Name: Standartlaştırılmış Sıçan Koroner Halka Hazırlama ve Damar Çapı Boyunca Dinamik Gerilim Değişikliklerinin Gerçek Zamanlı Kaydı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Öğrenin sıçan koroner arterlerinde damar reaktivitesini ölçmek için wire myograf tekniğini. Bu yöntem kardiyovasküler hastalıkların mekanizmalarını keşfetmeye ve tedavisine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Sichuan İl Bilim ve Teknoloji Planı'nın Anahtar Ar-Ge projesi (2022YFS0438), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82104533), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (2020M683273) ve Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü (2021YJ0175) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan protokolü, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Yönetim Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı (Kayıt No. 2021-11). Bu çalışmada erkek Sprague Dawley (SD) sıçanları (260-300 g, 8-10 haftalık) kullanıldı. Sıçanlar bir hayvan odasında tutuldu ve deney sırasında içmek ve yemek için özgürdüler.
1. Çözelti hazırlama
<ol><li>118 mM NaCl, 4.7 mM K+, 2.5 mM CaCl 2, 1.2 mM KH 2 PO4, 1.2 mM MgCl 2∙6H2 O,25 mM NaHCO3, 11 mM D-glikoz ve 5 mM HEKES'i çözerek fizyolojik tuz çözeltisi (PSS) hazırlayın (bkz.</li>
	<li>58 mM NaCl, 60 mM K+, 2,5 mM CaCl 2, 1,2 mM KH 2 PO4,1,2mM MgCl 2∙6H2 O,25mM NaHCO3, 11 mM D-glikoz ve 5 mM HEPES'i çözerek yüksek K+ tuz çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>Yukarıdaki iki çözeltiyi ve kabarcığı% 95 O2 ve% 5 CO2'lik karışık bir gazla doyurun. Bu arada, çözeltinin pH değerlerini 2 mM NaOH ile 7,38 ila 7,42 arasında tutun. NOT: Çözelti hazırlama hakkında ayrıntılı bilgi için lütfen referans15'e bakın.</li>
</ol>2. Sıçan koroner arter diseksiyonu
<ol><li>Sıçanı% 2 izofluran inhalasyonu ile anestezi yapın. Ayak parmağınızı sıkıştırarak derin anesteziyi onaylayın ve gerekirse ek anestezikler uygulayın. Ardından, daha önce yayınlanmış bir rapor12'yi takiben kalbi taşınabilir ameliyat masasında ortaya çıkarmak için derhal göğüs boşluğunu açın.</li>
	<li>Kalbi ayırdıktan ve çıkardıktan sonra, tıbbi plastik forsepslerle hafifçe sıkarak kalan kanı tüm kalp odalarından boşaltın. Önceden işlenmiş kalbi, pH değeri 7.40 olan 4 °C'de% 95 O2 +% 5 CO2 doymuş PSS içeren bir Petri kabına hızlı bir şekilde yerleştirin.</li>
	<li>Koroner arterlerin anatomik pozisyonunu doğru bir şekilde tanımlamak için, ışık mikroskobu altında izole kalbin duruşunu şematik diyagrama göre ayarlayın (Şekil 2A). NOT: Önden görünümde, sağ kulak kepçesi ve pulmoner arter sırasıyla sol üst ve sağ üstteydi.<ol>
<li>İnterventriküler septum boyunca sol ve sağ ventrikül boşluklarını pulmoner arter kökünden cerrahi makas ve cımbızla kesin (Şekil 2B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sol ve sağ koroner arterleri miyokard dokusundan ayırmak için, sağ koroner arter dalını iyice ortaya çıkarmak için sağ ventrikülü optik anatomik mikroskop altında diseke edin. Daha sonra kalp dokusunu saat yönünde 45 ° döndürerek sol koroner arterin konumunu tanımlayın (Şekil 2D).</li>
	<li>Çevreleyen yapışkan miyokard dokusunu çıkardıktan sonra, titreşen sol (yaklaşık 5 mm) ve sağ (yaklaşık 5 mm) koroner arterleri açıkça ayırt edin. Ortadaki koroner arterleri hemen ayırın ve 4 ° C'de PSS'ye tamamen daldırın. Farklı uyaranlar altında vasküler gerginliği kaydetmek için ayrılmış arteri anatomik makasla dikey olarak keserek yaklaşık 2 mm'lik bir arteriyel halka elde edin (Şekil 2E).</li>
</ol>3. Arteriyel halkanın süspansiyonu ve sabitlenmesi
NOT: Bu adımla ilgili ayrıntılar için lütfen referans14'e bakın.
<ol><li>İki adet 2 cm'lik paslanmaz çelik tel hazırlayın ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve% 95 O 2 +% 5 CO2 ile doymuş 4 °C PSS çözeltisine önceden batırın. Her iki teli de arteriyel halkadan paralel olarak, optik anatomik mikroskop altında damarın yönüyle ve vasküler boşluğun her iki ucunda eşit uzunlukta teller açıkta olacak şekilde geçirin.</li>
	<li>Arteriyel halkayı, çelik tel ön ve arka ile% 95O2 +% 5 CO 2 ile köpüren PSS ile doldurulmuş tel mikrografın banyosuna sabitleyin. Uygun bir ön ve arka aralık için yatay vida düğmesini döndürün, böylece iki tel yatay olur ve arteriyel halka doğal bir gevşeme durumunda olur.</li>
	<li>DMT banyosunu termostatik cihaza kurduktan sonra, ilgili yol sinyalinin kaydedildiğinden emin olmak için veri toplama yazılımını açın (Malzeme Tablosuna bakınız). Aşağıdaki parametreleri ayarlayın: göz merceği kalibrasyonu (mm/div): 0,36; hedef basınç (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; çevrimiçi ortalama süre: 2 sn; gecikme süresi: 60 sn. Arteriyel halka fiksasyonunun basamakları Şekil 3'te gösterilmiştir.</li>
</ol>4. Sıçan arteriyel halkasında vasküler gerilimin standardizasyonu
NOT: Farklı kavite numuneleri için, damarların in vitro olarak olağanüstü aktiviteyi sürdürmeleri için optimum başlangıç gerilimi gerekliydi. Ayrıntılar için lütfen referans15'e bakın.
<ol><li>Geminin çapı boyunca makul bir gerginlik uygulayarak arteriyel halkanın optimal başlangıç gerginliğini elde edin. NOT: Önceki çalışma 16'ya dayanarak, maksimum agonist kaynaklı gerilim, başlangıç gerilme gerilimi 1.16 ± 0.04 mN / mm (farklı kap örnekleri için referans değerler: k değeri, 0.90-0.95; başlangıç gerilimi, 1.16-1.52 mN / mm) ile 0.90 faktör k değerinde gerçekleştirilmiştir.</li>
	<li>Bu noktada, görüntülenen vasküler gerilim değerini sıfıra ayarlayın. Daha sonra, banyonun spiral eksenini döndürerek arteriyel halkaya 3 mN'lik bir çekme uyaranı uygulayın.</li>
	<li>37 °C, pH 7.40'ta oksijene doymuş PSS tamponunda 1 saat inkübasyondan sonra, tel mikrografın gerilim kontrol panelinde gerilim değerini tekrar 0 mN'ye ayarlayın. Arteriyel halkanın başlangıç geriliminin ayar süreci Şekil 4'te gösterilmiştir.</li>
</ol>5. Koroner arter halkasının reaktivite tespiti
<ol><li>Tel miyograf tekniği 14 ile koroner arter halkasının kasılma aktivitesini gerçekleştirin ve her biri10 dakika boyunca 60 mM K+ çözeltisi ile uyararak üç ayrı operasyonda doğrulayın.</li>
	<li>Her stimülasyondan sonra, vasküler ton başlangıç durumuna dönene kadar banyoyu oksijene doymuş PSS ile yıkayın. NOT: Sadece üç paralel ölçümün gerilim dalgalanması %10'dan az olduğunda ve her bir kasılmanın genliği 1 mN/mm'den büyük olduğunda, daha ileri deneyler için nitelikli ve yüksek derecede aktif arteriyel halkalar kullanılabilir. Sıçan koroner halkasının aktivite doğrulaması Şekil 5'te gösterilmiştir.</li>
</ol>6. Ameliyat sonrası tedavi
<ol><li>Ameliyattan sonra, kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek hayvanları ötenazi yapın. NOT: Bu çalışmada, hayvanlar aşırı izofluran solunarak ötenazi yapıldı.</li>
</ol>

<ol><li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+coronary+artery+disease%2C+its+risk+factors%2C+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li>
<li>Murray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((national+age-sex+specific+all-cause+and+cause-specific+mortality+for+240+causes+of+death%2C+1990-2013%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: A systematic analysis for the global burden of disease Study 2013.</a> The Lancet. 385 (9963), 117-171 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+adenosine+receptor-mediated+action+in+coronary+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Adenosine and adenosine receptor-mediated action in coronary microcirculation.</a> Basic Research in Cardiology. 116 (1), 22(2021).</li>
<li>Allaqaband, H., Gutterman, D. D., Kadlec, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+consequences+of+coronary+arteriolar+dysfunction+and+its+influence+on+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Physiological consequences of coronary arteriolar dysfunction and its influence on cardiovascular disease.</a> Physiology. 33 (5), 338-347 (2018).</li>
<li>Minelli, S., Minelli, P., Montinari, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+atherosclerosis%3A+Lesson+from+the+past+and+future+research+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Multidisciplinary+Healthcare%22%5BJournal%5D)">Reflections on atherosclerosis: Lesson from the past and future research directions.</a> Journal of Multidisciplinary Healthcare. 13, 621-633 (2020).</li>
<li>Alvarez-Alvarez, M. M., Zanetti, D., Carreras-Torres, R., Moral, P., Athanasiadis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+sub-saharan+gene+flow+into+the+mediterranean+at+risk+loci+for+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">A survey of sub-saharan gene flow into the mediterranean at risk loci for coronary artery disease.</a> European Journal of Human Genetics. 25 (4), 472-476 (2017).</li>
<li>LaCombe, P., Tariq, M. A., Lappin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+Afterload+Reduction%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls+%5BInternet%5D%22%5BJournal%5D)">Physiology, Afterload Reduction.</a> StatPearls [Internet]. , StatPearls Publishing. Treasure Island (FL). (2022).</li>
<li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+microcirculation%3A+regulation+of+flow+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">The human microcirculation: regulation of flow and beyond.</a> Circulation Research. 118 (1), 157-172 (2016).</li>
<li>Wang, G., Li, F., Hou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+and+alternative+therapies+for+stable+angina+pectoris+of+coronary+heart+disease%3A+A+protocol+for+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine%22%5BJournal%5D)">Complementary and alternative therapies for stable angina pectoris of coronary heart disease: A protocol for systematic review and network meta-analysis.</a> Medicine. 101 (7), 28850(2022).</li>
<li>Markousis-Mavrogenis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+disease%3A+the+%26%2334%3Bmeeting+point%26%2334%3B+of+cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular disease: the &#34;meeting point&#34; of cardiology.</a> European Journal of Clinical Investigation. 52 (5), 13737(2021).</li>
<li>Allison, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+in+vivo+continuous+cardiovascular+function+during+chronic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fetal in vivo continuous cardiovascular function during chronic hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 594 (5), 1247-1264 (2016).</li>
<li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Ca2%2B+handling+for+the+regulation+of+vasoconstriction+between+rat+coronary+and+renal+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of Ca2+ handling for the regulation of vasoconstriction between rat coronary and renal arteries.</a> Journal of Vascular Research. 56 (4), 191-203 (2019).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isometric+contractility+measurement+of+the+mouse+mesenteric+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58064(2018).</li>
<li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+TMEM16A%2FANO1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of TMEM16A/ANO1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 139, 111615(2021).</li>
<li>Ping, N. N., Cao, L., Xiao, X., Li, S., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+optimal+initial+tension+in+rat+coronary+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">The determination of optimal initial tension in rat coronary artery using wire myography.</a> Physiological Research. 63 (1), 143-146 (2014).</li>
<li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li>
<li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Emergency+and+Hospital+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li>
<li>Lanza, G. A., Parrinello, R., Figliozzi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+microvascular+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cardiovascular+Drugs%22%5BJournal%5D)">Management of microvascular angina pectoris.</a> American Journal of Cardiovascular Drugs. 14 (1), 31-40 (2014).</li>
<li>Zhu, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+intracoronary+tirofiban+bolus+administration+following+upstream+intravenous+treatment+in+patients+with+ST-elevation+myocardial+infarction+undergoing+primary+percutaneous+coronary+intervention%3A+The+ICT-AMI+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of intracoronary tirofiban bolus administration following upstream intravenous treatment in patients with ST-elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention: The ICT-AMI study.</a> International Journal of Cardiology. 165 (3), 437-443 (2013).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+coronary+flow+in+patients+with+no-reflow+after+primary+coronary+intervention+of+acute+myocardial+infarction+%28RECOVER%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Restoration of coronary flow in patients with no-reflow after primary coronary intervention of acute myocardial infarction (RECOVER).</a> American Heart Journal. 164 (3), 394-401 (2012).</li>
<li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning%2C+containing+moschus%2C+corydalis+and+ginseng%2C+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography%3A+Experimental+validation+and+clinical+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease%3A+Atherogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li>
<li>Hu, G., Li, X., Zhang, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+rat+thoracic+aorta+dilatation+by+astragaloside+IV+with+the+generation+of+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors+and+nitric+oxide%2C+and+the+blockade+of+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+reports%22%5BJournal%5D)">Association of rat thoracic aorta dilatation by astragaloside IV with the generation of endothelium-derived hyperpolarizing factors and nitric oxide, and the blockade of Ca2+ channels.</a> Biomedical reports. 5 (1), 27-34 (2016).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticonstriction+effect+of+MCA+in+rats+by+danggui+buxue+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Anticonstriction effect of MCA in rats by danggui buxue decoction.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 749915(2021).</li>
<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries%2C+depresses+Ca2%2B-activated+Cl%E2%88%92+currents+and+augments+voltage-dependent+K%2B+currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl− currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 115, 108926(2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

KAH hastalarının geniş bir bölümünü içeren koroner mikrosirkülasyonun bozulması yavaş yavaş fark edilmiş ve yeterli miyokard perfüzyonunun temeli ile ilgilidir. Ani koroner kalp hastalığı ve kardiyovasküler hastalığın ciddi komplikasyonları göz önüne alındığında, KAH17'li bir klinik birey için zamanında ilaç önleme ve tedavisi son derece önemlidir. Kaçınılmaz olarak, koroner arter anatomisinin gizliliği ve fizyolojik yapısının ...

Koroner arter hastalığı (KAH), hem gelişmiş hem de gelişmekte olan ülkelerde önde gelen ölüm nedeni olan tipik ve temsili bir kardiyovasküler hastalık olarak yaygın olarak kabul edilmiş ve endişe duymaktadır 1,2. Normal kardiyak fizyolojik fonksiyon için bir kan ve oksijen besleme yolu olarak, dolaşımdaki kan, iki ana koroner arter ve miyokard yüzeyindeki bir kan vasküler ağı yoluyla kalbe girer ve besler 3,4. Koroner arterlerdeki kolesterol ve yağ birikintileri, kalbin kan akışını ve vasküler sistemin şiddetli enflamatuar yanıtını keserek ateroskleroz, stabil anjina, kararsız anjina, miyokard enfarktüsü veya ani kardiyak ölüme neden olur 5,6. Koroner arterlerin patolojik darlığına yanıt olarak, telafi edici hızlandırılmış fizyolojik kalp atışı, sol ventrikülün çıkışını artırarak kalbin kendisinin veya vücudun hayati organlarının kan akışını tatmin eder7. Uzun süreli koroner darlık zamanla giderilmezse, kalbin belirli bölgelerinde geniş yeni kan damarları gelişebilir8. Günümüzde KAH klinik tedavisinde sıklıkla ilaç trombolizi veya cerrahi mekanik tromboliz ve sık ilaç tedavisi ve büyük cerrahi sakatlık ile ekzojen biyonik vasküler bypass uygulanmaktadır9. Bu nedenle, koroner arter fizyolojik aktivitesinin fonksiyonel olarak araştırılması kardiyovasküler hastalıklar için hala acil bir atılımdır10.
Koroner fizyolojik aktiviteyi tespit etmek için, in vivo koroner basıncı, vasküler gerilimi, kan oksijen doygunluğunu ve pH değerlerini dinamik olarak kaydedebilen kablosuz telemetri sistemleri dışında mevcut teknik bir araç yoktur11. Bu nedenle, koroner arterlerin dokusal gizliliği ve karmaşıklığı göz önüne alındığında, koroner arterlerin doğru tanımlanması ve izolasyonu, KAH in vitro 4'ün çoklu mekanizmalarını araştırmak için şüphesiz en iyi seçeneklerdir.
Bir dizi multi myograf sistemi, özellikle bir tel mikrograf mikrovasküler gerilim dedektörü (bakınız Malzeme Tablosu), küçük vasküler, lenfatik ve bronşiyal tüplerin in vitro doku gerginliği değişikliklerini yüksek hassasiyet ve sürekli dinamik kayıt özellikleriyle kaydetmek için çok olgun bir pazarlanabilir cihazdır12. Söz konusu sistem, 60 μm ila 10 mm çaplarındaki kavite yapılarının in vitro doku gerginlik özelliklerini kaydetmek için yaygın olarak kullanılmıştır. Tel mikrograf platformunun sürekli ısıtma özellikleri, olumsuz dış ortamın uyarılmasını büyük ölçüde dengelemiştir. Bu arada, gaz karışımının sabit girişleri ve pH değerleri, benzer bir fizyolojik durumda daha doğru vasküler gerilim verileri elde etmemizi sağlar13. Bununla birlikte, sıçan koroner arterlerinin anatomik lokalizasyonunun karmaşıklığı göz önüne alındığında (Şekil 1), izolasyonu mekanizmanın çeşitlendirilmiş kardiyovasküler hastalık ve ilaç geliştirme araştırmalarını şaşırtmakta ve sınırlandırmaktadır. Bu nedenle, mevcut protokol, sıçan koroner arterinin anatomik yerleşimini ve ayırma işlemini ayrıntılı olarak tanıtmakta, ardından tel mikrograf14'ün platformunda gerilim ölçümü yapmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Apigenin</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>150731</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A501330</td><td></td></tr><tr><td>D-glikoz</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A610219</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, Çin</td><td>S3872</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sangon Biyoteknoloji A.Ş., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A100781</td><td></td></tr><tr><td>LabChart Professional sürüm 8.3&nbsp;</td><td>ADInstruments, Avustralya</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl<alt>2</alt> ve orta nokta; 6H < > 2 </td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A100288</td><td></td></tr><tr><td>Çoklu miyograf sistemi ve nbsp;</td><td>Danimarkalı Myo Technology, Aarhus, Danimarka</td><td>620M</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin</td><td>A100241</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Şangay, Çin A100865</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çelik teller</td><td>Danimarkalı Myo Teknolojisi, Aarhus, Danimarka</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>U46619</td><td>Sigma, ABD</td><td>D8174</td><td></td></tr></tbody></table>

standartlaştırılmış sıçan koroner halka hazırlama ve damar Çapı boyunca dinamik gerilim değişikliklerinin gerçek zamanlı kaydı

Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Kardiyovasküler sistem hastalıklarının önemli bir olayı olan koroner arter hastalığı (KAH), tüm dünyada insanların yaşamını ve sağlığını ciddi şekilde tehdit eden ateroskleroz, miyokard enfarktüsü ve anjina pektorisin ana suçlusu olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, izole kan damarlarının dinamik biyomekanik özelliklerinin nasıl kaydedileceği uzun zamandır insanları şaşırtmıştır. Bu arada, in vitro dinamik vasküler gerilim değişikliklerini ölçmek için koroner arterlerin hassas konumlandırılması ve izolasyonu, CAD ilaç geliştirmede bir trend haline gelmiştir. Mevcut protokol, sıçan koroner arterlerinin makroskopik olarak tanımlanmasını ve mikroskobik olarak ayrılmasını tanımlamaktadır. Koroner arter halkasının damar çapı boyunca kasılma ve genişleme fonksiyonu, kurulan multi miyograf sistemi kullanılarak izlendi. Örneklemeden veri toplamaya kadar koroner halka gerilim ölçümünün standartlaştırılmış ve programlanmış protokolleri, fizyolojik, patolojik ve ilaç müdahalesinden sonra vasküler gerilim kayıtlarının gerçekliğini sağlayan deneysel verilerin tekrarlanabilirliğini büyük ölçüde geliştirir.

Anatomik olarak konumlandırılmış, miyokard dokusunun derinliklerine dağılmış ve gizlenmiş sıçan koroner arterleri kolayca tanınmadı. İnsanların koroner arterleri (Şekil 1A) ve sıçanlar (Şekil 1B) karşılaştırılarak, Şekil 2'deki örnekleme işlemine göre sıçan koroner arterlerinin hızlı ve doğru bir şekilde ayrılması gerçekleştirilmiştir. Sağ kulak kepçesini, pulmoner arteri ve tepeyi önden optik mikroskop altında tam olarak bulduktan ...

Mevcut protokol, sıçan koroner arterinin vasküler reaktivitesini ölçmek için tel miyograf tekniğini açıklamaktadır.

Standartlaştırılmış Sıçan Koroner Halka Hazırlama ve Damar Çapı Boyunca Dinamik Gerilim Değişikliklerinin Gerçek Zamanlı Kaydı

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Bu protokol, sıçan koroner arterlerinin lokalizasyonunu, ayrılmasını ve kas halkası fiksasyonunu ayrıntılı olarak tanıtmaktadır. Çeşitli kardiyovasküler hastalıkların mekanizmaları, eksplorasyonları ve tedavileri için yeni bir yöntem sağlamak. Sistem, in vitro arteriyel gerilimin dinamik değişikliklerinin kararlı bir şekilde kaydedilmesi, çapının 60 mikrometreden 10 milimetreye kadar okunması için uygundur.Acemilerin öncelikle her bir damarın anatomik yerini doğru bir şekilde anlamaları gerektiğini ve torasik arter ve mezenterik arter gibi biraz daha büyük damarlarla başlayabileceklerini öneriyoruz. Kalbi ayırdıktan ve çıkardıktan sonra, tıbbi plastik forsepslerle hafifçe sıkarak tüm kalp odalarından kalan kanı boşaltarak başlayın. Önceden işlenmiş kalbi, pH değeri 7.40 olan dört santigrat derecede% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit doymuş fizyolojik tuz çözeltisi içeren bir Petri kabına hızlı bir şekilde yerleştirin.Koroner arterlerin anatomik pozisyonunu doğru bir şekilde tanımlamak için, ışık mikroskobu altında izole kalbin duruşunu şematik şemaya göre ayarlayın. İnterventriküler septum boyunca sol ve sağ ventrikül boşluklarını pulmoner arterin kökünden cerrahi makas ve cımbızla kesin. Sol ve sağ koroner arterleri miyokard dokusundan ayırmak için, sağ koroner arter dalını iyice ortaya çıkarmak için sağ ventrikülü optik anatomik mikroskop altında diseke edin.Daha sonra kalp dokusunu saat yönünde 45 derece döndürerek sol koroner arterin konumunu tanımlayın. Çevreleyen yapışkan miyokard dokusunu çıkardıktan sonra, titreşen sol ve sağ koroner arterleri açıkça ayırt edin. Koroner arterleri hemen ortada ayırın ve dört santigrat derecede fizyolojik tuz çözeltisine tamamen daldırın.Farklı uyaranlar altında vasküler gerginliği kaydetmek için ayrılmış arteri anatomik makasla dikey olarak keserek yaklaşık iki milimetrelik bir arteriyel halka elde edin. İki santimetre paslanmaz çelik tel hazırlayın ve% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit ile doyurulmuş dört santigrat derece fizyolojik tuz çözeltisine önceden batırın. Her iki teli de arteriyel halkadan paralel olarak, optik anatomik mikroskop altında damarın yönüyle ve vasküler boşluğun her iki ucunda eşit uzunlukta teller açıkta olacak şekilde geçirin.Arteriyel halkayı,% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit içeren köpüren fizyolojik tuz çözeltisi ile doldurulmuş tel mikrografın banyosunda çelik tel ön ve arka ile sabitleyin. Uygun bir ön ve arka aralık için yatay vida düğmesini döndürün, böylece iki tel yatay olur ve arteriyel halka doğal bir gevşeme durumunda olur. DMT banyosunu termostatik cihaza kurduktan sonra, ilgili yol sinyalinin kaydedildiğinden emin olmak için veri toplama yazılımını açın.Parametreleri ayarlayın. Geminin çapı boyunca makul bir gerginlik uygulayarak arteriyel halkanın optimal başlangıç gerginliğini elde edin. Bu noktada, görüntülenen vasküler gerilim değerini sıfıra ayarlayın.Daha sonra, banyonun spiral eksenini döndürerek arteriyel halkaya üç mili Newton darbe uyaranı uygulayın. LCD panelini tıklatarak sıfır mili Newton'a ayarlayın ve bir saat boyunca koruyun. 37 santigrat derece pH 7.40'ta oksijene doymuş fizyolojik tuz çözeltisi tamponunda bir saat inkübasyondan sonra, tel mikrografın gerilim kontrol panelinde gerilim değerini tekrar sıfır mili Newton'a ayarlayın.Tel miyograf tekniği ile koroner arter halkasının kasılma aktivitesini gerçekleştirin ve her biri 10 dakika boyunca 60 milimolar potasyum iyon çözeltisi ile uyararak üç ayrı operasyonda doğrulayın. Her stimülasyondan sonra, vasküler ton ilk durumuna dönene kadar banyoyu oksijene doymuş fizyolojik tuz çözeltisi ile yıkayın. Banyoya 0.3 mikromolar U46619 ekleyin ve 10 dakika boyunca gözlemleyin.Bir mikromolar apigenin ekleyin ve vasküler etkileri gözlemleyin. Dilatasyon bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. Vasküler etkiyi gözlemlemek için 60 milimolar potasyum ön büzülme çözeltisine bir mikromolar apigenin ekleyin.Dilatasyon bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. İstirahat eden vasküler halkaya 28 milimolar potasyum iyonu ekleyin. Kasılma bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin.İstirahat eden vasküler halkaya 0.01 mikromolar U46619 ekleyin. Kasılma bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. Arteriyel halkaya ilk üç mili Newton gerilimi uygulandıktan sonra, gerilimi üç kez paralel olarak 60 milimolar potasyum iyonu konsantrasyonu uygulayarak iki mili Newton'dan fazla aştı.Böylece yukarıdaki prosedürler mükemmel fizyolojik aktiviteye sahip izole bir koroner halka ile sonuçlanmıştır. DMT620M banyosuna kümülatif potasyum iyonu konsantrasyonu veya U46619 eklendi ve bu da vitro vasküler tonda konsantrasyona bağlı bir artışa neden oldu. Bir sonraki potasyum iyonu veya U46619 konsantrasyonu, vazokonstriksiyon etkisi bir platoya ulaştığında eklendi.Potasyum iyonu ve U46619 tarafından daraltılmış izole koroner halkalar için, test ilacı apigenin, şaşırtıcı bir şekilde konsantrasyona bağımlı bir şekilde vazodilatasyona neden oldu. Kalp, pulmoner arterin kökünden ventriküler septum boyunca diseke edilir, iki milimetrelik koroner kas halkasını açığa çıkarır ve ayırır. Bu prosedürü takiben, retinal mikrodamarlarda, böbrek fonksiyonunda, renal arterde ve orta serebral arterde vasküler gerginliği kaydedebiliriz.60 mikrometreden 10 milimetreye kadar dinamik bir bölge.

standardized-rat-coronary-ring-preparation-real-time-recording

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Izole mezenterik arterler kuvvet ölçümleri için otomatik bir kasılmaların kâğıda çizilmesi yöntemi açıklanmıştır. Fenilefrin ve ekstrasellüler kalsiyum yanıtlarını belirlemek için 510A Mulvany Halpern Otomatik Çift Tel Myograph kullanır. 300 mikron, bağımsız yöntemi 60 çaplarının küçük damarlarda agonistleri izometrik yanıtları tutarlı tespitine imkan sağlamaktadır.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Protokol, farelerden izole edilen mezenterik arterlerin transmural izometrik gerginliğini değerlendirmek için tel miyografi kullanımını açıklar ve endotel hücrelerden ve perivasküler adipoz dokulardan salınan faktörlerin modülasyonunun özel olarak değerlendirilmesidir.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Burada, septal arter kanüle edildiği ve basınçlandırıldığı için kılcal yataklar ve perisitler de dahil olmak üzere damar ağacı bileşenlerinin yanı sıra basıncı koruyan arteriyel perfüzyon basıncının ve akışının eks vivo izlenmesi ile canlı murine kalp dokusundaki koroner mikrositülasyonu incelemek için bir protokol sunulmaktadır.

Fare Kalbinde Kılcal Damarlar, Arterioles ve Perisitlerin Dinamik Ölçümü ve Görüntülenmesi

Bu protokol, fare aort endotel fonksiyonunun deneysel ex vivo değerlendirmesinde çok odacıklı bir miyograf sistemi kullanılarak tensometrik miyograf tekniğinin kavramlarını ve teknik uygulamasını açıklamaktadır.

Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi

Bu protokol, kasılan lenf damarlarında sitosolik, serbest kalsiyum [Ca2 +] i ve damar çapını gerçek zamanlı olarak ölçmek ve ardından mutlak Ca2+ konsantrasyonlarının yanı sıra kasılma / ritmiklik parametrelerini hesaplamak için bir yöntemi tanımlar. Bu protokol, çeşitli deneysel koşullarda Ca2+ ve kasılma dinamiklerini incelemek için kullanılabilir.

İzole, Basınçlı Lenf Damarlarında Mutlak, Sitosolik, Serbest Ca2+ ve Karşılık Gelen Kontraktilitenin Gerçek Zamanlı Değerlendirmesi

Sağ kalp yetmezliği (RHF), ventriküler ve atriyal fonksiyon bozukluğuna yol açan sağ taraflı kardiyak dilatasyon ve hipertrofi ile karakterizedir. RHF ile ilişkili kardiyopulmoner durumlara kardiyak aritmi riskinde artış eşlik eder. Bu makale, gelişmiş ventriküler ve atriyal aritmogenez ile ilişkili pulmoner arter bantlamasına bağlı RHF'nin standart bir modelini açıklamaktadır.

Pulmoner Arter Bantlaması Kullanılarak Sağ Taraflı Kardiyak Yeniden Şekillenme ve Aritminin Sıçan Modeli

Bu makale, insan renal arter dallarının izolasyonu ve fonksiyonel değerlendirmesi için adım adım bir protokol sunmakta ve farmasötik geliştirme için klinik öncesi çalışmaları kolaylaştırmaktadır.

İnsan Renal Arteriyel Dallarının Çok Düzeyli Mikrodiseksiyonu ve Fonksiyonel-Yapısal Profillemesi

Biz, tarama ışınına dijital X-ray sistemi kullanarak bir dinamik adaptif maruz kalma tekniği geliştiriyorlar. Aksine düzgün bir nesne açığa, pozlama nesnenin opaklık bağlı olarak uyarlanmıştır. Burada bir doz% 30 tasarruf sonuçlandı antropomorfik bir hayalet bir deney göstermektedir.

Floroskopik Görüntüleme Adaptif Pozlama X-ray Doz Azaltma

Koroner damarların görüntülenmesi kardiyovasküler hastalıkların bizim anlayışın geliştirilmesi için çok önemlidir. Burada mikro-Bilgisayarlı Tomografi (μCT) görüntüleme için hazırlık, bir radyoopak silikon kauçuk (Microfil) ile sıçan koroner damar perfüze için bir yöntem açıklanmaktadır.

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için hazırlık olarak retrograd perfüzyon ve Fare Koroner damarları doldurulması

Öğrenin sıçan koroner arterlerinde damar reaktivitesini ölçmek için wire myograf tekniğini. Bu yöntem kardiyovasküler hastalıkların mekanizmalarını keşfetmeye ve tedavisine katkı sağlar.

Standartlaştırılmış Sıçan Koroner Halka Hazırlama ve Damar Çapı Boyunca Dinamik Gerilim Değişikliklerinin Gerçek Zamanlı Kaydı

Daha fazla video keşfet