Name: Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Öğrenin endometrial desidualizasyon araştırmaları için overiektomi ile fare yapay desidualizasyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem tekrarlayan düşüklerin mekanizmalarını anlamak için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82001629, XQS), Jiangsu Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı Gençlik Programı (BK20200116, XQS) ve Jiangsu Eyaleti Doktora Sonrası Araştırma Fonu'ndan (2021K277B, XQS) destek almak istemektedir.

Açıklanan tüm hayvan deneyleri, Nanjing Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvanların Kullanımı ve Bakımı Komitesi (No. 20171202) Bağlı Davul Kulesi Hastanesi tarafından onaylanmıştır. Tüm operasyonlar uygun hayvan bakımına ve kullanım ajansına ve ulusal yönergelere uygundur.
NOT: Fareler, 22 °C ± 1 °C sıcaklıkta,% 50 ±% 1 bağıl nem, 12 saat / 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü ve yiyecek ve suya serbest erişim ile belirli bir patojensiz (SPF) ortamda yetiştirilmiştir.
1. Fare ovariektomi
<ol><li>Ameliyattan 1 gün önce cerrahi aletleri yüksek sıcaklık ve yüksek basınçlı sterilizatör ile sterilize edin.</li>
	<li>8 haftalık C57BL/6 fareleri tartın ve intraperitoneal olarak (i.p) fareleri uyuşturmak için buna göre% 1 sodyum pentobarbital enjekte edin. Kullanılan doz 40 mg/kg17'dir. Bu doz, yumurtalık ameliyathanesinin gereksinimlerini karşılayan 40-60 dakikalık sedasyon sağlar. Ameliyat öncesi analjezi için, farelere 5 mg / kg meloksikam (s.c) enjekte edin. NOT: Farelerde başarılı anestezi, derin kas reflekslerinin ortadan kalkması ve sabit nefes alma ile belirtilebilir. Başarılı anestezi belirtileri arasında iç kanthusa dokunurken göz kırpma, dili çekerken yutkunma, cildi ayak parmakları arasında sıkıştırırken bacak bükülmesi ve kuyruğu iğnelerken zıplama olmaması sayılabilir.</li>
	<li>Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için koruyucu göz merhemini göz kürelerine uygulayın.</li>
	<li>Fareler tamamen uyuşturulduğunda operasyona başlayın. Fareleri çalışma yüzeyindeki eğilimli pozisyona yerleştirin ve sabitleyin ve saçları sabunlu suyla ıslattıktan sonra arkada tıraş edin. Tıraştan sonra cildi %70 etanol ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Ameliyat kesi yerini, omurgaya paralel her iki arka ekstremitenin uyluk kökünün üst kenarında 0,5 cm (veya kaburganın 1,0 cm altında) bulun (Şekil 1A). NOT: Yumurtalık hızlı bir şekilde lokalize olmak için doğru bir insizyon yeri şarttır.</li>
	<li>Kesi bölgesini merkez olarak alın ve kesi alanını iodophor 3x ile dezenfekte edin, ardından kesi alanının etrafına cerrahi bir örtü yerleştirin.</li>
	<li>Makas kullanarak yaklaşık 0.5-1.0 cm'lik uzunlamasına bir kesi yapın. Fasyayı kesin ve kasları cımbızla pasif olarak ayırın.</li>
	<li>İnce kas tabakasından böbreğin alt kutbuna yakın kesi alanında beyaz yağ yastığının bir parçasını bulun (Şekil 1B). NOT: Beyaz yağ yastığı, yumurtalık yerinin en belirgin göstergesidir.</li>
	<li>Yağ kütlesini hemostatik klipslerle sıkıştırın ve yağ yastığı tarafından sarılmış yumurtalıkları insizyondan çekin.</li>
	<li>Yumurtalık ve fallop tüpünün birleşme noktasını kavisli cımbızla kelepçeleyin ve yumurtalık pedikülü boyunca yumurtalıkları makasla çıkarın. Bir elektrokoagülasyon kalemi veya alkol lambasında ısıtılmış 1 mL'lik bir şırınga iğnesi kullanarak kanamayı durdurun. NOT: Susam yağının uterus boynuzlarına daha sonra enjekte edilmesi için anatomik dönüm noktası olan fallop tüpünü koruduğunuzdan emin olun.</li>
	<li>Doku yapışmasını önlemek için cerrahi insizyonu normal salinle durulayın, sırasıyla kas ve cildi dikmek için 4-0'lık bir dikiş kullanın ve cerrahi insizyonu tekrar iyodofor ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Fareleri kafeste yüzüstü konuma getirin ve yaklaşık 2 saat boyunca bir ışık kaynağı ve bir havalandırma sistemi ile donatılmış 25 ° C'lik bir inkübatörde canlandırın.</li>
	<li>Ameliyattan sonra farelere dikkat edin, tamamen iyileşene kadar onları orijinal beslenme yerine geri koyun ve onlara yeterli su ve yiyecek verin.</li>
</ol>2. Postoperatif istirahat ve östrojen ve progesteron formülasyonu
<ol><li>Farelerin yumurtalık ameliyatından sonra 2 hafta dinlendiğinden emin olun.</li>
	<li>Ultra temiz bir kabinde, RNA enzimsiz santrifüj tüplerinde susam yağına östrojen (2 ng / μL) ve progesteron (0.2 ng / μL) ekleyin.</li>
	<li>Santrifüj tüplerini 37 °C'de termostatik bir su banyosuna yerleştirin ve çözünmeyi hızlandırmak için tüpleri sürekli sallayın.</li>
	<li>Tamamen çözündükten sonra, rahat kullanım için susam yağı çözeltisini 100 μL aliqouts'a bölün. Hazırlanan östrojen ve progesteron çözeltilerini buzdolabında 4 ° C'de saklayın.</li>
</ol>3. İndüklenmiş yapay desidualizasyon modeli
<ol><li>Subkutan olarak (s.c), 3 gün boyunca her fareye 50 μL susam yağı içinde 100 ng östrojen enjekte edin, ardından 2 gün dinlenme15. NOT: Östrojen ve progesteronun formüle edildiğinden ve farklı yerlere yerleştirildiğinden emin olun. Östrojenin progesteron ile kontaminasyonu başarısızlığa yol açabilir.</li>
	<li>Her fareye 3 gün daha15 gün boyunca 50 μL susam yağı içinde 1 mg progesteron ve 10 ng östrojen enjekte edin (s.c.)</li>
	<li>Üçüncü östrojen-progesteron kombine enjeksiyonundan15 6 saat sonra yapay desidualizasyon modelini indüklemek için fareleri çalıştırın.</li>
	<li>Fallop tüplerinin alt ucundaki uterus boynuzunu bulun ve uterus boynuzu ile birlikte yavaşça 20 μL susam yağı enjekte edin, dokuyu geri itin, insizyonu dikin ve farenin iyileşmesine izin verin. Operasyona yaklaşım fare ovariektomi15 ile aynıdır. NOT: Başarılı bir yumurtalık ameliyatı durumunda sadece ikinci ameliyata devam edin (cilt insizyonu iyi iyileşir, yumurtalık tamamen eksize edilir ve fallop tüpünün kalan ucu çevre dokulara yapışmaz). NOT: AD modelini indüklemek için 20 μL susam yağı uygundur; 20 μL'den fazla susam yağı diğer tarafa kolayca nüfuz edecektir.</li>
	<li>4 gün daha 1 mg progesteron ve 10 ng östrojen (H.) içeren 50 μL susam yağı enjekte edin (s.c.) Ayrıntılara Şekil 215,18'deki bakınız.</li>
</ol>4. Örnek toplama
<ol><li>Fareleri (n = 6) karbondioksit boğulması ile ötenazi yapın ve uterusu toplayın. İki taraflı uterinin şeklini gözlemleyin, fotoğraf çekin ve uterus boynuzlarını tartın (Şekil 3A, B).</li>
	<li>Rahim dokusunun 3-5 mm'sini %10 formalin ile sabitleyin, parafine gömün ve kesitleyin. Morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için kesitleri hematoksilin ve eozin ile lekeleyin19 (Şekil 4A).</li>
	<li>Rahim dokusunun 3-5 mm'sini daha optimum kesme sıcaklığı bileşiğine (OCT) gömün, sıvı azotta dondurun ve -80 ° C'lik bir buzdolabında saklayın. Dondurulmuş doku 10 μm'ye kadar kesitlenir ve azo kuplaj yöntemi20 ile uterus dokusundaki alkalen fosfataz aktivitesi tespit edilir (Şekil 4B). NOT: ALP içeriğini tespit etmek için dondurulmuş kesitler kullanılarak tatmin edici sonuçlar elde edilebilir, parafin kesitleri değil.</li>
	<li>Trizol reaktifi ile uterusun toplam RNA'larını çıkarın ve prolaktin ailesi 8 alt aile üyesi 2 (Prl8a2), alkali fosfataz karaciğer / kemik / böbrek (Alpl) ve insülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein 1 (Igfbp1)15'in göreceli mRNA ekspresyonunu 18S mRNA seviyelerine normalleştirerek tespit etmek için qPCR ana karışımı (Malzeme Tablosu) ile gerçek zamanlı bir PCR sisteminde (qPCR) kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) gerçekleştirin (Şekil 4C-E ). PCR koşullarını takip edin: Aşama 1, 30 s için 95 °C; Aşama 2, 10 s için 95 °C ve 30 s için 60 °C; 40x döngüsünü tekrarlayın. Astar dizilerinin tam listesi Tablo 1'de verilmiştir.</li>
	<li>Uygun yazılımda istatistiksel analiz için 2-ΔΔCT yöntemini ve bir t-testi yöntemini kullanarak qPCR verilerini analiz edin. Bu çalışmada p < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.</li>
</ol>

<ol><li>Carson, S. A., Kallen, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+infertility%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of infertility: A review.</a> JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).</li>
<li>Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+female+infertility+dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Genetics of human female infertility dagger.</a> Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).</li>
<li>Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+mechanisms+of+endometrial+decidualization+and+pregnancy-related+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).</li>
<li>Ng, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+decidualization%3A+The+primary+driver+of+pregnancy+health%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092(2020).</li>
<li>Birgit, G., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).</li>
<li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li>
<li>Paulson, E. E., Comizzoli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+receptivity+and+embryo+implantation+in+carnivores-commonalities+and+differences+with+other+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species.</a> Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).</li>
<li>Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+glands+coordinate+on-time+embryo+implantation+and+impact+endometrial+decidualization+for+pregnancy+success%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success.</a> Nature Communications. 9 (1), 2435(2018).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+monoamine+oxidase+a+impairs+endometrial+receptivity+in+women+with+adenomyosis+via+downregulation+of+FOXO1dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger.</a> Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).</li>
<li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).</li>
<li>Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decidualization+of+the+human+endometrial+stromal+cell%3A+an+enigmatic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).</li>
<li>Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stromal+cells+and+decidualized+stromal+cells%3A+Origins%2C+transformation+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions.</a> Gene. 551 (1), 1-14 (2014).</li>
<li>Jose, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+and+decidual+stromal+precursors+show+a+different+decidualization+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity.</a> Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).</li>
<li>Pan-Castillo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphophysical+dynamics+of+human+endometrial+cells+during+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization.</a> Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+mouse+decidualization+models+at+the+molecular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level.</a> Genes. 11 (8), 935(2020).</li>
<li>De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55168(2017).</li>
<li>Kerger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+oxygen+delivery+and+interstitial+oxygenation+during+sodium+pentobarbital+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia.</a> Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).</li>
<li>Filant, J., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+glands+are+essential+for+blastocyst+implantation+and+decidualization+in+the+mouse+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus.</a> Biology of Reproduction. 88 (4), 93(2013).</li>
<li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+protease+LONP1+maintains+oocyte+development+and+survival+by+suppressing+nuclear+translocation+of+AIFM1+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals.</a> EBioMedicine. 75, 103790(2022).</li>
<li>Grogg, E., Pearse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+azo+dye+methods+for+histochemical+demonstration+of+alkaline+phosphatase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase.</a> Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).</li>
<li>Labarta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+serum+and+endometrial+progesterone+in+determining+endometrial+receptivity%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity.</a> Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Farelerde desidualizasyon, insanlardan farklı olan embriyoların varlığına bağlı olarak kendiliğinden bir süreçtir. Bununla birlikte, cam boncukların uterus enjeksiyonu ve uterus yırtılması gibi yapay stimülasyonun, embriyolar yerine endometriyumun desidualizasyonuna neden olabileceği bulunmuştur. Ek olarak, araştırmacılar, steroid hormonlarının, prostaglandinlerin ve büyüme inhibitör faktörlerin uterus boşluğuna enjekte edilmesi gibi birçok faktörün desidual indükleyebileceğini veya desidualizasyona katılabileceğini bulm...

İnsan destekli üreme teknolojisinin gelişmesiyle birlikte, in vitro fertilizasyon-embriyo transferinin (IVF-ET) mevcut klinik gebelik oranı, doğal gebeliğin seviyesine ulaşmış veya hatta aşmıştır. Buna rağmen, yardımcı üreme klinik pratiğindeki birçok hasta hala çoklu embriyo transferlerine maruz kalmaktadır, ancak istenildiği gibi gebelik elde edememektedir. Bununla birlikte, spesifik moleküler mekanizması hala belirsizdir, bu nedenle klinik müdahale etkisizdir, bu da üreme tıbbının karşılaştığı önemli zorluklardan biridir 1,2.
Endometriyal faktörler, IVF başarısızlığının nedenlerinin yaklaşık üçte ikisini oluşturur3. İnsan embriyosu implantasyonu üç aşamaya ayrılır: konumlandırma, yapışma ve istila 4,5,6. Maternal endometriyum, embriyonun gelişini karşılamak için bir dizi değişikliğe uğrar. İmplantasyon "pencere dönemi" oluşturmak, embriyo implantasyonu için uygun koşullar sağlar 7,8.
Çoğu memelide, blastosist uterusun luminal epiteline yapıştıktan sonra, blastosisti çevreleyen stromal hücreler hızla çoğalmaya ve farklılaşmaya başlar ve mezenkimin hızlı bir şekilde yeniden şekillenmesi şeklini ve işlevini değiştirerek embriyo implantasyonuna yol açar 5,9,10. Site hacmindeki ve ağırlığındaki hızlı artış, blastosistin desidualizasyon11 olarak bilinen bir süreç olan uterus stromasına gömülmesine izin verir. Endometriyal stroma gebeliğe hazırlık aşamasında farklılaşır ve yeniden şekillenirken, stromal hücrelerin geçişi, desidual hücrelerin işlevlerini yerine getirmeleri için alan ve yeni sinyal bağlantıları sağlar12,13. Stromal hücreler desidual hücrelere dönüşür ve prolaktin (PRL), insülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein 1 (Igfbp1) gibi birçok ikonik faktör salgılar. Çalışmalar, anormal desidualizasyonun embriyo implantasyon başarısızlığının temel nedenlerinden biri olduğunu göstermiştir, ancak anormal desidualizasyonun nedeni hala belirsizdir ve daha fazla aydınlatılması gerekmektedir 1,14.
Fare yapay desidualizasyon modeli, desidualizasyonun altında yatan fizyolojik süreci ve moleküler mekanizmaları incelemek için gereklidir. Yapay desidualizasyon (AD) esas olarak hamileliği veya adet döngüsünü simüle etmek için yapay yöntemlerle kurulan endometrial desidualizasyon sürecini ifade eder. Morfoloji açısından, gebelik desidualizasyonu ile yapay desidualizasyon arasında genel olarak çok az fark vardır15,16. Rahim bezleri desidua oluşmadan önce endometriyumda bulunur ve desidualizasyondan sonra kaybolur. Gen ekspresyonu ile ilgili olarak, doğal gebelik desidualizasyonu (NPD) ile AD15 arasında sadece küçük bir fark tespit edilmiştir. Sonuç olarak, farelerdeki yapay desidualizasyon modeli, bilinmeyen patogenezi ve insan üreme hastalıklarının yeni tedavisini araştırmak için gebelik desidualizasyonunu simüle edebilir.
NPD, AD ve in vitro desidualizasyon (IVD), fare desidualizasyonunu elde etmek için üç yöntemdir. NPD modeli doğal gebeliğe bağlıdır ve embriyoların etkileri de dahil olmak üzere maternal fizyolojik duruma en yakın olanıdır. İmplantasyon ve implantasyon dışı bölgeler arasındaki farkları karşılaştırmak, desidualizasyonu incelemek için daha fizyolojik ve uygun bir yaklaşımdır. AD modeli, embriyoların etkisinden kaçınmak için vazektomize erkeklerle çiftleştirilmiş sahte hamile bir dişi farede desidualizasyonu indüklemek için uyarıcı olarak intrauterin susam yağı enjeksiyonu kullanılarak geliştirilmiştir. Hem NPD hem de AD modelleri farklı araştırma amaçlarında önemli roller oynar, ancak çiftleşme başarısızlığından ve maternal hormon metabolizmasının farklı aktivitelerinin neden olduğu grup içi farklılıklardan kaçınamazlar. IVD, östrojen ve progesteronun kombine tedavisine hücresel düzeyde bağlı, daha sıkı deneysel koşullar ve ameliyat yeteneği gerektiren bir yöntemdir. Bununla birlikte, in vitro model, fizyolojik koşullar altında desidual yanıtı tam olarak simüle edemez15. Bu nedenle, endojen hormonların desidualizasyon üzerindeki etkisini azaltmak için geleneksel AD'den modifiye edilmiş basit ve geliştirilmiş bir indüksiyon yöntemi öneriyoruz. Desidualizasyon indüksiyonunun başarısını sağlamaya dayanarak, fizyolojik duruma daha yakındır ve embriyo faktörlerini dışlaması gereken deneyler için daha uygundur.

<table><tbody><tr><td>Östrojen</td><td>Sigma</td><td>E2758</td><td>Hormon takviyesi</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Hormon takviyesi</td></tr><tr><td>Susam yağı&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td>Hormon takviyesi</td></tr><tr><td>Sodyum pentobarbital&nbsp;</td><td>Dainippon Sumitomo İlaç Co., Ltd.</td><td></td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>Meloksikam enjeksiyonu</td><td>Qilu Hayvan Sağlığı Ürünleri Co, Ltd</td><td></td><td>Analjezi</td></tr><tr><td>Alkalin phophataz leke kiti (kaplow's / azo birleştirme yöntemi)</td> <td>Solarbio</td><td>G1480</td><td>Alkalin phophatase leke</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Servicebio</td><td>G1005-2</td><td>HE lekesi</td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Servicebio</td><td>G1005-1</td><td>HE lekesi</td></tr><tr><td>ChamQ Evrensel SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>Lircon</td><td>ZH1120090</td><td>Dezenfekte</td></tr><tr><td>İyodofor</td><td>Runzekang</td><td>RZK-DF</td><td>Dezenfekte</td></tr><tr><td>Eritromisin Göz Merhemi</td><td>Guangzhou Baiyunshan</td><td></td><td>Fareler göz küresi</td></tr><tr><td>4-0 sütür</td> korur <td>Ethicon</td><td>W329</td><td>İnsizyon sütür</td></tr><tr><td>% 10 formalin</td><td>Yulu</td><td>L25010118</td><td>Doku düzeltmesi</td></tr><tr><td>Optimum kesme sıcaklığı bileşiği</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Seksiyon</td></tr><tr><td>Trizol reaktifi</td><td>Ambion</td><td>15596018</td><td>qPCR</td></tr></tbody></table>

endometrial desidualizasyon araştırması için ovariektomi ile fare yapay desidualizasyon modelinin oluşturulması

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Endometrial desidualizasyon, menstrüasyon ve gebelik ile yakından ilişkili olan endometriyumun benzersiz bir farklılaşma sürecidir. Desidualizasyonun bozulması infertilite, tekrarlayan düşük ve erken doğum gibi çeşitli endometriyal bozukluklara yol açar. Endometriyal desidualizasyon modelinin üreme çalışmalarında geliştirilmesi ve kullanılması, üreme araştırmacıları için uzun zamandır bir vurgu olmuştur. Fare, üreme ve desidualizasyonu incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır. Desidualizasyon ile ilgili üç köklü fare modeli vardır, yani doğal gebelik desidualizasyonu (NPD), yapay desidualizasyon (AD) ve in vitro desidualizasyon (IVD). Bunlar arasında AD, uygulanması kolay ve NPD'ye yakın olan fare desidualizasyonu için güvenilir bir model olarak kabul edilir. Bu yazıda, yumurtalık etkilerinden kaçınmak için yumurtalık etkilerinden kaçınmak için fare yapay desidualizasyon modelinin yumurtalık ile oluşturulması ve uygulama sürecinin modifiye edilmiş bir yöntemine odaklanılmıştır, bu da grup içinde küçük varyanslarla yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar elde edebilir. Bu yöntem, endometrial desidualizasyon çalışması için iyi ve güvenilir bir hayvan modeli sağlar.

Fare desidualizasyon modeli indeksleri, uterusun genel morfolojisini, desidualize ve desidualize olmayan uterusun kütle oranını, endometriyumun histolojik morfolojisini ve desidualizasyon belirteci moleküllerinin ekspresyon seviyesini içerir. Yağ tarafından indüklenen farelerin yapay desidualize uterusunun genel morfolojisi, hamilelikte uterusunkine daha yakındır. Uterus gövdesi kalınlaşır ve uterus boşluğu indüklenmeyen taraftan daha küçük hale gelir. İndüklenen uterus boynuzunun hacmi ve ağırlığı, indüklenmeyen tarafın...

Burada, endometrial desidualizasyon araştırma alanında klasik bir endometrial desidualizasyon deneyi olan ovariektomize fareyi kullanarak yapay bir desidualizasyon modeli oluşturma yöntemini açıklıyoruz.

Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Ademi merkeziyetçiliğin bozulması, ölüm, tekrarlayan bir düşük gibi endometriyal bozuklukların virüsüne yol açar. Bu yöntem, endometriyal ademi merkeziyetçilik çalışması için iyi ve güvenilir bir hayvan modeli sağlar. Ovariektomi ile yapılan bu yapay ademi merkeziyetçilik modeli, angelina'nın hormonlar üzerindeki etkisini önleyebilir, bu da grup içinde küçük farklılıklarla genellikle yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar doğurabilir.Ameliyattan bir gün önce cerrahi aletleri yüksek sıcaklık ve yüksek basınçlı sterilizatör ile sterilize etmeye başlamak. Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için koruyucu göz merhemini göz kürelerine uygulayın. Fareler tamamen uyuşturulduğunda operasyona başlayın.Fareleri çalışma yüzeyinde yüzüstü konuma getirin ve saçları sabunlu suyla ıslattıktan sonra sırtında tıraş edin. Cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin. Ameliyat kesi yerini, omurgaya paralel her iki arka ekstremitenin uyluk kökünün üst kenarında 0,5 santimetrede bulun.Kesi bölgesini merkez olarak alın ve kesi bölgesini üç kez iyotofor ile dezenfekte edin. Makas kullanarak yaklaşık 0,5 ila bir santimetre arasında uzunlamasına bir kesi yapın. Fasyayı kesin ve kasları cımbızla pasif olarak ayırın.İnce kas tabakasından böbreğin alt kutbuna yakın kesi alanında beyaz yağ yastığının bir parçasını bulun. Yağ kütlesini hemostatik klipslerle sıkıştırın ve yağ yastığı tarafından sarılmış yumurtalıkları insizyondan çekin. Yumurtalık ve fallop tüplerinin birleşme noktasını kavisli cımbızla kelepçeleyin ve yumurtalık pedikülü boyunca yumurtalıkları makasla çıkarın.Bir elektrokoagülasyon kalemi veya alkol lambasında ısıtılmış bir mililitrelik şırınganın iğnesini kullanarak kanamayı durdurun. Doku yapışmasını önlemek için cerrahi kesiyi normal salin ile durulayın. Sırasıyla kas ve cildi ekmek için 4-0'lık bir dikiş kullanın ve cerrahi kesiyi tekrar iyodofor ile dezenfekte edin.Fareleri kafeste yüzüstü konuma yerleştirin ve 25 santigrat derecelik bir inkübatörde canlandırın. Yaklaşık iki saat boyunca bir ışık kaynağı ve havalandırma sistemi ile donatılmıştır. Ameliyattan sonra farelere dikkat edin.Tamamen iyileşene kadar onları orijinal beslenme yerine geri koyun ve onlara yeterli su ve yiyecek verin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde 100 nanogram östrojeni deri altından enjekte edin ve ardından iki gün dinlenin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde bir miligram progesteron ve 10 nanogram östrojen enjekte edin.Üçüncü östrojen progesteron kombine enjeksiyonundan altı saat sonra yapay kalıntı modelini indüklemek için fareleri çalıştırın. Fallop tüplerinin alt ucundaki uterus boynuzunu bulun ve uterus boynuzu boyunca yavaşça 20 mikrolitre susam yağı enjekte edin. Dokuyu geriye doğru itin, kesiyi dikin ve farenin iyileşmesine izin verin.Rahim dokusunun üç ila beş mililitresini parafine gömülmüş% 10 formalin ile sabitleyin ve kesitleyin. Morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için bölümleri hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. Rahim dokusunun bir başka üç ila beş milimetresini optimum kesme sıcaklığına gömün, sıvı azotta dondurun ve eksi 80 santigrat derece dondurucuda saklayın.Dondurulmuş doku 10 mikrometrede kesitlenir ve Azo kuplajlama yöntemi ile uterus dokusundaki alkalen fosfataz aktivitesi tespit edilir. Yağ tarafından indüklenen farelerin yapay merkezi olmayan uterusunun genel morfolojisi, hamilelikte uterusunkine daha yakındır. Uterus gövdesi kalınlaşır ve uterus boşluğu indüklenmeyen taraftan daha küçük hale gelir.İndüklenen uterus boynuzunun hacmi ve ağırlığı, indüklenmeyen tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksektir. Rahim dokusunun hematoksilin ve eozin boyaması bezlerin kaybolduğunu ve indüklenen yırtık üzerindeki son endometriyal stromal hücrelerin, hücre sınırları belirsiz olan büyük yuvarlak sitoplazmik ve çok çekirdekli desidual hücrelere farklılaştığını göstermiştir. İndüklenmeyen yan kesitler endometriyal doku morfolojisini normal fizyolojik bir durum altında gösterir.Azo kaplin yönteminin sonucu, yağın indüklediği tarafın alkalen fosfataz içeriğinin, indüklenmemiş tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermiştir. QPCR sonuçları, indüklenen boynuzdaki PRL-8-A-2, ALPL ve IGFBP-1'in mRNA ekspresyonunun, indüklenmemiş olandan önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ve yağın farelerde yapay ademi merkeziyetçiliği indükleyebileceğini düşündürdüğünü göstermiştir. Homo takviyesi, başarının anahtarı olan homolar arasındaki kontaminasyona özel dikkat gerektiren uzun bir süreçtir.Bu modele dayanarak, rezidüalizasyonu düzenleyen spesifik moleküllerin ilgili mekanizmasını inceleyebilen Adenovirüsün uterus boynuzu enjeksiyonu yapılabilir.

generation-mouse-artificial-decidualization-model-with-ovariectomy

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Fare ve sıçanlarda barsak mezenter arter kaskad rahim dokusundaki otomatik nakli endometriozis cerrahi indüksiyon açıklaması.

Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Bu videoda, bir fare modelinden sağlam yumurtalık çıkarmak için uygulanan cerrahi bir prosedürü anlatıyoruz.

Fareden Sağlam Yumurtalık Alımı: Tam Yumurtalığı Murin Modelinden İzole Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Bu çalışma, in vitro desidualizasyon çalışma için Coculture sisteminde kullanılabilen birincil fare, endometriyal stromal ve epitelyal hücrelerin izolasyonu ve kültürü, bir standart ve geçerli bir yöntem sunulur.

Fare Endometrial stromal ve epitelyal hücrelerin izolasyonu için<em&gt; İn Vitro</em&gt; sidualizasyonu

Bu çalışmada yalıtım ve kültür vitro decidualization tahlil yapmak için insan endometrium stromal hücre için doğrulanmış ve en iyi duruma getirilmiş bir yordam sunar. Ayrıca, bu çalışmada çift insan endometrium stromal hücreler kullanarak belirli bir gen için verimli bir şekilde devirme detaylı bir yöntem sağlar.

Vitro Decidualization için insan endometrium Stromal hücre izolasyon

Burada, canlı görüntüleme, farelerde aşılı fluorescently etiketli insan endometrium parçacıkları için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntemi seçim ilaçların etkileri izleme aracılığıyla endometriotic lezyon boyutu ve gerçek zamanlı olarak flüoresan muhabir tarafından yayılan Floresans miktar...

Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Bu protokol, gen ekspresyonu ve histolojik analizler için fare endometriyal epitel organoidlerini oluşturma metodolojilerini açıklamaktadır.

Fare Rahiminden 3D Endometriyal Organoidlerin Kurulması

Gebelik oluşumu, kompleks embriyo ve uterus çapraz ilişkisini içeren dinamik bir süreçtir. Maternal uterin ortamın bu süreçlere kesin katkıları aktif bir araştırma alanı olmaya devam etmektedir. Burada, bu araştırma sorularını ele almak için in vivo hayvan modellerinin tasarlanmasına yardımcı olacak ayrıntılı protokoller sağlanmaktadır.

Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri

Çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda folikül stimüle edici hormon (FSH) birçok hastalığın patogenezi ile ilişkilidir. Yumurtalıklı ve FSH ile tedavi edilmiş fare modeli (OVF), FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

Folikül Uyarıcı Hormonun Bağımsız Etkilerinin Bir Fare Modelinde İn Vivo Olarak Araştırılması

Bu çalışma, endometriozisin klinik olarak anlamlı bir alt tipi olan endometrioma'yı simüle etmek için özel olarak tasarlanmış yeni bir fare modelini tanıtmaktadır. Model, C57BL / 6J farelerini kullanarak, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaları aydınlatmayı ve üreme tıbbındaki mevcut bilgi boşluğunu kapatmak için rafine bir araç sunmayı amaçlamaktadır.

Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

Bu makale, fare rahmine 1-3 dakika içinde %95 etanol enjekte ederek çok düşük mortalite oranı ve minimal intrauterin adezyonlara sahip güvenilir ve tekrarlanabilir bir ince endometriyum üretmek için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır.

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

Öğrenin endometrial desidualizasyon araştırmaları için overiektomi ile fare yapay desidualizasyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem tekrarlayan düşüklerin mekanizmalarını anlamak için güvenilir bir çerçeve sunar.

Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması

Daha fazla video keşfet