Name: Kalsiyum Fosfat Kaynaklı Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Keşfedin kalsiyum fosfat ile indüklenen fare abdominal aort anevrizması modelini. C57BL6J farelerinde hızlı ve maliyet etkin AAA oluşumunu inceleyerek patolojik özellikleri ve moleküler mekanizmaları öğrenin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 ve 91529203) ve Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2019YFA 0801600) tarafından finanse edilerek desteklenmiştir.

Hayvan çalışmaları, Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi kılavuzlarına uygun olarak gerçekleştirilmiş ve Pekin Üniversitesi Biyomedikal Etik Kurulu (LA2015142) tarafından onaylanmıştır. Ameliyat için tüm fareler izofluran (% 1.5 -% 2) ile uyuşturuldu ve fareler için ağrı veya rahatsızlıktan kaçınmak için anestezi dikkatle izlendi.
1. Hazırlık
<ol><li>0,3 cm genişliğinde pudrasız lastik eldiven ve gazlı bez şeritlerini kesin.</li>
	<li>8-10 haftalık C57BL/6J erkek fareleri satın alın. Hayvanları, 12 saatlik açık-karanlık döngüsünün yanı sıra yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlayan klimalı bir ortamda barındırın.</li>
	<li>Ameliyattan önce gazlı bez, pamuklu çubuklar, makas ve forsepsleri otoklav edin.</li>
	<li>Betadin,% 70 etanol ve antiseptik el yıkama elde edin.</li>
	<li>Bir maske, önlük ve steril eldivenler giyin.</li>
</ol>2. Cerrahi prosedür
<ol><li>Ameliyattan 2-4 saat önce çiğnenebilir karprofen tabletlerini (5 mg / kg doz) 8-10 haftalık bir C57BL / 6J fareye besleyin. Ardından, fareyi% 1,5 -% 2'lik bir akış hızında izofluran içeren bir indüksiyon odasına (206 mm x 210 mm x 140 mm) yerleştirin.<ol><li>Solunum gözle görülür şekilde yavaşlayana kadar fareyi yaklaşık 5 dakika izleyin. Ameliyattan önce farenin ağrı stimülasyonuna yanıt vermediğinden emin olun.</li>
	</ol></li>
	<li>Gözlere oftalmik bir merhem uygulayın ve bir ısıtma yastığı veya battaniye ile termal destek sağlayın. Cerrahi prosedür sırasında her 15 dakikada bir ayak parmağı tutamağı ile anestezi derinliğini onaylayın.</li>
	<li>Farenin karın kıllarını elektrikli kesme makinesi veya epilasyon kremi kullanarak tıraş edin. Tıraş edilen bölgeyi betadin ile sürünceme, ardından dairesel bir hareketle birkaç kez% 70 etanol ile silin. Steriliteyi korumak için eldivenleri değiştirin.</li>
	<li>Alt karın bölgesinde karın orta hattı boyunca ~ 1,5 cm'lik bir kesi yapmak için makas kullanın.</li>
	<li>İnfrarenal aort görünene kadar bağırsağı dikkatlice çıkarmak için normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanın.</li>
	<li>Bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan yaklaşık 0.5 cm'lik bir kesit için diseke edin. Küçük damarları sırt tarafına not edin ve yırtılmaktan kaçının. Abdominal aortu abdominal ana venden ayırmaya gerek yoktur.</li>
	<li>Salin batırılmış kauçuk eldiven şeridinin bir parçasını abdominal aort ve abdominal ana venin altına yerleştirin. Fazla sıvıyı silmek için pamuklu çubukla temizleyin.</li>
	<li>İnfrarenal abdominal vaskülatürün adventitiasında 0,5 M CaCl2 ile ıslatılmış bir gazlı bez parçasını 10 dakika boyunca paketleyin. Sahte fare grubu için 0,5 M CaCl2'yi normal salin ile değiştirin.</li>
	<li>Gazlı bezi çıkarın ve aortun adventitiasında in situ CaPO4 kristalleri üretmek için 5 dakika boyunca PBS çözeltisi ile ıslatılmış başka bir gazlı bez parçası paketleyin.</li>
	<li>Kauçuk eldiven şeridini ve gazlı bezi dikkatlice çıkarın. Farenin bağırsak sistemini sıfırlayın.</li>
	<li>Karın kesisini ve cildi 5-0 dikişle dikin.</li>
	<li>Fare bilincini yeniden kazanana kadar fareyi bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Yerel hayvan etik komitesine göre, ameliyat sonrası ağrı iyileşme konutu ve analjezi sağlayın.</li>
	<li>Fareyi 14 gün daha bekletin. Ameliyattan sonra fareyi yakından izleyin ve daha sonra her gün en az 1 kat gözlemleyin. Bu dönemde herhangi bir fare ölürse hemen bir nekropsi yapın.</li>
</ol>3. Aortların görüntülenmesi için hasat
<ol><li>Ameliyattan 14 gün sonra, CO 2 kullanarak fareleri fedaedin.</li>
	<li>Fare torasik ve abdominal boşluklarını ventralal olarak kesin ve sağ atriyumu açın.</li>
	<li>Aorttaki kanı çıkarmak için PBS tamponu ile fareleri kalbin sol ventrikülünden geçirin ve daha sonra daha önce tarif edildiği gibi% 4 paraformaldehit ile perfüzeedin 8.</li>
	<li>Aortu stereoskop altında hasat edin.</li>
	<li>Hasat edilen aortları 48 saat boyunca 5 mL% 4 paraformaldehit içeren tüplere yerleştirin.</li>
	<li>Adventitial dokuyu ve yağları stereoskop altında dikkatlice çıkarın ve aortu böcek iğneleriyle siyah bir balmumu plakasına sabitleyin.</li>
	<li>Aort görüntüleri elde edin.</li>
</ol>4. Elastik liflerin parçalanmasının değerlendirilmesi
<ol><li>Aort anevrizması dokularını seri kriyozitler halinde (7 μm kalınlığında) kesin.</li>
	<li>Elastik elyafları, üreticinin protokolüne göre ticari bir elastik van Gieson (EVG) boyama kiti kullanarak analiz edin.</li>
	<li>Elastin bozunmasını derecelendirin. Sınıf 1: <% 25 bozulma; sınıf 2:% 25 ila% 50 bozulma; sınıf 3:% 50 ila% 75 bozulma; veya sınıf 4: >75% bozulma.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li>
<li>Yamanouchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+aneurysmal+dilation+associated+with+apoptosis+and+inflammation+in+a+newly+developed+calcium+phosphate+rodent+abdominal+aortic+aneurysm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).</li>
<li>Wang, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+apolipoprotein+E%2C+age+and+aortic+site+on+calcium+phosphate+induced+abdominal+aortic+aneurysm+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice.</a> Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).</li>
<li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unspliced+xbp1+confers+VSMC+homeostasis+and+prevents+aortic+aneurysm+formation+via+foxo4+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction.</a> Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+macrophage+TFEB-14-3-3+epsilon+interface+by+naringenin+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm.</a> Cell Discovery. 8 (1), 21(2022).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYLD+deubiquitinates+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+4+contributing+to+adventitial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).</li>
<li>Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+abdominal+aortic+aneurysm+in+population-based+studies%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805(2018).</li>
<li>Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+and+aortic+aneurysm+rupture%3A+A+favorable+association%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).</li>
<li>Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+suppresses+calcium+phosphate-induced+aneurysm+formation+through+inhibition+of+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062(2016).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53191(2015).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutral+sites+for+calcium+ion+binding+to+elastin+and+collagen%3A+A+charge+neutralization+theory+for+calcification+and+its+relationship+to+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).</li>
<li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Runx2+%28runt-related+transcription+factor+2%29-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li>
<li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689(2019).</li>
</ol>

CaPO4'ün periaortik uygulaması, farelerde AAA'yı indüklemek için sağlam bir yaklaşımdır. Birkaç çalışma CaPO4 modelini kullanmış ve sürekli olarak bunun farelerde AAA'yı incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem olduğunu bildirmiştir 7,9. Bu modelin insan aort anevrizmasının özelliklerinin bir kısmını özetlediği ve inflamasyon ve hücre dışı matriks yıkımı da dahil olmak üzere AAA patogenezi hakkında mekanik bilgiler sağladığı düşünü...

Abdominal aort anevrizması (AAA), abdominal aortun kalıcı genişlemesi ile karakterize, rüptür meydana geldiğinde yüksek mortalite oranları olan ölümcül bir kardiyovasküler hastalıktır. AAA yaşlanma, sigara içme, erkek cinsiyet, hipertansiyon ve hiperlipidemi ile ilişkilidir1. Hücre dışı matriks lif proteolizi, immün hücre infiltrasyonu ve vasküler düz kas hücrelerinin kaybı dahil olmak üzere çeşitli patolojik süreçlerin AAA oluşumuna katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Şu anda, AAA'nın patolojik mekanizmaları belirsizliğini korumaktadır ve AAA1'in tedavisi için kanıtlanmış bir ilaç yoktur. İnsan AAA'sı üzerine yapılan araştırmalar, az sayıda insan aort örneğinin varlığı nedeniyle sınırlıdır; Bu nedenle, subkutan anjiyotensin II (AngII) infüzyonu, perivasküler veya intraluminal elastaz inkübasyonu ve perivasküler kalsiyum fosfat uygulaması2 dahil olmak üzere çeşitli kimyasal modifikasyona bağlı hayvan AAA modelleri kurulmuş ve yaygın olarak benimsenmiştir. Yaygın olarak kullanılan bir fare modeli, infrarenal abdominal aortun adventitisine kalsiyum fosfatın (CaPO4) uygulanmasıdır, bu da uygun maliyetlidir ve genetik modifikasyon gerektirmez.
Anevrizmal değişikliği indüklemek için tavşanların karotis arterine CaCl2'nin doğrudan periaort uygulaması başlangıçta Gertz ve ark.3 tarafından bildirilmiş ve daha sonra farelerin abdominal aortlarına uygulanmıştır. Model, farelerde CaPO 4 kristalleri kullanılarak aort genişlemesini hızlandırmak için Yamanouchi ve ark.tarafından geliştirilmiştir4. CaPO4'ün farelerin aortlarına infiltrasyonu, derin makrofaj infiltrasyonu, hücre dışı matriks yıkımı ve kalsiyum birikimi dahil olmak üzere insan AAA'larında gözlenen birçok patolojik özelliği özetler. Hiperlipidemi gibi insan AAA'sının risk faktörleri, farelerde CaPO4 kaynaklı AAA'yı da arttırır5. ApoE-/- veya LDLR-/- farelerde AngII perfüzyona bağlı AAA'nın aksine, CaPO4 kaynaklı AAA, insan AAA'sını taklit eden infrarenal aort bölgesinde meydana gelir. Günümüzde bu yöntem, genetiği değiştirilmiş farelerde AAA gelişimine duyarlılığı değerlendirmek ve ilaçların anti-AAA etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak uygulanmaktadır 6,7.

<table><tbody><tr><td>CaCl2</td><td>MECKLIN</td><td>C805225</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Biomed</td><td>SH5001-01</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>HARVEYBIO</td><td>MB5051</td><td></td></tr><tr><td>Küçük hayvan ventilatörü</td><td>RWD</td><td>H1550501-012</td><td></td></tr></tbody></table>

kalsiyum fosfat kaynaklı fare abdominal aort anevrizması modeli

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

Abdominal aort anevrizması (AAA), tüm dünyada görülen, hayatı tehdit eden ve abdominal aortun geri dönüşümsüz genişlemesi ile karakterize kardiyovasküler bir hastalıktır. Günümüzde, her biri AAA'nın patogenezinin farklı bir yönünü simüle eden çeşitli kimyasal olarak indüklenmiş murin AAA modelleri kullanılmaktadır. Kalsiyum fosfat kaynaklı AAA modeli, anjiyotensin II ve elastaz kaynaklı AAA modellerine kıyasla hızlı ve uygun maliyetli bir modeldir. CaPO4 kristallerinin fare aortuna uygulanması, elastik lif yıkımı, düz kas hücrelerinin kaybı, iltihaplanma ve aort dilatasyonu ile ilişkili kalsiyum birikimi ile sonuçlanır. Bu makalede, CaPO4 kaynaklı AAA modeli için standart bir protokol tanıtılmaktadır. Protokol, materyal hazırlamayı, CaPO4'ün infrarenal abdominal aortun adventitisine cerrahi olarak uygulanmasını, aort anevrizmalarını görselleştirmek için aortların toplanmasını ve farelerde histolojik analizleri içerir.

CaPO4 uygulamasından 14 gün sonra, C57BL / 6J erkek fareleri ötenazi yapıldı ve aortları hasat edildi ve temizlendi. AAA oluşumunu görselleştirmek için aortların morfolojisi görüntülendi. Şekil 1A-B'de gösterildiği gibi, CaPO 4 uygulaması infrarenal abdominal aortun genişlemesine yol açmıştır. Histolojik olarak, CaPO4, elastin kırılmaları ile gösterildiği gibi, elastik liflerin dramatik bir şekilde bozulmasına neden olmuştur...

Bu protokol, AAA'ların patolojik özelliklerini ve moleküler mekanizmalarını incelemek için kalsiyum fosfata bağlı abdominal aort anevrizması (AAA) fare modelini tanımlamaktadır.

Kalsiyum Fosfat Kaynaklı Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Bu protokol, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarındaki patolojik özellikleri incelemek için kalsiyum fosfata bağlı abdominal aort anevrizması üçlü A fare modelini tanımlar. Kalsiyum fosfat kaynaklı abdominal aort anevrizması modeli, anjiyotensin tüpü ve elastaz kaynaklı abdominal aort anevrizması modellerine kıyasla hızlı ve uygun maliyetli bir modeldir. Prosedürü gösteren, burada doktora sonrası doktor, laboratuvarımızdan bir arkadaş olan Zeyu Cai olacak.Başlamak için 0,3 santimetre genişliğinde pudrasız lastik eldiven ve gazlı bez şeritleri kesin. Daha sonra sekiz ila on haftalık C57BL6J Mayo fareleri satın alın ve hayvanları 12 saatlik açık karanlık döngü ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile klimalı bir ortamda barındırın. Daha sonra, ameliyattan önce gazlı bez, pamuklu çubuklar, makas ve forseps otoklav yapın ve Betadine,% 70 etanol ve antiseptik el yıkama elde edin.Anestezi uygulanan farenin karın kıllarını elektrikli kesme makinesi veya epilasyon kremi kullanarak tıraş edin. Daha sonra tıraş edilen bölgeyi Betadine ile silin ve silin, ardından dairesel bir hareketle birkaç kez% 70 etanol alın. Daha sonra makas kullanarak karnın orta çizgisi boyunca alt karın bölgesinde yaklaşık 1,5 santimetrelik bir kesi yapın.Normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanarak, infrarenal aort görünene kadar bağırsağı dikkatlice çıkarın. Daha sonra, bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan yaklaşık 0.5 santimetrelik bir bölüm boyunca diseke ederken, küçük damarlarda dorsal tarafa herhangi bir yırtılmayı önleyin. Ardından, pamuklu çubukla fazla sıvıyı silerken abdominal aort ve abdominal ana damarın altına tuzlu su batırılmış kauçuk eldiven şeridinin bir parçasını paketleyin.Daha sonra, 10 dakika boyunca infrarenal abdominal vaskülatürün adventitisi üzerine 0.5 molar kalsiyum klorür ile ıslatılmış bir parça gazlı bez paketleyin. Gazlı bezi çıkarın ve aortun adventitisinde C2'de kalsiyum ortofosfat kristalleri üretmek için beş dakika boyunca PBS çözeltisi ile ıslatılmış başka bir gazlı bez parçası paketleyin. Ardından lastik eldiven şeridini ve gazlı bezi dikkatlice çıkarın.Farenin bağırsak sistemini sıfırladıktan sonra, karın insizyonunu ve cildi beş sıfır dikişle dikin. Ardından, fare bilincini yeniden kazanana kadar fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fareyi 14 gün daha bekletin ve ameliyattan sonra fareyi yakından izleyin ve daha sonra en az her gün gözlemleyin.Ameliyattan 14 gün sonra, ötenazi fare torasik ve abdominal boşluklarını ventralal olarak kesin ve sağ atriyumu açın. PBS tamponlu fareleri aorttaki kanı çıkarmak için kalbin sol ventrikülünden bolca kullanın ve daha sonra makalede açıklandığı gibi% 4 paraformaldehit ile perfüze edin. Adventitial doku ve yağları stereo mikroskop altında dikkatlice çıkarın.Daha sonra aortu hasat edin ve 48 saat boyunca beş mililitre% 4 paraformaldehit içeren bir tüpe yerleştirin. Daha sonra aortu böcek iğneleriyle siyah bir balmumu plakasına sabitleyin ve aort görüntüleri elde etmeye devam edin. 14 günlük kalsiyum ortofosfat uygulamasından sonra abdominal aort anevrizması oluşumunu görselleştirmek için aortların morfolojisi görüntülendi.Kalsiyum ortofosfatın infrarenal abdominal aortun genişlemesine yol açtığı ve elastin kırılmaları ile gösterildiği gibi elastik liflerin dramatik bir şekilde bozulmasına neden olduğu gözlendi. İnfrarenal aort görünene kadar bağırsağı çıkarmak için normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanmak ve daha sonra bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan çıkarmak. Genel olarak, kalsiyum fosforata bağlı fareler abdominal aort anevrizması modeli, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarını ve terapötik stratejilerini araştırmak için hızlı ve uygun maliyetli bir yaklaşımdır ve insan abdominal aort anevrizmasının özelliklerini tam olarak taklit etmek için diğer modellerle paralel olarak uygulanabilir.

a-calcium-phosphate-induced-mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz geçici intraluminal infüzyonu ile farelerde abdominal aort anevrizması (AAA) ikna etmek için nasıl gösterir. Modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir.

Elastaz ile murin Deneysel Abdominal Aort Anevrizmalarının Yaratılış

Bu makalede ayrıntılı bir metodoloji radyoopak .Kurşun bazlı silikon kauçuk fare damarlara aort çapı miktar aort anevrizması ve diseksiyon, bir fare modeli için sıvı için kullanma.

Aortopathy aort anevrizması β-aminopropionitrile-indüklenen ve diseksiyon, fare modeli nicel mikro-CT Analizi

Bu yeni model balon anjiyoplasti, elastaz / kollajenaz perfüzyon, topikal elastaz uygulaması ve oral bileşik β-aminopropionitril uygulaması, kollajen çapraz bağlama ile müdahale bir arada kullanarak domuz sağlam infrarenal abdominal aort anevrizmaları oluşturur.

İnfrarenal Abdominal Aort Anevrizması Porcine Modeli

Mevcut protokol, farelerde infrarenal abdominal aortun adventitisine doğrudan elastaz uygulanması yoluyla elastaz kaynaklı AAA modeli için standartlaştırılmış bir cerrahi yöntemi tanımlamaktadır.

Elastazın Perivasküler Uygulaması ile İndüklenen Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Bu makale, önceki modelleme yöntemlerinin avantajlarını birleştirerek, kalsiyum klorür ve elastaz kullanarak bir fare abdominal aort anevrizması modeli oluşturmak için bir protokol sunmaktadır. Bu model, abdominal aort anevrizmalarının altında yatan patofizyolojik mekanizmaları araştırmak için kullanılabilir.

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Bu protokol, farelerde ileri abdominal aort anevrizmalarının modellenmesine yönelik metodik bir cerrahi yaklaşımı, infrarenal aorta doğrudan elastaz uygulanması ve içme suyu yoluyla ß-aminopropionitrilin uygulanmasının bir kombinasyonu ile tanımlar.

Topikal Elastaz ve Oral ß-aminopropionitril kombinasyonu ile farelerde ileri abdominal aort anevrizması modellemesi

Bu protokol, elastin hassasiyeti ve perivasküler elastaz uygulaması kullanarak C57BL/6 farelerinde abdominal aort anevrizmalarını (AAA) indüklemek için tekrarlanabilir ve güvenilir bir yöntem sunar; bu yöntem bağışıklık duyarlılığı bileşeni içeren bir AAA modelidir.

Elastin duyarlılığı ve perivasküler elastaz kullanarak güvenilir bir fare karın aort anevrizması modeli oluşturulması

Anjiyogenez, önceden mevcut olan damarsal kan damarlarının çimlenme hem de doğal ve patolojik süreçleri ile ilişkilidir. Burada anjiyogenik potentiators ve inhibitörleri doğrudan kültür aort halkalar eklenecek sağlayan bir aort halka tahlil göstermektedir. Çimlenme ve neovessel akıbet aort halkaları 6-12 günlük bir süre içinde inceleyerek tespit edilebilir.

Aort Halka Testi

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Vasküler endotel hücreleri birçok önemli kardiyovasküler hastalıkta önemli rol oynamaktadır. Bu makale, herhangi bir özel ekipman kullanmadan fare aortundan endotel hücrelerini izole etmek ve genişletmek için basit bir yöntemi açıklamaktadır. Protokolümüz, endotel hücre fizyopatolojisindeki mekanizmaları tanımlamak için etkili bir yol sağlar.

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

Keşfedin kalsiyum fosfat ile indüklenen fare abdominal aort anevrizması modelini. C57BL6J farelerinde hızlı ve maliyet etkin AAA oluşumunu inceleyerek patolojik özellikleri ve moleküler mekanizmaları öğrenin.

Kalsiyum Fosfat Kaynaklı Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Daha fazla video keşfet