Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

Bu protokol, kökeni amigdala olan bir epilepsi modeli önerdi. Mesial temporal lob yapılarının araştırılmasına zemin hazırlar. Bu model deneyin temeli olarak yorumlanabilir.

Bu protokol düşük maliyetli ve verimli bir yöntem olduğundan, laboratuvarların çoğunda hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızda yüksek lisans yapan Yongchang Lu olacak. 76.2 mikrometre ayı çapına sahip iki santimetre uzunluğundaki Teflon kaplı tungsten tel parçalarından başlayarak önceden hazırlanmış bileşenleri toplayarak başlayın.

Aynı uzunlukta 127 mikrometre ayı çapına sahip bir gümüş tel parçası ve iki x iki ölçülü ip pimlerinden oluşan bir set. İzolasyon kaplamasının beş milimetresini çıkarmak için her tungsten telin bir ucunu yakmak için bir çakmak kullanın. Ultra ince çok telli telin bir bölümünü soyun.

Alttan üst uca doğru açın, burada üste doğru devam ederek karanlık olmaya başlar. Bu süper ince teli ve tungsten teli, bir ucunu sıkıştırarak ve diğerini hafifçe bükerek birleştirin ve iki malzemenin kolayca birbirine dolanması sağlansın. Tellerin sıkıca sarıldığından emin olmak için yavaşça çekin ve fazla süper ince teli kesin.

İşlem boyunca tungsten telini düz tutmaya çalışın. Halat pimini, pimlerin uzun tarafı dışa bakacak şekilde kaynak tablasındaki kelepçeye sabitleyin. Bazı lehim macunlarını almak ve pimlere uygulamak için şırınga iğnesini kullanın.

Kaynak torcunu 320 santigrat dereceye ısıtın. Meşale ucu ile kurşunsuz bir miktar kalay teli eritin ve sürün. Tungsten telinin üst ucunu ip pimlerinin bir iğnesiyle örtüşürün ve tungsten telini pime bağlamak için meşale üzerindeki lehimi kullanın.

Halat pimine başka bir tungsten tel ve başka bir gümüş teli aynı şekilde kaynaklayın, böylece her tel bir iğneye karşılık gelir. Isı ile büzülebilen iki tüpü tungsten telinin üst ucundan biraz daha uzun kesin. İletken parçanın tüpün içinde tamamen kaplanmasını sağlamak için iki tungsten telin lehim eklemine koyun, böylece iki tungsten telin devresi seri olarak yerleştirilmez.

Elektrodu kaynak masası kelepçesinden çıkarın ve büzülebilir tüpü ısıtırken elektrotların şeklini kaybetmesi kolay olduğundan elektrodu büyük penselerle yavaşça tutun. Biraz daha fazla kuvvete sahip iyi bir termal iletkenlik kelepçesi kullanın. Hava kanalını açın ve 320 santigrat derece sıcaklığa ulaşana kadar ısıtın.

Isı ile büzülebilen tüpü sıkılana kadar birkaç saniye üfleyin. Elektrodu sıcak eriyik yapıştırıcı ile güçlendirin. İki tungsten teli tutun ve uçlarını birbirinden ayrı tutarak bir araya getirin.

Bükülmüş tungsten telleri yaklaşık 10 milimetre uzunluğa kadar kesin, böylece uçlardaki ayırma 0,5 milimetreyi geçmez. Halat pimlerinin kaynaksız tarafına multi-metrenin bir çubuğunu yerleştirerek ve tungsten telinin veya gümüş telin ucuna diğer çubuğa hafifçe dokunarak elektrotları bir multi-metre ile kontrol edin. Devrenin pürüzsüz olup olmadığını kontrol etme.

Çizgilerin seri olarak yerleştirilmediğinden emin olun. İçindeki metal teli açığa çıkarmak için her iki uçtaki yalıtım derisinin beş milimetresini soyun. Her marş teline bir parça ısı ile büzülebilir boru ekleyin.

Her kabloyu EEG aygıt konektörü fişi ile kaynaklayın. Isıl büzülebilir tüpü sıcak hava ile küçültün. Her rotor teline bir parça ısı ile büzülebilir tüp ekleyin.

Kırmızı ve turuncu tellerin iletken parçalarını birbirine vidalayın ve ip pimine uyacak şekilde bir bağlantıya ve başlığa kaynak yapın. Başlıktaki diğer iki teli her bir bağlantıya kaynaklayın. Fareyi tartın.

Fare tamamen uyuşturulduğunda, saçları gözden kulak bölgesine tıraş ederek tıraş edin. Fareyi stereotaksik çerçeveye sabitleyin. Ön üst dişleri kesici çubuğa yerleştirin ve her iki kulak çubuğunu da kulaklara eşit derinlikte yerleştirin.

Ameliyat sırasında parlak ışığın neden olduğu kuruluk ve körlüğü önlemek için gözlere eritromisin göz merhemi uygulayın. Cerrahi bölgeyi alternatif iyodofor çubukları ve% 75 alkol ile en az üç kez dezenfekte edin. Cerrahi alanı tamamen açığa çıkarmak için uzunlamasına bir kesi yapın veya ön ve arka fontaneller ve elektrot implante bölgelerini açığa çıkardığı sürece üçgen bir kesi yapın.

Küçük bir pamuk parçasını bir topun içine yuvarlayın ve% 3 hidrojen peroksit ile ıslatın. Ön ve arka fontanel görülene kadar açıkta kalan bölgeyi küçük bir pamuk topu ile hafifçe ovalayarak kafatasına bağlı yumuşak dokuyu çıkarın. Ön ve arka yükseklikleri, ön ve arka fontanel yatay olacak şekilde ayarlayın.

Ön fontanelin konumunun eksenlerin kökeni olduğunu düşünün. Sol serebellar kafatasına paslanmaz çelik bir vida sabitleyin. Amigdala çırasının koordinatlarını bregma'dan ayarlayın ve stereotaksik cihazı bu noktayı bulmak ve işaretlemek için ayarlayın.

0,5 milimetre çapında kafatası matkabıyla yürüyüş noktasında bir delik açın. Elektrotları stereotaksik cihazın konumlandırma çubuğuna sabitleyin. Elektrodu dikey olarak deliğin üzerine yerleştirin ve konumu yavaşça eksi 4,9 milimetreye bırakın.

Gümüş teli vidanın etrafına üç kez sarın. Çalışma sırasında elektrot gövdesini sallamamaya özen göstermek. Diş çimentosunu karıştırın ve elektrot ve kafatası yüzeyine nazikçe uygulayın.

Diş çimentosu sertleştiğinde, sabit elektrodu çevreleyen çimento bir koniye dönüşene kadar dışını değiştirin. Ardından elektrodu stereotaksik cihazdan serbest bırakın. Fareyi çıkarın ve tekrar kafese yerleştirin.

Diğer farelerden ayrı tutmak. Fareyi, elektrodu farenin kafasına ve EEG cihazına bağlayan kaygan kablolarla özelleştirilmiş bir kutuya koyun. Kabloyu kutu kapağındaki bir delikten geçirin ve farenin serbestçe hareket etmesini sağlamak için kutuda kalan uzunluğu ayarlayın.

EEG cihazını açın ve düzgün çalıştığından emin olun. Stimülatör parametrelerini, 10 stimülasyon döngüsü için bir saniyelik bir tren süresi boyunca 60 hertz'de bir milisaniyelik monofazik kare dalga darbeleri verecek şekilde ayarlayın. İlk stimülasyon için 50 mikroamperlik bir akım yoğunluğu ile başlayın.

EEG'yi, yüksek frekanslı ani artışlarla karakterize edilen deşarj sonrası için izleyin. Akıntı gözlenmezse, bir sonraki uyarana 25 mikroamper ekleyin ve bir sonraki deşarj gözlenene ve beş saniye sürene kadar her 10 dakikada bir bu işleme devam edin. Fareyi her 15 dakikada bir, günde en fazla 20 kez belirlenen akım yoğunluğuyla uyarın.

Uyarana verilen davranışsal tepkileri izleyin. Elektrot implantasyon ameliyatı altı sağlıklı yetişkin erkek C57 siyah 6 fareye ve elektriksel stimülasyon ameliyattan iki hafta sonra yapıldı. Davranışsal nöbet seviyesi, uyaran sayısının artmasıyla birlikte giderek artmış ve tam çıra için gerekli uyaran sayısı kaydedilmiştir.

Taburcu olduktan sonra EEG beş ila 15 saniye sürdü. Daha sonra intrakraniyal spontan akıntılar yoğunlaştı ve davranışsal semptomlar başladı. Nöbet süresi genellikle bir dakikadan azdı ve bu da apne ile sonuçlanan ciddi konvülsiyonlardan ölüm riskini azaltır.

Beyin dokusundaki c-Fos ekspresyonu, tam çıralamadan iki saat sonra immünohistokimya ile tespit edildi. Sonuçlar, ipsilateral amigdaladaki c-Fos ekspresyonunun, bu modelin fizibilitesini doğrulayarak önemli ölçüde arttığını göstermektedir. Tungsten tel uçlarının ayrılması yarım milimetreyi geçmemelidir, aksi takdirde beyin deliğinden geçmez.

Elektrotun uzunluğu çok uzun olmamalıdır, aksi takdirde farelerin aktivitesini etkiler.