Tyramide Signal Amplification for the Immunofluorescent Staining of ZBP1-Dependent Phosphorylation of RIPK3 and MLKL After HSV-1 Infection in Human Cells

Josephine Nemegeer; Kelly Lemeire; Peter Vandenabeele; Jonathan Maelfait

doi:10.3791/64332

İnsan Hücrelerinde HSV-1 Enfeksiyonu Sonrası ZBP1'e Bağlı RIPK3 ve MLKL'nin İmmünofloresan Boyama...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Tyramide Signal Amplification for the Immunofluorescent Staining of ZBP1-Dependent Phosphorylation of RIPK3 and MLKL After HSV-1 Infection in Human Cells

İnsan Hücrelerinde HSV-1 Enfeksiyonu Sonrası ZBP1'e Bağlı RIPK3 ve MLKL'nin İmmünofloresan Boyama İçin Timamid Sinyal Amplifikasyonu

Full Text

2,820 Views

09:15 min

October 20, 2022

DOI: 10.3791/64332-v

Josephine Nemegeer^1,2, Kelly Lemeire^1,2, Peter Vandenabeele^1,2, Jonathan Maelfait^1,2

¹VIB-UGent Center for Inflammation Research, ²Department of Biomedical Molecular Biology,Ghent University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

İmmünofloresan boyama sırasında tiramid sinyal amplifikasyonu, HSV-1 enfeksiyonundan sonra ZBP1 kaynaklı nekroptoz sırasında fosforile RIPK3 ve MLKL'nin hassas tespitini sağlar.

Nekrotoz indüksiyonu sırasında iki önemli sinyal olayı olan fosforile RIPK3 ve MLKL'nin sağlam bir şekilde görselleştirilmesi teknik olarak zor olmuştur. Sunulan tiramid amplifikasyon protokolü, bu iki molekülün hassas bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Sinyal amplifikasyon adımı, fosforile RIPK3 ve MLKL'nin sağlam ve tekrarlanabilir bir şekilde algılanmasını sağlayarak algılama eşiğini düşürür.

90.000 ZBP1 eksprese eden HT-29 hücrelerini tam güçte McCoy's 5A ortamında bir santimetre karelik bir yüzey alanı kuyu plakasında tohumlamaya başlayın ve üst düzey mikroskopiye izin verin. Kuyu başına 200 mikrolitrelik bir uç hacim kullanın. Hücreleri gece boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede inkübe edin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos