Ex Vivo Murin Biventriküler Fonksiyonunun Langendorff Modelinde Değerlendirilmesi

Anlatılan protokol ile donör kalp, sol ventrikül ve ventrikülün koruma sonrası fonksiyonunu karşılaştırabilir ve bu koruma işlemleri sırasında her iki ventriküldeki koruma biyolojisinin farkını inceleyebiliriz. Bu teknikte ex vivo perfüzyon sistemi kullanılarak kalp fonksiyonları korunduktan sonra incelenir. Korunduktan sonra donör kalp fonksiyonlarını iyileştirmek için yeni tedavileri taramak için sağlam ve güvenilir bir araç sağlar.

Metinde anlatıldığı gibi hamurun hazırlanmasına başlayın ve kafayı elde etmek için hamurun küçük bir parçasını oval bir şekle getirin. Kuru bir spagetti telinin ucuna takın. Kafayı önceden hazırlanmış şeker çözeltisine batırın ve ince bir çözelti filmi ile iyice kaplandıktan sonra yavaşça çıkarın.

Ardından, başın üzerinde eşit ve parlak bir örtü oluşmasına izin vermek için spagetti ipliğini bir polistiren köpük blok veya diğer tutucular üzerine asın ve gece boyunca kurutun. Ertesi gün, kalıbı ksilen içinde dağılmış silikon elastomere batırın ve spagetti ipliğini iki saat boyunca veya kuruyana kadar 37 santigrat derecede polistiren köpük bloğuna geri yerleştirin. Bu adımı bir kez daha tekrarlayın.

Ardından, balonu ayırmak ve toplamak için kalıbı suya yerleştirin. Balonu %0.02 sodyum azid içinde saklayın. Şimdi, 22 gauge iğneden iki kör uçlu bir uç kesin ve bir kör ucunu silikon balona, diğer kör ucunu bir PE boruya monte edin.

Balonu iğne üzerindeki yerine bağlamak için 4-0 ipek dikiş kullanın. C57Black/6 fareyi alın ve antikoagülasyon için hayvanın karnına intraperitoneal olarak 200 ünite heparin enjekte edin. Uygun anesteziyi bir ayak parmağı tutamıyla onayladıktan sonra, sternumun hemen altında bir kesi yapın.

Ve makas kullanarak, diyaframı kaburgalardan keserek göğsü açın. Ardından, aort kemerine yakın inen aortta bir kesi yapmadan önce göğsü tamamen ortaya çıkarmak için ön göğüs duvarını katlayın. Şimdi, organları izole etmek için farenin kalbini, akciğerlerini ve timüsünü buz gibi histidin-triptofan-ketoglutarat veya HTK tamponuna aktarın.

Herhangi bir bağ dokusunu çıkararak aortu açığa çıkarın. Aortun ucunu 22 gauge iğneye bağlayın ve 6-0 ipek dikişle bağlayın. Aort kapağına müdahale etmemek için kanülün aort kökünün üzerinde olduğundan emin olun.

Aortu yaklaşık 10 dakika boyunca 10 mililitre HTK tamponu ile perfüze edin, önceden dört santigrat dereceye kadar soğutun. Deneyin türüne bağlı olarak, kalbi sekiz saat boyunca buz gibi soğuk HTK ile 50 mililitrelik bir tüpte saklayın veya hemen bolluğu gerçekleştirin. Bolluk yapmak için, iğneye monte edilmiş kalbi Langendorff aparatındaki kanüle bağlayın ve ipek bir dikişle bağlayın.

Bolluğu dakikada üç mililitrede sabit bir akış modunda başlatın ve ardından 70 ila 80 milimetre cıvada sabit bir basınç moduna geçtikten sonra, perfüzyon hızını dakikada yaklaşık altı mililitreye ayarlayın. Ardından, üç bir musluk kullanarak sönük su dolu bir silikon balonu bir basınç dönüştürücüsüne ve su dolu bir şırıngaya bağlayın. Önceki perfüzyonu takiben 15 ila 20 dakikalık bir dengeleme periyodundan sonra, sağ atriyumu veya RA'yı kesin ve balonu RA'dan sağ ventriküle veya RV'ye yerleştirin. Balonu RV'nin içinde tutmak için bant kullanın ve balonu ventrikülde sınırlamaya yardımcı olmak için RA'nın açık alanını en aza indirin.

RV için 20 dakikalık fonksiyonel veri topladıktan sonra, sol atriyumu veya LA'yı kesin ve LA'dan sol ventriküle veya LV'ye sönmüş su dolu bir balon yerleştirin. Balonu içinde tutmak için bant kullanın LV.To basınç dönüştürücüyü kalibre edin, önce 10 mililitrelik bir şırıngayı ılık tuzlu su ile doldurun ve şırıngayı üç bir musluktan kubbeye bağlayın. Musluğu açın ve tüm muslukları kapatmadan ve şırıngayı çıkarmadan önce kubbeyi yavaşça tuzlu suyla doldurun. Ardından, basınç göstergesini üç musluğun üçüncü ucuna bağlayarak doldurulmuş kubbeyi dönüştürücüye takın.

Kayıt yazılımında, dönüştürücüye bağlanan kanalın açılır menüsünden Bridge Amp. Dönüştürücü okumasını sıfır milimetre cıvaya ayarlamak için kayda başlamadan önce 0'a tıklayın. Birkaç saniye kayıttan sonra, şırıngayı yavaşça itin ve basıncı 100'e yükseltin.

Kaydı sonlandırmak için Durdur'a tıklayın. Birim Dönüştürme iletişim kutusunda, sıfır milimetre cıva için kayıt alanını seçin ve sıfır milimetre cıva yazmadan önce 1'e giden oku tıklatın. Benzer şekilde, 100 milimetre cıva için kayıt alanını seçin.

2'ye giden oku tıklatın ve 100 milimetre cıva yazın. Şimdi, dönüştürücüyü kalibre etmek için Tamam'a tıklayın. Kalibrasyon yapıldıktan sonra, balonlu basınç dönüştürücüsüne karşılık gelen kanalı Ventrikül Basıncı veya LV Basıncı olarak yeniden adlandırın ve kalp sisteme bağlandığında kayda başlayın.

Balonu ventriküle yerleştirdikten sonra, son diyastolik basıncı beş ila 10 milimetre cıvada tutmak için üç musluktan bir mikrometre şırınga kullanarak balondaki su hacmini ayarlayın. Ardından, boş bir kanalı dP/dt olarak yeniden adlandırın ve türev kaynak kanalını ventrikül basıncı olarak tutun. Bu kanal, kasılma sırasında ventriküler boşluktaki basınç değişiminin oranını kaydeder.

Kan basıncı modülünde ayara gitmeden önce sabit ölçüm periyodunu seçin. Ardından, giriş kanalı olarak AG Basıncını seçin ve Tamam'a basmadan önce seçime tıklayın. Şimdi, herhangi bir aykırı kardiyak döngüyü kaldırmak için Sınıflandırıcı Görünümü'ne ve seçilen dönem için maksimum dP/dt ve minimum dP/dt ortalaması için tablolar oluşturmak için Tablo Görünümü'ne tıklayın. Fare kalbi perfüzyondan önce sıfır saat HTK tamponunda saklandığında, RV'ye kıyasla LV için daha yüksek sistolik basınç kaydedildi. Ek olarak, RV ile karşılaştırıldığında, LV ayrıca önemli ölçüde daha fazla kas kasılması ve gevşeme gösterdi.

Bununla birlikte, sekiz saatlik soğuk depolamaya maruz bırakıldıktan sonra kalbe perfüzyon yapıldığında, hem LV hem de RV, sıfır saat aşamasına kıyasla önemli bir fonksiyonel azalma gösterdi. Düşüşlerin RV'ye kıyasla LV'de daha şiddetli olduğu gözlendi. Sekiz saatlik depolamadan sonra LV'nin daralması ve gevşemesi, sıfır saatlik depolamaya karşılık gelen işlevin %25,1'i ve %30,7'si iken, RV, sıfır saatlik taban çizgisine kıyasla işlevin %32,5 ve %29,1'ini gösterdi. Uzun süreli depolamadan sonra LV'nin primer greft disfonksiyonunu gösteren RV'den daha anlamlıydı. Koruma kalitesi büyük ölçüde HTK'nın perfüzyonuna bağlıdır.

Farklı tedavileri hassas bir şekilde karşılaştırmak için perfüzyonun tutarlı olduğundan emin olmak önemlidir. Bir donör kalp fonksiyonunun hassas bir şekilde ölçülmesiyle, bu yöntem, donör kalp fonksiyonunu iyileştirebilen tarama ilaçlarına kolayca uyarlanabilir ve daha sonra heterotopik bir nakil modeli kullanarak daha fazla doğrulanabilir.