Tek Moleküllü Çalışmalarda Çift Optik Cımbız ve Mikroakışkan Kullanımı

Portların borulu şırıngalarla çiftleşmek için bağlanması kritik öneme sahiptir, çünkü doğru yapıldığında, sızıntı yoktur, akış hücresinde kabarcık yoktur ve deneyler aynı akış hücresi kullanılarak bir yıllık bir süre boyunca tekrar tekrar yapılabilir. dikkatli kullanım. Burada, konektörleri akış hücrelerine bağlamak için iki basit yöntem sunulacaktır. Bunlar kolaydır, tekrarlanabilirler ve araştırmacının akış hücresini çok fazla sorun yaşamadan ihtiyaçlarına kolayca uyarlamasına izin verir.

Bu akış hücrelerinin kullanımı, tek molekül deneyleri göz önünde bulundurularak yapıldı. Özellikle, görsel biyokimya dediğimiz şey, ancak mikroakışkanların gerekli olduğu herhangi bir çalışmada ve lamina sıvı akışının kullanılacağı durumlarda kullanılabilirler. Bu nedenle, hataları önlemek için, teknikleri oluşturmak için değerli akış hücreleri kullanmak yerine, önce bir cam slayt veya kapak kayması üzerinde pratik yapmanızı öneririm.

Bu, cam veya PDMS malzemelerinin bunların nasıl ele alınacağını ve boru takarken veya konektörleri yapıştırırken ne kadar kuvvet uygulanacağını bilmesini sağlayacaktır. Bu, bazı konektörleri feda etmeyi gerektirecektir, ancak akış hücrelerinden çok daha ucuzdurlar. Akış hücresini temiz ve düz bir yüzeye yerleştirerek başlayın.

PTFE borusunu forseps ile serbest uçtan üç milimetre tutun ve boruyu porta itin. Kalan bağlantı noktalarının her biri için bu yordamı yineleyin. Giriş portlarını şırınga pompasına ve çıkışı bir atık şişesine bağlayın.

Her cam şırıngayı bir mililitre spektro fotometrik ile doldurun, metanolü derecelendirin ve bir anahtarlama valfine takın. Valfin çıkışının atığa yönlendirildiğinden emin olun ve her hattı 50 mikrolitre metanol ile temizleyin. Çıkış konumunu akış hücresine geçirin ve yüzeyleri ıslatmak ve kabarcıkları ortadan kaldırmak için akış hücresinden saatte 100 mikrolitre akış hızında 800 mikrolitre metanol pompalayın.

Ertesi gün, 800 mikrolitre ultra saf su kullanarak bu işlemi tekrarlayın. Akış hücresi artık kullanıma hazırdır. Prese takılan boru konektörleri kullanılacaksa, yapışkan bandı konektörün bir tarafından dikkatlice çıkarın ve mikroskop slaytındaki deliğin üzerine yerleştirin.

Birkaç saniye boyunca aşağı basın. Kalan konektörler için işlemi tekrarlayın. Ardından akış hücresini temiz ve düz bir yüzeye yerleştirin.

PTFE borusunu serbest uçtan üç milimetre uzakta tutun ve boruyu porttaki deliğe itin. Kalan bağlantı noktalarının her biri için bu yordamı yineleyin. Boruları girişlerden anahtarlama valflerine takın.

Yapıştırma işlemi sırasında akış hücresini ve konektörleri yerinde tutmak için ataşmanı temiz, düz bir yüzeye veya özel yapım bir manifolda yerleştirin. Akış hücresini manifoldun girintili bölümüne yerleştirin, ardından montajın altına az miktarda cam yapıştırıcı yerleştirin ve contayı yerleştirin. Nano portu mikroskop slaytındaki giriş deliklerinden birinin üzerine yerleştirin.

Yanal hareket olmadan yavaşça aşağı doğru itin ve yerinde tutun. Kalan bağlantı noktaları için işlemi yineleyin. Manifoldda kurumaya veya kelepçelenmeye bırakın.

Akış hücresini manifolddan yavaşça çıkarın ve montajların akış hücresindeki giriş portlarıyla iyi hizalandığından emin olun. Mikroskop aşamasına bir akış hücresi yerleştirin ve parmağınızı sıkıca geçiren konektörleri kullanarak boruyu takın. Her cam şırıngayı bir mililitre spektro fotometrik sınıf metanol ile doldurun.

Her şırıngayı bir anahtarlama vanasına takın. Valfin çıkışının atığa yönlendirildiğinden emin olun ve her hattı 50 mikrolitre metanol ile temizleyin. Çıkış konumunu akış hücresine geçirin ve akış hücresinden saatte 100 mikrolitre akış hızında 800 mikrolitre metanol pompalayın.

Ertesi gün, 800 mikrolitre ultra saf su kullanarak bu işlemi tekrarlayın. Güç çıkışının ölçümü burada gösterilmiştir. Lazerden gelen güç çıkışı, lazer kafasını optik düzene takmadan önce ölçülür.

Tuzak hizalaması yapıldıktan sonra, ışın gücü her tuzak için 100 x hedefinden sonra ölçülür. Görüntüler, bir mikrometre floresan boncukların kararlı optik yakalamasını göstermektedir. Burada F sabit bir tuzaktır ve M mobil bir tuzaktır.

Tarama modundaki mobil tuzak, 30 hertz'de küçük veya büyük bir daire boyunca hareket ederken. Akış hücresi içindeki sıvı akışı laminerdir. Şema, kanallar arası difüzyonun bitişik sıvı akışları arasındaki karıştırmanın ana kaynağı olduğunu göstermek için akış hücresini üstten gösterir.

Mavi oklar akış yönünü gösterir ve tek tek akışlar renkli, beyaz, açık gri ve beyazdır. Kanallar arasındaki enine difüzyonun genişleyen bölgeleri kırmızı renkle gösterilir. İç kısım, alt akıştaki floresan etiketli DNA boncuk kompleksleri ve sadece üst akıştaki tamponlarla bitişik sıvı akışlarının 10 kat büyütmede floresan görüntüsünü gösterir.

Üst akıştaki beyaz noktalar CCD kameradan gelen çekim gürültüsüdür. Akış profili ve laminer akış hücreleri paraboliktir. Akış hücresi yandan görüntülenir ve akışın yönü her hücrenin üzerinde gösterilir.

Lineer boncuk hızı, pompa hızından ve sakkaroz konsantrasyonundan etkilenir. Bir boncuk üzerindeki karşıt kuvvet, çözelti viskozitesinden etkilenir. Boncuk çapı, akış altındaki boncuklar üzerindeki kuvveti etkiler.

Bu prosedürü denerken, çalıştığınız alanın temiz olduğundan ve cam yüzeyleri spektrometrik sınıf metanol veya aseton ile temizlediğinizden emin olun. Bu aşamada, şırınga pompanıza yapılmış bir akış hücresine sahip olmalısınız ve artık çözümlerinizi tanıtmaya ve optik cımbız deneylerine başlamaya hazırsınız. Uzun süre kullanılabilen akış hücrelerinin kullanımı, araştırmacıların kuvvetlerin ölçüldüğü, reaksiyonların floresan veya her ikisinin bir kombinasyonu ile görselleştirildiği çeşitli tek moleküllü reaksiyonları araştırmalarını sağlamıştır.