Name: İskelet Kasında Kas İçi Yağ Oluşumunu ve Hücresel Kökenini İnceleme Kılavuzu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Öğrenin, iskelet kasında kas içi yağ oluşumunu ve hücresel kökenini gliserol yaralanması ve PFA fiksasyonu kullanarak görüntüleyin ve nicelendirin. Bu yöntem, sarkopeni ve kas distrofilerinde yağ birikimini incelemek için sağlam bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Kopinke laboratuvarı üyelerine, veri toplama ve makalenin eleştirel okuması konusunda yardımcı oldukları için teşekkür ederiz. Ayrıca, Florida Üniversitesi'ndeki Miyoloji Enstitüsü üyelerine, el yazması hakkındaki değerli katkıları için teşekkür ederiz. Çalışma, NIH hibesi 1R01AR079449 tarafından desteklenmiştir. Şekil 2, Biorender ile oluşturulmuştur.

<ol><li>Milad, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+plasma+lipid+levels+exacerbate+muscle+pathology+in+the+mdx+mouse+model+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Increased plasma lipid levels exacerbate muscle pathology in the mdx mouse model of Duchenne muscular dystrophy.</a> Skeletal Muscle. 7 (1), 19(2017).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+regional+body+fat+distribution%2C+and+the+metabolic+syndrome+in+older+men+and+women%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Obesity, regional body fat distribution, and the metabolic syndrome in older men and women.</a> Archives of Internal Medicine. 165 (7), 777-783 (2005).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+regional+adipose+tissue+distribution+and+both+type+2+diabetes+and+impaired+glucose+tolerance+in+elderly+men+and+women%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Association between regional adipose tissue distribution and both type 2 diabetes and impaired glucose tolerance in elderly men and women.</a> Diabetes Care. 26 (2), 372-379 (2003).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+loss+of+skeletal+muscle+strength%2C+mass%2C+and+quality+in+older+adults%3A+the+health%2C+aging+and+body+composition+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journals+of+Gerontology%2C+Series+A%3A+Biological+Sciences+and+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The loss of skeletal muscle strength, mass, and quality in older adults: the health, aging and body composition study.</a> The Journals of Gerontology, Series A: Biological Sciences and Medical Sciences. 61 (10), 1059-1064 (2006).</li>
<li>Goodpaster, B. H., Thaete, F. L., Kelley, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thigh+adipose+tissue+distribution+is+associated+with+insulin+resistance+in+obesity+and+in+type+2+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Thigh adipose tissue distribution is associated with insulin resistance in obesity and in type 2 diabetes mellitus.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 71 (4), 885-892 (2000).</li>
<li>Goodpaster, B. H., Theriault, R., Watkins, S. C., Kelley, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+lipid+content+is+increased+in+obesity+and+decreased+by+weight+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Intramuscular lipid content is increased in obesity and decreased by weight loss.</a> Metabolism. 49 (4), 467-472 (2000).</li>
<li>Burakiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fat+replacement+of+muscle+by+quantitative+MRI+in+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Quantifying fat replacement of muscle by quantitative MRI in muscular dystrophy.</a> Journal of Neurology. 264 (10), 2053-2067 (2017).</li>
<li>Murphy, W. A., Totty, W. G., Carroll, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+of+normal+and+pathologic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Roentgenology%22%5BJournal%5D)">MRI of normal and pathologic skeletal muscle.</a> American Journal of Roentgenology. 146 (3), 565-574 (1986).</li>
<li>Willcocks, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+longitudinal+study+of+magnetic+resonance+biomarkers+in+a+large+duchenne+muscular+dystrophy+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective longitudinal study of magnetic resonance biomarkers in a large duchenne muscular dystrophy cohort.</a> Annals of Neurology. 79 (4), 535-547 (2016).</li>
<li>Wokke, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+MRI+and+strength+measurements+in+the+assessment+of+muscle+quality+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscular+Disorders%22%5BJournal%5D)">Quantitative MRI and strength measurements in the assessment of muscle quality in Duchenne muscular dystrophy.</a> Neuromuscular Disorders. 24 (5), 409-416 (2014).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skeletal Muscle. 11 (1), 16(2021).</li>
<li>El Agha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic disease.</a> Cell Stem Cell. 21 (2), 166-177 (2017).</li>
<li>Joe, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Liu, W., Liu, Y., Lai, X., Kuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+adipose+is+derived+from+a+non-Pax3+lineage+and+required+for+efficient+regeneration+of+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Intramuscular adipose is derived from a non-Pax3 lineage and required for efficient regeneration of skeletal muscles.</a> Developmental Biology. 361 (1), 27-38 (2012).</li>
<li>Scott, R. W., Arostegui, M., Schweitzer, R., Rossi, F. M. V., Underhill, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hic1+defines+quiescent+mesenchymal+progenitor+subpopulations+with+distinct+functions+and+fates+in+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Hic1 defines quiescent mesenchymal progenitor subpopulations with distinct functions and fates in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Stem Cell. 25 (6), 797-813 (2019).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> Journal of Cell Science. 124, Pt 21 3654-3664 (2011).</li>
<li>Hogarth, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroadipogenic+progenitors+are+responsible+for+muscle+loss+in+limb+girdle+muscular+dystrophy+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Fibroadipogenic progenitors are responsible for muscle loss in limb girdle muscular dystrophy 2B.</a> Nature Communications. 10 (1), 2430(2019).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 143-152 (2010).</li>
<li>Stumm, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odd+skipped-related+1+%28Osr1%29+identifies+muscle-interstitial+fibro-adipogenic+progenitors+%28FAPs%29+activated+by+acute+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Odd skipped-related 1 (Osr1) identifies muscle-interstitial fibro-adipogenic progenitors (FAPs) activated by acute injury.</a> Stem Cell Research. 32, 8-16 (2018).</li>
<li>Kopinke, D., Roberson, E. C., Reiter, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+Hedgehog+signaling+restricts+injury-induced+adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ciliary Hedgehog signaling restricts injury-induced adipogenesis.</a> Cell. 170 (2), 340-351 (2017).</li>
<li>Huang, Y., Das, A. K., Yang, Q. Y., Zhu, M. J., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zfp423+promotes+adipogenic+differentiation+of+bovine+stromal+vascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Zfp423 promotes adipogenic differentiation of bovine stromal vascular cells.</a> PLoS One. 7 (10), 47496(2012).</li>
<li>Sun, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGFR%CE%B1+regulated+by+miR-34a+and+FoxO1+promotes+adipogenesis+in+porcine+intramuscular+preadipocytes+through+Erk+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">PDGFRα regulated by miR-34a and FoxO1 promotes adipogenesis in porcine intramuscular preadipocytes through Erk signaling pathway.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (11), 2424(2017).</li>
<li>Te, L. J. I., Doherty, C., Correa, J., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification%2C+isolation%2C+and+characterization+of+fibro-adipogenic+progenitors+%28FAPs%29+and+myogenic+progenitors+%28MPs%29+in+skeletal+muscle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Identification, isolation, and characterization of fibro-adipogenic progenitors (FAPs) and myogenic progenitors (MPs) in skeletal muscle in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (172), e61750(2021).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446 (2019).</li>
<li>Santini, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+PDGFRalpha%28%2B%29+progenitor+cells+contribute+to+fibrosis+versus+healing+in+a+context-+and+spatiotemporally+dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident PDGFRalpha(+) progenitor cells contribute to fibrosis versus healing in a context- and spatiotemporally dependent manner.</a> Cell Reports. 30 (2), 555-570 (2020).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+PDGFRalpha%2B+mesenchymal+progenitors+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of PDGFRalpha+ mesenchymal progenitors in human skeletal muscle.</a> Cell Death & Disease. 5, 1186(2014).</li>
<li>Wosczyna, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+are+required+for+regeneration+and+homeostatic+maintenance+of+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells are required for regeneration and homeostatic maintenance of skeletal muscle.</a> Cell Reports. 27 (7), 2029-2035 (2019).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+potential+of+Hic1-expressing+cardiac+stromal+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic potential of Hic1-expressing cardiac stromal progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Chung, M. I., Bujnis, M., Barkauskas, C. E., Kobayashi, Y., Hogan, B. L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche-mediated+BMP%2FSMAD+signaling+regulates+lung+alveolar+stem+cell+proliferation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Niche-mediated BMP/SMAD signaling regulates lung alveolar stem cell proliferation and differentiation.</a> Development. 145 (9), Cambridge, England. (2018).</li>
<li>Hilgendorf, K. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+fatty+acids+activate+ciliary+FFAR4+to+control+adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Omega-3 fatty acids activate ciliary FFAR4 to control adipogenesis.</a> Cell. 179 (6), 1289-1305 (2019).</li>
<li>Waisman, A., Norris, A. M., Elías Costa, M., Kopinke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+and+unbiased+segmentation+and+quantification+of+myofibers+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automatic and unbiased segmentation and quantification of myofibers in skeletal muscle.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11793(2021).</li>
<li>Kang, S. H., Fukaya, M., Yang, J. K., Rothstein, J. D., Bergles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2%2B+CNS+glial+progenitors+remain+committed+to+the+oligodendrocyte+lineage+in+postnatal+life+and+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NG2+ CNS glial progenitors remain committed to the oligodendrocyte lineage in postnatal life and following neurodegeneration.</a> Neuron. 68 (4), 668-681 (2010).</li>
<li>Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Developmental Biology. 1, 4(2001).</li>
<li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), 71084(2013).</li>
<li>Mahdy, M. A., Lei, H. Y., Wakamatsu, J., Hosaka, Y. Z., Nishimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+muscle+regeneration+following+cardiotoxin+and+glycerol+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Anatomy+%3D+Anatomischer+Anzeiger%3A+Official+Organ+of+the+Anatomische+Gesellscaft%22%5BJournal%5D)">Comparative study of muscle regeneration following cardiotoxin and glycerol injury.</a> Annals of Anatomy = Anatomischer Anzeiger: Official Organ of the Anatomische Gesellscaft. 202, 18-27 (2015).</li>
<li>Pisani, D. F., Bottema, C. D., Butori, C., Dani, C., Dechesne, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+skeletal+muscle+adiposity%3A+a+glycerol+treatment+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Mouse model of skeletal muscle adiposity: a glycerol treatment approach.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 396 (3), 767-773 (2010).</li>
<li>Kawai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glycerol+myopathy%3A+a+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Experimental glycerol myopathy: a histological study.</a> Acta Neuropathologica. 80 (2), 192-197 (1990).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+CT+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method.</a> Nature Protocols. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Bmp3b+expression+maintains+skeletal+muscle+integrity+and+decreases+in+age-related+sarcopenia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Bmp3b expression maintains skeletal muscle integrity and decreases in age-related sarcopenia.</a> The Journal of Clinical Investigation. 131 (1), 139617(2021).</li>
<li>Biferali, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prdm16-mediated+H3K9+methylation+controls+fibro-adipogenic+progenitors+identity+during+skeletal+muscle+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Prdm16-mediated H3K9 methylation controls fibro-adipogenic progenitors identity during skeletal muscle repair.</a> Science Advances. 7 (23), 9371(2021).</li>
<li>Biltz, N. K., Meyer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+quantification+of+fatty+infiltration+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">A novel method for the quantification of fatty infiltration in skeletal muscle.</a> Skeletal Muscle. 7 (1), (2017).</li>
<li>Vieites-Prado, A., Renier, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+3D+imaging+in+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and 3D imaging in developmental biology.</a> Development. 148 (18), Cambridge, England. (2021).</li>
<li>Gómez-Gaviro, M. V., Sanderson, D., Ripoll, J., Desco, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomedical+applications+of+tissue+clearing+and+three-dimensional+imaging+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Biomedical applications of tissue clearing and three-dimensional imaging in health and disease.</a> iScience. 23 (8), 101432(2020).</li>
<li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nature Reviews Neuroscience. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
</ol>

Yazarlar rakip çıkarlar olmadığını beyan ederler.

Bu protokol, kas içi yağın verimli bir şekilde görselleştirilmesine ve titizlikle ölçülmesine olanak tanıyan kapsamlı ve ayrıntılı bir protokolü özetlemektedir. Aynı kası, biri immünofloresan diğeri RT-qPCR analizi için kullanılan iki parçaya bölerek, bu protokol aynı zamanda çok yönlüdür. Ayrıca, belirli koşullar altında adipositlere dönüşümlerini incelemek için FAP'ların genetik soy takibi ile birleştirilebilir ve çoklu ek hücre tiplerini etiketlemek ve görüntülemek için oldukça uyarlanabilir.
Kas içi yağları görselleştirmek için en sık kullanılan yollar parafin kesitleri, ardından hematoksilin ve eozin boyama veya Oil Red O (ORO) gibi lipofilik boyalar için boyanmış dondurulmuş kesitlerdir. Bununla birlikte, parafin ile işlenmiş dokular en iyi histolojiyi korurken, aynı işlem lipofilik boyaların kullanımını önleyen tüm lipitleri de çıkarır. Lipofilik boyama yöntemleri hem PFA ile sabitlenmiş hem de sabitlenmemiş doku kesitlerinde işe yarayacak olsa da, lipit damlacıkları kapak kaymasına basınç uygulanarak kolayca yer değiştirir, böylece kas içi yağın uzamsal dağılımını bozar. Bunu atlatmak için, yakın tarihli bir çalışma, ORO + adipositleri bütüne monte bir yaklaşım kullanarak görselleştirmek için titiz bir protokol oluşturdu. Bunun için yazarlar, kas içi yağın tüm TA41 boyunca uzamsal dağılımını görselleştirmek için TA'yı hücreselleştirdiler. Bu teknik ne kadar güçlü olursa olsun, ek hücresel yapıları işaretlemek için diğer ko-lekelerin kullanılmasını da önler. Burada sunulan tüm montaj immünofloresan yaklaşımı, hücresel ortamın ince haritalanmasına izin veren çeşitli belirteçlerle adipositleri birlikte boyamak için kullanılabilir. Bununla birlikte, en büyük zorluklardan biri, antikorların doku penetrasyonudur. Ne kadar çok lif bir arada tutulursa, antikorların mevcut tüm antijenlere eşit şekilde nüfuz etmesi ve bağlanması o kadar zor olacaktır. Bu nedenle, bu yöntem küçük lif gruplarına bakarken en etkilidir. Aynı zamanda, kas içi yağın genel anatomik yeri, sadece küçük, soyulmuş lif demetlerine odaklanırken kaybedildiğinden bu da bir sınırlamadır. Bununla birlikte, yeni doku temizleme yöntemlerinin ve yeni görüntüleme teknolojisinin mevcut gelişimi ile birlikte, gelecekte daha fazla doku penetrasyonu ve görselleştirme mümkün olacaktır42,43,44.
Kas dokusunun önceden sabitlenmesi adiposit morfolojisini korurken, kas sağlığının önemli bir ölçümü olan miyoliflerin boyutunu değerlendirmek için de bir zorluk yaratır. Miyofiber boyutu, miyoliflerin kesit alanının ölçülmesiyle belirlenir. Kas dokusunun önceden fiksasyonunun, miyolifleri özetlemek için mevcut belirteçlerin çoğunun31'in başarısız olmasına neden olacağını daha önce bildirmiştik. Bu engelin üstesinden gelmek için, sabit kas bölümleri31'de bile miyofiber boyutunun ölçülmesine izin veren yeni bir görüntü segmentasyon boru hattı geliştirdik. Bu nedenle, bu protokolle birlikte, kas dokusunun önceden sabitlenmesinden kaynaklanan çoğu dezavantajın üstesinden gelen sağlam ve verimli bir doku işleme boru hattı kurduk.
Bu yaklaşımın bir diğer önemli avantajı çok yönlülüktür. TA'yı iki parçaya bölerek, bir kastan elde edilebilecek bilgi miktarı en üst düzeye çıkarılır. Bu sadece hayvan sayısını azaltmakla kalmaz, aynı zamanda gen ekspresyonu yoluyla histolojiyi doğrulayarak ekstra bir kontrol katmanı ekler ve bunun tersi de geçerlidir. Ek olarak, adipojenik genlerin ötesinde birçok farklı gen incelenebilir. İzole RNA, bütün bir kas RNAseq deneyi için de kullanılabilir. Son olarak, dondurulmuş kas parçası protein çalışması için de kullanılabilir. Bu protokolün bir sınırlaması, yaralanmanın TA'nın tüm uzunluğu boyunca tutarlı olmama olasılığıdır. Bu, iki kas parçasının içerdikleri kas içi yağ miktarında farklılaştığı bir senaryoya yol açabilir ve böyle bir numunenin herhangi bir aşağı akış analizinden dışlanmasını garanti edebilir. Bu nedenle, kas içi yağ miktarı hakkında önemli sonuçlar çıkarmak için sadece RT-qPCR'ye güvenilmemesi, bunun yerine histolojik nicelemelere destekleyici veriler olarak güvenilmesi önerilir.
Birlikte, bu protokol, yağlı fibrozla mücadele etmek için yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesinde ilk adım olan kas içi yağın görselleştirilmesine ve miktarının belirlenmesine izin verecek sağlam, verimli ve titiz bir doku işleme boru hattını özetlemektedir. Aynı zamanda, çok yönlüdür ve kas içindeki birçok farklı hücre tipine ve diğer dokulardaki adipositlere uyarlanabilir.

Sağlıklı kas dokusunun yağlı fibrozis ile infiltrasyonu, Duchenne Kas Distrofisi (DMD) ve diğer nöromüsküler hastalıkların yanı sıra sarkopeni, obezite ve diyabetin belirgin bir özelliğidir 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 . Bu koşullarda artan yağ infiltrasyonu, azalmış kas fonksiyonu ile güçlü bir şekilde ilişkili olmasına rağmen, kas içi yağ formlarının neden ve nasıl oluştuğuna dair bilgimiz hala sınırlıdır. FAP'lar, iskelet kası11,12 dahil olmak üzere çoğu yetişkin organda bulunan multipotent bir mezenkimal stromal hücre popülasyonudur. Bununla birlikte, yaşla birlikte ve kronik hastalıklarda, FAP'lar fibrotik skar dokusu üretir ve bireysel miyolifler arasında bulunan ve kas içi yağ 13,14,15,16,17,18,19,20 oluşturan adipositlere farklılaşır.
Kas içi yağ oluşumu ile mücadeleye başlamak için, FAP'ların adipositlere nasıl dönüştüğünün mekanizmalarının tanımlanması gerekir. PDGFRα, 13,16,17,18,20,21,22,23,24,25,26,27 numaralı birden fazla türün kasındaki FAP'ları tanımlamak için alandaki "altın standart" belirteçtir. Sonuç olarak, Pdgfrα promotorunun kontrolü altında birkaç murin tamoksifen ile indüklenebilir Cre hattı üretildi ve Cre-LoxP sistemi27,28,29 kullanılarak FAC'ların in vivo olarak genetik olarak manipüle edilmesine izin verildi. Örneğin, bu indüklenebilir Cre çizgisini genetik bir muhabirle birleştirerek, FAP'ların soy takibi yapılabilir, bu strateji kas ve beyaz yağ dokusundaki kader haritası FAP'larına başarıyla uyguladığımız bir strateji20,30. Soy çizgisi izlemenin yanı sıra, bu Cre çizgileri FAP'tan yağa dönüşümü incelemek için değerli araçlar sağlar.
FAP'ların kas içi yağa adipojenik dönüşüm mekanizmasını tanımlamadaki en büyük engellerden biri, farklı koşullar altında oluşan kas içi yağ miktarını titizlikle ve tekrar tekrar ölçme yeteneğidir. Anahtar, kas ve yağ dokusunun korunmasını dengelemek ve bunu adipositleri görselleştirmek için mevcut boyama yöntemleriyle eşleştirmektir. Örneğin, iskelet kası genellikle önceden fiksasyon yapılmadan dondurulur, miyolifleri korur ancak adiposit morfolojisini bozar (Şekil 1). Buna karşılık, fiksasyonun ardından parafin gömülmesi, adipositler de dahil olmak üzere en iyi doku histolojisini sergilerken, tüm lipitleri uzaklaştırır, böylece yaygın olarak kullanılan boya Yağı Kırmızı O gibi çoğu lipofilik boyayı kullanılamaz hale getirir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig1v2.jpg"> Şekil 1: Anlık dondurulmuş ve sabit kas dokularındaki kas içi yağın temsili görüntüleri . (A) Deney düzeneğine şematik genel bakış. Hem (B) dondurulmuş hem de (C) gliserol hasarından sonraki 21 günde sabit TA'larda adipositleri (sarı), miyolifleri (gri) ve çekirdekleri (camgöbeği) gösteren immünofloresan görüntüler. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig1v2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Burada açıklanan protokol miyofiber ve adiposit morfolojisini korur ve çoklu hücre tiplerinin görselleştirilmesine ve analizine izin verir. Bu yaklaşım, paraformaldehit (PFA) ile sabitlenmiş kas dokusundaki adipositlerin immünofloresan boyamasına dayanır ve bu da çoklu antikorlarla birlikte boyanmaya izin verir. Ayrıca, tam montajlı görüntüleme kullanılarak sağlam dokudaki kas içi yağın mekansal olarak görüntülenmesi için kolayca uyarlanabilir, böylece kas içindeki yağın hücresel mikro ortamı hakkında bilgi sağlar. Ek olarak, bu protokol, kas sağlığını değerlendirmek için önemli bir ölçüm olan sabit kas dokularındaki miyoliflerin kesit alanını belirlemek için yakın zamanda yayınlanan yaklaşımımızla birleştirilebilir31. Bu yaklaşımı, FAP'ların adipositlere farklılaşmasını kader haritalamak için genetik soy izleme ile birleştirmek de burada özetlenmiştir. Bu nedenle, burada açıklanan çok yönlü protokol, FAP'ların titiz ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirilmesini ve doku kesitlerinde ve bozulmamış dokularda kas içi yağa farklılaşmasını sağlar.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig2v2.jpg"> Şekil 2: Şematik protokole genel bakış. TA'nın üçte birinin çıkarıldığı, çırpıda dondurulduğu ve RT-qPCR aracılığıyla sonraki RNA izolasyonu ve transkripsiyon analizi için homojenize edildiği doku işlemeye şematik genel bakış. TA'nın diğer üçte ikisi PFA'ya sabitlenir ve dondurulmuş kesitler veya tam montajlı lifler üzerinde immün boyama için işlenir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig2v2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>% 16 PFA (12, 10 mL şişe paketi)</td> <td>Elektron Miskroskopi Bilimleri</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Mikrosantrifüj Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td>çıtçıt/boncuk çırpma için mikrosantrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>2-Metilbütan (4 L)</td><td>Fisher Chemical</td><td>O3551-4</td><td>izopentan</td></tr><tr><td>Mutlak Etanol (200 kanıt)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>BP2818100</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab parçası eşek anti-fare</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-007-003</td><td>fare üzerinde fare engelleme</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 eşek anti-tavuk ikincil antikoru</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>703-545-155</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 eşek anti-fare ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A21202</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 eşek anti-tavşan ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 eşek anti-keçi ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A11057</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 eşek anti-tavşan ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A11037</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Phalloidin antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A12380</td><td>1.5 mL metanol içinde çözülür (~ 66 & mikro; M çalışma çözümü)</td></tr><tr><td>BioLite 24 kuyulu Çok Amaçlı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>930186</td><td>PFA doku inkübasyonu için 24 oyuklu plaka</td></tr><tr><td>Biometra TOne</td><td>analitiği</td><td>8462070301</td><td>Termal döngüleyici</td></tr><tr><td>Tavuk anti-GFP antikoru</td><td>Aves Labs</td><td>GFP-1020</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform/izoamil alkol 24:1(h/h) moleküler biyoloji, DNAse, RNAse ve Proteaz içermez</td><td>ThermoFisher için Bilimsel</td><td>AC327155000</td><td></td></tr><tr><td>Mısır yağı</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>DAPI lekesi</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>150 & mikro; dH2O'da M çalışma çözümü</td></tr><tr><td>Körfez Serumu (100 mL)</td><td>Millipore Sigma</td><td>5058837</td> bloke <td>edici çözelti</td></tr><tr><td>için Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-20</td> keskin <td>uçlu cımbız</td></tr><tr><td>İnce Makas Düz 9 cm</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td>montaj ortamı</td></tr><tr><td>Gliserol, %99,5, moleküler biyoloji için (500 mL)</td><td>Acros Organics</td><td>327255000</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-PDGFR ve alfa; antikor</td><td>R& D</td><td>AF1062</td><td></td></tr><tr><td>Hibridizasyon Fırını</td><td>VWR</td><td>230301V</td><td>Tamoksifen inkübasyonu için</td></tr><tr><td>ImmEdge Hidrofobik Bariyer PAP Kalem</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-4000</td><td>hidrofobik kalem</td></tr><tr><td>Mikro-İnce IV iğneli İnsülin Şırıngası (28 G)</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Kayma Uçlu İnsülin Şırıngası, 1 mL</td><td>BD</td><td>329654</td><td>İğnesiz insülin şırıngası, oral için gavaging</td></tr><tr><td>iScript cDNA Sentez Kiti</td><td>Bio-Rad</td><td>1708890</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Patterson Veteriner</td><td>78938441</td><td></td></tr><tr><td>Leica DMi8 ters mikroskop</td><td>Geniş alan IF ve konfokal görüntüleme için kullanılan</td><td>Leica</td><td></td> mikroskop</tr><tr><td>Mikro Slaytlar</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td>pozitif yüklü mikroskop slaytları</td></tr><tr><td>fare anti-MYOD antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>MA1-41017</td><td></td></tr><tr><td>fare anti-PAX7 antikoru (süpernatant)</td><td>DSHB</td><td>AB 428528</td><td></td></tr><tr><td>MX35 Premier+ Mikrotom bıçakları</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3052835</td><td>mikrotom bıçakları</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 Spektrofotometre</td><td>RNA verimi için ThermoFisher</td><td>Scientific ND2000</td><td>spektrofotometre</td></tr><tr><td>Play-Doh</td><td>Hasbro</td><td></td><td>modelleme bileşiği</td></tr><tr><td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A25742</td><td>yeşil boya PCR ana karışımı</td></tr><tr><td>Puralube Veteriner Merhemi</td><td>Puralube</td><td>17033-211-38</td><td>veteriner oftalmik merhem</td></tr><tr><td>QuantStudi 6 Flex Gerçek Zamanlı 384 kuyulu PCR Sistemi</td><td>qPCR makinesi</td><td>4485694</td> Uygulamalı <td>Biyosistemler</td></tr><tr><td>Tavşan anti-perilipin antikoru</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>9349S</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı Rotorlu Çalkalayıcı</td><td>Hoefer Scientific</td><td>PR70-115V</td><td>IF boyama için çalkalayıcı</td></tr><tr><td>Richard-Allan Scientific Slip-Rite Kapak Camı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>152460</td><td>lameller</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>QIAGEN</td><td>74106</td><td>mini döndürme sütunları içerir</td></tr><tr><td>Güvenli Kilit Tüpleri 1.5 ml, doğal</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>Numune Tüpleri RB (2 mL)</td><td>QIAGEN</td><td>990381</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Alfa Aesar</td><td>14314</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Boncuklar, 2.8 mm</td><td>Precellys</td><td>KT03961-1-101. BK</td><td>küçük boncuklar</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Boncuklar, 5 mm</td><td>QIAGEN</td><td>69989</td><td>orta boy boncuklar</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Boncuklar, 7 mm</td><td>QIAGEN</td><td>69990</td><td>büyük boncuklar</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Tek Kullanımlık Neşterler</td><td>Miltex</td><td>327-4102</td><td>neşter</td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik besleme borusu, 20 G x 38 mm, düz</td><td>Instech Laboratories</td><td>FTSS-20S-3</td><td>gavaj iğnesi</td></tr><tr><td>Tamoksifen</td><td>Toronto Araştırma Kimyasalları</td><td>T006000</td><td></td></tr><tr><td>Doku Artı OCT Bileşik</td><td>Fisher HealthCare</td><td>4585</td><td>gömme ortamı</td></tr><tr><td>TissueLyser LT</td><td>QIAGEN</td><td>85600</td><td>boncuk çırpıcı</td></tr><tr><td>TissueLyser LT Adaptör, 12 Tüplü</td><td>QIAGEN</td><td>69980</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura</td><td>4566</td><td>numune kalıpları</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16046</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reaktifi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15596026</td><td>guanidyum tiyosiyanat</td></tr><tr><td>Tween20 (500 mL)</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>VWR Mikro Slaytlar - Superfrost Plus</td><td>VWR</td><td>48311703</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton Coplin boyama kavanozları</td><td>Millipore Sigma</td><td>S6016</td><td>Coplin kavanozu</td></tr></tbody></table>

İskelet kasında kas İçi yağ oluşumunu ve hücresel kökenini İnceleme kılavuzu

A Guide to Examining Intramuscular Fat Formation and its Cellular Origin in Skeletal Muscle

Fibro-adipojenik progenitörler (FAP'ler), iskelet kası homeostazı ve rejenerasyonu sırasında çok önemli bir rol oynayan mezenkimal stromal hücrelerdir. FAP'lar, moleküler miyofiber iskelesi gibi davranan hücre dışı matrisi oluşturur ve korur. Ek olarak, FAP'lar miyofiber rejenerasyonu için vazgeçilmezdir, çünkü kas kök hücreleri (MuSC'ler) tarafından algılanan çok sayıda faydalı faktör salgılarlar. Bununla birlikte, hastalıklı durumlarda, FAP'lar kas içi yağ ve fibrotik skar dokusunun hücresel kökenidir. Bu yağlı fibrozis, sarkopeni ve Duchenne Musküler Distrofi gibi nöromüsküler hastalıkların bir işaretidir. FAP'ların kas içi yağa neden ve nasıl farklılaştığını belirlemede önemli bir engel, özellikle dondurulmuş doku kesitlerinde, adipositlerin etkili bir şekilde korunması ve daha sonra görselleştirilmesidir. Çırpınarak dondurma gibi geleneksel iskelet kası dokusu işleme yöntemleri, bireysel adipositlerin morfolojisini uygun şekilde korumaz, böylece doğru görselleştirme ve nicelleştirmeyi önler. Bu engelin üstesinden gelmek için, iskelet kası bölümlerinde adiposit morfolojisini koruyan, kas içi yağın görselleştirilmesine, görüntülenmesine ve nicelleştirilmesine izin veren titiz bir protokol geliştirilmiştir. Protokol ayrıca, RT-qPCR için kas dokusunun bir kısmının nasıl işleneceğini de özetleyerek, kullanıcıların adipojenik genlerin ekspresyonundaki farklılıkları görüntüleyerek yağ oluşumunda gözlenen değişiklikleri doğrulamalarını sağlar. Ek olarak, kas örneklerinin tamamen monte immünofloresansı ile adipositleri görselleştirmek için uyarlanabilir. Son olarak, bu protokol, FAP'ların adipojenik dönüşümünü incelemek için Pdgfrα eksprese eden FAP'ların genetik soy izlemesinin nasıl yapılacağını özetlemektedir. Bu protokol, RT-qPCR ile doğrulanması ile birlikte, adipositlerin yüksek çözünürlüklü ve morfolojik olarak doğru immünofloresan görüntülerini tutarlı bir şekilde verir ve kas içi yağın sağlam, titiz ve tekrarlanabilir görselleştirmesine ve miktarına izin verir. Birlikte, burada açıklanan analiz boru hattı, FAP'ların kas içi yağa nasıl farklılaştığına dair anlayışımızı geliştirmenin ilk adımıdır ve yağ oluşumunu önlemek için yeni müdahaleleri doğrulamak için bir çerçeve sağlar.

Kas içi yağın immünofloresan görselleştirmesi Yukarıdaki adımları takip ederek ve Şekil 1A'yı görüntüleyerek, TA doku kesitleri, LN2 soğutmalı izopentanda hasattan hemen sonra dondurulmuş veya 2.5 saat boyunca% 4 PFA'da sabitlenmiş olan 21 günlük bir gliserol sonrası yaralanmadan toplanmıştır. Her iki numunenin kriyoseksiyonu ve boyanmasından sonra, görüntüler TA'nın en büyük alanı olan göbek ortasından çekildi. Sabit olmayan TA'lardan elde edilen PERILIPIN + adipositler (Şekil 1B), sabit kesitlere (Şekil 1C) kıyasla morfolojiyi önemli ölçüde değiştirmiş, bu da tanımlamalarını, görselleştirmelerini ve sonraki niceliklendirmelerini çok daha zor ve potansiyel olarak yanlış hale getirmiştir. Not etmek gerekirse, ilk PERILIPIN + lipit damlacıkları yaralanmadan yaklaşık 5 gün sonra tespit edildi ve çoğu adiposit 7. günde oluştu. Yaralanmadan 21 gün sonra, adipositler tamamen olgunlaşmıştı.
TA başına düşen yağ miktarı, indüklenen yaralanmanın ciddiyeti ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğundan, kas içi yağ oluşumunu etkili bir şekilde gözlemlemek ve incelemek için TA'lar önemli ölçüde yaralanmalıdır. Kadavra TA'larına mürekkep kullanarak enjeksiyon yapmak, yaralanma şiddetini arttırmanın harika bir yoludur. Başarılı yaralanmalar kasların% 50'sinin üzerinde olma eğilimindedir. Not etmek gerekirse, kasın yaralı bölgeleri, kas liflerinden yoksun alanları veya yenilenen bir kas lifinin bilinen bir özelliği olan en az bir merkezi olarak yerleştirilmiş çekirdek içeren kas lifleri tarafından doldurulan alanları temsil eder.
Bu protokol, FAP'lar ve 3D'deki yağlar için lekelenmeye kolayca uyarlanabilir. Bunun için, TA post-fiksasyonundan çoklu miyofiberler dikkatlice ayrıldı, ardından tam monte immünofloresan izledi. Önemli olan, lifleri cam slayda uygun şekilde sabitlemek ve aynı zamanda dokunun aşırı sıkışmasını önlemektir. Kalıplanabilir kil ayaklar kullanarak, kullanıcı gerekli kalınlığı ayarlayabilir ve kapak kaymasını slayta sabitleyebilir, hatta ters çevrilmiş bir mikroskop kullanımına izin verebilir (Şekil 4A). Bu yöntem PDGFRa+ FAP'ları, Phalloidin+ miyofiberleri ve PERILIPIN eksprese eden adipositleri etiketlemek için başarıyla kullanılmıştır (Şekil 4B, Ek Video 1 ve Ek Video 2). 150 μm kalınlığa kadar uzanan çoklu z-düzlemlerinde görüntüler elde edildikten sonra, mikroskop yazılımındaki 3D oluşturma modülü bir 3D rekonstrüksiyon oluşturmak için kullanıldı.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig4v3.jpg"> Şekil 4: Tam montajlı immünofloresan boyama . (A) Numunenin nasıl monte edileceğine ve tam montajlı boyama için kapak kaymasının nasıl ekleneceğine dair üstten ve yandan görünüm. (B) FAP'ların (yeşil; sol) ve adipositlerin (kırmızı; sağ) miyolifler (gri) ve çekirdeklerle (mavi) birlikte temsili 3D rekonstrüksiyonları. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig4v3large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Kas içi yağın miktarının belirlenmesi Kas içi yağın görüntüleri alındıktan sonra, PERLIPIN + adipositlerin sayısını manuel olarak saymak için ImageJ / FIJI'deki Hücre Sayacı fonksiyonu kullanıldı (Şekil 5A). Daha sonra, kas bölümünün toplam alanı ve miyolifler içinde merkezi olarak yerleştirilmiş çekirdekler tarafından tanımlanan yaralı alan belirlendi. Yaralanma şiddetini kontrol etmek için, toplam adiposit sayısı yaralı bölgeye bölündü ve yaralı kasın 1mm2'si başına yağ hücresi sayısı ile sonuçlandı. Genellikle,% &lt;30 yaralanma gösteren TA'lar niceliklerin dışında tutulur. Not etmek gerekirse, adipositler yaralanmadan nadir olmasına rağmen, kesitsel alan başına sıfır ila sekiz arasında değişmekle birlikte, toplam adiposit sayısı hala toplam alana göre normalleştirilmiştir. Şekil 5B'de vurgulandığı gibi, bir gliserol yaralanması, yaralanmamış bir TA kasına kıyasla büyük miktarda kas içi yağa neden olur. Alternatif olarak, Perilipin boyama yüksek sinyal-gürültü oranı ile çok temiz olduğundan, Perilipin tarafından işgal edilen toplam alanı belirlemek için Parçacık Analiz işlevini kullanmak da mümkündür. Bununla birlikte, bu yöntem daha küçük ve daha az adiposit arasında ayrım yapamayacaktır. En az dört bireysel hayvandan üç bölüme kadar görüntüleme ve nicelleştirme yapıldı ve fare başına mevcut ortalama yağ hücresi sayısı bildirildi.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig5v2.jpg"> Şekil 5: Kas içi yağın nicelleştirilmesi . (A) ImageJ'deki Hücre Sayacı işlevini kullanarak PERILIPIN + adipositlerin (beyaz) nasıl sayılacağına dair temsili görüntü. Ölçek çubuğu: 50 μm. (B) Gliserol enjeksiyonundan 21 gün sonra tüm TA adiposit miktarları, yaralı bölgenin 1mm2'sine normalleştirilmiştir. Her nokta bir farenin ortalamasını temsil eder. SEM olarak gösterilen hata çubukları. **** = p &lt; 0,0001. (C) RT-qPCR analizi için homojenizasyon ve ardından kloroform ile faz ayırma sonrası RNA tabakası kullanılmaktadır. (D) Pparg ve Cepbα, erken adipojenik genler ve iki olgun adiposit belirteci olan Plin1 ve Adipoq'un ekspresyon seviyelerinde, gliserol hasarından sonra farklı zaman noktalarında katlama değişiklikleri. Her nokta bir farenin ortalamasını temsil eder. SEM olarak gösterilen hata çubukları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig5v2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Mevcut kas içi yağ miktarını bağımsız olarak doğrulamak için, çeşitli adipojenik belirteçlerin gen ekspresyon seviyeleri belirlenebilir. Bunun için RNA, immünofloresan için kullanılan aynı TA kasının bir kısmından (yukarıdaki adımlara bakın) yaralanma sonrası farklı noktalarda izole edilebilir. Dokuyu homojenize etmek için guanidium thiocyanate ile kombinasyon halinde bir boncuk çırpıcı kullanıldı. Kloroform eklendikten sonra santrifüjleme yapıldıktan sonra, üst RNA içeren tabaka dikkatlice ekstrakte edildi ve RNA temizliği için mini spin kolonları kullanıldı (Şekil 5C). Bu yöntem rutin olarak RT-qPCR ve RNAseq gibi tüm aşağı akış analizleri için uygun yüksek kalitede ve miktarda RNA üretir. RT-qPCR için, adipojenik ila kat hizmetleri genlerinin göreceli ekspresyon seviyeleri belirlendi ve ΔΔCT yöntemi38'i takiben herhangi bir göreceli değişiklik değerlendirildi. Şekil 5D'de açıklandığı gibi, yaralanmamış TA kası ile karşılaştırıldığında, gliserol hasarı, yaralanmadan sonraki 3 gün içinde Pparg ve Cebpα gibi erken adipojenik belirteçlerin ekspresyonunu indükler. Adiponektin (Adipoq) ve Perilipin (Plin1) gibi olgun belirteçler, gliserol hasarından 5 gün sonra tespit edilebilir.
Adipositlerin genetik soy takibi Burada sunulan adiposit boyama protokolü, FAP'ların genetik soy izlemesini, adipositlere kaderlerini haritalamak ve takip etmek için kolayca uyarlanabilir. Örneğin, daha önce PdgfrαCreERT2'de tamoksifen uygulaması yoluyla rekombinasyonun indüklenebileceğini göstermiştik; Rosa26 EYFP fareleri, yaralanmadan 2 hafta önce, floksed durdurma kodlamasını etkili bir şekilde ortadan kaldırır ve FAP'larda EYFP ekspresyonunu silinmez bir şekilde aktive eder (Şekil 6A). Burada sunulan tamoksifen rejimi ile yüksek rekombinasyon verimlilikleri elde ettik, PDGFRα + FAP'ların ~% 75'i EYFP 20'yi ifade ediyor, diğer laboratuvarların 27,39,40 bildirdiğine benzer şekilde. FAP'ların gerçekten kas içi yağın hücresel kökeni olduğunu gösteren FAP'ların çoğu, gliserol hasarından 7 gün sonra EYF + PERILIPIN eksprese eden adipositlere dönüşmüştür (Şekil 6B).
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig6v3.jpg"> Şekil 6: FAP'ların soy izlemesi. (A) Deney düzeneğine şematik genel bakış. (B) PDGFRa+ FAP'lar (kırmızı, ok uçları) ve PERILIPIN+ adipositler (kırmızı, yıldız işaretleri) içinde EYFP'nin (sarı) başarılı rekombinasyonunu ve aktivasyonunu gösteren temsili immünofloresan görüntüler. Ölçek çubukları: 25 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig6v3large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Birden fazla hücre tipinin tespiti Bu protokol miyojenik bölmeyi görselleştirmek için de kullanılabilir. PAX7 ve MYOD1'e karşı antikorlar kullanılarak, sırasıyla kas kök hücreleri (MuSC'ler) ve miyoblastlar, PFA ile sabitlenmiş kas dokusu bölümünde bile gliserol hasarından 5 gün sonra kolayca tespit edilebilir (Şekil 7). Bu nedenle, sunulan protokol çok yönlüdür ve sadece adipositleri ve FAP'ları etiketlemek ve görüntülemek için değil, aynı zamanda miyojenik soyun diğer hücre tiplerine de uyarlanabilir.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig7v2.jpg"> Şekil 7: Kas kök hücresi ve miyoblast immünofloresan boyama . (A) Deney düzeneğine şematik genel bakış. (B) PAX7 ile kas kök hücresinin (MuSC) (sarı, sol) ve MYOD1 ile miyoblastların (sarı, sağ) başarılı bir şekilde boyandığını gösteren temsili immünofloresan görüntüler. LAMININ, miyolifleri (beyaz) ana hatlarıyla belirtir ve çekirdekler camgöbeği içindedir. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig7v2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video 1: FAP'ların 3D gösterimi. Yaralanmadan 21 gün sonra sırasıyla PHALLOIDIN (gri), PDGFRα (yeşil) ve DAPI (mavi) için boyanmış miyofiberlerin, FAP'ların ve çekirdeklerin üç boyutlu rekonstrüksiyonu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/FAPs.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen tıklayınız.</a>
Ek Video 2: Kas içi yağın 3D oluşturulması. Gliserol hasarından 21 gün sonra miyolifin yerini alan miyofiber demetlerinin (gri, PHALLOIDIN) ve kas içi yağın (kırmızı, PERILIPIN) hacimsel olarak oluşturulması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/FAT.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen tıklayınız.</a>

Sağlıklı kas dokusunun kas içi yağ ile değiştirilmesi, insan hastalıklarının ve koşullarının belirgin bir özelliğidir. Bu protokol, kas içi yağın nasıl görselleştirileceğini, görüntüleneceğini ve ölçüleceğini ana hatlarıyla belirtir ve kas içi yağ oluşumunun altında yatan mekanizmaların titizlikle incelenmesine izin verir.

İskelet Kasında Kas İçi Yağ Oluşumunu ve Hücresel Kökenini İnceleme Kılavuzu

Fibro-adipogenic progenitors (FAPs) are mesenchymal stromal cells that play a crucial role during skeletal muscle homeostasis and regeneration. FAPs build ...

Sarkopeni ve nöromüsküler hastalıkların ayırt edici bir özelliği olan kas içi yağın incelenmesinde önemli bir engel, özellikle dondurulmuş doku kesitlerinde adipositlerin etkili bir şekilde korunması ve daha sonra görselleştirilmesidir. Protokol, kas içi yağın sağlam, titiz ve tekrarlanabilir görselleştirmesi ve nicelleştirilmesi için hizalanmış adiposit morfolojisini ve iskelet kası bölümlerini korur. Analiz boru hattımız, Duchenne kas distrofisi gibi hastalıklarda yağ oluşumunu önlemek için yeni müdahaleleri doğrulamak için bir çerçeve sağlar Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir araştırma teknisyeni olan Connor Johnson olacaktır.Başlamak için, dezenfekte etmek için taze bir alkollü mendille enjekte edilecek bacağı temizleyin. İnsülin şırıngasına 30 ila 50 mikrolitre% 50 gliserol çekin. TA'nın yerini ortaya çıkarmak için saçları hafifçe fırçalayın. TA'yı bulduktan sonra, iğneyi ayak bileğinin yakınında distal olarak TA'ya yerleştirin.İğneyi kasın içine tamamen yerleştirin ve yavaşça gliserol enjekte edin, aynı zamanda kasın çoğuna zarar vermeye yardımcı olan iğneyi yavaş yavaş geri çekin. Saçları diseksiyon alanından ve aletlerden uzak tutmaya yardımcı olmak için farenin kesilecek herhangi bir alanına% 70 etanol ile serbestçe püskürtün. Pelvisin yakınındaki bacağın üst kısmındaki cildi kesmek için makas kullanın.Bacağın derisini yukarıdan aşağıya doğru ayak bileğine doğru yavaşça çekin. İlk olarak, TA'yı toplamadan önce keskin uçlu cımbız kullanarak dış bağ dokusu tabakasını çıkarın. TA'nın altındaki cımbızları kasın altından distal tendondan başlayarak kaydırın ve yavaşça dize doğru yukarı doğru çekin. Kasın sonunda durun.Alt dizde hissedilen direnci geçmeyin. Alt diz seviyesine ulaşmadan önce önemli bir direnç varsa, artık bağ dokusu katmanlarını çıkarmaya devam edin ve durun. TA, cımbızla bacağından kısmen kaldırıldıktan sonra, TA'nın alt dize bağlantısını kesmek için aynı hareketi bir neşterle kullanın.TA'yı tamamen çıkarmak için ayak bileğindeki tendonu makasla bağırsaklayın. Liflere zarar vermemek için sadece tendondaki kası tutun. TA'nın üçte birini sonunda, tendonun karşısında kesin. Mikro santrifüj tüpüne koyun ve sıvı azot içine düşürerek dondurun.Dokunun diğer üçte ikisini, histoloji için% 4 PFA ile etiketlenmiş bir kuyuya batırın. İlk ve son dokunun fiksatif olarak ne zaman yerleştirildiğini takip ettiğinizden emin olun. Dört santigrat derecede iki ila iki buçuk saat boyunca bir nutatöre yerleştirin.Fiksasyondan sonra, PFA'yı kuyucuklardan çıkarın. Dokuları soğuk bir X PBS ile iki ila üç kez durulayın ve daha sonra yıkama başına beş dakika boyunca soğuk 1X PBS ile iki ila üç kez yıkayın. PBS'yi kuyucuklardan çıkarın ve dokunun yüzmesine izin vermek için 1X PBS'ye yeteri kadar% 30 sakkaroz ekleyin.Nutator'a gece boyunca dört santigrat derecede yerleştirin. Mikroskobu açın ve görüntüleme yazılımını başlatın. Slaytı sahne alanında sabitleyin.Görüntülenecek alanı tanımlamak için herhangi bir kanalı kullanın. Görüntüleme yazılımında, her kanal için kazanç ve pozlama süresini ayarlayın. Her kanaldaki tüm dokunun görüntülerini alın ve tam TA kesitinin bir bileşimini oluşturmak için tek tek karoları birleştirin.Başlamadan önce, RNase içermeyen suyu 45 santigrat dereceye ısıtın ve taze% 70 etanol hazırlayın. Numuneyi içeren her tüpe 1000 mikrolitre guanidinyum tiyosiyanat ekleyin. Boncuk Çırpıcı onaylı tüplerin kullanılması önemlidir.Her tüpe üç orta boy boncuk veya bir büyük ve bir küçük boncuk ekleyin. Bir Boncuk Çırpıcı kullanarak dokuyu iki ila dört dakika boyunca 50 Hertz'de homojenize edin. Doku tipine ve numune büyüklüğüne bağlı olarak, 10 dakika kadar sürebilir.200 mikrolitre kloroform ekleyin. Örnekleri 15 saniye boyunca sallayın. Oda sıcaklığında iki ila üç dakika kuluçkaya yatırın.12.000 kez G.Pipet'te 15 dakika boyunca santrifüj yapın ve 350 mikrolitre% 70 etanol içeren yeni bir mikro santrifüj tüpüne ekleyin. Alt protein ve / veya DNA katmanlarını aspire etmemeye dikkat edin. Bu karışımın 700 mikrolitresine kadar, iki mililitrelik bir toplama tüpüne yerleştirilmiş bir mini sıkma kolonuna aktarın.Üreticinin talimatlarını izleyerek RNA izolasyonu ile devam edin. Beklenen verime bağlı olarak 30 ila 50 mikrolitre RNaz içermeyen su ile sültü. RNA'yı buz üzerinde tutun ve bir spektrofotometre kullanarak verimi ölçün.RNA'yı eksi 80 santigrat derecede saklayın. Üreticinin talimatlarını izleyerek cDNA'yı bir cDNA sentez kiti ile sentezlemek için bir mikrogram RNA kullanın. Çalıştırma tamamlandıktan sonra, 80 mikrolitre RNase içermeyen su ekleyin.Örnekleri eksi 20 santigrat derecede saklayın. 384 kuyucuk formatı kullanarak, her bir kuyucuğun dibine bir mikrolitre astar ekleyin. Serbest kurutma primerleri daha sıkı teknik kopyalar sağlar.Astarlar tamamen buharlaşana kadar kapalı bırakın. Dört ila sekiz teknik çoğaltma ile numune reaksiyonları ayarlayın. PCR çalışması tamamlandıktan sonra, ham döngü eşik değerlerini temizlik gen seviyelerine normalleştirin ve delta-delta Ct.Perilipin ve sabitlenmemiş TA'lardan pozitif adipositleri hesaplayarak kıvrım değişikliklerini belirleyin, sabit bölümlere kıyasla morfolojiyi önemli ölçüde değiştirdi, bu da tanımlamalarını, görselleştirmelerini ve sonraki bir nicelemeyi çok daha zor ve potansiyel olarak yanlış hale getirdi.Buna karşılık, PFA fiksasyonu adiposit morfolojisini koruyarak kas içi yağın doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Yaralanmamış TA kası ile karşılaştırıldığında, gliserol hasarı, yaralanmadan sonraki üç gün içinde PPAR gama ve CEBP alfa gibi erken adipojenik belirteçlerin ekspresyonunu indükler. Adiponektin ve perilipin gibi olgun belirteçler, gliserol hasarından beş gün sonra tespit edilebilir.Genetik soy izlemeyi kullanarak, PDGF reseptörü alfa FAP'larının çoğunluğu soy belirteci EYFP'yi eksprese eder. Gliserol hasarından yedi gün sonra, EYFP pozitif FAP'lar, adipositleri eksprese eden EYFP pozitif perilipine dönüşmüş ve FAP'ların gerçekten kas içi yağın hücresel kökeni olduğunu göstermiştir. Protokol ayrıca miyojenik bölmeyi görselleştirmek için uyarlanabilir.PAX7 ve MYOD1'e karşı antikorlar kullanılarak, sırasıyla kasların kök hücre ve miyoblast belirteçleri, PFA sabit kas dokusu bölümlerinde bile, gliserol hasarından beş gün sonra kolayca tespit edilebilir. Bu protokol ayrıca adipositleri ve diğer yetişkin dokuları görselleştirmek ve ölçmek için uyarlanabilir. Ayrıca doku koruma tekniğimiz farklı ayakta durma tekniklerinin çeşitliliği ile uyumludur.

a-guide-to-examining-intramuscular-fat-formation-its-cellular-origin

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

İnsan kasından türetilen ana yapışık hücre tipleri miyojenik hücreler ve fibroblastlardır. Burada, hücre popülasyonları, CD56 antijenine dayalı olarak manyetik olarak aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak zenginleştirilir. Spesifik antikorlarla müteakip immüno-etiketleme ve görüntü analiz tekniklerinin kullanılması, tek tek hücrelerde sitoplazmik ve nükleer özelliklerin miktar tayinine izin verir.

İnsan İskelet Kası İlköğretim andMyogenic Hücreleri ve Fibroblast İzolasyon ve Kantitatif İmmünositokimyasal Karakterizasyonu

Nedeniyle obezite ve diğer yandaş arasındaki şiddetli ve negatif bağlantı, rol adipoz araştırma hastalığında oynadığı ve genel sağlık garantilidir. Biz izolasyon ve yerinde kullanarak adipoz çalışması için izin yağ depolarında eksizyonu ve in vitro yöntemler bir protokol mevcut.

Yerelleştirme, Kimlik ve Eksizyon Kemirgen Yağ depolarının

Adipositler ayrı depolarında var ve benzersiz mikro ortamlarında çeşitli rolleri vardır. Adiposit karakteri ve fonksiyonunda bölgesel farklılıklar ortaya çıktığı için, depoların standartlaştırılmış tanımlaması ve yalıtımı alanın ilerlemesi için çok önemlidir. Burada, çeşitli fare yağ depolarının eksizyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Çeşitli fare Adipose depoları tanımlama ve diseksiyon

Artan kanıtlar, iskelet kası içindeki lipitlerin aşırı infiltrasyonunun lipotoksisite ve diyabet ile sonuçlandığını göstermektedir. Burada, lipit damlacıklarının boyutunu, yoğunluğunu ve hücre altı dağılımını lif tipine özgü bir şekilde ölçmek için doku işleme, Bodipy ile boyama, görüntü elde etme ve analiz dahil olmak üzere eksiksiz bir protokol sunuyoruz.

İskelet Kasında Lipid Damlacık İçeriğinin Lif Tipi ve Subhücresel-Spesifik Analizi

Preadipositler, yenidoğan farelerden alınan interskapular kahverengi yağ dokusunun stromal vasküler fraksiyonundan izole edilir ve lipid damlacıkları biriktiren, moleküler belirteçleri eksprese eden ve olgun kahverengi adipositlerin mitokondriyal morfolojisini gösteren hücrelere farklılaşır. Bu hücreler ayrıca immünofloresan ve transmisyon elektron mikroskobu ile analiz edilir.

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Bu çalışma, sağlam kas hacmi yoluyla kas içi yağ dokusu (IMAT) birikiminin görselleştirilmesi ve ölçülmesinin yanı sıra IMAT'ı oluşturan bireysel adipositlerin ölçümlerinin ölçülmesi için hücreden arındırmaya dayalı metodolojileri açıklamaktadır.

İskelet Kası Yağ İnfiltrasyonunun Decellularizasyona Dayalı Miktar Tayini

Et kalitesi özelliklerindeki farklılıkları açıklamak için Bos indicus ve melez boğalardaki iskelet kası dokusunu araştırdık. Warner-Bratzler kesme kuvvetinin (WBSF) 4,7 kg ile 4,2 kg arasında değiştiği bulunmuştur. Miyozin ağır zincir izoformları hayvanlar arasında farklılıklar ortaya çıkardı ve miyofibril parçalanma indeksi, hassasiyet (WBSF) varyasyonları hakkında daha fazla bilgi sağladı.

Longissimus Kasını Keşfetmek: Bos indicus ve Melez Boğalarda Et Kalitesi ile İlişkisinin Çözülmesi

İntermüsküler yağ dokusunun (IMAT) biyolojisi, insan dokusunun sınırlı erişilebilirliği nedeniyle büyük ölçüde keşfedilmemiştir. Burada, bu benzersiz yağ deposunun hücresel bileşimini tanımlamak için tek çekirdekli RNA dizilimi için donmuş insan IMAT'ının çekirdek izolasyonu ve kütüphane hazırlığı için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

İnsan İntermüsküler Yağ Dokusundan Çekirdeklerin İzolasyonu ve Aşağı Akış Tek Çekirdekli RNA Dizilemesi

Bu çalışmada, zebra balığı larvaları üzerinde Evans Mavi Boya (EBD) analizi yapmak için basit bir yöntem açıklıyoruz.  Bu teknik, iskelet kası bütünlüğünün karakterizasyonu ve zebra balığı kas distrofisi modellerinin tanımlanması için güçlü bir araçtır ve yeni terapötiklerin geliştirilmesi için değerli bir yöntemdir.

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

Zebra balığı, kas fonksiyonlarını ve hastalıklarını incelemek için mükemmel bir modeldir. Erken embriyogenez sırasında zebra balığı düzenli kas kasılmalarına başlar ve ritmik yüzme davranışı üretir ve bu da kas bozulduğunda değişir. Burada, yüzme performansını kas fonksiyonunun bir ölçüsü olarak incelemek için dokunma ile uyarılmış bir tepki ve hareket testini açıklıyoruz.

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Öğrenin, iskelet kasında kas içi yağ oluşumunu ve hücresel kökenini gliserol yaralanması ve PFA fiksasyonu kullanarak görüntüleyin ve nicelendirin. Bu yöntem, sarkopeni ve kas distrofilerinde yağ birikimini incelemek için sağlam bir çerçeve sunar.

İskelet Kasında Kas İçi Yağ Oluşumunu ve Hücresel Kökenini İnceleme Kılavuzu

Daha fazla video keşfet