Name: Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Öğrenin fare torasik aortasında endotele bağlı vazogevşemeyi tensometrik küçük hacimli oda miyografisi ile ölçme yöntemini. Bu güvenilir teknik, damar biyolojisi ve endotelyal fonksiyon araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri (R15HL145646) ve Midwestern Üniversitesi Lisansüstü Çalışmalar Koleji'nin finansmanıyla desteklenmiştir.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Lerman, A., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function%3A+Cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function: Cardiac events.</a> Circulation. 111 (3), 363-368 (2005).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> International Journal of Biological Sciences. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Galley, H. F., Webster, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Physiology of the endothelium.</a> British Journal of Anaesthesia. 93 (1), 105-113 (2004).</li>
<li>Orita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+phosphate%2C+bicarbonate%2C+and+Hepes+buffered+storage+solutions+on+hypothermic+injury+to+immature+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of phosphate, bicarbonate, and Hepes buffered storage solutions on hypothermic injury to immature myocytes.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 8 (6), 851-859 (1994).</li>
<li>Liu, Y. H., Bian, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-dependent+effect+of+hydrogen+sulfide+on+vascular+contractility+in+rat+aortic+rings%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate-dependent effect of hydrogen sulfide on vascular contractility in rat aortic rings.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (4), 866-872 (2010).</li>
<li>Griffiths, K., Madhani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+wire+myography+to+investigate+vascular+tone+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%3A+Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of wire myography to investigate vascular tone and function.</a> Methods in Molecular Biology: Atherosclerosis. 2419, 361-367 (2022).</li>
<li>Pfeiffer, S., Leopold, E., Schmidt, K., Brunner, F., Mayer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+by+NG-nitro-L-arginine+methyl+ester+%28L-NAME%29%3A+Requirement+for+bioactivation+to+the+free+acid%2C+NG-nitro-L-arginine%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis by NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME): Requirement for bioactivation to the free acid, NG-nitro-L-arginine.</a> British Journal of Pharmacology. 118 (6), 1433-1440 (1996).</li>
<li>Bacon, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+dysfunction+in+systemic+vasculitis%3A+New+developments+and+therapeutic+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell dysfunction in systemic vasculitis: New developments and therapeutic prospects.</a> Current Opinion in Rheumatology. 17 (1), 49-55 (2005).</li>
<li>Gallo, G., Volpe, M., Savoia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+in+hypertension%3A+Current+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction in hypertension: Current concepts and clinical implications.</a> Frontiers in Medicine. 8, 798958(2021).</li>
<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Vasküler biyoloji alanı, araştırmacıların kan damarı duvarının fonksiyonel ve yapısal bütünlüğünü değerlendirmelerine yardımcı olan araçlara büyük ölçüde dayanmaktadır. Ayrıca, üç kan damarı katmanı arasındaki doğrudan ve dolaylı etkileşimlere özel dikkat gösterilmesini gerektirir: intima, medya ve adventitia. Bu üç katman arasında intima, endotel hücrelerinin tek katmanından oluşur ve vasküler sağlığı ve hemostazı düzenlemede çok önemli bir işleve sahiptir.
Endotel tabakasına verilen herhangi...

Son birkaç on yıldır, küçük oda miyografi sistemi, ex vivo, gerçek zamanlı bir ortamda çeşitli farmakolojik ajanlara ve nörotransmitterlere yanıt olarak farklı kan damarı duvarlarının reaktivitesini ölçmek için kullanılmıştır. Vasküler reaktivite, sağlıklı bir fonksiyonel kan damarının önemli bir bileşenidir ve periferik ve serebral vaskülatür 1'de kan akışının ve perfüzyonun düzenlenmesi için kritiköneme sahiptir. Kan damarı duvarı içinde, endotel ve düz kas katmanları arasındaki etkileşim, kan damarı duvarını çevreleyen bağ dokusu tabakasındaki yapısal değişikliklerden (adventitia) sürekli olarak etkilenen vasküler tonusun önemli bir belirleyicisidir.
Endotel tabakası, nitrik oksit (NO), prostasiklin (PGI2) ve endotel kaynaklı hiperpolarize edici faktör (EDHF) dahil olmak üzere birkaç vazodilatatör faktörü serbest bırakarak veya endotelin-1 (ET-1) ve tromboksan (TXA2) 2,3,4 gibi vazokonstrüktif ajanlar üreterek vazohareketi kontrol eder. Bu faktörler arasında, NO'nun kapsamlı bir şekilde çalışıldığı ve inflamasyon, göç, sağkalım ve proliferasyon gibi diğer kritik hücresel fonksiyonlardaki önemli düzenleyici rolleri bilimsel literatürde yüksek oranda belirtilmiştir 2,5.
Vasküler biyoloji alanında, oda miyografisi, vasküler fizyologlara ve farmakologlara, sıkı bir şekilde kontrol edilen yarı fizyolojik sistemde endotel fonksiyonunu ölçmek için değerli ve güvenilir bir araç sağlamıştır1. Şu anda, bilim adamları için iki farklı miyograf sistemi vardır: tel (veya iğne) tensometrik (izometrik) miyografi ve basınç miyografisi. Bir tel miyografi sisteminde, kan damarı iki tel veya pim arasında gerilir, bu da kan damarının duvarındaki kuvvet veya gerginlik gelişiminin izometrik ölçümüne izin verirken, basınç miyografisi, kan basıncındaki değişikliklerin vasküler ton ve vazohareketteki değişiklikler için ana uyaran olarak kabul edildiği küçük dirençli arterlerde vasküler reaktivite ölçümleri için tercih edilen bir platformdur. Mezenterik ve serebral arterler gibi küçük dirençli arterler için, basınç miyografisinin insan vücudundaki fizyolojik koşullara daha yakın bir durum yarattığı konusunda genel bir anlaşma vardır. Küçük odacıklı miyograf, aort gibi çok küçük çaplara (200-500 μm) sahip damarlar için kullanılabilir.
Tel miyograf, izometrik koşullar altında kan damarı gerginliğini kaydetmek için güçlü bir sistem olsa da, basınçlı miyograf, izobarik koşullardaki değişikliklere yanıt olarak damar çapındaki değişiklikleri ölçmek için daha uygun bir sistemdir. Basınç veya akıştaki değişikliklere yanıt olarak damardaki çap değişiklikleri, küçük bir kaslı arterde (arteriol) aort gibi büyük elastik arterlere kıyasla çok daha büyüktür. Bu nedenlerden dolayı, basınçlı miyograf, önemli vazoreaktivite1'e sahip küçük kan damarları için daha iyi bir araç olarak kabul edilir. Çok odacıklı küçük hacimli odacıklı tensometrik miyografinin diğer pratik güçlerinden biri, değişkenliği azaltmak ve sağlam ve kesin veriler üretmek için aynı arterin ve aynı hayvanın birden fazla (dörde kadar) segmentini inceleyerek farklı mekanizmaların vasküler reaktiviteye katkısını ayırt edebilmesidir. Teknik olarak kurulumu ve bakımı da nispeten kolaydır. Hemen hemen her büyüklükteki damarlar bir tel miyograf ile incelenebilir. Vasküler fonksiyonun değerlendirilmesi için daha uygun maliyetli bir çözümdür ve disseke edilen damarın uzunluğunun basınçlı miyograf protokolü için çok kısa olduğu deneylerde basınç miyografisine iyi bir alternatiftir.
Bu raporda, DMT-620 çok odacıklı miyograf sistemi (DMT-USA) kullanılarak küçük hacimli kamaralı tensometrik miyografi tekniğindeki montaj pimleri kullanılarak izole fare torasik aort halkasındaki endotel fonksiyonunun değerlendirilmesi için ayrıntılı bir protokol sunulmaktadır. Bu protokol, ortalama ağırlığı 25-35 g arasında olan 6 aylık bir erkek C57BL6 fare kullanır. Neyse ki, bu protokol, bu protokolün kullanılabileceği çok çeşitli damar tipleri ve çapları göz önüne alındığında, çeşitli hayvan türlerine ve ağırlıklarına uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Asetilkolin</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Karbojen gazı</td><td>Matheson</td><td>H103847</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makası</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 Çok odacıklı miyografi sistemi</td><td>DMT</td><td>DMT 620</td><td>Çok odacıklı miyograf sistemi</td></tr><tr><td>Dumont forseps</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SigmaAldrich</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>SigmaAldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SigmaAldrich</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4< / sub</td><td>>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>LabChart</td><td>ADI cihazları</td><td></td><td>Veri toplama yazılımı</td></tr><tr><td>Işık kaynağı</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Adı</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td>stereo zoom mikroskop</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Organ banyosu sistemi</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrin</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>Pompa</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>Yazılım</td><td>ADI cihazları</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kiti Elektron</td><td>Mikroskobu Hizmetleri</td><td>24236-10</td><td>silikon elastomer kiti</td></tr><tr><td>Tank Regülatörü</td><td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu sistemi</td><td>Fischer Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr></tbody></table>

fare torasik aortunda endotele bağlı vazogevşemenin tensometrik küçük hacimli oda miyografisi ile Ölçülmesi

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Küçük hacimli kamara tensometrik miyografi, laboratuvar hayvanlarında ve insan dokusundan izole edilen küçük arterlerde küçük ve büyük kan damarlarının vasküler kontraktilitesini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Bu teknik, araştırmacıların izole kan damarlarını sıkı bir şekilde kontrol edilen ve standartlaştırılmış (fizyolojik) bir ortamda, çeşitli çevresel faktörlere uyum sağlama seçeneğiyle korumalarını sağlarken, izole edilmiş damarlara vazokonstriksiyon veya vazodilatasyona neden olabilecek farklı farmakolojik ajanlarla meydan okur. Miyograf odası ayrıca, düz kas ve endotel katmanlarının işlevini ayrı ayrı veya aynı anda etkileyebilecek çeşitli hormonlara, inhibitörlere ve agonistlere yanıt olarak vasküler reaktiviteyi ölçmek için bir platform sağlar. Kan damarı duvarı üç farklı tabakadan oluşan karmaşık bir yapıdır: intima (endotel tabakası), media (düz kas ve elastin lifleri) ve adventiti (kollajen ve diğer bağ dokusu). Her katmanın işlevsel özelliklerini net bir şekilde anlamak için, üç katmanı aynı anda incelemek için kombinasyonel bir yaklaşıma izin verecek deneysel bir platforma ve sisteme erişebilmek çok önemlidir. Böyle bir yaklaşım, ex vivo bir ortamda in vivo ortamı taklit edecek yarı fizyolojik bir duruma erişim gerektirir. Küçük hacimli kamara tensometrik miyografi, çevresel ipuçlarının, deneysel değişkenlerin veya farmakolojik agonist ve antagonistlerin vasküler özellikler üzerindeki etkisini değerlendirmek için ideal bir ortam sağlamıştır. Uzun yıllar boyunca, bilim adamları farklı ajanlara yanıt olarak endotel fonksiyonunu ve düz kas kontraktilitesini ölçmek için tensometrik miyograf tekniğini kullandılar. Bu yazıda, izole fare aortunda endotel fonksiyonunu ölçmek için küçük hacimli odacıklı tensometrik miyograf sistemi kullanılmıştır. Bu rapor, torasik aort gibi büyük bir arterin küçük segmentlerinde endotelin fonksiyonel bütünlüğünü değerlendirmek için küçük hacimli kamara tensometrik miyografinin nasıl kullanılabileceğine odaklanmaktadır.

Burada açıklanan tensometrik küçük oda miyografi protokolü, küçük ve büyük arterlerde vasküler reaktiviteyi ölçmek için standart yöntemdir ve aynı deneysel küçük laboratuvar hayvanından dört kan damarı segmentine kadar vasküler reaktivitenin eşzamanlı ölçümlerine izin verir. Bu yazıda, sistemi özellikle izole fare aortundaki endotel fonksiyonunu ölçmek için kullanıyoruz (Şekil 1). Bu protokolde, izole aort segmentleri, iki küçük paslanmaz çelik pim (Şekil 3) ara...

Bu protokol, fare aort endotel fonksiyonunun deneysel ex vivo değerlendirmesinde çok odacıklı bir miyograf sistemi kullanılarak tensometrik miyograf tekniğinin kavramlarını ve teknik uygulamasını açıklamaktadır.

Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

İzometrik veya tensometrik miyografiyi, iyi kontrol edilen bir fizyolojik durumda küçük direncin veya büyük kanal kan damarlarının reaktivitesini ölçmek için altın standart protokol olarak gösteriyoruz. Ölçümler son derece tekrarlanabilir ve güvenilirdir. Bu teknik, araştırmacıların farklı kan damarı katmanlarını ayrı ayrı incelemelerine veya kan damarı duvarının farklı katmanları arasındaki etkileşimi aynı anda araştırmalarına izin vermede çok değerlidir.Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan araştırma laboratuvarı uzmanı Robert Folk olacak. Su banyosunu açıp 37 santigrat dereceye ayarlayarak başlayın. Su banyosuna uygun şekilde etiketlenmiş iki beheri yerleştirin, biri 600 mililitre HEPES-PSS çözeltisi ve diğeri 150 mililitre yüksek potasyum çözeltisi ile.300 mililitre HEPES-PSS çözeltisi içeren bir beheri en az 10 dakika boyunca karbojen gazı ile havalandırın. 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne 30 mililitre havalandırılmış HEPES-PSS çözeltisi ekleyin, uygun şekilde etiketleyin ve buzun üzerine yerleştirin. Kalan havalandırılmış HEPES-PSS solüsyonunu aort diseksiyonu işlemi sırasında kullanılmak üzere buz üzerinde tutun.Dört odacıklı miyograf ünitesini her miyograf odasına 5 mililitre HEPES-PSS çözeltisinde açın ve ısıyı 37 santigrat dereceye ayarlayın. Her odadaki çözeltinin 30 dakika boyunca havalandırılmasına izin verin ve odaların istenen 37 santigrat dereceye ulaştığından emin olmak için kontrol edin. Miyograf veri toplama donanımını ve bilgisayarını açın.Ötanize edilmiş farelerden eksize edilen torasik kafesi, buz gibi soğuk havalandırılmış HEPES-PSS tamponu ile doldurulmuş şeffaf silikon elastomer kaplı Petri kabına aktarın ve her iki tarafa da sabitleyin. Mikroskop altında, kalbi ve bağlı aortu göğüs kafesinden yavaşça kesin ve çıkarın ve temiz bir silikon elastomer kaplı kaba aktarın, ardından yağ bağ dokusunu ve pıhtılaşmış kanı aorttan yavaşça çıkarın. Keskin küçük makaslar kullanarak, tüm aortu ark bölgesinden başlayarak inen aortun dibine kadar diseke edin ve izole edin.Disseke edilmiş aortu her biri 2 milimetrelik dört segmente bölün. Çanak içindeki mini cetveli referans olarak kullanın. Zaten 5 mililitre ısıtılmış ve havalandırılmış HEPES-PSS tamponu içeren odalarda, forseps kullanarak 2 milimetrelik aort segmentlerinin her birini iki montaj pimine dikkatlice kaydırın.Odayı miyograf ünitesine geri yerleştirirken, mikrometreyi saat yönünün tersine döndürerek pimleri yavaşça birbirinden ayırın, böylece aort segmenti pimlerden kaymaz. Her miyograf odasını üniteye geri döndürün ve odaları 20 dakika boyunca 37 santigrat derecede havalandırmaya başlayın. Odaları boşaltın ve her odaya 5 mililitre taze, ılık, havalandırılmış HEPES-PSS çözeltisi ekleyin.Gerekirse, 6 milinewtonluk optimum gerilimi okumak için kuvvet ölçümlerini yeniden ayarlayın. Dokuyu 15 ila 20 dakika daha dinlendirin. Veri toplama yazılımını açın.Takip numaralarını 50'den 1'e, 500'den 1'e değiştirin ve Başlat'a basın. Yeni bir denemeye başlamadan önce, veri toplama yazılımına uygun etiketi eklediğinizden emin olun. Her odaya 5 mililitre yüksek potasyum çözeltisi eklemeden önce odaları bir kez daha boşaltın.Yüksek potasyum çözeltisine kontraktil tepki kuvvet üretimi için bir platoya ulaşır ulaşmaz odaları tekrar boşaltın. Dokuyu HEPES-PSS çözeltisi ile üç kez yıkayın. Her odaya 5 mililitre yüksek potasyum çözeltisi ekleyin.Yüksek potasyum çözeltisine kontraktil yanıt kuvvet üretimi için bir platoya ulaşır ulaşmaz odaları boşaltın ve dokuyu HEPES-PSS ile üç kez yıkayın, ardından dokuyu 15 ila 20 dakika dinlendirin. Aort segmentlerini vazokonstriktör ajan PE ile maksimuma yakın bir dozda önceden büzüştürün. PE kaynaklı kasılma eğrisinin gerilim gelişimi için bir platoya ulaşmasına izin verin.Metin makalesinde açıklandığı gibi miyograf odasında 50 pikomolar ila 10 mikromolar arasında son asetilkolin konsantrasyonlarını oluşturmak için 3 dakikalık aralıklarla 5 mikrolitre artan dozda asetilkolin çalışma stok solüsyonlarında PE'ye bir gerilim gelişim platosu ekleyin. Doz yanıtı deneyini tamamladıktan sonra, odaları boşaltın, aort segmentlerini ılık ve havalandırılmış HEPES-PSS çözeltisi ile üç kez yıkayın ve dokuları 30 dakika dinlendirin. Aort segmentlerini 30 dakika dinlendirdikten sonra, odaları boşaltın ve her odaya taze, ılık yüksek potasyumlu çözelti ekleyin, daha sonra odaları boşaltın ve yüksek potasyumlu çözeltiye kasılma tepkisi daha önce gösterildiği gibi bir F platosuna ulaştığında dokuyu HEPES-PSS çözeltisi ile yıkayın.Nitrik oksit üretiminin gözlenen asetilkolin kaynaklı vazogevşemeye katkısını değerlendirmek için hazırlanan 100 milimolar çalışma stoğu çözeltisinin 10 mikrolitresini ekleyerek aort segmentlerini L-NAME ile önceden inkübe edin. L adını çıkarmadan, aort kasılmasını indüklemek için odaya alt maksimum PE dozu ekleyin. PE kaynaklı kasılma eğrisi gerilim gelişimi için bir platoya ulaşana kadar bekleyin, ardından 500 nanomolar'lık son bir konsantrasyon elde etmek için miyograf odasına asetilkolin ekleyin.Oluşan plato stabil olana kadar kuvvet gelişimindeki olası değişiklikleri kaydetmek için birkaç dakika bekleyin. Odaları boşaltın ve dokuyu üç kez ılık havalandırılmış HEPES-PSS çözeltisi ile yıkayın. Miyograf odasını mikroskop altına yerleştirin ve aortun lümeninden küçük bir teli yavaşça geçirin.Teli kısa bir süre için lümenden yavaşça hareket ettirin. Aortu 2 milimetrelik aort halkalarına kesin ve bu halkaları miyograf odasına monte edin. Optimum gerilimi 6 milinewtona ayarlayın ve dokunun havalandırılmış sıcak HEPES-PSS tamponunda 30 dakika dinlenmesine izin verin, ardından odaları boşaltın ve her odaya 5 mililitre taze sıcak havalandırılmış HEPES-PSS çözeltisi ekleyin.Tüm miyograf odaları için kuvveti sıfırlayın ve kaydedilen kuvvet fare aortu için istenen optimum gerilime ulaşana kadar pimler arasındaki mesafeyi artırmak için mikrometreyi saat yönünün tersine yavaşça döndürün. Dokuyu optimum gerilimde 15 ila 20 dakika daha bastırın, ardından her odaya 5 mililitre yüksek potasyumlu çözelti eklemeden önce odaları bir kez daha boşaltın. Odaları tekrar boşaltın ve yüksek potasyum iyon çözeltisine kasılma tepkisi bir platoya ulaştığında dokuyu HEPES-PSS çözeltisi ile üç kez yıkayın.Dokuyu 15 ila 20 dakika dinlendirin, ardından aort segmentlerini vazokonstriktör ajan PE ile önceden kasılın. PE kaynaklı kuvvet bir platoya ulaştığında, 500 nanomolar'lık bir nihai konsantrasyon elde etmek için miyograf odasına maksimum asetilkolin konsantrasyonunu ekleyin. Deneyi sonlandırmadan önce PE kaynaklı kuvvet gelişimi için kayıtlı platonun değişmediğinden emin olmak için 3 dakika bekleyin.İzole edilen her bir kabın bütünlüğü ve yaşayabilirliği, kasılma kuvveti üretimi kaydedilerek değerlendirildi. Kaydedilen kuvvetin zirvesi daha sonra agonistlere yanıt olarak aynı segment için kuvvet üretimini normalleştirmek için kullanıldı. Endotel aracılı vazogevşeme ölçümlerinde düz kas aracılı kasılma ve kuvvet oluşumu saptandı.PE kaynaklı kontraksiyon bir platoya ulaştığında, artan asetilkolin dozları, izole segmentte maksimum vazogevşemeye ulaştı. Nitrik oksit inhibitörü L-NAME, önceden kontrakte edilmiş aorttaki asetilkolin kaynaklı vazoresyonu tamamen bloke etti, asetilkolinin nitrik oksit üretimini artırarak aort vazoredüklesyonunu indüklediğini gösterdi. Ayrıca, endotel tabakasının aort segmentlerinden çıkarılması, endotelin kan damarı gevşemesindeki rolünü vurgulayan asetilkolin kaynaklı vazogevşemeyi de bloke etti.Kan damarını tutarken, temizlerken ve parçalara ayırırken nazik olduğunuzdan emin olun. Farmakolojik agonistleri ve inhibitörleri, miyograf odalarına monte edilen kan damarı halkalarını rahatsız etmemek için dikkatle eklemek çok önemlidir. Bilgiler, belirli bir kan damarının katmanlarının işlev bozukluğunu ele almak için potansiyel terapötik yaklaşımları keşfetmek için deneylerin tasarlanmasına yardımcı olabilir.

measurement-endothelium-dependent-vasorelaxation-mouse-thoracic-aorta

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Izole mezenterik arterler kuvvet ölçümleri için otomatik bir kasılmaların kâğıda çizilmesi yöntemi açıklanmıştır. Fenilefrin ve ekstrasellüler kalsiyum yanıtlarını belirlemek için 510A Mulvany Halpern Otomatik Çift Tel Myograph kullanır. 300 mikron, bağımsız yöntemi 60 çaplarının küçük damarlarda agonistleri izometrik yanıtları tutarlı tespitine imkan sağlamaktadır.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi olarak, bir geminin bir sağlam küçük bir bölümü iki küçük kanüller üzerine monte edilir ve uygun bir lümen basınca basınçlandırılmıştır. Burada, fare 3 vasorelaxation tepki ölçmek için yöntem...

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Endotel disfonksiyonu sayısız hastalık durumları ile ilişkili olan ve insanlarda olumsuz kardiyovasküler olaylar için bir öngörü olduğunu. Akış-aracılı vazodilatasyon (FMD) endotel fonksiyonunu değerlendirmek için bir non-invaziv ultrason yöntemidir. Metodolojik seçimler ve operatör deneyimi sonuçlarını etkileyebilir. Insan çalışmalarında FMD için sistematik bir yaklaşım burada ele alınmıştır.

Klinik Araştırmalarda Brakial Arter Ultrason değerlendirilmesi Endotel Bağımlı Akış Dolayımlı Vazodilatasyon

Farelerde in vivo olarak basınç-çap ilişkisinden aort sertliğini ölçmek için bir teknik tarif ediyoruz. Aort çapı ultrason ile kaydedilir ve aort basıncı katı hal basınç kateteri ile invaziv olarak ölçülür. Kan basıncı kademeli olarak değiştirilir ve elde edilen çap ölçülür.

Artan Aort Katılığa Ölçme İn Vivo Ultrason Kullanımı Farelerde

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Hipoksi yoğun eğitim sprint yeteneği tekrarlanan vasküler uyarlamalar potansiyel olarak bazı hastalarda yararlı ikna etmek ve sporcuların geliştirmek için kanıtlanmış bir protokoldür. Burada, protokol ve ex vivo vasküler işlevi değerlendirme sistemini kullanarak bu vasküler uyarlamalar tanımlamak fizibilite eğitim fare kullanarak sınayın.

Supramaximal yoğunluğu hipoksik egzersiz ve farelerde vasküler işlevi değerlendirme

Protokol, farelerden izole edilen mezenterik arterlerin transmural izometrik gerginliğini değerlendirmek için tel miyografi kullanımını açıklar ve endotel hücrelerden ve perivasküler adipoz dokulardan salınan faktörlerin modülasyonunun özel olarak değerlendirilmesidir.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Öğrenin fare torasik aortasında endotele bağlı vazogevşemeyi tensometrik küçük hacimli oda miyografisi ile ölçme yöntemini. Bu güvenilir teknik, damar biyolojisi ve endotelyal fonksiyon araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet