Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması

Ademi merkeziyetçiliğin bozulması, ölüm, tekrarlayan bir düşük gibi endometriyal bozuklukların virüsüne yol açar. Bu yöntem, endometriyal ademi merkeziyetçilik çalışması için iyi ve güvenilir bir hayvan modeli sağlar. Ovariektomi ile yapılan bu yapay ademi merkeziyetçilik modeli, angelina'nın hormonlar üzerindeki etkisini önleyebilir, bu da grup içinde küçük farklılıklarla genellikle yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar doğurabilir.

Ameliyattan bir gün önce cerrahi aletleri yüksek sıcaklık ve yüksek basınçlı sterilizatör ile sterilize etmeye başlamak. Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için koruyucu göz merhemini göz kürelerine uygulayın. Fareler tamamen uyuşturulduğunda operasyona başlayın.

Fareleri çalışma yüzeyinde yüzüstü konuma getirin ve saçları sabunlu suyla ıslattıktan sonra sırtında tıraş edin. Cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin. Ameliyat kesi yerini, omurgaya paralel her iki arka ekstremitenin uyluk kökünün üst kenarında 0,5 santimetrede bulun.

Kesi bölgesini merkez olarak alın ve kesi bölgesini üç kez iyotofor ile dezenfekte edin. Makas kullanarak yaklaşık 0,5 ila bir santimetre arasında uzunlamasına bir kesi yapın. Fasyayı kesin ve kasları cımbızla pasif olarak ayırın.

İnce kas tabakasından böbreğin alt kutbuna yakın kesi alanında beyaz yağ yastığının bir parçasını bulun. Yağ kütlesini hemostatik klipslerle sıkıştırın ve yağ yastığı tarafından sarılmış yumurtalıkları insizyondan çekin. Yumurtalık ve fallop tüplerinin birleşme noktasını kavisli cımbızla kelepçeleyin ve yumurtalık pedikülü boyunca yumurtalıkları makasla çıkarın.

Bir elektrokoagülasyon kalemi veya alkol lambasında ısıtılmış bir mililitrelik şırınganın iğnesini kullanarak kanamayı durdurun. Doku yapışmasını önlemek için cerrahi kesiyi normal salin ile durulayın. Sırasıyla kas ve cildi ekmek için 4-0'lık bir dikiş kullanın ve cerrahi kesiyi tekrar iyodofor ile dezenfekte edin.

Fareleri kafeste yüzüstü konuma yerleştirin ve 25 santigrat derecelik bir inkübatörde canlandırın. Yaklaşık iki saat boyunca bir ışık kaynağı ve havalandırma sistemi ile donatılmıştır. Ameliyattan sonra farelere dikkat edin.

Tamamen iyileşene kadar onları orijinal beslenme yerine geri koyun ve onlara yeterli su ve yiyecek verin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde 100 nanogram östrojeni deri altından enjekte edin ve ardından iki gün dinlenin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde bir miligram progesteron ve 10 nanogram östrojen enjekte edin.

Üçüncü östrojen progesteron kombine enjeksiyonundan altı saat sonra yapay kalıntı modelini indüklemek için fareleri çalıştırın. Fallop tüplerinin alt ucundaki uterus boynuzunu bulun ve uterus boynuzu boyunca yavaşça 20 mikrolitre susam yağı enjekte edin. Dokuyu geriye doğru itin, kesiyi dikin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Rahim dokusunun üç ila beş mililitresini parafine gömülmüş% 10 formalin ile sabitleyin ve kesitleyin. Morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için bölümleri hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. Rahim dokusunun bir başka üç ila beş milimetresini optimum kesme sıcaklığına gömün, sıvı azotta dondurun ve eksi 80 santigrat derece dondurucuda saklayın.

Dondurulmuş doku 10 mikrometrede kesitlenir ve Azo kuplajlama yöntemi ile uterus dokusundaki alkalen fosfataz aktivitesi tespit edilir. Yağ tarafından indüklenen farelerin yapay merkezi olmayan uterusunun genel morfolojisi, hamilelikte uterusunkine daha yakındır. Uterus gövdesi kalınlaşır ve uterus boşluğu indüklenmeyen taraftan daha küçük hale gelir.

İndüklenen uterus boynuzunun hacmi ve ağırlığı, indüklenmeyen tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksektir. Rahim dokusunun hematoksilin ve eozin boyaması bezlerin kaybolduğunu ve indüklenen yırtık üzerindeki son endometriyal stromal hücrelerin, hücre sınırları belirsiz olan büyük yuvarlak sitoplazmik ve çok çekirdekli desidual hücrelere farklılaştığını göstermiştir. İndüklenmeyen yan kesitler endometriyal doku morfolojisini normal fizyolojik bir durum altında gösterir.

Azo kaplin yönteminin sonucu, yağın indüklediği tarafın alkalen fosfataz içeriğinin, indüklenmemiş tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermiştir. QPCR sonuçları, indüklenen boynuzdaki PRL-8-A-2, ALPL ve IGFBP-1'in mRNA ekspresyonunun, indüklenmemiş olandan önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ve yağın farelerde yapay ademi merkeziyetçiliği indükleyebileceğini düşündürdüğünü göstermiştir. Homo takviyesi, başarının anahtarı olan homolar arasındaki kontaminasyona özel dikkat gerektiren uzun bir süreçtir.

Bu modele dayanarak, rezidüalizasyonu düzenleyen spesifik moleküllerin ilgili mekanizmasını inceleyebilen Adenovirüsün uterus boynuzu enjeksiyonu yapılabilir.