Name: Farelerde Lizofosfatidilkolin Kaynaklı Fokal Demiyelinasyon Modelinin Stably Olarak Kurulmuş İki Noktalı Enjeksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Keşfedin farelerde korpus kallozum hedefli stereotaksik LPC enjeksiyonu ile stabil demiyelinasyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem, multipl skleroz gibi hastalıklarda miyelin kaybı mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı tarafından desteklenmiştir (Hibeler: 82071380, 81873743).

Tüm hayvan prosedürleri, Çin'deki Huazhong Bilim ve Teknoloji Üniversitesi, Tongji Tıp Koleji Hayvan Bakım Komitesi Enstitüsü tarafından onaylandı. Bu çalışmada yetişkin C57BL/6 erkek ve dişi fareler (vahşi tip, WT; 20-25 g; 8-10 haftalık) kullanılmıştır. Fareler ticari kaynaklardan elde edilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu). Fareler, su ve gıda ile sağlanan ad libitum ile spesifik bir patojen içermeyen (SPF) hayvan tesisinde barındırıldı. 22 °C sıcaklık ve %55-%60 bağıl nem standart koşullarında alternatif 12 saatlik aydınlık ve karanlık döngü periyodunda tutuldular.
1. LPC çözeltisi hazırlama
<ol><li>% 10'luk bir LPC çözeltisi oluşturmak ve 500 μL'lik bir santrifüj tüpüne aktarmak için 25 mg LPC tozunu (Malzeme Tablosuna bakınız) 250 μL kloroform ve metanol karışık çözelti (1: 1) ile çözün. NOT: LPC tamamen çözülmemişse, santrifüj tüpünü ultrasonik bir temizleyiciye yerleştirin ve düzgün bir çözelti elde etmek için ~ 1 saat boyunca 40 kHz'de ultrasonikte yapın.</li>
	<li>Çözeltiyi 3 μL / tüpe bölün ve -80 ° C'de saklayın. NOT: Çözelti ~ 2 yıl saklanabilir.</li>
	<li>Ameliyattan önce, çözeltiyi (adım 1.2.) 27 μL% 0.9 NaCl çözeltisi ile seyreltin ve çözeltiyi 37 ° C'de sabit sıcaklıkta bir su banyosunda tutun. NOT: Enjeksiyona başlamadan hemen önce çözeltiyi hazırlayın.</li>
</ol>2. Cerrahi hazırlık
<ol><li>5 μL'lik bir şırıngaya bağlanmak için 32 G, 2 iğne içinde bir iğne kullanın (bkz. Mikrolitre şırınganın engelsiz olduğundan emin olun. Enjeksiyonun hazırlanması için 5 μL LPC çözeltisi çekin.</li>
	<li>Fareyi, yaklaşık 0.3 L / dak hızında% 100 oksijen ile karıştırılmış% 3 izofluran buharlaştırıcısına bağlı bir indüksiyon odasında anestezi yapın.</li>
	<li>Solunum pürüzsüzken ayak parmağını sıkıştırma refleksinin eksikliği ile anestezi derinliğini onaylayın.</li>
	<li>Elektrikli tıraş makinesi kullanarak farenin başını kulaklar arasında tıraş edin. İşlem sırasında kornea kuruluğunu önlemek için yağlayıcı göz damlası uygulayın.</li>
	<li>Ardından, fareyi sırt tarafı yukarı bakacak şekilde stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin (bkz. Malzeme Tablosu) ve kafayı bir burun konisi ve diş kelepçesi ile sabitleyin. Anesteziyi burnundan %1.2-%1.6 izofluran ile sürdürün. NOT: İzofluran konsantrasyonu, farelerin solunum durumuna göre ayarlanabilir.</li>
</ol>3. Cerrahi prosedür
NOT: Hayvanlar tüm prosedürler sırasında bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirilir.
<ol><li>Fareyi iki taraflı kulak çubuklarıyla stereotaksik aparata sabitleyin. Kulak çubuklarının düz olduğundan ve başın yatay ve sabit olduğundan emin olun.</li>
	<li>İyodofor ve ardından dairesel harekette alkol ile birkaç kez silerek kafadaki cildi dezenfekte edin. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta çizgisi boyunca yaklaşık 1,5 cm'lik küçük bir kesiyi kesmek için bir neşter kullanın.</li>
	<li>Kafatasını bregma, lambda ve posterior fontanelle açığa çıkana kadar% 1 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla silin. Şırıngayı stereotaksik aparata yerleştirin. NOT: Hidrojen peroksiti dikkatli kullanın ve çevre dokulara dokunmaktan kaçının.</li>
	<li>Hayvanın başının yatay olarak konumlandırılmasını sağlayın (hem ön hem de arka ve sol ve sağ).<ol><li>Stereotaksik çerçevenin Z ekseni düğmesini, iğne ucu ve kafatası bükülmeden sadece temas edecek şekilde ayarlayın, ardından Z ekseni koordinatını ölçün. Bregma ve posterior fontanelle'nin Z koordinatlarını kontrol edin.</li>
		<li>Kulak çubuğunu, bregma ve posterior fontanelle'nin Z koordinatları arasındaki fark 0,02 mm'den fazla olmayacak şekilde ayarlayın. Ardından, orta hattın sol ve sağ taraflarındaki karşılık gelen konumların Z koordinatlarını ölçmek için aynı yöntemi izleyin. Sol ve sağın aynı seviyede olduğundan emin olmak için kulak çubuğunu ayarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Korpus kallozumu bulun. XYZ kaynağını bregma olarak ayarlayın. NOT: İlk enjeksiyon bölgesi bregmaya 1,0 mm yanal, 2,4 mm derinlikte ve 1,1 mm öndür. İkinci enjeksiyon bölgesi bregmaya 1.0 mm yanal, 2.1 mm derinlikte ve 0.6 mm öndür. Örneğin, bregmanın koordinatı (0,0,0) şeklindedir. (-1, 1.1, X) ve (-1, 0.6, Y) olarak işaretlenmiş karşılık gelen konumun Z koordinatını ölçün. Korpus kallozumun ilk enjeksiyon bölgesi koordinatının (-1, 1.1, -[X + 2.4]) ve ikinci enjeksiyon bölgesinin (-1, 0.6, -[Y + 2.1]) olduğu belirlenebilir.</li>
	<li>Enjeksiyon bölgesi belirlendikten sonra, kafatası üzerinde steril bir işaretleyici ile bir işaret yapın ve koordinatları kaydedin.</li>
	<li>İşaretli bölgeyi kafatası matkabıyla nazikçe delin (bkz. Herhangi bir kanamayı önlemeye özen gösterin.</li>
	<li>İğneyi yavaşça verilen koordinatlara hareket ettirin ve enjeksiyona başlayın. Korpus kallozum demiyelinizasyonunu indüklemek için, her enjeksiyon bölgesine (adım 3.5.) 0.4 μL / dak hızında 2 μL LPC çözeltisi (adım 1.) enjekte edin.</li>
	<li>Enjeksiyondan sonra, iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun. NOT: İki enjeksiyon aralığının 20 dakikadan fazla olmadığından emin olun.</li>
	<li>Cildi 4-0 dikişle dikin ve hayvanın 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin. Analjezikleri postoperatif olarak kurumsal hayvan bakım yönetmeliklerine uygun olarak uygular. NOT: Ötanazi için önerilen süre, deneyin amacına göre belirlenebilir.</li>
</ol>4. Fokal demiyelinizasyon için numune ekstraksiyonu
NOT: Bu adımla ilgili ayrıntılar için lütfen daha önce yayınlanmış olan14 numaralı rapora bakın.
<ol><li>Nötr kırmızı boyayı (bakınız Malzeme Tablosu) fosfat tamponlu salin (PBS) içinde %1'lik bir çözelti içinde çözün.</li>
	<li>fareleri feda etmeden saatler önce (ayrıntılar için önceki referans 10'a bakın), her fare için intraperitoneal enjeksiyonla PBS'ye500 μL% 1 nötr kırmızı boya enjekte edin.</li>
	<li>Kardiyak perfüzyon12'yi, 4 °C'de önceden soğutulmuş 30 mL% 0.1 PBS ile gerçekleştirin.</li>
	<li>Beyni bir beyin kalıbı ile 1 mm'ye dilimleyin (bkz.</li>
	<li>Mikroskop altında nötr kırmızı ile boyanmış lezyonu görselleştirin ve lezyonu ayırın. NOT: Sonraki analizlerin doğruluğunu artırmak için çevredeki normal dokuyu mümkün olduğunca çıkarın. Lezyon dokusu RT-PCR, elektron mikroskobu ve western blot analizleri ile incelenebilir.</li>
</ol>5. Histolojik boyama ve immünofloresan
<ol><li>Histolojik boyama ve immünofloresan12 için, kardiyak perfüzyondan sonra (adım 4.3.), beyin 10'unu çıkarın, gece boyunca% 4 PFA'da (4 ° C'de) sabitleyin ve%30 sakarozda tamamen dehidratasyon.</li>
	<li>Sabit sıcaklıkta (-20 ° C) dondurulmuş bir dilimleyici10 kullanarak 20 mm koronal beyin bölümlerine kesin.</li>
	<li>Luxol hızlı mavi (LFB) boyama, immünofloresan ve batı lekesi10 için dilimleri kullanın.</li>
</ol>

<ol><li>Gaire, B. P., Choi, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+roles+of+lysophospholipid+receptors+in+activation+of+neuroglia+and+their+neuroinflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864(2021).</li>
<li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li>
<li>Dobson, R., Giovannoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis+-+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis - a review.</a> European Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).</li>
<li>Mahad, D. H., Trapp, B. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+mechanisms+in+progressive+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Pathological mechanisms in progressive multiple sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 14 (2), 183-193 (2015).</li>
<li>Filippi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43(2018).</li>
<li>Villoslada, P., Steinman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+targets+and+therapeutics+for+neuroprotection%2C+remyelination+and+repair+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).</li>
<li>Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis pathology.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (3), 028936(2018).</li>
<li>Franklin, R. J., Ffrench-Constant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remyelination+in+the+CNS%3A+From+biology+to+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Remyelination in the CNS: From biology to therapy.</a> Nature Reviews Neuroscience. 9 (11), 839-855 (2008).</li>
<li>Gentile, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+effects+of+exercise+in+experimental+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2197(2019).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+microglial+Hv1+channel+is+associated+with+activation+of+autophagic+pathway+and+ROS+production+in+LPC-induced+demyelination+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Deficiency of microglial Hv1 channel is associated with activation of autophagic pathway and ROS production in LPC-induced demyelination mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 333(2020).</li>
<li>Luo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stable+and+easily+reproducible+model+of+focal+white+matter+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).</li>
<li>Blakemore, W. F., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remyelination+in+experimental+models+of+toxin-induced+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Remyelination in experimental models of toxin-induced demyelination.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 318, 193-212 (2008).</li>
<li>Degaonkar, M. N., Raghunathan, P., Jayasundar, R., Jagannathan, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+relaxation+characteristics+during+preacute+stage+of+lysophosphatidyl+choline-induced+demyelinating+lesion+in+rat+brain%3A+An+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+Imaging%22%5BJournal%5D)">Determination of relaxation characteristics during preacute stage of lysophosphatidyl choline-induced demyelinating lesion in rat brain: An animal model of multiple sclerosis.</a> Magnetic Resonance Imaging. 23 (1), 69-73 (2005).</li>
<li>Baydyuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+the+evolution+of+CNS+remyelinating+lesion+in+mice+with+neutral+red+dye%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Tracking the evolution of CNS remyelinating lesion in mice with neutral red dye.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14290-14299 (2019).</li>
<li>Plemel, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination%3A+A+primary+lipid+disrupting+myelinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of lysophosphatidylcholine-induced demyelination: A primary lipid disrupting myelinopathy.</a> Glia. 66 (2), 327-347 (2018).</li>
<li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+oligodendrocyte+differentiation+by+Olig2+and+Sox10%3A+evidence+for+reciprocal+interactions+and+dosage-dependent+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Induction of oligodendrocyte differentiation by Olig2 and Sox10: evidence for reciprocal interactions and dosage-dependent mechanisms.</a> Developmental Biology. 302 (2), 683-693 (2007).</li>
<li>Kassis, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+expression+in+white+matter+oligodendrocytes+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase expression in white matter oligodendrocytes after stroke.</a> Neurochemistry International. 77, 17-23 (2014).</li>
<li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morris+water+maze%3A+Procedures+for+assessing+spatial+and+related+forms+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Morris water maze: Procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory.</a> Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).</li>
<li>Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+focal+EAE+model+of+cortical+demyelination%3A+multiple+sclerosis-like+lesions+with+rapid+resolution+of+inflammation+and+extensive+remyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination.</a> Brain. 129, Pt 8 1972-1983 (2006).</li>
<li>Karussis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnosis+of+multiple+sclerosis+and+the+various+related+demyelinating+syndromes%3A+A+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The diagnosis of multiple sclerosis and the various related demyelinating syndromes: A critical review.</a> Journal of Autoimmunity. 48-49, 134-142 (2014).</li>
<li>Kamma, E., Lasisi, W., Libner, C., Ng, H. S., Plemel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+macrophages+in+progressive+multiple+sclerosis%3A+Relationship+to+neurodegeneration+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Central nervous system macrophages in progressive multiple sclerosis: Relationship to neurodegeneration and therapeutics.</a> Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 45(2022).</li>
<li>Kutzelnigg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+demyelination+and+diffuse+white+matter+injury+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis.</a> Brain. 128, Pt 11 2705-2712 (2005).</li>
<li>Lassmann, H., Bradl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+Experimental+models+and+reality%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: Experimental models and reality).</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 223-244 (2017).</li>
<li>Lamport, A. C., Chedrawe, M., Nichols, M., Robertson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+accelerates+remyelination+after+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination+in+the+corpus+callosum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis accelerates remyelination after lysophosphatidylcholine-induced demyelination in the corpus callosum.</a> Journal of Neuroimmunology. 334, 576995(2019).</li>
<li>Torkildsen, O., Brunborg, L. A., Myhr, K. M., Bo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cuprizone+model+for+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurologica+Scandinavica.+Supplementum%22%5BJournal%5D)">The cuprizone model for demyelination.</a> Acta Neurologica Scandinavica. Supplementum. 188, 72-76 (2008).</li>
<li>Zhan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cuprizone+model%3A+Dos+and+do+nots%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The cuprizone model: Dos and do nots.</a> Cells. 9 (4), 843(2020).</li>
<li>Torre-Fuentes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+demyelination+and+remyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologia+%28Barcelona%2C+Spain%29%22%5BJournal%5D)">Experimental models of demyelination and remyelination.</a> Neurologia (Barcelona, Spain). 35 (1), 32-39 (2020).</li>
<li>Merkler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein-induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+common+marmoset+reflects+the+immunopathology+of+pattern+II+multiple+sclerosis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+Journal%22%5BJournal%5D)">Myelin oligodendrocyte glycoprotein-induced experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset reflects the immunopathology of pattern II multiple sclerosis lesions.</a> Multiple Sclerosis Journal. 12 (4), 369-374 (2006).</li>
<li>Ucal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+cortical+demyelination+of+both+hemispheres+can+be+induced+by+injection+of+pro-inflammatory+cytokines+via+an+implanted+catheter+in+the+cortex+of+MOG-immunized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Widespread cortical demyelination of both hemispheres can be induced by injection of pro-inflammatory cytokines via an implanted catheter in the cortex of MOG-immunized rats.</a> Experimental Neurology. 294, 32-44 (2017).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

MSS'nin kronik demiyelinizan bir hastalığı olan MS, genç erişkinlerde nörolojik disfonksiyonun en yaygın nedenlerinden biridir20. Klinik olarak, MS hastalarının yaklaşık% 60-80'i, sekonder-ilerleyici bir MS 21,22 gelişmeden önce nüks ve remisyon döngüsünü yaşar ve sonunda kümülatif hareket bozukluklarına ve zamanla bilişsel eksikliklere yol açar23. Şu anda, tek bir deneysel model, hastalığın klinik, patolojik veya i...

Reseptör aracılı lizofosfolipid sinyalizasyonu, hemen hemen tüm organ sistemlerinin çeşitli fizyolojik süreçlerini içerir1. Merkezi sinir sisteminde (MSS), bu sinyal multipl skleroz (MS) gibi otoimmün nörolojik hastalıkların patojenitelerinde kritik bir rol oynar. Multipl skleroz, patolojik demiyelinasyon ve inflamatuar yanıt ile karakterize, nörolojik disfonksiyon ve kognitif bozukluğa neden olan kronik immün aracılı bir hastalıktır 2,3. Erken hastalık sırasında sürekli nüks ve remitting sonrasında, çoğu hasta sonunda beyinde geri dönüşü olmayan hasara ve sonuçta sakatlığa neden olabilecek ikincil-ilerleyici aşamaya ilerler4. İkincil-ilerleyici seyrin patolojik özelliğinin, enflamatuar lezyonların neden olduğu demiyelinizan plaklar olduğuna inanılmaktadır5. MS için mevcut tedaviler nüks riskini önemli ölçüde azaltabilir. Bununla birlikte, ilerleyici MS6'nın neden olduğu uzun süreli demiyelinizan hasar için hala etkili bir tedavi yoktur. Bu nedenle, beyaz cevher dejenerasyonuna odaklanan preklinik terapötikleri incelemek için istikrarlı bir şekilde kurulmuş ve kolayca çoğaltılabilir bir model gereklidir.
Demiyelinasyon ve remiyelinasyon, multipl skleroz gelişiminde iki önemli patolojik süreçtir. Demiyelinasyon, proinflamatuar fenotipler7 ile mikroglia tarafından indüklenen aksonların etrafındaki miyelin kılıfının kaybıdır ve sinir uyarılarının yavaş iletilmesine yol açarak nöron kaybına ve nörolojik bozukluklara neden olur. Remiyelinasyon, oligodendrositlerin aracılık ettiği, bozuklukların nörodejenerasyona ve bilişsel bozulmaya yol açabileceği endojen bir onarım yanıtıdır8. Enflamatuar yanıt, hem miyelin hasarının derecesini hem de onarımını etkileyen tüm süreç için çok önemlidir.
Bu nedenle, MS'in karmaşıklığı nedeniyle, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), toksik-demiyelinizan modeller, cuprizon (CPZ) ve lizofosfatidilkolin (LPC)9 dahil olmak üzere in vivo demiyelinizan lezyonları taklit etmek için çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. . LPC, inflamasyonla ilişkili endojen bir lizofosfolipiddir ve miyelin lipitlerine toksisite ile hızlı hasara neden olabilir ve fokal demiyelinizasyona yol açabilir. Önceki raporlara ve araştırmalara dayanarak10,11, bazı modifikasyonlarla birlikte iki noktalı enjeksiyonun ayrıntılı bir protokolü sağlanmıştır. Genel olarak, klasik tek noktalı LPC enjeksiyon modeli sadece enjeksiyon bölgesinde lokal demiyelinasyon üretir ve sıklıkla spontan remiyelinasyon12,13 eşlik eder. Bununla birlikte, iki noktalı enjeksiyon LPC modeli, LPC'nin fare korpus kallozumunda doğrudan demiyelinasyonu indükleyebileceğini ve az miktarda miyelin rejenerasyonu ile daha dayanıklı demiyelinizasyona neden olabileceğini gösterebilir.

<table><tbody><tr><td>Yumurta sarısından L-&alfa;-Lizofosfatidilkolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4129-25MG</td><td></td></tr><tr><td>32 gauge İğne</td><td>HAMILTON</td><td>7762-05</td><td></td></tr><tr><td>10 &mu; l şırınga</td><td>HAMILTON</td><td>80014</td><td></td></tr><tr><td>yüksek hızlı kafatası matkap</td><td>güçlü, kore</td><td>strong204</td><td></td></tr><tr><td>matkap</td><td>Hager & Meisinger, Almanya&nbsp;</td><td>REF 500 104 001 001 005</td><td></td></tr><tr><td>Matrx Hayvan Anestezisi Vantilatörü</td><td>MIDMARK</td><td>VMR</td><td></td></tr><tr><td>Fare için Taşınabilir Stereotaksik Alet</td><td>Ödül</td><td>68507</td><td></td></tr><tr><td>Mikro şırınga</td><td>Ödülü</td><td>KDS LEGATO 130</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane&nbsp;</td><td>VETEASY</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Servicebio</td><td>G1101</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tampon</td><td>BOSTER</td><td>PYG0021</td><td></td></tr><tr><td>LuxoL hızlı bLue</td><td>Servicebio</td><td>G1030-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Sütür</td><td>FUSUNPHARMA</td><td>20152021225</td><td></td></tr><tr><td>Beyin kalıbı</td><td>Ödül</td><td>68707</td><td></td></tr><tr><td>Elektron mikroskobu sabitleyici</td><td>Servicebio</td><td>G1102-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Nötr kırmızı (C.I. 50040), mikroskopi için Certistain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.01376</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Miyelin Temel Protein Antikoru&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>#AB5864</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GST-P pAb</td><td>MBL</td> <td># 311</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 Monoklonal Antikor (SolA15)</td> <td>Thermo Fisher&nbsp; Bilimsel</td><td>14-5698-95</td><td></td></tr><tr><td>Beta Aktin Monoklonal Antikor</td><td>Proteintech</td><td>66009-1-Ig&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Miyelin Temel Protein Poliklonal Antikor</td><td>Proteintech</td><td>10458-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>OLIG2 Poliklonal Antikor</td><td>Proteintech</td><td>13999-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488&nbsp; AffiniPure&nbsp; Eşek anti-Tavşan&nbsp; IgG (H + L)</td> <td>YEASEN</td><td>34206ES60</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 AffiniPure Eşek Anti-Sıçan IgG (H + L)&nbsp;</td><td>YEASEN</td><td>34412ES60</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594&nbsp; AffiniPure Eşek Anti-Tavşan IgG (H + L)&nbsp;</td><td>YEASEN</td><td>34212ES60</td><td></td></tr><tr><td>HRP Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L)</td> <td>abclonal</td><td>AS014</td><td></td></tr><tr><td>HRP Keçi Anti-Fare IgG (H + L) &nbsp;</td><td>abklonal</td><td>AS003</td><td></td></tr><tr><td>Yetişkin C57BL / 6 erkek ve dişi fareler</td><td>Hunan SJA Laboratuvar Hayvanları Co, Ltd</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde lizofosfatidilkolin kaynaklı fokal demiyelinasyon modelinin stably olarak kurulmuş İki noktalı enjeksiyonu

A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice

Reseptör aracılı lizofosfolipid sinyalizasyonu, başta multipl skleroz (MS) olmak üzere çeşitli nörolojik hastalıkların patofizyolojisine katkıda bulunur. Lizofosfatidilkolin (LPC), inflamasyonla ilişkili endojen bir lizofosfolipiddir ve miyelin lipitlerine toksisite ile hızlı hasara neden olarak fokal demiyelinizasyona yol açabilir. Burada, stereotaktik iki noktalı LPC enjeksiyonu için doğrudan ciddi demiyelinasyona neden olabilecek ve deneysel demiyelinasyon hasarını cerrahi prosedürle farelerde hızlı ve istikrarlı bir şekilde çoğaltabilecek ayrıntılı bir protokol sunulmaktadır. Bu nedenle, bu model demiyelinasyon hastalıkları, özellikle MS ile oldukça ilgilidir ve klinik olarak ilgili araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunabilir. Ayrıca, LPC enjekte edilen farelerin korpus kallozumunda demiyelinizasyonun zaman seyrini göstermek için immünofloresan ve Luxol hızlı mavi boyama yöntemleri kullanılmıştır. Ek olarak, modelleme sonrası farelerin bilişsel işlevlerini değerlendirmek için davranışsal yöntem kullanılmıştır. Genel olarak, stereotaksik bir çerçeve yoluyla lizofosfatidilkolinin iki noktalı enjeksiyonu, daha fazla çalışma için farelerde bir demiyelinasyon modeli oluşturmak için kararlı ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.

LPC'nin iki noktalı enjeksiyonu daha dayanıklı bir demiyelinizasyon ile sonuçlandı LPC esas olarak miyelin toksisitesi ve akson bütünlüğünün bölünmesi ile hızlı hasara yol açar15. Enjeksiyon günü 0. gün olarak kabul edildi. Fareler 10-28 günlük bir süre boyunca tutuldu (10 dpi ve 28 dpi). Luxol hızlı mavi (LFB) boyama10, bu zaman noktalarında farelerde demiyelinizasyon alanını değerlendirmek için kullanıldı. İki noktalı enjeksiyon modelinde, sahte gruba ...

Mevcut protokol, farelerde stabil ve tekrarlanabilir bir demiyelinasyon modeli oluşturmak için stereotaksik bir çerçeve yoluyla iki noktalı bir lizofosfatidilkolin enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Farelerde Lizofosfatidilkolin Kaynaklı Fokal Demiyelinasyon Modelinin Stably Olarak Kurulmuş İki Noktalı Enjeksiyonu

Receptor-mediated lysophospholipid signaling contributes to the pathophysiology of diverse neurological diseases, especially multiple sclerosis (MS). ...

Modelimiz demiyelinizasyon hastalıkları, özellikle multipl skleroz ile oldukça ilgilidir. Ve klinik olarak ilgili araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunabilir. Cerrahi prosedürle farelerde hızlı ve istikrarlı bir şekilde doğrudan ciddi demiyelinizasyona neden olabilecek ayrıntılı bir protokoldür.Bu tekniği ilk kez denerken, sabırlı olun ve koordinatların doğru olduğundan emin olun. 32 gauge'lik bir iğneyi 5 mikrolitrelik bir şırıngaya bağlayarak başlayın. Enjeksiyonun hazırlanması için 5 mikrolitre LPC çözeltisi çekin.Daha sonra, solunum pürüzsüzken ayak parmağı sıkışma refleksinin eksikliği ile farenin anestezi derinliğini onaylayın. Fareyi stereotaksik çerçeveye sırt tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve kafayı bir burun konisi ve diş kelepçesi ile sabitleyin. Fareyi iki taraflı kulak çubuklarıyla stereotaksik aparata sabitleyin.Kulak çubuklarının düz olduğundan ve başın yatay ve sabit olduğundan emin olun. İyodofor ile silerek baş derisini dezenfekte edin. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta çizgisi boyunca yaklaşık 1,5 santimetreye kadar küçük bir kesi kesmek için neşter kullanın.Bregma, lambda ve posterior fontanelle açığa çıkana kadar% 1 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla beceriyi silin. Şırıngayı stereotaksik aparata yerleştirin. Hayvanın başının yatay olarak konumlandırıldığından emin olun ve korpus kallozumu bulun.Enjeksiyon bölgesi belirlendikten sonra, koordinatları kaydedin ve kafatası üzerinde bir işaretleyici ile bir işaret yapın. İşaretli bölgeyi bir kafatası matkabı ile nazikçe delin. Herhangi bir kanamayı önlemeye özen gösterin.İğneyi yavaşça verilen koordinatlara hareket ettirin. Korpus kallozum demiyelinizasyonunu indüklemek için, her enjeksiyon bölgesine dakikada 0.4 mikrolitre hızında 2 mikrolitre LPC çözeltisi enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.Son olarak, cildi 4-0 dikişle dikin ve hayvanın 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin. Temsili görüntü, Luxol hızlı mavi boyama yoluyla beyaz madde lejyonlarının tespitini göstermektedir. Sonuçlardan, korpus kallozumun stabil demiyelinizasyonu enjeksiyondan 10 ve 28 gün sonra görülebilir.Demiyelinasyon alanının farklı zaman noktalarında nicelleştirilmesi burada gösterilmiştir. İmmünofloresan boyama yoluyla bozulmuş miyelin bazik proteini, LPC enjekte edilen grupta, enjeksiyondan 10 gün sonra kayda değer bir dMBP artışı gözlenmiştir, bu da korpus kallozumda miyelin kaybını temsil eder. Miyelin bazik proteininin veya MBP'nin batı leke analizi, LPC enjeksiyonundan sonra önemli miktarda MBP kaybı gösterdi.Beta-aktin, temel ifadeyi ölçmek için yükleme kontrolü olarak kullanıldı. Elektron mikroskobu görüntüleri, sahte grup ve LPC enjekte edilen grubun korpus kallozumundaki miyelinli ultrayapıyı doğrulamaktadır. GST-pi, oligodendrosit öncü hücresinin veya OPC, farklılaşma olgunlaşmasının belirtecidir.10 günlük LPC enjeksiyonundan sonra, GST-pi sahte gruba kıyasla azaldı. Aynı zamanda, oligodendrositlerin proliferasyon kabiliyeti, oligodendrositlerin çoğalma oranı ve toplam oligodendrosit soy hücreleri ile yansıtılabilir. Daha yüksek oran, enjeksiyondan 10 gün sonra oligodendrositlerin daha fazla çoğalmasını temsil eder.Temsili görüntüler, farelerin yüzme yolunu her grupta, platformun varlığında ve platformu kaldırdıktan sonra göstermektedir. Sonuçlar, iki noktalı LPC enjeksiyon modelinde demiyelinli farelerin uzamsal hafızasının önemli ölçüde bozulduğunu göstermektedir. Bu prosedürü denerken, enjeksiyon hızının doğru olduğundan emin olun ve iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.

a-stably-established-two-point-injection-lysophosphatidylcholine

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Video, miyelin oligodendrosit glikoproteinleri ve inaktive edilmiş Mycobacterium tuberculosis'in bir kombinasyonunu enjekte ederek bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelit indüksiyonunu göstermektedir. Model, araştırmacıların hastalık mekanizmalarını incelemelerine ve terapötik müdahaleleri test etmelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Bu video, anestezi uygulanmış bir hayvanda optik sinire cerrahi olarak erişme ve fokal demiyelinizasyonu indüklemek için hassas bir şekilde lizolesitin verme prosedürünü göstererek daha fazla çalışma için nöropatolojik koşullar yaratır.

Lisolesitin kullanılarak optik sinirde lokal demiyelinizasyonun indüklenmesi

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

Bu video, iki noktalı Lizofosfatidilkolin (LPC) enjeksiyonu kullanılarak bir fokal demiyelinizasyon fare modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir farenin kafatası açığa çıkar. Enjeksiyon koordinatları belirlenir ve hedeflenen bölgelerde LPC enjeksiyonlarını mümkün kılmak için bir delik açılır. LPC, inflamasyon yoluyla nöronların fokal demiyelinizasyonunu indüklerken, iki noktalı bir enjeksiyon sürdürülebilirliğini sağlar.

İki noktalı lizofosfatidilkolin enjeksiyonu yoluyla fokal demiyelinizasyon fare modelinin oluşturulması

Bu video, lizolesitin enjeksiyonları kullanılarak fare omurilik nöronlarında demiyelinizasyonu indükleme yöntemini ve ardından oligodendrosit öncü hücrelerinin göçü ve farklılaşması yoluyla remiyelinasyonu göstermektedir. İşlem, nöronal sinyal iletimini bozar ve daha sonra yavaş yavaş geri yükler.

Fare Omurilik Nöronlarının Demiyelinizasyonu ve Remiyelinasyonu

Kaynak: Wang, X. et. al., Merkezi Sinir Sistemi Üzerine In Vivo Remiyelinasyon Araştırması için Ozmotik Pompa Tabanlı İlaç Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, demiyelinize bir fare modelinde ozmotik bir pompa kullanarak nöroterapötik ilaçların verilme yöntemini göstermektedir. Kontrollü ilaç salınımı, korpus kallozumdaki miyelin üreten hücreleri aktive ederek remiyelinizasyonu teşvik eder.

 Demiyelinize Fare Modelinde Ozmotik Pompa Bazlı Nöroterapötik İlaç Dağıtımı

Fare omuriliği görüntülenmesi için yeni bir ex vivo hazırlık. Bu protokol, omurilik boyunca canlı hücresel etkileşimlerin iki foton görüntüleme için izin verir.

Fare Omurilik Hücresel Dynamics İki foton Görüntüleme

Demiyelinizan hastalıklar, lizolesitinin CNS'ye fokal olarak uygulanmasıyla hayvanlarda modellenebilir. Fare omuriliğine tek bir lizolesitin enjeksiyonu, zamanla kendiliğinden onarılan bir lezyon oluşturur. Amaç, de- ve remiyelinizasyon ile ilgili faktörleri incelemek ve onarımı geliştirmek için ajanları test etmektir.

Lisolesitin Odak Enjeksiyon Deneysel Demyelizasyon ve Kemirgen Omurilik remiyelinizasyon

Burada sunulan protokol, yetişkin erkek Dark Agouti sıçanlarında her iki kortikal yarımkürenin yaygın bir gri madde demyelinasyonunun çoğaltılmasına izin verir. Yöntem, bir kateterin intraserebral implantasyonu, miyelin oligodendrosit glikoproteine karşı subklinik bağışıklama ve implante kateterden pro-enflamatuar sitokin karışımının intraserebral enjeksiyonundan oluşur.

Pro-enflamatuar Sitokinlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile İndüklenen Yaygın Serebral Kortikal Demiyelinasyonun Sıçan Modeli

Demiyelinasyon çoklu santral sinir sistemi hastalıklarında görülür. Remiyelinizan ilaç testi için güvenilir bir in vivo ilaç dağıtım tekniği gereklidir. Bu protokol, uzun süreli ilacın doğrudan beyin parankimine verilmesine izin veren ve remiyelinasyon araştırmalarında geniş bir uygulama ile ilaç biyoyararlanımını geliştiren ozmotik pompa bazlı bir yöntemi tanımlamaktadır.

Merkezi Sinir Sistemi Üzerine In Vivo Remiyelinasyon Araştırması için Ozmotik Pompa Bazlı İlaç Dağıtımı

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Keşfedin farelerde korpus kallozum hedefli stereotaksik LPC enjeksiyonu ile stabil demiyelinasyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem, multipl skleroz gibi hastalıklarda miyelin kaybı mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için kullanılır.

Farelerde Lizofosfatidilkolin Kaynaklı Fokal Demiyelinasyon Modelinin Stably Olarak Kurulmuş İki Noktalı Enjeksiyonu

Daha fazla video keşfet