COVID-19 ile İlişkili Orta Kulak Patolojisinin Değerlendirilmesi için Yüksek Hızlı İnsan Temporal Kemik Kesiti
18 Mayıs 2022
Bu makalede, temporal kemik immünohistokimyasının hızlı dekalsifikasyonu ve analizi için ince dilimler oluşturmak üzere ikiz elmas bıçaklı bir mikro testere kullanan hızlı insan temporal kemik kesitleme tekniği açıklanmaktadır.
Bu protokol, temporal kemik işleme süresini 9 ila 10 aydan 10 ila 14 güne düşürür. Bu tekniğin temel avantajı, bizim durumumuzda COVID-19 ile ilişkili orta kulak patolojisinin değerlendirilmesi ile ilgili olan otopatolojinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesine izin vermesidir. Bu teknik, temporal kemiğin zamana duyarlı çalışmaları için özellikle yararlı olabilir.
Gelecekte, iç kulak patolojisini incelemek için kullanım için daha da optimize edilebilir. Otopsi sırasında hasada başlayın ve kraniyal sinirleri keskin bir şekilde iç işitsel kanala bölün. Osteotom ile ilk kemik insizyonunu temporal kemiğin skuamöz kısmına paralel ve sadece medial yapın.
Ardından, temporal kemiğin medial sınırında birincisine paralel olarak ikinci kemik kesisini gerçekleştirin. Üçüncü kesiyi üç ila dört santimetre ön tarafta ve petroz sırtına paralel olarak yapın. Daha sonra, dördüncü insizyonu petrous sırtının iki santimetre gerisinde kabaca üçüncüye paralel yapın.
Numunenin alt kenarı boyunca tutturulmuş yumuşak dokuyu serbest bırakmak ve temporal kemiği çıkarmak için keskin diseksiyon kullanın. Hasattan sonra, dokuyu hemen 200 ila 300 mililitre% 10 tamponlu formalin içine batırın. Ardından, ikiz elmas bıçaklı hassas bir mikro testereyi beş milimetrelik bir mesafeye ayarlayın.
Hızlı doku dekalsifikasyonu için, her bir numuneyi temporal kemiğin orta kısmı beş milimetre kalınlığında ve her iki uçtakiler üç ila beş milimetre kalınlığında olacak şekilde üç bölüme ayırın. Bölümleri yumuşatma için oda sıcaklığında yedi ila 10 gün boyunca 200 ila 300 mililitre 0.37 molar EDTA'ya yerleştirin. Orta kulak mukozası ve östaki tüpünün hematoksilin ve eozin boyaması, bu protokol kullanılarak işlendikten sonra dokunun korunduğunu göstermiştir.
İmmünohistokimyasal analizler, bu dokularda ACE2, transmembran proteaz serin ve furin proteinlerinin varlığını gösterdi ve orta kulağın solunum epitelinde SARS-CoV2 enfeksiyonu için olası bir kök sağladı. Temporal kemik dokusunun elmas testere içinde uygun şekilde konumlandırılması önemlidir. Bu yöntemle birleştirilebilecek alternatif teknikler arasında farklı proteinler için immünohistokimya, farklı doku lekeleri ve transkriptomikler bulunur.
Bu teknik, COVID-19 pandemisi sırasında orta kulakta SARS-CoV2 enfeksiyonunda rol oynayan proteinlerin varlığını hızlı bir şekilde değerlendirmemizi sağladı.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, çift elmas bıçaklı bir mikrotestere kullanılarak insan temporal kemiğinin hızlı bir şekilde kesilmesi için geliştirilen bir tekniği açıklamaktadır. Bu yöntem, temporal kemik işlemesi için gereken süreyi önemli ölçüde azaltarak immünohistokimyasal analizlerin daha hızlı gerçekleştirilmesini kolaylaştırmaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Otopatoloji
- İmmünohistokimya
Arka Plan
- Geleneksel temporal kemik işlemleri 9 ila 10 ay sürebilir.
- Otopatolojinin hızlı değerlendirilmesi, zamanında araştırma yapılması açısından kritik öneme sahiptir.
- Bu teknik, COVID-19 ile ilişkili orta kulak patolojilerini incelemek için uygundur.
- Gelecekteki optimizasyonlar, iç kulak patolojisi çalışmalarını geliştirebilir.
Çalışmanın Amacı
- Temporal kemik analizi için işlem süresini azaltmak.
- Otopatolojinin hızlı değerlendirmesine olanak sağlamak.
- Zamana duyarlı çalışmalara uygulanabilir bir yöntem sunmak.
Kullanılan Yöntemler
- Otopsi sırasında toplama.
- Kranial sinirlerin internal akustik kanala kadar keskin bir şekilde ayrılması.
- İlk kemik insizyonunun bir osteotom ile yapılması.
- Kesim işlemi için çift elmas bıçaklı bir mikrotestere kullanımı.
Ana Sonuçlar
- İşlem süresi 9-10 aydan 10-14 güne düşürülmüştür.
- Orta kulak patolojisinin hızlı değerlendirmesini kolaylaştırır.
- Gelecekteki çalışmalarda daha fazla optimizasyon potansiyeli bulunmaktadır.
- Otopatolojideki acil araştırma ihtiyaçları için uygundur.
Sonuçlar
- Bu teknik, temporal kemik işlemini önemli ölçüde hızlandırır.
- Özellikle COVID-19 ile ilgili çalışmalar için kullanışlıdır.
- Gelecekteki araştırmalar, tekniğin iç kulak patolojisindeki uygulamasını geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Alanları
Hızlandırılmış temporal kemik kesit alma işlemi, orta kulak dokularının hızlı histopatolojik değerlendirmesine olanak tanıyarak COVID-19 gibi bulaşıcı hastalık salgınları sırasındaki acil araştırma ihtiyaçlarını karşılamaktadır. Doku işlem süresini aylardan günlere indiren bu yöntem, otopatolojide zamana duyarlı hedef doğrulamayı ve mekanistik çalışmaları destekler. Bu yaklaşım, viral giriş yolaklarını ve dokuya özgü protein ekspresyonunu inceleyen translasyonel araştırma ekipleri için portföy çevikliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- İnsan dokularında viral giriş mekanizmalarıyla ilgili protein ekspresyonunun hızlı bir şekilde sorgulanmasını sağlar.
- İmmünohistokimyasal analiz için doku bütünlüğünü koruyarak fonksiyonel hedef doğrulamasını destekler.
- Orta kulaktaki patojen-konak etkileşimleri çalışmalarında mekanistik risk azaltma sürecini kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Standartlaştırılmış immünohistokimya ve moleküler analizler için uygun, yüksek kaliteli doku kesitleri sağlar.
- Otopatoloji araştırmalarında analiz geliştirme ve doğrulama için gereken işlem süresini azaltır.
- Doku tabanlı tarama iş akışlarının tekrarlanabilirliğini ve ölçeklenebilirliğini artırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Doku tabanlı bulguların, enfeksiyöz hastalık modellerindeki translasyonel biyobelirteç çalışmalarıyla uyumlu hale getirilmesini sağlar.
- Doku analizini hızlandırarak, keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar olan sürekliliği destekler.
- Acil halk sağlığı durumlarında, çıkarımların gecikme riskini azaltır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu hızlı kesit alma protokolü, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece entegre edilerek, insan doku modellerinde zamanında hipotez testlerinin yapılmasına ve hedef doğrulanmasına olanak tanır.
- Keşif Biyolojisi: Protein lokalizasyonu ve dokuların enfeksiyona duyarlılığına yönelik hipotez odaklı çalışmaları hızlandırır.
- Tarama: Kantitatif immünohistokimyasal okumalar için analize hazır kesitler sağlar.
- Analitik: Farklı koşullar altında protein markerlarının (örneğin ACE2, TMPRSS2, Furin) güvenilir ölçümünü destekler.
- Translasyonel Araştırma: Biyobelirteç uyumlandırması için insan dokusu analizleri ile preklinik model bulguları arasında köprü kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Gelecekteki bulaşıcı hastalık araştırmaları için ölçeklenebilir ve hızlı bir doku hazırlama kapasitesi oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Doku tabanlı hedef doğrulamada ve mekanistik çalışmalarda öngörüsel güveni artırır.
- Operasyonel Değer: Doku işlemeyi standartlaştırır ve hızlandırarak kaynak ve zaman yükünü azaltır.
- Stratejik Değer: Acil araştırma senaryolarında daha hızlı karar verme süreçlerini mümkün kılarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Halk sağlığı acil durumları sırasında translasyonel projelerin riskle uyumlu önceliklendirilmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Postmortem doku işleme ve kesit alma enstrümantasyonu konusunda uzmanlık gerektirir.
- Elmas bıçaklı hassas mikrotesterelere ve dekalsifikasyon altyapısına erişim gerektirir.
- Doku işleme ve boyama protokollerinin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Protokol optimizasyonu ile çeşitli doku tiplerine ve protein hedeflerine uyarlanabilir.
- Optimal sonuçlar için zamanında otopsi erişimine ve numune kalitesine bağımlıdır.
