Name: Kahverengi Yağ Dokusunda De Novo Yağ Asidi Sentezinin Döteryum Oksit Kullanılarak Kantitatif Tayini (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T12:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Öğrenin, kahverengi yağ dokusunda de novo yağ asidi sentezinin GCMS ile kantitatif tayini için deuterium oksit kullanımını. Bu yöntem metabolik durumu invaziv olmayan şekilde değerlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Değerli tartışmalar için Sanchez-Gurmaches ve Wallace laboratuvar üyelerine teşekkür ederiz. Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (18CDA34080527'den JSG'ye ve 19POST34380545'ten RM'ye), NIH (JSG'ye R21OD031907), CCHMC Mütevelli Ödülü, CCHMC Pediatrik Genomik Merkezi Ödülü ve CCHMC Mendel Genomik ve Terapötik Merkezi Ödülü'nden alınan hibelerle desteklenmiştir. Bu çalışma kısmen Cincinnati'deki Sindirim Hastalıkları Araştırma Çekirdek Merkezi'nin NIH P30 DK078392 tarafından desteklenmiştir. İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmeyebilir. RT ve MW, UCD Ad Astra Bursu tarafından desteklendi.

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yoktur.

Karmaşık metabolik yolaklar arasındaki dengeyi ve etkileşimi anlamak, metabolik ilişkili hastalıkların biyolojik temelini anlamak için vazgeçilmez bir adımdır. Burada, de novo yağ asidi sentezindeki değişiklikleri belirlemek için invaziv olmayan ve ucuz bir metodoloji gösteriyoruz. Bu yöntem, yağ asidi döteryum zenginleştirmesinden31 de novo sentez akısını tahmin etmek ve vücut suyundakiD2O'nunnispi yüzdesini belirlemek için döteryum-aseton değişimini kullanmak için he...

Obezite ve buna bağlı metabolik hastalıklar, şimdiki ve gelecek nesilleri tehlikeye atan bir salgındır 1,2. Enerji alımı ve harcaması arasındaki dengesizliğin bir sonucu olarak yaygın olarak basitleştirilen obezite ile ilişkili metabolik düzensizlik, çevresel ve endojen faktörler tarafından kontrol edilen çok sayıda metabolik yolu etkiler3. Bununla birlikte, metabolik düzensizliğin hayvan modellerinde sadece birkaç yol rutin olarak test edilir.
Örnek olarak, glikoz imhası, muhtemelen taşınabilir glikoz monitörlerinin kullanımının basitliği nedeniyle, rutin olarak glikoz ve insülin tolerans testleri ile ölçülür4. Tüm vücut glukoz ve lipid oksidasyon nispi oranları da dolaylı kalorimetri testlerinden 5,6 elde edilen solunum değişim oranına dayalı olarak rutin olarak tahmin edilmektedir. Bununla birlikte, metabolizmanın diğer tüm yönlerinin çoğunluğu rutin olarak işlevsel olarak değerlendirilmez. Bu, metabolik durumun eksik yorumlanmasına ve terapötik seçeneklerin kaçırılmasına yol açar. Bu tür ana yollardan biri de novo lipogenezdir.
De novo lipogenez (DNL), öncüllerden yeni yağ asitlerinin üretildiği süreçtir. Glikoz, tüm vücut DNL7'ye katkıda bulunan ana öncü olarak kabul edilir, ancak asetat, fruktoz, laktat ve dallı zincirli amino asitler gibi diğer öncülerin, mekansal ve duruma bağlı bir şekilde ilgili karbon kaynakları olduğu gösterilmiştir 8,9,10,11,12. DNL, metabolik homeostaza önemli bir katkıda bulunur ve normal gelişim için gereklidir13. Ek olarak, DNL'deki değişiklikler kanser 14,15 ve metabolik 16,17,18 ve kardiyovasküler hastalıklar 19,20 ile ilişkilendirilmiştir.
DNL yolu, esas olarak 16 karbonlu doymuş bir yağ asidi olan palmitat üreten çekirdek enzimatik bileşenler ATP sitrat liyaz (ACLY), asetil-CoA karboksilaz (ACC1/2) ve yağ asidi sentazdan (FAS) oluşur. Bununla birlikte, tek zincirli ve dallı zincirli yağ asitleri de daha düşük oranlarda üretilebilir9. Uzamalar ve desatürazlar, bu yağ asitlerini daha da değiştirerek, çeşitli işlevler için yararlı olan çok çeşitli yağ asitleri türleri yaratır (örneğin, uzun süreli enerji depolama ve membran akışkanlığının manipülasyonu).
DNL enzimatik mekanizmasının ekspresyonu, kısa sayıda transkripsiyon faktörü tarafından kontrol edilir. Bugüne kadar en iyi tanımlananlar arasında sterol düzenleyici element bağlayıcı protein (SREBP) ailesi, karbonhidrat yanıt elemanı bağlayıcı protein (ChREBP) ve karaciğer X reseptörü (LXR)21,22,23,24,25,26 bulunur. İşlevlerinde belirgin bir örtüşmeye rağmen, hücre tipi baskınlığına ve fizyolojik veya patolojik koşullara dayalı bireysel düzenlemeler bildirilmiştir21,22,27,28.
Dikkat çekici bir şekilde, DNL yolunun seçilen adımları için bir dizi inhibitör klinik kullanım için onaylanmıştır veya obezite, alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı / alkolsüz steatohepatit (NAFLD / NASH) ve kardiyovasküler hastalık dahil olmak üzere bir dizi hastalık için klinik öncesi veya klinik gelişim aşamalarındadır29. Bu çabalar, DNL'nin sağlık ve hastalıkla olan ilişkisini vurgulamaktadır.
Son yıllarda, de novo yağ asidi sentezini kantitatif olarak değerlendirmek için yöntemlerin kullanımı artmıştır30. Bunu değerlendirmek için en yaygın yöntem, ağır etiketli hidrojenin sentez sırasında hem doğrudan hem de dolaylı olarak, DNL substratları NAPDH, asetil-CoA ve malonil-CoA'nın hidrojenleri ile döteryum değişimi yoluyla asil zincirlerine dahil edildiği ağır etiketli suyun (D2O) kullanılmasıdır. Bu yaklaşım popülerlik kazanmasına rağmen, bu alanda yeni gelenler için uygun, kamuya açık ayrıntılı protokollerin eksikliği vardır. Burada, daha önce Lee ve ark.31 tarafından geliştirilen hesaplamalarla, D2Ove gaz kromatografisi kütle spektrometrisi (GCMS) kullanarak FAS ürünlerinin de novo sentezini nicel olarak değerlendirmek için bir yöntemin ana hatlarını çiziyoruz. Bu yöntem, bir karbon kaynağından bağımsız olarak de novo yağ asidi sentezini ölçer ve herhangi bir fare modelinde ve herhangi bir dış bozulma altında hemen hemen her doku için potansiyel olarak yararlıdır. Burada, yüksek DNL seviyeleri ve metabolik homeostazın korunmasındaki kritik rolleri nedeniyle kahverengi yağ dokusunun (BAT) analizine odaklanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>4 mL Cam Şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-334</td><td></td></tr><tr><td>0.2 & m filtre</td><td>Olympus Plastik</td><td>25-244</td><td></td></tr><tr><td>26G iğneli şırıngalar</td><td>BD</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Merck</td><td>34850</td><td></td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>Merck</td><td>900667</td><td></td></tr><tr><td>Mavi GC septalı vidalı kapak</td><td>Agilent</td><td>5190-1599</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sigma</td><td>366927</td><td></td></tr><tr><td>Döteryum oksit</td><td>Sigma</td><td>151882</td><td></td></tr><tr><td>Di-tert-butil-4-metilfenol (BHT) FAME Sütun</td><td>Merck'i</td> seçin <td>B1378</td><td></td></tr><tr><td>Di-tert-butil-4-metilfenol (BHT) FAME Sütunu Seç</td><td>Agilent</td><td>CP7419</td><td></td></tr><tr><td>EDTA tüpü</td><td>Sarstedt</td><td>411395105</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>51976</td><td></td></tr><tr><td>Hekzadekenoik-d31 Asit</td><td>Larodan</td><td>71-1631</td><td></td></tr><tr><td>Hekzan</td><td>Merck</td><td>34859</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Merck</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Olympus Plastik</td><td>24-282</td><td></td></tr><tr><td>Fare çevre odası</td><td>Caron</td><td>Caron 7001-33</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Fisher Biyoreaktifleri</td><td>BP366-500</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat</td><td>MP Biyomedikaller</td><td>194727</td><td></td></tr><tr><td>SafeLock mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı kehribar GC flakon</td><td>Agilent</td><td>5182-0716</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Fisher Biyoreaktifleri</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Merck</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat, dibazik</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Sülfat</td><td>Merck</td><td>239313</td><td></td></tr><tr><td>Sülfürik Asit</td><td>Merck</td><td>258105</td><td></td></tr><tr><td>Flakon eki</td><td>Agilent</td><td>5183-2088</td><td></td></tr></tbody></table>

kahverengi yağ dokusunda de novo yağ asidi sentezinin döteryum oksit kullanılarak kantitatif tayini

Quantitative Determination of De Novo Fatty Acid Synthesis in Brown Adipose Tissue Using Deuterium Oxide

Yağ asidi sentezi, tüm vücut metabolik homeostazının ve diğer fizyolojik ve patolojik süreçlerin kontrolünde önemli fonksiyonel rollere sahip karmaşık ve yüksek enerji gerektiren bir metabolik yoldur. Glikoz imhası gibi diğer önemli metabolik yolların aksine, yağ asidi sentezi rutin olarak işlevsel olarak değerlendirilmez ve bu da metabolik durumun eksik yorumlanmasına yol açar. Buna ek olarak, bu alanda yeni gelenler için uygun, kamuya açık ayrıntılı protokollerin eksikliği vardır. Burada, in vivo kahverengi yağ dokusunda toplam yağ asidi de novo sentezinin analizi için döteryum oksit ve gaz kromatografisi kütle spektrometrisi (GCMS) kullanan ucuz bir kantitatif yöntemi açıklıyoruz. Bu yöntem, bir karbon kaynağından bağımsız olarak yağ asidi sentaz ürünlerinin sentezini ölçer ve herhangi bir fare modelinde ve herhangi bir dış bozulma altında hemen hemen her doku için potansiyel olarak yararlıdır. GCMS için numune hazırlama ve sonraki hesaplamalar ile ilgili ayrıntılar verilmiştir. Yüksek seviyelerde de novo yağ asidi sentezi ve metabolik homeostazın korunmasındaki kritik rolleri nedeniyle kahverengi yağın analizine odaklanıyoruz.

Adım 1'de açıklananD2Odozuna dayanarak, tipik olarak vücut suyunun %2,5 ila %6 aralığında zenginleştirildiğini ve vücut suyunda temel bir döteryum zenginleştirme seviyesinin 1 saat içinde hızla elde edildiğini ve çalışma süresince %8 zenginleştirilmiş içme suyu ile korunduğunu bulduk (Şekil 1). Sürekli kararlı durum vücut suyu zenginleştirme, 6. adımda kullanılan hesaplamaların bir varsayımıdır ve bu nedenle yeni deneysel modellerde vücut suyu zenginleştirme kinetiğinin d...

Burada, in vivo kahverengi yağ dokusunda toplam yağ asidi de novo lipogenezinin analizi için döteryum oksit ve gaz kromatografisi kütle spektrometrisi (GCMS) kullanan ucuz bir kantitatif yöntem sunuyoruz.

Kahverengi Yağ Dokusunda De Novo Yağ Asidi Sentezinin Döteryum Oksit Kullanılarak Kantitatif Tayini

Fatty acid synthesis is a complex and highly energy demanding metabolic pathway with important functional roles in the control of whole-body metabolic ...

Glikoz imhası gibi diğer metabolik yolların aksine, yağ asidi sentezi rutin olarak değerlendirilmez ve bu da metabolik durumun eksik yorumlanmasına yol açar. Bu yöntemin temel faydaları, nispeten invaziv olmaması ve muhtemelen yağ asidi sentezi akısının, yukarı akış glikoz kullanımındaki değişikliklerin sonuçları etkileyebileceği izotop etiketli glikoz kullanmaktan daha iyi bir yansımasıdır. Burada, kahverengi yağ dokusuna odaklanıyoruz, ancak bu yöntem, herhangi bir fare modelindeki herhangi bir dokuyu incelemek için potansiyel olarak yararlıdır.Başlamak için numuneleri kuru buz üzerine yerleştirin. Önceden etiketlenmiş bir mikrosantrifüj tüpü alın, analitik bir teraziye yerleştirin ve terazinin darasını alın. Ardından cımbız ve neşter veya çelik tıraş bıçağını soğuması için 10 ila 20 saniye kuru buz üzerine yerleştirin.Donmuş doku örneğini tüpten çıkarmak için cımbız kullanın ve düz bir kuru buz bloğu veya önceden soğutulmuş başka bir yüzey üzerine yerleştirilebilen plastik bir ağırlık teknesine yerleştirin. Neşter veya çelik tıraş bıçağı kullanarak, 5 ila 15 miligram ağırlığa eşdeğer dokunun küçük bir kısmını inceleyin ve mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin. Tam ağırlığı kaydedin ve her numune için tekrarlayın.10 milimolar heksadekanoik D31 asidin miligramı başına bir mikrolitre ekleyin, ardından her numuneye üç beş milimetre paslanmaz çelik boncuk ekleyin. Daha sonra boncuklu her numuneye 250 mikrolitre metanol, 250 mikrolitre su ve 500 mikrolitre kloroform ekleyin. Tüpleri önceden soğutulmuş bir öğütme değirmeni bloğuna yerleştirin ve numuneleri beş dakika boyunca 25 hertz'lik bir titreşim frekansında karıştırın.Bir mıknatıs kullanarak boncukları çıkarın ve numuneleri 12.000 G'de dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Bir mikropipet kullanarak, her numunenin alt fazının sabit bir hacmini uygun şekilde etiketlenmiş mikrosantrifüj tüplerine alın. Kalan numuneye 500 mikrolitre kloroform ekleyin ve bu adımları tekrarlayın.Kombine alt fazlı tüpleri nitrojen gazı altına veya tamamen kuruyana kadar dört santigrat derecede kloroforma dayanıklı soğutmalı santrifüj vakuma yerleştirin. 98 mililitre susuz metanolü bir cam ortam şişesine pipetleyin. Ve metanolde %2 sülfürik asit yapmak için çeker ocakta yavaşça iki mililitre susuz sülfürik asit ekleyin.Kapalı şişeyi döndürerek karıştırın. Her numuneye metanol çözeltisi içinde bu %2 sülfürik asitten 500 mikrolitre ekleyin ve kısaca vorteksleyin. Numuneleri ısı bloğunda 50 santigrat derecede iki saat inkübe edin ve her numuneye 100 mikrolitre doymuş sodyum klorür çözeltisi ve 500 mikrolitre heksan ekleyin.Numuneleri oda sıcaklığında bir dakika kuvvetlice vorteksleyin ve numuneleri bir dakika bekletin. Bundan sonra iki aşama belirgin olmalıdır. Üst fazı yeni bir mikrosantrifüj tüpüne toplayın.Ardından heksan ilavesini tekrarlayın. Faz ayrımından sonra, ikinci üst faz numunelerini aynı etiketli tüplerde toplayın. Numuneleri oda sıcaklığında nitrojen gazı altında kurutun ve numuneleri orijinal doku ağırlığının miligramı başına 20 mikrolitre heksan içinde yeniden süspanse edin.Numuneleri hemen bir cam ek parçalı bir cam gaz kromatografi şişesine aktarın. Yağ asidi metil esterlerinin veya FAME izotopologlarının bolluğunu belirlemek için numuneleri tek bir dörtlü gaz kromatografisi kütle spektrometresine enjekte edin. Taşıyıcı gaz olarak helyum kullanarak 270 santigrat derece giriş sıcaklığında bölünmüş veya bölünmemiş bir girişe bir mikrolitre numune enjekte edin.Etiketli güvenli kilitli mikrosantrifüj tüplerinde, her plazma örneğinin 10 mikrolitresini veya standart dört mikrolitre 10 molar sodyum hidroksit ve dört mikrolitre% 5 asetonu asetonitrilde birleştirin. Bunu her örnek için üç kopya halinde gerçekleştirin. Numuneleri gece boyunca oda sıcaklığında inkübe ettikten sonra, her numuneye 450 ila 550 miligram sodyum sülfat ekleyin, çeker ocaktaki her tüpe 600 mikrolitre kloroform ekleyin ve 15 saniye boyunca kuvvetlice girdap yapın.Numuneleri 300 G'de iki dakika santrifüjleyin. Etiketli cam GCMS şişelerini cam eklerle alın ve her numuneden süpernatantın üçlü ve ardından 80 mikrolitrelik alikotlarını şişelere aktarın. GCMS analizi için şişeleri sıkıca kapatın.Birden fazla zaman noktasında farelerin plazmasındaki D2O zenginleşmesinin yüzdesi burada gösterilmektedir. Vücut suyunun %2,5 ila %6 aralığında zenginleştirildiği, vücut suyunda temel bir döteryum zenginleştirme seviyesine bir saat içinde hızla ulaşıldığı ve çalışma süresince korunduğu bulunmuştur. Oda sıcaklığında ve termonötritede üç günlük D2O uygulamasından sonra palmitatın kahverengi yağ dokusunda kütle izotopolog dağılımı burada gösterilmektedir.Bu sonuç, oda sıcaklığında daha yüksek bir M1 ve M2 döteryum zenginleşmesi göstermektedir. Bu şekilde, oda sıcaklığında ve termonötritede üç günlük D2O uygulamasından sonra bir dizi yağ asidinin kahverengi yağ dokusu molar yönünden zenginleştirilmesi ve plazma molar zenginleştirilmesi sunulmaktadır. Daha soğuk sıcaklıkta zenginleşme, kahverengi yağ dokusunda çok çeşitli yağ asitlerinde bulundu.Özellikle, plazma toplam yağ asidi zenginleşmesi, kahverengi yağ dokusu ile aynı eğilimi izlemez, bunun yerine, yağ asidi zenginleştirmesi termonötralite ile artar. Bu görüntüler, üç günlük D2O uygulamasından sonra kahverengi yağ dokusunda toplam bolluğu ve de novo sentezlenmiş palmitatı temsil eder. Sonuç, oda sıcaklığında toplam palmitat sentezinde bir artış olduğunu gösterir.GCMS'de yağ asitleri çalıştırırken dikkatli olun. Palmitatın aşırı yüklenmediğinden emin olun, çünkü yapay olarak yüksek izotop zenginleştirme değerleri verebilir. Ek olarak, GCMS'de asetonu analiz ederken, örnekleri çalıştırmadan önce arka plan aseton tepe noktası olmadığından emin olun, bu nedenle sistemdeki asetonu çıkarmak için boşlukları çalıştırın.Bu yöntem, birden fazla lipit sınıfındaki toplam yağ asitlerine bakar, ancak yağ asidi sentezinin belirli lipit sınıflarını nasıl etkilediğini anlamak istiyorsanız, önce bu lipit sınıflarını kromatografi kullanarak ayırabilir ve ardından bu fraksiyonlardan yağ asitlerini çıkarabilirsiniz. Lipogenez normal gelişime ve aynı zamanda birçok hastalığa önemli bir katkıda bulunduğundan, bu protokol birçok alanda yararlı olabilir.

quantitative-determination-de-novo-fatty-acid-synthesis-brown-adipose

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

De novo lipogenez ve β-yağ asidi oksidasyon hepatosit kilit metabolik, yağlı karaciğer hastalığı da dahil olmak üzere birçok metabolik bozukluklar, içinde tedirgin olan yollar oluşturmaktadır. Burada fare primer hepatositlerin izolasyonu göstermek ve β-yağ asidi oksidasyon ve lipogenez ölçümü açıklar.

Fare İlköğretim Hepatositlerde Yağ Asidi Oksidasyon ve lipogenez Belirlenmesi

Yani, yağ asitleri asimilasyon tüm molekül ve transfer tüketici doku içine yağ asidi trofik marker yaklaşım değişiklik, engel olmayan ya da küçük küçük toprak omurgasızlar yağ asidi metabolizması bilgi boşlukları tarafından. Isotopologue profil oluşturma trofik etkileşimleri disentangle için değerli bir araç olarak sağlanır.

Yağ asidi 13C profil oluşturma Isotopologue trofik karbon Transfer ve Lipid metabolizması, omurgasız tüketicilerin sağlar

Ücretsiz, açık kaynak yazılım kullanarak, toplam ve bölgesel kahverengi yağ dokusundan (BAT) birim ve 18F-FDG PET/CT kullanarak yarasa metabolik etkinliğini ölçmek için analitik bir yaklaşım...

18F-FDG PET/BT kullanarak yağ dokusu kahverengi tüm vücut ve bölgesel Quantification etkin insan

Bu çalışmada, gen ve protein ekspresyon analizi için murin kahverengi adipositlerin izole edilmesinde yeni bir yöntem açıklanmaktadır.

Gen ve Protein İfade Analizi için Murin İnterskapüler Kahverengi Yağ Dokusundan Kahverengi Adipositlerin İzolesi

Mikro-PET/MR görüntüleme tabanlı bir yaklaşım kullanılarak farelerde termojenik yağ depolarının fonksiyonel görüntülenmesi ve kantitasyonu.

[18F]FDG Micro-PET/MR Görüntüleme Kullanılarak Farelerde Kahverengi ve Bej Yağ Dokularının Görselleştirilmesi ve Ölçülmesi

Burada, kahverengi yağ dokusu (BAT) aktivitesinin insan metabolizması üzerindeki etkisinin fizyolojik önemini ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu, karbonhidrat yüklemesi ve dolaylı kalorimetriyi sıcaklıktaki supraklaviküler değişikliklerin ölçümleriyle birleştirerek elde edilir. Bu yeni yaklaşım, insanlarda BAT termojenezi için farmakolojik bir hedef geliştirilmesine yardımcı olabilir.

İnsanlarda kahverengi yağ dokusu termojenezini ölçmek için dolaylı kalorimetri, kızılötesi termografi ve kan şekeri seviyelerinin bir kombinasyonunu kullanma

Preadipositler, yenidoğan farelerden alınan interskapular kahverengi yağ dokusunun stromal vasküler fraksiyonundan izole edilir ve lipid damlacıkları biriktiren, moleküler belirteçleri eksprese eden ve olgun kahverengi adipositlerin mitokondriyal morfolojisini gösteren hücrelere farklılaşır. Bu hücreler ayrıca immünofloresan ve transmisyon elektron mikroskobu ile analiz edilir.

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Nükleer floresan etiketlemeli transgenik muhabir farelerden izole edilen yağ dokuları ile çekirdek sıralama kullanarak özellikle adipositler üzerinde yüksek verimli dizileme (ATAC-seq) ile transpozaz erişilebilir kromatin için bir test protokolü sunuyoruz.

Floresan Aktif Çekirdek Ayıklama Kullanarak Yağ Dokuları ile Adiposit-Spesifik ATAC-Seq

Bu protokolde, bir fare modelinde GC-MS kullanılarak BAT ile optimize edilmiş arteriyovenöz metabolomikler ile ilgili yöntemler özetlenmiştir. Bu yöntemler, organizma düzeyinde BAT aracılı metabolit değişimi hakkında değerli bilgiler edinilmesine izin verir.

Kahverengi Yağ Dokusunda İn Vivo Metabolit Değişimini Ölçmek için Arteriyovenöz Metabolomikler

Cryolysis, üre solubilziation, HILIC fraksiyonasyon ve fosforile peptidlerin IMAC zenginleştirme kullanarak kantitatif fosforilasyon prosedürü açıklaması.

Yağ Asidi Kantitatif Phosphoproteomics Uyarılmış Saccharomyces cerevisiae</em

Öğrenin, kahverengi yağ dokusunda de novo yağ asidi sentezinin GCMS ile kantitatif tayini için deuterium oksit kullanımını. Bu yöntem metabolik durumu invaziv olmayan şekilde değerlendirir.

Kahverengi Yağ Dokusunda De Novo Yağ Asidi Sentezinin Döteryum Oksit Kullanılarak Kantitatif Tayini

Daha fazla video keşfet