory+functional+decline%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Age-related cochlear synaptopathy: An early-onset contributor to auditory functional decline.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (34), 13686-13694 (2013).</li>
<li>Viana, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+neuropathy+in+human+presbycusis%3A+Confocal+analysis+of+hidden+hearing+loss+in+post-mortem+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Cochlear neuropathy in human presbycusis: Confocal analysis of hidden hearing loss in post-mortem tissue.</a> Hearing Research. 327, 78-88 (2015).</li>
<li>Batrel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+potentials+recorded+at+the+round+window+enable+the+detection+of+low+spontaneous+rate+fibers+in+gerbil+auditory+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mass potentials recorded at the round window enable the detection of low spontaneous rate fibers in gerbil auditory nerve.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0169890(2017).</li>
<li>Jeffers, P. W. C., Bourien, J., Diuba, A., Puel, J. -L., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise-induced+hearing+loss+in+gerbil%3A+Round+window+assays+of+synapse+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Noise-induced hearing loss in gerbil: Round window assays of synapse loss.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15, 699978(2021).</li>
<li>Gleich, O., Semmler, P., Strutz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+auditory+thresholds+and+loss+of+ribbon+synapses+at+inner+hair+cells+in+aged+gerbils%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Behavioral auditory thresholds and loss of ribbon synapses at inner hair cells in aged gerbils.</a> Experimental Gerontology. 84, 61-70 (2016).</li>
<li>Cheal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gerbil%3A+A+unique+model+for+research+on+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Aging+Research%22%5BJournal%5D)">The gerbil: A unique model for research on aging.</a> Experimental Aging Research. 12 (1), 3-21 (1986).</li>
<li>Gates, G. A., Mills, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presbycusis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Presbycusis.</a> The Lancet. 366 (9491), 1111-1120 (2005).</li>
<li>Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+sensitivity+of+the+gerbil%2C+Meriones+unguiculatis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Hearing sensitivity of the gerbil, Meriones unguiculatis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 59 (5), 1222-1226 (1976).</li>
<li>Müller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cochlear+place-frequency+map+of+the+adult+and+developing+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">The cochlear place-frequency map of the adult and developing gerbil.</a> Hearing Research. 94 (1-2), 148-156 (1996).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Reijntjes, D. O. J., Breitzler, J. L., Persic, D., Pyott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+the+intact+rodent+organ+of+Corti+for+RNAscope+and+immunolabeling%2C+confocal+microscopy%2C+and+quantitative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of the intact rodent organ of Corti for RNAscope and immunolabeling, confocal microscopy, and quantitative analysis.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100544(2021).</li>
<li>Hickman, T. T., Hashimoto, K., Liberman, L. D., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+migration+and+reorganization+after+noise+exposure+suggests+regeneration+in+a+mature+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Synaptic migration and reorganization after noise exposure suggests regeneration in a mature mammalian cochlea.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19945(2020).</li>
<li>Gray, D. A., Woulfe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+and+aging%3A+a+matter+of+toxic+waste%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+Aging+Knowledge+Environment%3A+SAGE+KE%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin and aging: a matter of toxic waste.</a> Science of Aging Knowledge Environment: SAGE KE. 2005 (5), 1(2005).</li>
<li>Li, H. -S., Hultcrantz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+degeneration+of+the+organ+of+Corti+in+two+genotypes+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ORL%3B+Journal+for+Oto-rhino-laryngology+and+Its+Related+Specialties%22%5BJournal%5D)">Age-related degeneration of the organ of Corti in two genotypes of mice.</a> ORL; Journal for Oto-rhino-laryngology and Its Related Specialties. 56 (2), 61-67 (1994).</li>
<li>Kobrina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+anatomical+and+physiological+markers+of+auditory+system+degeneration+with+behavioral+hearing+assessments+in+a+mouse+%28Mus+musculus%29+model+of+age-related+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Linking anatomical and physiological markers of auditory system degeneration with behavioral hearing assessments in a mouse (Mus musculus) model of age-related hearing loss.</a> Neurobiology of Aging. 96, 87-103 (2020).</li>
<li>Moreno-García, A., Kun, A., Calero, O., Medina, M., Calero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+role+of+lipofuscin+in+age-related+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An overview of the role of lipofuscin in age-related neurodegeneration.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 464(2018).</li>
<li>Jensen, T., Holten-Rossing, H., Svendsen, I., Jacobsen, C., Vainer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+myocardial+tissue+with+digital+autofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology+Informatics%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of myocardial tissue with digital autofluorescence microscopy.</a> Journal of Pathology Informatics. 7, 15(2016).</li>
<li>Kalluri, R., Monges-Hernandez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+gradients+in+the+size+of+inner+hair+cell+ribbons+emerge+before+the+onset+of+hearing+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Spatial gradients in the size of inner hair cell ribbons emerge before the onset of hearing in rats.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 18 (3), 399-413 (2017).</li>
<li>Wu, P. Z., Liberman, L. D., Bennett, K., de Gruttola, V., O'Malley, J. T., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+neural+degeneration+in+the+human+cochlea%3A+Evidence+for+hidden+hearing+loss+in+the+aging+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Primary neural degeneration in the human cochlea: Evidence for hidden hearing loss in the aging ear.</a> Neuroscience. 407, 8-20 (2019).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokolde özetlenen yöntemle, koklealardaki IHC'leri ve sinaptik yapıları genç yetişkin ve yaşlı gerbillerden immüno-etiketlemek, sinaptik öncesi ve sonrası elemanların birlikte lokalizasyonu ile varsayılan fonksiyonel sinapsları tanımlamak, bunları bireysel İHC'lere tahsis etmek ve sayılarını, hacimlerini ve konumlarını ölçmek mümkündür. Bu yaklaşımda kullanılan antikorlar ayrıca dış saç hücrelerini (OHC'ler; myoVIIa) ve presinaptik şeritlerini de etiketledi. Ayrıca, hem IHC'lerin hem de OHC'lerin immüno-etiketlenme...

Yaşa bağlı işitme kaybı, 65 yaş ve üstü dünya nüfusunun üçte birinden fazlasını etkileyen, dünyanın en yaygın hastalıklarından biridir1. Altta yatan nedenler hala tartışılmakta ve aktif olarak araştırılmaktadır, ancak iç saç hücrelerini (IHC'ler) afferent işitme siniri lifleri ile bağlayan özel sinapsların kaybını içerebilir2. Bu şerit sinapslar, kendisine bağlı nörotransmitter glutamat ile dolu veziküllerin yanı sıra postsinaptik α-amino-3-hidroksi-5-metil-4-izoksazolepropiyonik asit (AMPA) glutamat reseptörleri 3,4,5 olan presinaptik bir yapıyı içerir. Gerbilde, ~ 20 afferent işitme siniri lifi bir IHC 6,7,8 ile temas eder. IHC'deki modiolusa bakan lifler büyük sinaptik şeritlere karşıyken, IHC'nin sütun tarafına bağlanan lifler küçük sinaptik şeritlerle karşı karşıya kalır (yani, kedilerde9, gerbiller7, gine domuzları 10 ve farelerde 3,11,12,13,14). Ayrıca gerbilde presinaptik şeritlerin ve postsinaptik glutamat yamalarının büyüklüğü pozitif korelasyongösterir 7,14. IHC'nin modiolar tarafındaki büyük şeritlere karşı çıkan lifler kalibre olarak küçüktür ve düşük spontan oranlara ve yüksek eşiklere sahiptir15. Düşük spontan oranlı liflerin, gürültüye maruz kalma 10 ve ototoksik ilaçlara karşı16, IHC15'in sütun tarafında bulunan yüksek spontan düşük eşikli liflerden daha savunmasız olduğuna dair kanıtlar vardır.
Şerit sinapslarının kaybı, koklear nöral yaşa bağlı işitme kaybında en erken dejeneratif olaydır, spiral ganglion hücrelerinin ve bunların afferent işitme siniri liflerinin kaybı 17,18'in gerisinde kalmaktadır. Elektrofizyolojik korelasyonlar, işitsel beyin sapı yanıtlarınınkayıtlarını içerir 17 ve bileşik aksiyon potansiyelleri8; Bununla birlikte, bunlar sinaps kaybının inceliklerini yansıtmaz, çünkü düşük spontan oranlı lifler bu önlemlere katkıda bulunmaz16. Daha umut verici elektrofizyolojik metrikler, kütle potansiyelinden türetilmiş nöral indeks19 ve peristimulus zaman yanıtı20'dir. Bununla birlikte, bunlar yalnızca hayvanın işitme siniri lifi kaybının ötesinde, kalan işitme siniri liflerinin aktivitesini etkileyen başka koklear patolojileri yoksa güvenilirdir8. Ayrıca, gerbildeki davranışsal olarak değerlendirilen eşikler sinaps sayıları21 ile ilişkili değildi. Bu nedenle, hayatta kalan şerit sinapslarının ve dolayısıyla fonksiyonel işitme siniri liflerinin sayısının güvenilir bir şekilde ölçülmesi ancak koklear dokunun doğrudan incelenmesiyle mümkündür.
Moğol gerbili (Meriones unguiculatus), yaşa bağlı işitme kaybını incelemek için uygun bir hayvan modelidir. Kısa bir ömre sahiptir, insanlara benzer düşük frekanslı işitmeye sahiptir, bakımı kolaydır ve yaşa bağlı işitme kaybıile ilgili insan patolojileriyle benzerlikler gösterir 2,22,23,24. Gerbiller, ortalama yaşam süreleri22'nin sonuna yakın olan 36 aylıkken yaşlı olarak kabul edilir. Daha da önemlisi, yaşa bağlı bir şerit sinaps kaybı, sessiz ortamlarda yetiştirilen ve yaşlanan gerbillerde gösterilmiştir 8,21.
Burada, genç yetişkinlerden yaşlılara kadar farklı yaşlardaki gerbillerden kokleaları immünoetiketlemek, diseke etmek ve analiz etmek için bir protokol sunulmaktadır. Presinapsın (CtBP2), postsinaptik glutamat reseptör yamalarının (GluA2) ve IHC'lerin (myoVIIa) bileşenlerine yönelik antikorlar kullanılır. Yaşlı koklealarda arka planı azaltan ve floresan sinyalini sağlam bırakan bir otofloresan söndürücü uygulanır. Ayrıca, hem duyusal epiteli hem de stria vascularis'i incelemek için kokleanın nasıl diseke edileceğine dair bir açıklama verilmiştir. Koklear uzunluk, belirli en iyi frekanslara karşılık gelen farklı koklear konumların seçilmesini sağlamak için ölçülür25. Sinaps sayılarının nicelleştirilmesi, serbestçe kullanılabilen ImageJ26 yazılımı ile gerçekleştirilir. Bireysel HC içindeki sinaps hacimlerinin ve konumlarının ek nicelleştirilmesi, Matlab'da özel olarak yazılmış yazılımla gerçekleştirilir. Bu yazılım, yazarlar profesyonel dokümantasyon ve destek sağlayacak kaynaklardan yoksun oldukları için kamuya açık hale getirilmemiştir.

<table><tbody><tr><td>Albümin Fraksiyonu V biyotin içermeyen</td><td>Carl Roth</td><td>0163.2</td><td></td></tr><tr><td>anti-CtBP2 (IgG1 monoklonal fare)</td><td>BD Biosciences, Eysins</td><td>612044</td><td></td></tr><tr><td>anti-GluA2 (IgG2a monoklonal fare)</td><td>Millipore</td><td>MAB39</td><td></td></tr><tr><td>anti-fare (IgG1)-AF 488</td><td>Moleküler Problar A.Ş.</td><td>A21121</td><td></td></tr><tr><td>anti-MiyozinVIIa (IgG poliklonal tavşan)</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25e6790</td><td></td></tr><tr><td>Bıçak Tutucu & Kırıcı - Düz Çeneler</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>10052-11</td><td></td></tr><tr><td>Bonn Arter Makası - Top Ucu</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14086-09</td><td></td></tr><tr><td>Lamel kalınlığı 1.5H, 24 x 60 mm</td><td>Carl Roth</td><td>LH26.1</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Cerrahi Bıçak</td><td>Henry Schein</td><td>0473</td><td></td></tr><tr><td>eşek anti-tavşan (IgG)-AF647</td><td>Yaşam Teknolojileri-Moleküler Problar</td><td>A-31573</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, mutlak% 99.8</td> <td>Fisher Scientific</td><td>12468750</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit</td><td>Carl Roth</td><td>8040.2</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tüyü Çift Kenarlı Bıçak</td><td>PLANO</td><td>112-9</td><td></td></tr><tr><td>G19 Kanül</td><td>Henry Schein</td><td>9003633</td><td></td></tr><tr><td>keçi anti-fare (IgG2a)-AF568</td><td>Invitrogen</td><td>A-21134</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Ratiopharm</td><td>N68542.04</td><td></td></tr><tr><td>Huygens Essentials</td><td>Bilimsel Hacim Görüntüleme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Fiji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Immersol, Daldırma yağı 518F</td><td>Carl Zeiss</td><td>10539438</td><td></td></tr><tr><td>Intrafix Primeline Classic, 150 cm (mit Datamatrix Code auf der Sterilverpackung)</td><td>Braun</td><td>4062957E</td><td></td></tr><tr><td>ISM596D</td><td>Ismatec</td><td></td><td>peristaltik pompa</td></tr><tr><td>KL 1600 LED</td><td>Schott</td><td>150.600</td><td>stereomikroskop için ışık kaynağı</td></tr><tr><td>Leica Uygulama paketi X</td><td>Leica Microsystem CMS GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS SP8 sistemi</td><td>Leica Microsystem CMS GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matlab</td><td>Mathworks Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mayo Makas Tungston Karbür ToghCut</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14512-17</td><td></td></tr><tr><td>Mini-100 Orbital-Genie</td><td>Scientific Industries</td><td>SI-M100</td><td>soğuk ortamda kullanım için</td></tr><tr><td>Narcoren (pentobarbital)</td><td>Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ni-Ei</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements</td><td>Nikon Europe B.V.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Carl Roth</td><td>0335.3</td><td></td></tr><tr><td>Havalandırma delikleri olmayan petri kabı</td><td>Avantor VWR</td><td>390-1375</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Fosfat tamponlu tuzlu su:</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Disodyum fosfat</td><td>AppliChem</td><td>A1046</td><td></td></tr><tr><td>Monopotasyum fosfat</td><td>Carl Roth</td><td>3904.1</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Carl Roth</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>31434-M</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı Kapaklı Kaplar</td><td>Sarstedt</td><td>75.562.300</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Carl Roth</td><td>K305.1</td><td></td></tr><tr><td>Öğrenci Adson Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>Öğrenci Halsted-Sivrisinek Hemostat</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Yapışma Mikroskobu Slaytları</td><td>Epredia</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp; X</td><td>Carl Roth</td><td>3051.2</td><td></td></tr><tr><td>TrueBlack Lipofuscin Otofloresan Söndürücü</td><td>Biotium</td><td>23007</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makası, 3mm</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield Antifade Montaj Ortamı</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Vibrax VXR basic</td><td>IKA</td><td>0002819000</td><td></td></tr><tr><td>VX 7 Çanak ataşmanı Vibrax VXR basic</td><td>IKA</td><td>953300</td><td></td></tr><tr><td>Wild TYP 355110 (Stereomikroskop)</td><td>Wild Heerbrugg</td><td></td><td>artık kullanılamıyor</td></tr></tbody></table>

genç yetişkin ve yaşlı gerbil cochleae'de İmmünoetiketleme ve Şerit sinapslarının sayılması

Immunolabeling and Counting Ribbon Synapses in Young Adult and Aged Gerbil Cochleae

İç saç hücrelerini ve afferent işitme siniri liflerini birbirine bağlayan şerit sinapsların kaybı, yaşa bağlı işitme kaybının bir nedeni olarak kabul edilir. Şerit sinapslarının kaybını tespit etmek için en yaygın yöntem immünoetiketlemedir, çünkü bireysel bir kokleadaki çeşitli tonotopik konumlardan kantitatif örneklemeye izin verir. Bununla birlikte, ilgilenilen yapılar kemikli kokleanın derinliklerine gömülüdür. Gerbiller, yaşa bağlı işitme kaybı için bir hayvan modeli olarak kullanılır. Burada, fiksasyon, gerbil koklear bütün montajların immüno-etiketlenmesi, konfokal görüntüleme ve şerit sinaps sayılarının ve hacimlerinin ölçülmesi için rutin protokoller açıklanmaktadır. Ayrıca, değerli yaşlanan bireylerden iyi malzeme elde etmekle ilgili özel zorluklar vurgulanmaktadır. 
Gerbiller ötenazi yapılır ve ya kardiyovasküler olarak perfüze edilir ya da timpanik bülleri kafatasından dikkatlice diseke edilir. Koklealar tepe ve tabanda açılır ve doğrudan fiksatif bölgeye aktarılır. İlk yöntemden bağımsız olarak, koklealar sonradan sabitlenir ve daha sonra kireçten arındırılır. Doku daha sonra sinaptik öncesi ve sonrası yapılara ve saç hücrelerine karşı birincil antikorlarla etiketlenir. Daha sonra, kokleae, kendi birincil antikorlarına karşı spesifik olan ikincil floresan etiketli antikorlarla inkübe edilir. Yaşlı gerbillerin kokleaları daha sonra yaşlı hayvanların dokularının tipik olarak önemli arka plan floresansını azaltmak için bir otofloresan söndürücü ile muamele edilir. 
Son olarak, koklealar 6-11 segmente ayrılır. Tüm koklear uzunluk, belirli koklear konumların bireyler arasında güvenilir bir şekilde belirlenebileceği şekilde yeniden yapılandırılır. Sırayla elde edilen konfokal görüntü yığınları, seçilen konumlardaki saç hücrelerini ve sinapsları görselleştirmeye yardımcı olur. Konfokal yığınlar deconvolved edilir ve sinapslar ya ImageJ kullanılarak manuel olarak sayılır ya da Matlab'da özel olarak yazılmış görüntü analizi prosedürleri ile sinaptik yapıların daha kapsamlı bir şekilde ölçülmesi gerçekleştirilir.

Kokleae, kardiyovasküler perfüzyondan sonra ya tüm hayvanın fiksatif ile hasat edildi ya da hayvanı ötenazi yaptıktan ve daldırma ile sabitlendikten sonra hızla diseke edildi. İkinci yöntemle, IHC'ler diseksiyon sırasında yerinde kalırken, başarısız perfüzyon ve dolayısıyla yetersiz sabit doku durumlarında, duyusal epitel sıklıkla tahrip olmuştur. Yazarların, transkardiyal perfüzyondan sonra kokleaların fiksasyonunun yetersiz olduğu, beynin fiksasyonunun hala yeterli olduğu vakalarla karşılaştıklarını unutmayın. İnferior...

Genç erişkin ve yaşlı gerbil kokleae'lerin afferent sinaptik yapıların ve saç hücrelerinin immüno-etiketlenmesi, yaşlı dokudaki otofloresansın söndürülmesi, kokleae'nin uzunluğunun diseksiyonu ve tahmin edilmesi ve konfokal görüntüleme ile elde edilen görüntü yığınlarındaki sinapsların nicelleştirilmesi için bir protokol sunulmaktadır.

Genç Yetişkin ve Yaşlı Gerbil Cochleae'de İmmünoetiketleme ve Şerit Sinapslarının Sayılması

The loss of ribbon synapses connecting inner hair cells and afferent auditory nerve fibers is assumed to be one cause of age-related hearing loss. The ...

Bu protokol, her yaştan gerbilin kokleasındaki sinaptik bütünlüğün değerlendirilmesini sağlar. Bu, özellikle yaşlanmaya bağlı işitme problemleriyle ilgili temel araştırmalar için önemlidir. Protokol nispeten hızlıdır ve koklea boyunca çeşitli konumlardan nicel veriler verir.Ayrıca, bir otofloresan söndürücü kullanarak yaşlanan dokunun belirli bir problemini ele alır. Sinapsların dejenerasyonu, kokleadaki fonksiyon kaybının en erken belirtisidir. Niceliklendirme, sinaptopati için invaziv olmayan tanı araçları geliştirmeye yönelik araştırmalarda önemli bir araçtır.Koklear diseksiyon, pratik gerektiren en önemli kısımdır, bu nedenle deneysel olmayan kokli ile başlamak daha iyidir. Bullaları çıkararak başlayın. Kemiği makasla kesin veya forseps ile kemiği çatlatın ve kokleaya ulaşmak için forseps ile çıkarın.Malleus, incus ve yarım daire şeklindeki kanalları çıkarın. Kokleanın tepesini kaplayan kemiği dikkatlice çıkarın ve tepede ve bazal dönüşte küçük delikler açmak için koklear kemiği forseps ile çizin veya her iki yerde de dikkatlice delikler açın. Bullaları hemen en az 50 mililitre soğuk fiksatif içine aktarın.Kokliyi ikiye bölmek için, kokleanın sarmal uzunluğundan daha uzun bir tıraş bıçağı parçasını bir bıçak tutucuya yerleştirin. Ardından, kokleayı stereo mikroskop altında bir Petri kabına yerleştirin. Fazla dokuyu tıraş bıçağı veya ince makasla kesin.Kokleayı ince forseps ile yerinde tutun ve modiolus boyunca ikiye bölün. Otofloresan söndürücünün% 5'lik bir çözeltisini% 70 etanol ile karıştırarak hazırlayın. Kokli'yi bu çözeltiye yerleştirin ve bir çalkalayıcı üzerinde oda sıcaklığında bir dakika boyunca inkübe edin, ardından beş dakika boyunca bir mililitre PBS ile üç kez yıkayın.Kokleanın diseksiyonu için iki ince forseps, süper ince forseps, vannalar, yaylı makas, bıçak tutucu, tıraş bıçağı toplayın ve polistirol Petri kabını ve kapağını PBS ile doldurun. İki ila dört milimetrelik bir kesme yüzeyi elde etmek için tıraş bıçağından parçaları kırın. Kokleayı doku hazırlığı için bölümde gösterildiği gibi ikiye bölün.Koklear yarısını, forseps ile kesilmiş kenar yukarı bakacak şekilde dikkatlice sabitleyin. Kokleanın kemiğini tepeyi kaplayan helikotremanın üzerinde kesmek için ince yaylı makas kullanın. Daha sonra, modiolus ve işitme siniri ve scala vestibuli'yi keserek apikal dönüşü izole etmek için makas kullanın.Yukarıdaki koklear kemiğin her iki tarafında iki kesik yapın veya stria vascularis daha fazla değerlendirme için gerekli değilse, doğrudan orta dönüşün stria vascularis'inden geçin. Koklear parçalarını ayırmak için tıraş bıçağını kullanın. Alternatif olarak, Corti Organı ile stria vascularis arasında kesin.Stria vascularis'i spiral ligamente bağlı bırakın ve forseps kullanarak kireçlenmiş kemiği çıkarın. Ardından, koklear parçalarını PBS ile doldurulmuş bir Petri kabı kapağına aktarın. Sütun ve modiolar taraflardaki fazla dokuyu çıkarın, böylece tüm montajlar daha sonra slaytta mümkün olduğunca düz bir şekilde uzanacaktır.Büyük koklear parçalar, özellikle bazal dönüşten kaynaklananlar, iki parçaya bölünmelidir. Tektoryal membranı süper ince forsepslerle dikkatlice çıkarın. Koklear parçaları bir damla montaj ortamına kaydırarak Corti Organının yukarı bakmasını sağlayın.Koklear parçayı sagital düzleme kaydırın ve iç saç hücrelerine yakın bir yerde spiral limbusun invaginasyonunu arayın. Spiral limbusun bu invaginasyonu orta ve bazal koklear parçalarda daha net görülebilir. Bu adımları tekrarlayarak tüm kokleayı ve tüm stria vaskülarisi mikroskop slaytına aktarın.Kapak sürgüyü kaydırın ve sızdırmazlık için kenarların etrafına siyah oje ekleyin. Karanlıkta kurutun ve dört santigrat derecede saklayın. BioVoxxel eklentisi yüklü ImageJ yazılımında deconvolved yığınlarının bir kopyasını açın.Görüntü'ye, ardından Renk'e ve ardından Kanalları Böl'e tıklayarak kanalları bölün. Farklı renkler atamak için Görüntü'ye, ardından Renk'e ve ardından Kanalları Birleştir'e tıklayarak bunları birleştirin. Görüntü'ye tıklayarak görüntüyü RGB yığınına dönüştürün, ardından Renk'e gidin ve RGB'ye Yığınla'ya tıklayın.Görüntü, Ayarla ve ardından Parlaklık/Kontrast'a tıklayarak parlaklığı ve kontrastı ayarlayın. Sinaptik öncesi ve sonrası yapıların ve iç saç hücresi etiketlerinin arka plandan farklı olduğundan emin olmak için otomatik veya kaydırıcı kullanın. Yığın içinde istediğiniz yere tıklayarak metin aracıyla beş iç saç hücresini etiketleyin.Ardından, Çözümle'ye, ardından Araçlar'a gidin ve YG Yöneticisi'ni seçin. Noktaları bir sayı ile etiketlemek için onay kutusu etiketlerini işaretleyin. İlgilendiğiniz iç saç hücresini yakınlaştırın.Çok noktalı modu seçmek için nokta aracına sağ tıklayın. Z boyutunda ilerleyin ve sinaptik bir glutamat sonrası yama ile yan yana duran bir sinaptik öncesi şerit tarafından tanımlanan işlevsel şerit sinapslarını sayın. İlgilendiğiniz tüm yapıları seçtikten sonra, YG Yöneticisini Ekle'yi tıklayın, ardından rastgele adı tıklayın ve Yeniden Adlandır'ı seçin.El aletiyle, görüntüyü bir sonraki iç saç hücresini tam olarak görüntüleyecek şekilde ayarlayın. Önceden depolanmış verilere daha fazla puncta eklemekten kaçınmak için Çok noktalı araçtan Nokta aracına geçin. Bir sonraki iç saç hücresindeki ilgi çekici bir yapıya tıklayın ve Çok noktalı araca geçin.Tüm iç saç hücreleri değerlendirilene kadar ROI Yöneticisi'ne fonksiyonel şerit sinapsını eklemeye devam edin. YG Yöneticisi'nde bir veri kümesine ve ardından Ölçüm'e tıklayın. Ölçülen veri noktalarını listeleyen yeni bir pencerenin görünmesini bekleyin ve bu listeyi elektronik tablo olarak kaydetmek için Dosya ve Farklı Kaydet'i tıklayın.YG Yöneticisi'nde Tümünü Göster'i etkinleştirerek görüntüyü kaydedin. Nokta etiketlerini yığına kalıcı olarak eklemek için Düzleştir'e tıklayın ve değişiklikleri kaydederek kapatmak için Kabul Et'e tıklayın. 10 aylık genç bir gerbilin kokleasından elde edilen Z yığını projeksiyonları, burada beyaz kesikli çizgilerle özetlenen miyozin 7A etiketli iç saç hücrelerinin arka planla keskin bir kontrast oluşturduğunu göstermektedir.Ön sinaptik şeritler yeşil renkte gösterilen anti-CtBP2 iki ile etiketlenirken, sinaptik sonrası glutamat yamaları kırmızı renkte gösterilen anti-GluA2 ile etiketlendi. 38 aylık eski bir gerbilden gelen koklea, otofloresan söndürücü ile tedavi edildi ve açıkça görülebilen sinaptik öncesi ve sonrası yapılara sahip farklı iç saç hücreleri gösterdi. İmmünoetiketlemenin stabilitesini test etmek için, genç gerbilden aynı koklea parçası üç ay ve 29 1/2 ay sonra görüntülendi.Azalmış sinyal-gürültü oranına rağmen, fonksiyonel sinapslar farklı ve ölçülebilirdi. Bir kesim başarısız olsa bile, daha sonra koklear uzunluğun tamamını en doğru şekilde tahmin etmek için kalan doku parçasını monte edin. Bu protokolden elde edilen veriler, elektrofizyolojik veya psikofiziksel işitme testlerinden önce ve daha sonra bireysel olarak ilişkilendirilirse özellikle değerlidir.

immunolabeling-counting-ribbon-synapses-young-adult-aged-gerbil

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz, kemirgenler ve insan olmayan primatlardan farklı yaşlarda beyin dilimleri nöron gibi DII floresan boyalar, tanıtmak için, gen tabancasının kullanımını göstermektedir. Bu özel durumda, yetişkin farelerin (3-6 ay) ve yetişkin cynomologus maymunlar (9-15 yaşında) kullanın. Dr Lichtman laboratuvar tarafından açıklanan bu teknik,...

Kemirgen Nöronlar ve Sigara insan Primate Beyin Slices DiOLISTIC Etiketleme

Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.

Sinapslar miktarının: Synapse Numarası ölçmek için bir İmmünositokimya tabanlı Testi

Memeli koklea iç saç hücresi şerit sinaps işitsel sinir lifi dendritler Tüm hücre yama klemp kayıtları.

Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme

Bu videoda, fare kokleasının belirli bölgelerindeki şerit sinapslarını değerlendirmek için bir yöntem gösterilmektedir. Her koklear dönüşte farklı frekans bölgelerindeki fonksiyonel sinapsları tanımlamak için immün boyama ve konfokal görüntüleme tekniklerini kullanır.

Fare Kokleasının Belirli Frekans Bölgelerinde Şerit Sinapslarının Değerlendirilmesi

Proteinlerin lokalizasyonu ve dağıtım onların hücresel fonksiyonları anlamak için önemli bilgiler sağlar. Elektron mikroskobu üstün çözünürlük uzaysal (EM), belirli bir antijen aşağıdaki immünohistokimya hücre içi lokalizasyonu belirlemek için kullanılabilir. Sürdürmek antijenite EM araştırmalarda özellikle zor olmuştur süre yapısal bütünlüğünü koruyarak merkezi sinir sistemi (MSS), dokular için. Burada, çalışma MSS yapılar ve antijenleri korumak ve sıçan hipokampal CA1 piramidal nöronlarda...

Hipokampal Dilim Kültürleri Synaptic Proteinler Post-gömme immunogold Etiketleme

Bu video makale, aynı doku kesitinde yetişkin hipokampal nörogenezin tüm aşamalarını tespit etmek ve ölçmek için kapsamlı bir protokolü göstermektedir. Farklı konakçı türlerden uygun antikorlar mevcut olmadığında ortaya çıkan dolaylı çoklu immünofloresan sınırlamalarının üstesinden gelmek için bir yöntem geliştirdik.

Aynı Sunucu Türlerin Antikorlar ile İmmünohistokimya ve Çoklu Etiketleme Yetişkin hipokampal nöron Eğitim için

Biz üç bozulmamış koklear döner (apeks, orta ve üs) olarak Corti yetişkin organı izole etmek için bir yöntem mevcut. Biz de floresan levhası 'antikorlar ile immün için bir prosedür ortaya koymaktadır. Birlikte bu teknikler kokleadaki bulunan saç hücreleri, destek hücreler ve diğer hücre türleri çalışma sağlar.

Tüm Dağı Diseksiyon ve Yetişkin Fare Kohlea immünofloresan

Koku duyu nöronları, uygun sinirsel devreleri oluşturmak için çok çeşitli akson sıralama moleküllerini ifade eder. Bu protokol, olfaktör duyu nöronlarının akson ucunda akson sıralama moleküllerinin kombinatoryal ifadelerini görselleştirmek için bir immünohistokimyasal boyama yöntemi tarif eder.

Koku Meşfatının Olfaktör Duyusal Akson Moleküler Kimlik Kodlarının Görselleştirilmesi İçin Dörtlü İmmün Sulanması

Bu yazıda normal farelerde morfolojik özellikleri ve kurdele sinüslerinin fonksiyonel durumunu değerlendirmek için deneysel bir protokol açıklanmaktadır. Bu model aynı zamanda gürültüye bağlı ve yaşa bağlı Cochlear synaptopathy-kısıtlanmış modeller için de uygundur. Önceki fare çalışmalarından gelen göreli sonuçlar da tartışılmaktadır.

Fare koklea belirli frekans bölgelerinde şerit synapses morfolojik ve fonksiyonel değerlendirilmesi

Bu makalede, yetişkin fare kokleae immünohistokimya için 10 mm yuvarlak kapak fişleri koklear epitel parçaları yapıştırmak için bir hücre ve doku yapıştırıcı kullanımı ve kireçlenme gerektiren değiştirilmiş bir koklear yüzey hazırlama yöntemi sunar.

Yetişkin Farede Koklear Yüzey Hazırlama

Tüm kokleayı görüntülemek ve dijitalleştirmek için bir ışık tabakası mikroskobu geliştirilmiştir.

Yaşlanan Kokleanın Işık Tabakası Floresan Mikroskobu ile Görüntülenmesi

Öğrenin genç ve yaşlı gerbil koklealarında immünoetiketleme ve şerit sinaps sayımı yöntemini. Bu protokol, yaşlanmaya bağlı işitme kaybı araştırmalarında sinaptik bütünlüğü değerlendirmek için hızlı ve nicel veri sağlar.

Genç Yetişkin ve Yaşlı Gerbil Cochleae'de İmmünoetiketleme ve Şerit Sinapslarının Sayılması

Daha fazla video keşfet