Osteoartriti Tanımlamak için Sinovyal Sıvı Analizi

Sinovyal sıvı analizi, kas-iskelet sistemi semptomları ve eklem efüzyonları olan hastanın ilk değerlendirmesi sırasında inflamasyon derecesini ve patojenik kristallerin varlığını ortaya çıkarabilir. Bu tekniğin temel avantajı basitliği ve güvenilirliğidir. Birkaç adımda, klinisyen hastanın hastalığı hakkında önemli tanısal bilgiler edinebilir.

Spesifik kristallerin tanımlanması tanı ve tedavi için hayati öneme sahiptir. Ürat kristalleri gutu gösterirken, kalsiyum pirofosfat ve diğer kalsiyum kristalleri kalsiyumla ilişkili artropatileri veya daha şiddetli bir osteoartrit formunu gösterir. Başlamak için, hastaların şişmiş eklemlerinin artrosentezi sırasında toplanan sinovyal sıvı örneğini alın.

Numunenin hacmine mililitre cinsinden açıklama ekleyin ve ayrı ayrı antikoagülan EDTA içeren bir tüpe ve herhangi bir katkı maddesi olmadan başka bir tüpe aktarın. Şüpheli enfeksiyon vakalarında, sinovyal sıvı numunesinin birkaç mililitresini mikrobiyolojik testler için bir kültür şişesine aseptik olarak aktarın. Numuneyi makroskopik olarak incelemek için, numuneyi içeren bir tüp alın ve numunenin soluk ila koyu sarı arasında değişebilen rengini tanımlayın.

Varsa kanın varlığını kaydedin. Arka ışıkta gözlemleyerek ve numuneyi içeren tüpten basılı bir sayfayı okuma kolaylığını belirleyerek numunenin netlik derecesini tanımlayın. Ardından, numuneyi tek kullanımlık bir pipetten damlatarak numunenin viskozitesini değerlendirin.

Uzun bir sıvı dizisinin ortaya çıkması yüksek viskoziteyi gösterirken, damla oluşumu düşük viskozitenin göstergesidir. Doku parçaları veya fibrin dahil olmak üzere herhangi bir partikül materyalin varlığı için numuneyi arka planda ışıkla tüpün içinden gözlemleyin. Toplam beyaz kan hücresi sayısını belirlemek için, bir Malassez-Potain pipeti kullanarak EDTAA içeren tüpten 0,5 mikrolitre numune çekin.

9,5 mikrolitre% 0.1 metilen mavisi çözeltisi çekmek için aynı pipeti kullanın. Numuneyi ve metilen mavisi çözeltisini pipet içinde nazik ters çevirme ile karıştırın. Karışımı bir hemositometrenin sayım odasına dökmeden önce ilk birkaç damlayı atın.

Şimdi hücreleri dokuzdan iki ardışık karede sayın ve elde edilen sayıyı 100 ile çarpın. Toplam beyaz kan hücresi sayısını, milimetreküp başına lökosit sayısı olarak ifade edin. Sinovyal sıvı örneklerinin diferansiyel beyaz kan hücresi sayısını belirlemek için tüpten sinovyal sıvı örneğini herhangi bir katkı maddesi olmadan kullanın.

Supravital boyama kullanarak diferansiyel hücre sayısını belirlemek için, kristal menekşe ve metilen mavisi ile önceden kaplanmış kullanıma hazır bir slayt alın ve slaydın ortasına küçük bir damla numune yerleştirin. Daha sonra, numune damlasını bir kapak kapağı ile örtün ve kapak kapağına bir damla mikroskop daldırma yağı yerleştirin. Diferansiyel hücre sayısını tahmin etmek için geleneksel boyamayı kullanmak için, temiz bir slaydın sonuna numunenin küçük bir damlasını koyarak başlayın.

Şimdi damlayı slayt boyunca ileri doğru hareket ettirerek yaymak için ikinci bir slayt veya kapak kayması kullanın. Yaymanın havada kurumasını bekleyin. 1.000X yağ daldırma hedefi altında hava ile kurutulmuş yaymayı içeren slaydı inceleyin.

Polimorfonükleer hücreleri, monositleri ve lenfositleri birbirinden ayırt ederken 100 ardışık hücreyi sayarak diferansiyel hücre sayısını tahmin edin. Bir cam slaytı etanol ile emilmiş optik veya yumuşak kağıtla temizleyin. Cam slayt üzerine herhangi bir katkı maddesi ile karıştırılmamış numunenin küçük bir damlasını uygulayın ve slaytı mikroskop altına yerleştirmeden önce bir kapak kayması ile örtün.

Düşük güçlü bir büyütme hedefi kullanarak slaytı mikroskop altına odaklayın ve 40X hedefi olan parlak bir alan altında dikkatlice inceleyin. Kristalleri, eşkenar dörtgen, iğne şeklinde veya çubuk şeklinde olabilen boyutlarına ve şekillerine göre tanımlamak için hücrelerin içine ve dışına bakın. Ardından polarize filtreyi ışık kaynağı ile numune arasına yerleştirin.

Koyu bir arka plan oluşturmak için, polarizörü optik ekseni analizöre dik olana kadar döndürün. Bir çift kırılımlı kristal tanımlandıktan sonra, kompansatörü polarizör ile numune arasına yerleştirin ve kristalin optik eksenine paralel veya dik olarak hareket ettirin. Kristalin ortaya çıkardığı rengi gözlemleyin.

Alizarin Kırmızı boyama için, sinovyal sıvı numunesinin bir damlasını temiz bir slayt üzerinde önceden hazırlanmış eşit miktarda Alizarin Kırmızı çözeltisi ile karıştırın. Slaytı bir kapak kayması ile örtün ve kristalleri tanımlamak için mikroskop altında 400X büyütmede inceleyin. Sinovyal sıvı örneklerinin makroskopik özellikleri inflamasyon derecesini gösterdi.

Soluk sarı renge ve daha fazla netliğe sahip bir örnek genellikle osteoartrit gibi enflamatuar olmayan durumlarla ilişkilidir. Öte yandan, koyu sarı renge ve bulanık bir görünüme sahip bir örnek, enflamatuar efüzyonlarla ilişkili hücrelerin, döküntülerin, hyaluronik asidin ve fibrin fragmanlarının varlığını gösterir. Osteoartrit hastalarından alınan sinovyal sıvı örneklerinde gözlenen lökositler çoğunlukla monositler ve sinovyositler gibi diğer mononükleer hücrelerdi.

Sinovyal sıvı örneklerinde kalsiyum pirofosfat kristalleri tespit edildi ve nispeten daha yüksek seviyelerde inflamatuar sitokinler görüldü. Ayrıca, pozitif bir Alizarin Kırmızı boyaması, numunelerde bazik kalsiyum fosfat kristallerinin varlığını ortaya koymuştur. Kristalleri ararken slaytı normal ışık altında dikkatlice incelemek çok önemlidir.

Pirofosfat kristallerinin genellikle zayıf bir şekilde çift kırılımlı olduğunu ve polarize ışık altında kaçırılabileceğini unutmayın. Sinovyal sıvıda kalsiyum kristallerinin varlığı ve bunların daha şiddetli hastalık formlarıyla ilişkisi, araştırmacıları osteoartritin patogenezinde ve ilerlemesinde yeni mekanizmaları keşfetmeye yönlendirmiştir.