Name: Beyin Dilimlerinde Miyelinasyon Görüntüleme için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: Öğrenin, CARS mikroskobisi ile beyin dokusunda miyelin kılıfını görüntülemeyi. Bu yöntem, immünofloresan tekniklerle uyumlu olup, multipl skleroz ve otizm gibi nörolojik hastalıklarda miyelin değişikliklerini incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH R01 DC 17924, R01 DC 18401 (Klug) ve NIH 1R15HD105231-01, T32DC012280 ve FRAXA (McCullagh) tarafından desteklenir. CARS görüntüleme, kısmen NIH P30 NS048154 ve NIH P30 DK116073 tarafından desteklenen Colorado Üniversitesi Anschutz Tıp Kampüsü'ndeki Nöroteknoloji Merkezi'nin Gelişmiş Işık Mikroskobu Çekirdeği bölümünde gerçekleştirildi.

Tüm deneyler yürürlükteki tüm yasalara, Ulusal Sağlık Enstitüleri yönergelerine uymuş ve Colorado Üniversitesi Anschutz Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvanlar
<ol><li>Jackson Laboratuvarı'ndan elde edilen C57BL / 6J (stok #000664) farelerini (Mus musculus) veya aslen Charles Nehri'nden elde edilen Moğol gerbillerini (Meriones unguiculatus) kullanın.</li>
</ol>2. Doku hazırlığı
<ol><li>Transkardiyal perfüzyon için, pentobarbital (120 mg / kg vücut ağırlığı) ile ilgilenen aşırı doz kemirgen türleri ve transkardiyal olarak fosfat tamponlu salin (PBS; 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.76 mM KH 2 PO 4, 10 mM Na2HPO4) ile%4 paraformaldehit (PFA) 24 ile perfüze edilir.<ol><li>Spesifik olarak, karın ve göğüs kafesini makas kullanarak açın ve kalbi açığa çıkarmak için göğüs kafesini Kelly hemostatik forseps ile yerinde tutun.</li>
		<li>Sol ventriküle bir perfüzyon pompasına bağlı 23 GA'lık bir iğne yerleştirin ve ince makas kullanarak sağ atriyumu hızla kesin.</li>
		<li>Beyni ve vücudu kandan temizlemek için PBS'yi perfüzyon pompası ve kalpteki iğne ile 10 dakika boyunca uygulayın.</li>
		<li>Perfüzyon pompasını 10 dakika boyunca% 4 PFA'ya değiştirin ve başarılı perfüzyonu onaylamak için uzuvların ve kuyruğun sertliğini kontrol edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Perfüzyondan sonra, hayvanların kafasını kesin ve beyinlerini kafatasından çıkarın. PBS'ye geçmeden önce beyinleri gece boyunca% 4 PFA'da tutun. Beyin saplarını% 4 agaroza (PBS'de) gömün ve 200 μm kalınlığında bir vibratom kullanarak koronal olarak dilimleyin.</li>
</ol>3. Boyama
<ol><li>Nissl için, hücre cisimciklerini görselleştirmek için (1:100), antikor ortamında (AB ortamı: 0,1 M fosfat tamponu (PB: 50 mM KH 2 PO 4, 150 mM Na2HPO4), 150 mM NaCl, 3 mM Triton-X, %1 sığır serum albümini (BSA)) standart bir laboratuvar çalkalayıcı25 üzerinde oda sıcaklığında 30 dakika boyunca lekesiz yüzer kesitler.<ol><li>Alüminyum folyo ve/veya kapak kullanarak bölümleri ışıktan koruyun. 550 nm veya altındaki dalga boyları CARS görüntüleme ile uyumludur (Şekil 1). NOT: Triton-X veya diğer reaktiflerin lipitlerin CARS görüntülemesi üzerinde bir etkisi olmasını beklemesek de, spesifik antikor ortamları ile ek kontroller garanti edilebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>DURAKLATMA NOKTASI: Serbest kayan bölümleri (ışıktan korunurken) görüntülemeye kadar PBS'de saklayın. Bölümlendikten sonra, 2 hafta içinde beyin bölümlerini görüntüleyin.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig01.jpg"> Şekil 1: CARS görüntüleme immünofloresan görüntüleme ile birleştirilebilir. Grafikler, CARS görüntülemenin 660/640 nm kırmızı sinyal spektrumu26'da gerçekleştiğini göstermektedir. Bu dalga boyu yeşil, mavi veya UV aralığından yeterince uzaktır ve CARS sinyalinin bu aralıklarda immünofloresan ile kombinasyonuna izin verir. Özellikle, grafik ayrıca, bu yayın için temsili sonuçların toplanması sırasında CARS ile birleştirilen mavi florofor ile etiketlenmiş Nissl için uyarma ve emisyonu da göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. Görüntüleme
NOT: CARS lazer kurulumu, 80 MHz saat sağlayan bir fiber lazer ve CARS sinyalini toplamak için gerekli olan 1031 nm'de sabitlenmiş Stokes ışını ile 770-990 nm ayarlanabilir aralıkta bir OPO (Optik Parametrik Osilatör) lazer içerir. Her iki ışın için de bir diyafram açıklığı vardır.
<ol><li>Örnekleri mikroskopa getirmeden önce, CARS lazerini en az 1 saat boyunca açın ve ısıtın, CARS lazerini ve Koehler'i kondenser optiklerini ve ileri CARS görüntüleme için mikroskobun diyaframını hizalayın. NOT: Bu adım, CARS mikroskopisinin düzgün çalışması için kritik öneme sahiptir.<ol><li>İki lazer ışınının (pompa ve stoklar) uzamsal hizalaması için, CARS lazer GUI'si aracılığıyla iki dahili PSD'ye (konuma duyarlı dedektörler) erişin.</li>
		<li>CARS lazer GUI'sindeki gecikme işlevini kullanarak zamansal hizalama elde edin, bu da farklı dalga boyları nedeniyle farklı dağılımlara sahip iki lazerin (pompa ve stoklar) darbelerinin üst üste binmesine yardımcı olabilir. Bu nedenle, pompa ve stokes kirişlerinin hem zamansal hem de mekansal örtüşmesi, GUI üzerinden kullanıcı girişi ile yapılır.</li>
		<li>Uzaysal olarak üst üste binen iki lazeri mikroskobun tarama kafası aynalarına ortalamak için harici periskopu (kurulumun son iki aynası) ayarlayın.</li>
		<li>En iyi ileri CARS taramasız algılama için, kondenserin Koehler-ed olduğundan emin olun (kondenserin ortalandığı ve düzgün aydınlatma elde etmek için diyaframa odaklandığı anlamına gelir)</li>
	</ol></li>
	<li>İmmünofloresan konfokal görüntüleme ve CARS görüntüleme için, floresan görüntüleme için görünür lazerlerle donatılmış bir konfokal mikroskop kullanarak, CARS lazerini hem ileri hem de epi CARS taranmamış dedektörlerle (NDD'ler) birlikte takın (Şekil 2).</li>
	<li>Bölümleri kapak kayması (ters mikroskopi için), dokunun kurumasını önlemek için PBS ve dokuyu örtü kaymasının yakınında tutmak için bir cam ağırlığı olan bir kültür kabına yerleştirin.</li>
	<li>CARS sinyalinin epi yönde toplanmasına ve yamuk cismin medial çekirdeği (MNTB) gibi beyin bölgelerini görüntülemek için ileri yönde 0,55 NA kondenserden toplanmasına hizmet eden 60X, 1,2 NA kızılötesi düzeltilmiş su hedefi ile z-yığınları veya tek görüntüler alın.<ol><li>CARS lazer GUI'sini kullanarak CARS görüntülerini yaklaşık 600 mW pompa/prob ve 300 mW Stokes'ta alın. Bu lazer güç değerleri sistem tarafından dahili olarak ölçülür. Her iki lazerin de numune konumundaki güçleri 25 mW'tan azdır ve doku numunesi için güvenlidir.</li>
		<li>Pompa ve Stokes kirişlerini mekansal ve geçici olarak üst üste bindirin. OPO'yu 797,2 nm olarak ayarlayın. Bu, 650 nm'lik bir CARS dalga boyu verir. Daha yüksek enerji seviyesi nedeniyle, zemin durumuna ortaya çıkan geri dönüş, uyarılmaya karşı anti-Stokes'tur (mavi kaydırılmış).</li>
		<li>CARS sinyalini, bandpass filtreleri (640-680 nm) kullanarak epi veya ileri taramasız dedektörlerde yakalayın, ardından immünofloresan etiketinin (bu örnekte floresan olarak etiketlenmiş Nissl) sıralı olarak algılanmasını sağlayın. NOT: Nissl nöronal soma işaretleyicisi, CARS 640-680 nm bandpass filtresinde yakalanmamıştır ve aşağıda sunulan görüntülerde floresan ve CARS görüntüleme kombinasyonuna izin vermektedir.</li>
		<li>CARS ve floresan PMT'leri paylaşmaz. Bu ayarları, beyin bölgesindeki miyelinasyonu seçici olarak görüntülemek için optimal lipit sinyali için kullanın. DİKKAT: Kullanıcıyı lazer ışınından koruyun</li>
	</ol></li>
	<li>Görüntüleri, daha fazla niceleme için bir görüntü analiz programına aktarılabilen .oib dosyaları olarak kaydedin (Şekil 3).</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig02.jpg"> Şekil 2: Bir lazer tarama konfokaline dahil edilen CARS lazerlerini (kırmızı oklar) ve taranmamış (NDD) epi ve ileri algılamayı gösteren CARS cihaz diyagramı. İleri NDD'de, 515 nm'de (turuncu ok) C-H bağları (koyu kırmızı oklar) ve SHG (ikinci harmonik genratioin) için CARS satın aldık. Epi NDD'de, C-H bağları (koyu kırmızı oklar) ve 2PE (iki foton emisyonu) otofloresan (açık mavi ok) için CARS satın aldık. Sırasıyla, floresan konfokal görüntüler elde edilebilir (görünür lazer için yeşil oklar, konfokal algılama için mavi oklar). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig03v2.jpg"> Şekil 3: CARS, beyin dokusundaki (beyin sapı) miyelini (macenta) aydınlatırken, aynı zamanda Nissl (camgöbeği) veya floresan belirteçleri de görüntüleyebilir. İki panel, Moğol gerbili (tek görüntü M. unguiculatus, Şekil 3A, C, E) ve fare (z-stack max projeksiyonu M. musculus, Şekil 2B, D, F) beyninden temsili sonuçlar göstererek, bu tekniğin türler arasında kullanılabileceğini göstermektedir. Şekil 3A,B, camgöbeğinde Nissl'i gösterir, C,D macentadaki CARS sinyalini gösterir, E,F sırasıyla gerbil veya fare için her panelle Nissl ve CARS sinyallerini birleştirir. Her iki görüntü seti de beyin sapındaki yamuk cismin (MNTB) medial çekirdeğinin bir bölümünü göstermektedir. MNTB'deki nöronlar, bir tür dev sinaps27 olan tutulan kalikste sonlanan ağır miyelinli aksonlardan girdiler alırlar. Ölçek çubuğu 20 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig03largev2.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Cole, K., Curtis, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electric+impedance+of+the+squid+giant+axon+during+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Electric impedance of the squid giant axon during activity.</a> The Journal of General Physiology. 22 (5), 649-670 (1939).</li>
<li>Cole, K. S., Curtis, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+potential+of+the+squid+giant+axon+during+current+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Membrane potential of the squid giant axon during current flow.</a> Journal of General Physiology. 24 (4), 551-563 (1941).</li>
<li>Alcami, P., El Hady, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+computations%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Axonal computations.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 413(2019).</li>
<li>Neumann, E., Nachmansohn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+excitability-Toward+an+integrating+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Aharon+Katzir+Memorial+Volume%22%5BJournal%5D)">Nerve excitability-Toward an integrating concept.</a> Aharon Katzir Memorial Volume. , 99-166 (1975).</li>
<li>Waxman, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+properties+and+design+principles+of+axons%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Integrative properties and design principles of axons.</a> International Review of Neurobiology. 18, 1-40 (1975).</li>
<li>Fitzhugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computation+of+impulse+initiation+and+saltatory+conduction+in+a+myelinated+nerve+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Computation of impulse initiation and saltatory conduction in a myelinated nerve fiber.</a> Biophysical Journal. 2 (1), 11-21 (1962).</li>
<li>Zalc, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acquisition+of+myelin%3A+a+success+story%5BTitle%5D)+AND+%22Novartis+Foundation+Symposium%22%5BJournal%5D)">The acquisition of myelin: a success story.</a> Novartis Foundation Symposium. 276, 275-281 (2006).</li>
<li>Salzer, J. L., Zalc, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Myelination.</a> Current Biology. 26 (20), 971-975 (2016).</li>
<li>Boullerne, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+history+of+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The history of myelin.</a> Experimental Neurology. 283, 431-445 (2016).</li>
<li>Kuhn, S., Gritti, L., Crooks, D., Dombrowski, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocytes+in+development%2C+myelin+generation+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocytes in development, myelin generation and beyond.</a> Cells. 8 (11), 1424(2019).</li>
<li>Saab, A. S., Nave, K. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+dynamics%3A+protecting+and+shaping+neuronal+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Myelin dynamics: protecting and shaping neuronal functions.</a> Current Opinion in Neurobiology. 47, 104-112 (2017).</li>
<li>Chomiak, T., Hu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+optimal+value+of+the+g-Ratio+for+myelinated+fibers+in+the+rat+CNS%3F+A+theoretical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">What is the optimal value of the g-Ratio for myelinated fibers in the rat CNS? A theoretical approach.</a> PLOS ONE. 4 (11), 7754(2009).</li>
<li>Ford, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+Ranvier+node+and+internode+properties+in+myelinated+axons+to+adjust+action+potential+timing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Tuning of Ranvier node and internode properties in myelinated axons to adjust action potential timing.</a> Nature Communications. 6, 8073(2015).</li>
<li>Stange-Marten, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Input+timing+for+spatial+processing+is+precisely+tuned+via+constant+synaptic+delays+and+myelination+patterns+in+the+auditory+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Input timing for spatial processing is precisely tuned via constant synaptic delays and myelination patterns in the auditory brainstem.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), 4851-4858 (2017).</li>
<li>Bu, J., Banki, A., Wu, Q., Nishiyama, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+NG2%2B+glial+cell+proliferation+and+oligodendrocyte+generation+in+the+hypomyelinating+mutant+shiverer%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Increased NG2+ glial cell proliferation and oligodendrocyte generation in the hypomyelinating mutant shiverer.</a> Glia. 48 (1), 51-63 (2004).</li>
<li>Pacey, L. K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+myelination+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Delayed myelination in a mouse model of fragile X syndrome.</a> Human Molecular Genetics. 22 (19), 3920-3930 (2013).</li>
<li>Green, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clemastine+fumarate+as+a+remyelinating+therapy+for+multiple+sclerosis+%28ReBUILD%29%3A+a+randomised%2C+controlled%2C+double-blind%2C+crossover+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clemastine fumarate as a remyelinating therapy for multiple sclerosis (ReBUILD): a randomised, controlled, double-blind, crossover trial.</a> Lancet. 390 (10111), London, England. 2481-2489 (2017).</li>
<li>Jeon, S. J., Ryu, J. H., Bahn, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+translational+control+of+fragile+X+mental+retardation+protein+on+myelin+proteins+in+neuropsychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Altered translational control of fragile X mental retardation protein on myelin proteins in neuropsychiatric disorders.</a> Biomolecules & Therapeutics. 25 (3), 231-238 (2017).</li>
<li>Barak, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+deletion+of+Gtf2i%2C+associated+with+Williams+syndrome%2C+causes+behavioral+and+myelin+alterations+rescuable+by+a+remyelinating+drug%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuronal deletion of Gtf2i, associated with Williams syndrome, causes behavioral and myelin alterations rescuable by a remyelinating drug.</a> Nature Neuroscience. 22 (5), 700-708 (2019).</li>
<li>Phan, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+myelin-related+transcriptomic+profile+is+shared+by+Pitt-Hopkins+syndrome+models+and+human+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A myelin-related transcriptomic profile is shared by Pitt-Hopkins syndrome models and human autism spectrum disorder.</a> Nature Neuroscience. 23 (3), 375-385 (2020).</li>
<li>Lucas, A., Poleg, S., Klug, A., McCullagh, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+deficits+in+the+auditory+brainstem+of+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelination deficits in the auditory brainstem of a mouse model of fragile X syndrome.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 1536(2021).</li>
<li>Wang, H., Fu, Y., Zickmund, P., Shi, R., Cheng, J. -X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coherent+anti-stokes+raman+scattering+imaging+of+axonal+myelin+in+live+spinal+ttissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Coherent anti-stokes raman scattering imaging of axonal myelin in live spinal ttissues.</a> Biophysical Journal. 89 (1), 581-591 (2005).</li>
<li>Kim, S. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+coherent+anti-stokes+raman+spectroscopy+images+intact+atheromatous+lesions+and+concomitantly+identifies+distinct+chemical+profiles+of+atherosclerotic+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Multiplex coherent anti-stokes raman spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids.</a> Circulation Research. 106 (8), 1332-1341 (2010).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Tu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free-floating+Immunostaining+of+Mouse+Brains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Free-floating Immunostaining of Mouse Brains.</a> Journal of Visualized Experiments. (176), e62876(2021).</li>
<li>Fluorescence SpectraViewer. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/order/fluorescence-spectraviewer">https://www.thermofisher.com/order/fluorescence-spectraviewer</a> (2022).</li>
<li>Held, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Die+centrale+geh%C3%B6rleitung%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Anat+Physiol+Anat+Abt%22%5BJournal%5D)">Die centrale gehörleitung.</a> Arch Anat Physiol Anat Abt. 17, 201-248 (1893).</li>
<li>Sherman, D. L., Brophy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+axon+ensheathment+and+myelin+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of axon ensheathment and myelin growth.</a> Nature Reviews Neuroscience. 6 (9), 683-690 (2005).</li>
<li>Gruchot, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+remyelination+failure+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for remyelination failure in multiple sclerosis.</a> Cells. 8 (8), 825(2019).</li>
<li>Rivera, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+pathway+in+the+age-related+decline+of+oligodendrocyte+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor pathway in the age-related decline of oligodendrocyte regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 16, 838007(2022).</li>
<li>Kútna, V., O'Leary, V. B., Hoschl, C., Ovsepian, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebellar+demyelination+and+neurodegeneration+associated+with+mTORC1+hyperactivity+may+contribute+to+the+developmental+onset+of+autism-like+neurobehavioral+phenotype+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Autism+Research%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+for+Autism+Research%22%5BJournal%5D)">Cerebellar demyelination and neurodegeneration associated with mTORC1 hyperactivity may contribute to the developmental onset of autism-like neurobehavioral phenotype in a rat model.</a> Autism Research: Official Journal of the International Society for Autism Research. 15 (5), 791-805 (2022).</li>
<li>Ozsvár, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+lipid+debris+accumulation+caused+by+cuprizone+induced+myelin+degradation+in+different+CNS+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of lipid debris accumulation caused by cuprizone induced myelin degradation in different CNS areas.</a> Brain Research Bulletin. 137, 277-284 (2018).</li>
<li>Prineas, J. W., Graham, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+capping+of+surface+immunoglobulin+G+on+macrophages+engaged+in+myelin+breakdown%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: capping of surface immunoglobulin G on macrophages engaged in myelin breakdown.</a> Annals of Neurology. 10 (2), 149-158 (1981).</li>
<li>Bégin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+method+for+the+segmentation+and+morphometry+of+nerve+fibers+in+large-scale+CARS+images+of+spinal+cord+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Automated method for the segmentation and morphometry of nerve fibers in large-scale CARS images of spinal cord tissue.</a> Biomedical Optics Express. 5 (12), 4145-4161 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Giderek artan bir literatür, miyelinin beyin fonksiyonlarındaki rolünü vurgulamaktadır 13,16,21,28. Ayrıca, miyelinasyon kalınlığının ve miyelinasyon paterninin multipl skleroz (29'da gözden geçirildi), yaşlanma (30'da gözden geçirildi), otizm 20,31 ve diğerleri gibi çeşitli nörolojik durumlarda değişebileceğini ...

Aksiyon potansiyelleri beyindeki temel bilgi birimidir ve aksonlar aracılığıyla aksiyon potansiyeli yayılımı bilgi işlemenin bir ayağını oluşturur 1,2,3. Nöronlar tipik olarak diğer birçok nörondan afferent girdiler alır ve bu girdileri belirli bir dar zaman aralığı 4,5 içinde bütünleştirir. Bu nedenle, aksonlardaki potansiyel yayılım mekanizmaları araştırmacılardan önemli miktarda ilgi görmüştür.
Bir akson boyunca yayılırken, güvenilir yayılmayı sağlamak için bir aksiyon potansiyeli akson boyunca tekrar tekrar yenilenir6. Çeneli omurgalıların (gnathostomlar) nöronlarının çoğunda, aksonlar, glial hücrelerin tipleri olan yakındaki oligodendrositler veya Schwann hücreleri tarafından üretilen lipit bakımından zengin bir madde olan bir miyelin kılıfı ile çevrilidir (7,8'de gözden geçirilmiştir). Bu miyelin kılıf, aksonu elektriksel olarak yalıtır, kapasitansını azaltır ve aksiyon potansiyelinin verimli, hızlı ve daha düşük enerji tüketimi ile yayılmasına izin verir. Miyelin, aksonu düzgün bir şekilde örtmez, ancak aksonu, Ranvier'in düğümleri olarak adlandırılan aralarında kısa boşluklar olan bölümler halinde kaplar (9,10'da gözden geçirilmiştir). Hem bir aksonun elektriksel yalıtım seviyesini kontrol eden miyelinasyon kalınlığı hem de bir akson boyunca aksiyon potansiyellerinin yenilenme sıklığını kontrol eden Ranvier düğümlerinin aralığı, aksiyon potansiyeli yayılım hızını etkiler (11'de gözden geçirilmiştir).
Miyelinasyon kalınlığının aksonlar12,13,14'teki aksiyon potansiyeli yayılım hızını etkilediğini öne süren geniş bir literatür vardır. Ayrıca, akson miyelinasyonundaki değişiklikler bir dizi CNS açığına neden olabilir 15,16,17,18,19,20,21. Bu nedenle, birçok araştırma çabasının odak noktasının akson miyelinasyonunun ölçümünü ve karakterizasyonunu içermesi şaşırtıcı değildir. Miyelin kalınlığının ölçümleri en yaygın olarak, önemli miktarda doku hazırlığı gerektiren ve immünohistokimya ile kombinasyon halinde kullanılması zor olan bir teknik olan elektron mikroskobu ile yapılmıştır. Bununla birlikte, Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisine (CARS) dayanan akson miyelinasyonunu ölçmek için daha hızlı ve daha basit bir teknik de vardır. Bir CARS lazeri çeşitli frekanslara ayarlanabilir ve lipitleri uyarmak için uygun frekanslara ayarlandığında, miyelin herhangi bir ek etikete ihtiyaç duymadan görüntülenebilir22. Lipid görüntüleme, standart immünohistokimya ile birleştirilebilir, böylece lipitler birkaç floresan kanalı ile birlikte görüntülenebilir23. CARS ile miyelinasyonun görüntülenmesi, elektron mikroskobundan önemli ölçüde daha hızlıdır ve EM'den daha düşük olsa da, aynı tip aksonlardaki miyelinasyondaki küçük farklılıkları bile tespit etmek için yeterli bir çözünürlüğe sahiptir.

<table><tbody><tr><td>< güçlü > Anestezik: < / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL iğneli tek kullanımlık şırınga 27 GA x 0.5 "</td><td>Exel int</td><td>260040</td><td></td></tr><tr><td>Ölümcül +</td> <td>Vortech</td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü > Cerrahi: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Yaylı Makas - 8mm Kesme</td><td>Kenarı Güzel Bilim Araçları</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Standart cımbız</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11027-12</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Perfüzyon: < / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 4 Paraformaldehit</td><td>Fisher Chemical</td><td>SF994 (CS)</td><td></td></tr> <tr><td>İnce Makas - Sharp</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14063-11</td><td></td></tr><tr><td>Kelly kanama durdurucular</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13019-14</td><td></td></tr><tr><td>Kırlangıç H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İğne ucu, 23 GA x 1"</td> <td>BD hassas kayma</td><td>305193</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS):</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobaz</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>pompa Değişken debili veya eşdeğeri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Fisher Chemical</td><td>s271-1</td><td></td></tr><tr><td>Sodyumfosfat dibazik</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td><güçlü >Diseksiyon: <</td> / güçlü><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 4 PFA ile 50 mL şişe</td> Bochem Kimyasal Kaşık 180mm Bochem 230331000 İnce Makas - Sharp Fine Science Araçları <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>14063-11</td><td></td></tr><tr><td>Noyes Bahar Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15011-12</td><td></td></tr><tr><td>İnce (Graefe) cımbız</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Sığ cam veya plastik tepsi, yaklaşık 10" x 10"</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Standart cımbız</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Makas - Künt</td><td>Güzel Bilim Araçlar</td><td>14000-20</td><td></td></tr><tr><td><güçlü > Dilimleme: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agar, bitki</td><td>RPI</td><td>9002-18-0</td><td></td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1000s</td><td></td></tr><tr><td>kuyu plakası</td><td>Alkali Sci.</td><td>TPN1048-NT</td><td></td></tr><<tr><td>güçlü > Boyama: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>AB Ortam:</td><td></td><td></td> <td>1n 1.000 mL Millipore H 2O</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu (PB):</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Potasyum Fosfat Monobaz</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosohat Dibazik</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>BSA (Sığır serum albümini)</td> <td>Sigma yaşam bilimleri</td><td>A2153-100g</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Fisher Chemical</td><td>s271-1</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>x100-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Nissl 435/455</td><td>Invitrogen</td><td>N21479</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > ARABALAR: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>APE & nbsp; picoemerald lazer</td><td>Angewandte Physik & Elektronik&nbsp; </td><td></td><td></td>GmbH</tr><tr><td>bant geçiren filtre (420-520 nm)</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ470/100m-2P</td><td></td></tr><tr><td>bant geçiren filtre (500-530 nm)</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ515/30m-2P</td><td></td></tr><tr><td>bant geçiren filtreler (640-680 nm)</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ660/40m-2P</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td><td></td></tr><tr><td>Kesim Transfer pipeti</td><td>Fisher</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>dikroik uzun geçiren 565 nm</td><td>Chroma Teknolojisi</td><td>565dcxr</td><td></td></tr><tr><td>dikroik uzun geçiren 585 nm</td><td>Chroma Teknolojisi</td><td>585dcxr</td><td></td></tr><tr><td>dikroik kısa geçiren 750 nm</td><td>Chroma Teknolojisi</td><td>T750spxrxt</td><td></td></tr><tr><td>cam alt kültür kabı</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>cam ağırlığı (10 mm x 10 mm boro çubuk)</td><td>Allen Scientific Glass Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>multifoton kısa geçişli emisyon filtresi 680 nm</td><td>Chroma Teknolojisi</td><td>ET680sp-2p8</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

beyin dilimlerinde miyelinasyon görüntüleme için tutarlı anti-stokes raman spektroskopisi (cars) uygulaması

Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS) Application for Imaging Myelination in Brain Slices

Tutarlı anti-Stokes Raman spektroskopisi (CARS), kimyagerler ve fizikçiler tarafından moleküllerin imza titreşimlerinin tutarlı bir sinyalini üretmek için klasik olarak kullanılan bir tekniktir. Bununla birlikte, bu titreşimsel imzalar aynı zamanda beyin gibi anatomik doku içindeki moleküllerin karakteristiğidir ve bu da onu Sinirbilim uygulamaları için giderek daha kullanışlı ve uygulanabilir hale getirir. Örneğin, CARS, lipitleri, bu moleküller içindeki özellikle heyecan verici kimyasal bağlarla ölçebilir ve nörotransmisyonda yer alan miyelin gibi dokunun farklı yönlerinin nicelleştirilmesine izin verebilir. Ek olarak, tipik olarak miyelini ölçmek için kullanılan diğer tekniklerle karşılaştırıldığında, CARS ayrıca immünofloresan tekniklerle uyumlu olacak şekilde ayarlanabilir ve sodyum kanalları veya sinaptik iletimin diğer bileşenleri gibi diğer belirteçlerle birlikte etiketlemeye izin verir. Miyelinasyon değişiklikleri, multipl skleroz gibi demiyelinizan hastalıklarda veya Frajil X Sendromu veya otizm spektrum bozuklukları gibi diğer nörolojik durumlarda doğal olarak önemli bir mekanizmadır. Sonuç olarak, CARS, Nörobilimdeki acil soruları cevaplamak ve birçok farklı nörolojik durumla ilgili altta yatan mekanizmalar için kanıt sağlamak için yenilikçi yollarla kullanılabilir.

CARS mikroskopisinin diğer tekniklere göre en büyük avantajlarından biri, floresan görüntüleme23 ile uyumluluğudur. Şekil 1 , spektrumlarda çok az / hiç örtüşme göstermeyen/hiç örtüşme göstermeyen immünofloresan işaretleyici ile etiketlenmiş Nissl ile karşılaştırıldığında CARS spektrumlarını göstermektedir. Şekil 2 , konfokal mikroskopi ile birlikte CARS için kurulan lazeri göstermektedir. Şekil 3 , biri tek ...

Miyelinasyonu görselleştirmek, sinir sistemini inceleyen birçok araştırmacı için önemli bir hedeftir. CARS, miyelin gibi özel yapıları aydınlatan beyin gibi doku içindeki lipitleri doğal olarak görüntüleyebilen immünofloresan ile uyumlu bir tekniktir.

Beyin Dilimlerinde Miyelinasyon Görüntüleme için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması

Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy (CARS) is a technique classically employed by chemists and physicists to produce a coherent signal of signature ...

Bu teknik, miyelini beyin dokusu bölümlerinde görüntüleyebilir. miyelinasyon, aksiyon potansiyellerinin iletilmesinde önemli bir rol oynar ve miyelini anlamak, beyin fonksiyonlarını anlamamıza yardımcı olacaktır. CARS tekniğinin elektron mikroskobuna göre temel avantajı, CARS'ın hafif bir mikroskopi tekniği olması ve immünohistokimyada kullanıldığı gibi diğer floresan görüntüleme ile kolayca birleştirilebilmesidir.Çeşitli tıbbi durumlar, örneğin multipl skleroz, yaşlanma ve otizm gibi miyelinasyondaki değişikliklerden kaynaklanmaktadır. Bu değişiklikleri anlamak, altta yatan tıbbi durumları anlamamıza yardımcı olacaktır. Bu durumda, CARS lazer görüntü lipitlerine veya özellikle CH2 bağlarına ayarlanır.Beyinde, en büyük lipit kaynağı miyelindir. Bu nedenle, bu beyin dokusunda miyelini görüntülemek için kullanılan bir tekniktir. Lipitlerin görüntülenmesi ilgi çekici olduğunda diğer doku tipleri için aynı yöntemi kullanmak mümkün olmalıdır.CARS lazerinin ayarlanması ve hizalanması önemli uzmanlık gerektirir ve en iyi şekilde bir lazer veya ışık mikroskobu uzmanı tarafından gerçekleştirilir. Dokuları makalede açıklandığı gibi hazırladıktan sonra, hücre cisimciklerini görselleştirmek için nisel ve antikor ortamı için serbest yüzen bölümleri lekeleyin, ardından bölümleri oda sıcaklığında 30 dakika boyunca standart bir laboratuvar çalkalayıcısında inkübe edin. Örnekleri mikroskopa getirmeden önce, CARS lazerini en az bir saat boyunca açın ve ısıtın, ardından pompayı uzamsal olarak üst üste bindirerek CARS lazerini hizalayın ve lazer ışınlarını stoklayın ve iki lazer ışını arasındaki gecikmeyi ayarlayın.İleriye dönük CARS görüntüleme için kondenser optiklerini ve mikroskobun diyaframını renklendirin, ardından dış periskopu mekansal olarak üst üste binen iki lazeri mikroskobun tarama kafası aynalarına ortalayacak şekilde ayarlayın. En iyi ileri CARS taranmamış algılama için. kondenserin renk ayarlı olduğundan emin olun.İmmünofloresan, konfokal görüntüleme ve araba görüntüleme için, floresan görüntüleme için görünür lazerlerle donatılmış bir konfokal mikroskop ekleyerek CARS lazerini hem ileri hem de epi CARS taramasız dedektörlerle donatın. Şimdi, dokuyu kurutmaktan kaçınmak için bölümleri kapak kayması dibi ve PBS olan bir kültür kabına yerleştirin. Ayrıca, dokuyu kapak kaymasına yakın tutmak için bir cam ağırlığı kullanın.Grafik kullanıcı arayüzünü kullanarak, otomobiller ve füze floresan konfokal görüntüleme için görüntü alma parametrelerini ayarlayın. Örneği mikroskop aşamasına yerleştirin, örneği odaklayın ve görüntüleri yakalayın. CARS'ın spektrumları 640 ila 660 nanometre arasında değişmektedir ve CARS sinyallerinin immünofloresan sinyallerle kullanılabileceğini gösteren nisel etiketli immünofloresan işaretleyici ile spektrumlarda örtüşme olmadığı görülmektedir.Nisel, Moğol gerbil ve fare beyinlerinin hücre gövdelerini görselleştirmek için kullanıldı ve CARS'ın görüntülemesi, miyelin kılıfını görselleştirmek için kullanıldı ve bu tekniğin türler arasında kullanılabileceğini gösterdi. Her iki görüntü seti de beyin sapındaki yamuk cismin medial çekirdeğinin bir bölümünü göstermektedir. CARS'ın çözünürlüğü elektron mikroskobundan daha düşüktür ve birkaç yüz nanometre mertebesindedir.Görüntüler, miyelin kalınlığı veya uzunluğu gibi ilgili parametreleri ölçmek için ImageJ gibi standart görüntü analiz yazılımı ile analiz edilebilir.

coherent-anti-stokes-raman-spectroscopy-cars-application-for-imaging

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Üç tek dalga boyu kısa darbeli lazerler bir arada tutarlı bir anti-Stokes Raman saçılması (CARS) ve iki kat rezonans ARABALAR (DR-CARS) oluşturmak için kullanılır. Bu sinyaller arasındaki fark, aksi takdirde tutarlı Raman sinyalleri algılamak için zor zayıf Raman sikliklerin görüntüleme sağlayan gelişmiş hassasiyet sağlar.

Çifte rezonans Tutarlı Anti-Stokes Raman saçılımı (CARS) Biyolojik Yapıların Diferansiyel Görüntüleme

Source: Espinoza, R., et al. Doku teşhisi için fare beyninin gerçek zamanlı, iki renkli uyarılmış Raman saçılma görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2022). Video, fare beyin dokusu bölümlerinin iki renkli uyarılmış Raman saçılması (SRS) görüntülemesini gösterir. İki senkronize lazer ışını, moleküler titreşimleri uyarmak için doku bölümüne yönlendirilir ve bu da ışınlarda nispi bir yoğunluk değişikliğine neden olur. Dokudaki lipitler ve proteinler, lazer ışınlarının farklı frekans çiftleri kullanılarak...

Fare Beyin Dokusunun İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılması Görüntülemesi

Kaynak: McCullagh, EA, et al. Beyin Dilimlerinde Miyelinasyonu Görüntülemek için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2022)Video, kemirgen beyin dokusundaki nöronal mimariyi görselleştirmek için floresan ve Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) görüntülemeyi göstermektedir. Nissl boyama, ribozomal RNA'ya bağlanarak hücre gövdelerini etiketlerken, CARS görüntüleme, lazerle indüklenen sinyaller yoluyla lipit açısından zengin miyelini hedefler.

Fare Beyin Dokusundaki Miyelinli Nöronları Görselleştirmek için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi

molekül bağlarının doğasında titreşim dayalı Tutarlı bir anti-Stokes Raman saçılması (CARS) mikroskopi etiket ücretsiz kimyasal seçici canlı hücre görüntüleme izin verir. safir lazer ve bir OPO lazer: Bu çalışma femtosaniye Ti dayalı standart bir multiphoton lazer tarama mikroskobu tamamlayıcı mikroskopi tekniği uygulanmasını sunar.

Sapphire ve OPO Lazer Bazlı Standart Lazer Tarama Mikroskobu: Bir Ti bir Tutarlı Anti-Stokes Raman saçılması (CARS) Sisteminin Uygulanması

Burada fare serebellum ve miyelin kılıf immünhistokimya tarafından myelination ve remyelination merkezi sinir sisteminde mekanizmaları araştıran için uygun boyama dilim kültürler organotypic hazırlamak için bir yöntem mevcut.

Hazırlık ve Immunostaining Myelinating Organotypic serebellar dilim kültürlerin

Uyarılmış Raman saçılma (SRS) mikroskopisi, spesifik kimyasal moieties'in seçici, etiketsiz görüntülenmesini sağlar ve lipit moleküllerini in vivo olarak görüntülemek için etkili bir şekilde sunulmuştır. Burada, SRS mikroskopi prensibine kısa bir giriş sağlıyoruz ve Caenorhabditis elegans'talipid depolama görüntülemede kullanımı için yöntemleri açıklıyoruz.

Uyarılmış Raman Saçılma Mikroskopisi Kullanılarak Caenorhabditis elegans Lipid Depolama Dinamiklerinin Etiketsiz Görüntülenmesi

Uyarılmış Raman saçılması (SRS) mikroskobu güçlü, tahribatsız ve etiketsiz bir görüntüleme tekniğidir. Ortaya çıkan bir uygulama, protein ve lipit Raman geçişlerinde iki renkli SRS görüntülemenin psödo-hematoksilin ve eozin görüntüleri üretmek için kullanıldığı uyarılmış Raman histolojisidir. Burada, doku teşhisi için gerçek zamanlı, iki renkli SRS görüntüleme için bir protokol gösteriyoruz.

Doku Teşhisi için Fare Beyninin Gerçek Zamanlı, İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi

Bu makale, aynı mikroskop platformuna entegre edilmiş uyarılmış Raman saçılmasının (SRS) ve tutarlı anti-Stokes Raman saçılmasının (CARS) çözünürlüğünü, hassasiyetini ve görüntüleme kontrastlarını doğrudan karşılaştırmaktadır. Sonuçlar, CARS'ın daha iyi bir uzamsal çözünürlüğe sahip olduğunu, SRS'nin daha iyi kontrastlar ve spektral çözünürlük sağladığını ve her iki yöntemin de benzer hassasiyete sahip olduğunu göstermektedir.

Kimyasal Görüntüleme için Hiperspektral Uyarılmış Raman Saçılması ve Tutarlı Anti-Stokes Raman Saçılma Mikroskobunun Doğrudan Karşılaştırılması

Geniş bant uyarılmış Raman saçılma (SRS) mikroskobu ile kimyasal görüntüler elde etmek için bir protokol sunuyoruz. Diferansiyel çok kanallı kilitleme tespiti ile çalışan bir SRS mikroskobuna dayanan protokol, numune hazırlamayı, SRS cihazının ayarlanmasını ve kimyasal olarak heterojen numunelerin farklı bileşenlerini çözmek için kemometriyi açıklar.

Geniş Bant Uyarılmış Raman Saçılma Mikroskobuna Dayalı Multipleks Kimyasal Görüntüleme

Etiketsiz optik görüntüleme modalitelerini birleştiren çok modlu bir platform kullanarak, hücresel dinamikleri ve metabolizmayı görselleştirmek ve ölçmek için bir protokol geliştirdik. Çoklu foton floresansı, ikinci harmonik üretimi ve uyarılmış Raman saçılma mikroskobu yoluyla görüntüleme yoluyla, hücresel ve moleküler çevreye bütünsel bir genel bakış oluşturabiliriz.

Hücresel metabolizmayı incelemek için multimodal optik görüntüleme platformu

Öğrenin, CARS mikroskobisi ile beyin dokusunda miyelin kılıfını görüntülemeyi. Bu yöntem, immünofloresan tekniklerle uyumlu olup, multipl skleroz ve otizm gibi nörolojik hastalıklarda miyelin değişikliklerini incelemeye yardımcı olur.

Beyin Dilimlerinde Miyelinasyon Görüntüleme için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması

Daha fazla video keşfet