Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transkripsiyon Tahlillerinin Temel Bileşenleri

Borreliella burgdorferi için in vitro transkripsiyon tahlil sistemi, araştırmacıların gen düzenleyici mekanizmaları ve RNA polimerazın enzimatik aktivitesini yöneten faktörleri incelemeleri için biyokimyasal bir araç sağlar. Sistem, transkripsiyon faktörlerinin, ko-faktörlerin, tuz konsantrasyonlarının ve pH'ın Borreliella burgdorferi RNA polimeraz fonksiyonunu nasıl etkilediğini test etmemizi sağlar ve bu da gen düzenleyici mekanizmalar hakkındaki genel anlayışımıza katkıda bulunur. Bu güçlü teknik, RNA polimerazı seçici olarak inhibe eden ilaçları taramamıza izin verebilir ve Lyme borreliosis'i tedavi etmek için yeni ilaçlar geliştirmenin kapısını açabilir.

Başlamak için, hücre peletini mikroaerofilik bir ortamda BSKII ortamında kültürlenmiş iki ila dört litre Borreliella burgdorferi RpoC-His10X'ten, mililitre başına iki ila dört kat 10 sabit yoğunluğa kadar toplayın. Hücreleri 500 mililitre santrifüjlü şişelerde dört santigrat derecede 30 dakika boyunca 10.000 kez G'de pelet yapın ve süpernatanı atın. Ardından, hücreleri 30 mililitre buz gibi soğuk HN tamponunda yeniden askıya alın, santrifüjleme adımını tekrarlayın ve süpernatanı boşaltın.