Diyet Lipid Emiliminin ve Şilomikron Sekresyonunun İn Vivo Kinetiğini Ölçmek için Farelerde Akan Mezenterik Lenflerin İzolasyonu

Protokolümüz, akan mezenterik lenflerde postprandiyal metabolizmayı doğrudan ölçmemizi sağlar. Bu güçlüdür, çünkü besinlerin ince bağırsaktan lenf içine hareketini nicel olarak belirleyebiliriz. Ve sitokinleri, diyet lipitlerini, diğer diyet bileşenlerini ve lenfositleri ölçebiliriz.

Bu teknik, lenf içine hareket eden diyet lipitlerinin dinamiklerini, şilomikronların sentezini ve sekresyonunu incelememize yardımcı olabilir. Burada sunulan bir günlük modelin birkaç avantajı vardır. İlk olarak, deneysel zamanı azaltır.

İkincisi, hayvan stresini azaltır. Hayvanların hayatta kalmasını arttırır. Ve genel olarak, deney sayısını azaltır.

Bugün tekniğimizi gösteren, Kıdemli Laboratuvar Cerrahımız Bay Nick Dedousis olacak. Ve Araştırma Bilimcimiz Dr. Lihong Teng. Fareyi ameliyata hazırladıktan sonra, cildi cımbızla kavrayın ve küçük makasla orta hat karın kesisi yapın.

Daha sonra, sternuma doğru ve kasık yağına doğru kesin. Retraktörü kullanarak, lenf kanalı görünene kadar periton iç organlarını yoldan uzaklaştırın. Tuzlu suya batırılmış bir Q-ucu kullanarak, karaciğeri vücudun sağ üst tarafına ve bağırsakları ve mideyi hayvanın soluna doğru hareket ettirin.

Daha sonra duodenumu enine sola doğru gererek superior mezenterik arteri ve bağırsak lenf kanalını açığa çıkarın. Künt bir iğne sokarak 30 ila 40 santimetre uzunluğunda bir kanül tüpü hazırlayın. Daha sonra, bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, tüpün içinden az miktarda heparin yıkayın ve makas kullanarak kanül borusunun ucunda bir eğim kesin.

Ardından, makalede açıklandığı gibi iris makası kullanmak için sığ bir kesi ve lenf kanalı yapın. Kanül borusunu bir çift ince forseps ile tutun ve uç eğimini yavaşça kanala yerleştirin. Lenf kanalı kırılgan olduğundan, kateteri bir dikişle bağlamak yerine lenf kanülünü mezenterik lenf içine yapıştırmak için bir damla siyanoakrilat kullanın.

Şimdi, 18 gauge'lik bir iğne kullanarak, midenin pilorik bölgesinden pilor sfinkterine doğru bir delik açın ve duodenal infüzyon tüpünü mideye pilor sfinkterinin bir ila iki milimetre ötesinde duodenuma yerleştirin. Daha sonra, tüpü bir ipek 5/0 dikiş kullanarak bir çanta ipi bağı ile mideye sabitleyin ve sızıntıyı önlemek için bir damla siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın. % 5 glikoz ve% 0.9 salin intraduodenal infüzyonuna başlayın.

Vücut boşluğundaki organları değiştirin ve orta hat insizyonunu dikin. Fareyi nazikçe sıkıca tutturulmuş bir kısıtlamaya yerleştirin. Farelere bir saat boyunca sürekli intraduodenal salin ve glikoz infüzyonu sağlayın.

Kanülü lenf akışı açısından kontrol edin ve lenf akışını sürdürmek için lenf kanülünü sağmaya başlayın. İntraduodenal infüzyon tüpü yoluyla 0.3 mililitrelik lipid emülsiyon bolusunun klasik lipid infüzyonunu gerçekleştirin. Daha sonra, infüzyonu, deneyin sonuna kadar sürekli olarak saatte 0.3 mililitrede% 5 glikoz ve% 0.9 saline geri döndürün.

Lenf örneklerini toplayın ve mikro santrifüj tüplerini 60 dakika boyunca önceden tartın ve lenfleri buz üzerinde tutun. Her 60 dakikada bir salgılanan lenf ağırlığını belirlemek için tüpleri ikinci kez tartın. Mide, çekum ve kolonu toplayın ve her organı 15 mililitrelik bir cam tüpe yerleştirin.

İnce bağırsağı üç veya dört bölüme ayırın. Uzunlamasına kesin ve dokuyu iki ila üç mililitre soğuk PBS ile durulayarak luminal içeriği toplayın. Epitel hücrelerini ve ilişkili lamina propria'yı içeren bağırsak mukozasını kas tabakasından, her bölümü iki ila üç mililitre soğuk PBS'de kavisli bir cımbız ile kazıyarak çıkarın.

Tüm dokuları, luminal ve mukozal izolatları ve kas tabakasını cam tüplere yerleştirin. Lenflerdeki trigliserit konsantrasyonu, 300 mikrolitre SMOFlipid'in intraduodenal bolusuna yanıt olarak artmıştır. Pik trigliserit konsantrasyonuna bolus sonrası iki ila üç saatte ulaşılır ve altı saatlik süre boyunca istikrarlı bir şekilde azalır.

Lenf akış hızı, sıfır bolus infüzyonundan deneyin sonuna kadar artar. Bu protokolün temel amacı, hayvan stresini azaltmak, hayatta kalma oranını artırmak ve anestezi süresini azaltmaktı. Bunu başarmak için, Bollman emniyet kafeslerini takılmalar için değiştirdik ve nem, sıcaklık ve sıvı ikmali ekledik.

Bir günlük topallama fistül protokolümüz, gerçek zamanlı, in vivo, lipit emilim dinamiklerini ölçmemizi sağlar. Aynı zamanda bağırsak organı çapraz iletişimi, metabolizması, diyet besin emilimi ve bağışıklık fenotiplerini incelememizi sağlar.