Farelerde Transvers Aort Daralması için Modifiye Bir Teknik
18 Ağustos 2022
Bu protokol, kendi kendine yapılan bir retraktör kullanılarak minimal invaziv transvers aort daralması (TAC) prosedürü ile modifiye edilmiş ve basitleştirilmiş bir tekniği tanımlamaktadır. Bu prosedür ventilatör veya mikroskop olmadan yapılabilir ve sonunda kardiyak hipertrofi veya kalp yetmezliğine yol açan aşırı basınç yüküne neden olur.
Bu protokol, TAC cerrahisini gerçekleştirmek için sınırlı, komplike olmayan ve ucuz kitlelere hızlı bir cerrahi travma sağlar. Bu model, aort arkına kendi kendine yapılan bir retraktör kullanarak yaklaşır ve mikrocerrahi ölçek veya mekanik ventilasyona ihtiyaç duymaz, bu nedenle cerrahi travmayı önemli ölçüde sınırlar. Başlamak için beş mililitrelik bir şırınga hazırlayın.
Ardından, ucunu bir iğne tutucu ile sıkıştırarak iğneyi köreltin. Bir iğne tutucu ile köreltilmiş 27 gauge bir iğne hazırlayın ve ucunu 90 derecede bükün. Ticari olarak elde edilen bir demir tel kullanın ve iğnenin etrafına yerleştirin.
İğnenin körelmiş ucunda küçük bir tuzak veya halka oluşturun. Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri otoklavlama ile sterilize edin. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için anestezinin derinliğini bir parmak tutamağı ile onaylayın.
Her iki göze de oftalmik merhem sürün. Ardından, fareyi sırtüstü pozisyonda, başı operatöre işaret edecek şekilde steril bir örtü ile kaplı bir ısıtma yastığına yerleştirin. Ekstremitelerini yapışkan bant ve kesici dişlerle 4-0 dikişle sabitleyin.
Şimdi, operasyon sırasında vücut ısısını izlemek için bir rektal prob yerleştirin. Sterilize edilmiş oftalmik makas kullanarak, yeni, tek kullanımlık steril bir örtüde bir delik açın. Steril örtüyü farenin üzerine yerleştirin ve tüysüz çalışma alanının delikten görülebildiğinden emin olun.
Bir kesi yaptıktan sonra cildi ve yüzeysel fasyayı ayırın ve trakea ve proksimal sternali açığa çıkarın. Daha sonra sternuma üst kenardan sternal açıya kadar üç ila dört milimetre uzunlamasına orta hat insizyonunu dikkatlice yapın ve sternumu forsepslerle yavaşça kaldırın. Düz forseps kullanmak, hedef damarı ve etrafındaki dokuları açıkça diseke eder.
Şimdi, daha önce kendi kendine yapılan retraktörü sağ elinizde bir tel tuzakla tutun. Retraktörün tuzağını aortun altından, sol ortak karotis arter ile sağ determinat arterin kökeni arasında dikkatlice geçirin. Retraktörü sol ele geçirin.
Mikroskobik cımbızları sağ elinizde tutun ve sonundaki tuzak halkasından 7-0'lık bir ipek dikiş geçirin. Retraktörü dışarı çekin. Aort ile paralel 27 gauge bir iğne yerleştirin ve dikişi iğnenin ve aortun etrafına bağlayın.
Daha sonra 27 gauge iğneyi oftalmik forseps ile tutun ve düğümü 27 gauge iğneye ve aort ile başka bir forseps ile bağlayın. 27 gauge iğneyi hızlı ama nazikçe ligasyondan çekin. Cildi 4-0 sentetik monofilament sütür ile kesintili bir dikiş düzeninde dikin.
Fareyi sıcak bir pedin üzerine yerleştirin ve canlanmasını bekleyin. Genel olarak, fare yaklaşık 60 dakika içinde canlanır. Dört haftalık ameliyattan sonra.
Ejeksiyon fraksiyonu ve fraksiyonel kısalma, transvers aort konstriksiyon farelerinde sahte farelere kıyasla önemli ölçüde azalmıştır. Bununla birlikte, transvers aort daralma farelerinde sol ventrikül kitlesi ve sol ventrikül iç çapı anlamlı olarak yükselmiştir. Bu parçacıktaki en önemli adım aort arkının altına dikiş atılmasıdır.
Artere gereksiz çekişi azaltmak için tüm filmler nazik olmalıdır. Bu prosedürü takiben, araştırmacılar kardiyo hipertrofisi veya kalp yetmezliği olan hastalara potansiyel terapötik hedefleri araştırmak için hayvan modeline tıbbi tedavi uygulayabilirler.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, basınç aşırı yüklemesi oluşturmak ve kardiyak hipertrofi veya kalp yetmezliğini incelemek amacıyla tasarlanmış, el yapımı bir ekartör kullanılarak gerçekleştirilen minimal invaziv transvers aortik konstriksiyon (TAC) prosedürünü özetlemektedir. Prosedür basit olup mekanik ventilasyon veya gelişmiş mikroskopi gerektirmemektedir.
Temel Çalışma Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Kardiyoloji
- Kalp hastalığı hayvan modelleri
- Cerrahi teknikler
Arka Plan
- TAC modeli, kardiyak hipertrofi ve kalp yetmezliğinin incelenmesi için kritik öneme sahiptir.
- İyileşmeyi ve deneysel sonuçları artırmak için cerrahi travmanın en aza indirilmesi esastır.
- Geleneksel TAC yöntemleri genellikle karmaşık ekipmanlar gerektirir; bu protokol söz konusu süreci basitleştirmeyi amaçlamaktadır.
Kullanılan Yöntemler
- TAC işlemini gerçekleştirmek için el yapımı bir retraktör ve küt uçlu iğneler kullanılmıştır.
- Kullanılan biyolojik sistem bir fare modelidir.
- Temel teknolojiler arasında, mikrocerrahi gereksinimi sınırlı olan temel cerrahi aletler yer almaktadır.
Temel Sonuçlar
- TAC prosedürünün ardından, dört hafta sonra kardiyak hipertrofi modellerinde sol ventrikül kütlesi ve ejeksiyon fraksiyonunda belirgin değişiklikler kaydedilmiştir.
- Sonuçlar, prosedüre yanıt olarak kardiyak stres ve hipertrofinin başarıyla indüklendiğini doğrulamaktadır.
- Bu durum, modelin daha ileri terapötik araştırmalar için kullanımını doğrulamaktadır.
Sonuçlar
- Bu çalışma, farelerde kardiyak aşırı yüklemeyi simüle etmek için basitleştirilmiş bir yöntemi başarıyla sunmaktadır.
- Bu teknik, kalp hastalıklarını ve potansiyel tedavileri araştıran bilim insanları için uygundur.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Alanları
Farelerde transvers aortik konstriksiyon (TAC), basınç yüklenmesi altında kardiyak hipertrofi ve kalp yetmezliğini incelemek için temel bir preklinik modeldir. Bu modifiye edilmiş, minimal invaziv TAC tekniği, cerrahi travmayı ve operasyonel karmaşıklığı azaltarak, erken evre kardiyovasküler ilaç keşfi için daha tekrarlanabilir ve ölçeklenebilir hastalık modellemesine olanak tanır. Bu yaklaşım, hızlı iyileşmeyi ve fizyolojik uygunluğu destekleyerek, translasyonel araştırmalar ve terapötik hedef değerlendirmeleri için öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Mekanistik çalışmalar için basınç aşırı yüklemesi kaynaklı kardiyak hipertrofinin güçlü bir şekilde modellenmesini sağlar.
- Kontrollü bir in vivo sistemde kardiyovasküler hedeflerin fonksiyonel validasyonunu kolaylaştırır.
- İnsan hastalıklarıyla ilgili kardiyak stres yolaklarının hipotez odaklı sorgulanmasını destekler.
Tarama ve Assay Geliştirme
- Aday müdahalelerin in vivo değerlendirilmesi için standardize edilmiş, tekrarlanabilir bir platform sağlar.
- Prosedürel değişkenliği azaltarak, ejeksiyon fraksiyonu ve ventrikül kütlesi gibi tutarlı kantitatif okumaları destekler.
- Model hazırlama sürecini kolaylaştırarak, preklinik tarama kampanyaları için işlem kapasitesini artırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Kalp yetmezliği araştırmalarında translasyonel biyobelirteç geliştirme için hastalıkla ilgili son noktalarla uyumludur.
- Yeni terapötiklerin erken keşif aşamasından preklinik etkinlik değerlendirmesine kadar süreklilik sağlar.
- Klinik olarak ilgili kardiyak fenotipleri modelleyerek riskten arındırılmış ilerleme kararlarını destekler.
İş Akışı ve Boru Hattı Entegrasyonu
Bu minimal invaziv TAC modeli, erken mekanistik çalışmalardan preklinik ön aday değerlendirmesine kadar kardiyovasküler keşif sürecine entegre edilmektedir.
- Keşif Biyolojisi: Kardiyak aşırı yük modellerinde hipotez testlerini ve yolak aydınlatmalarını destekler.
- Tarama: Bileşik değerlendirmesi için tekrarlanabilir, kantitatif kardiyak fonksiyon ölçümleri sağlar.
- Analitik: Deneysel gruplar arasında kardiyak parametrelerin istatistiksel karşılaştırmasına olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: Temel kalp yetmezliği fenotiplerini modelleyerek klinik uygunluğa bir köprü kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Kardiyovasküler Ar-Ge programları genelinde tekrarlı kullanım için ölçeklenebilir, standardize bir platform sunar.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Kardiyak hedef doğrulamasında öngörü güvenini artırır ve mekanistik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Cerrahi karmaşıklığı minimize eder, prosedürleri standartlaştırır ve iyileşme sürelerini hızlandırır.
- Stratejik Değer: Geç evre biyolojik riski azaltarak go/no-go karar kalitesini ve sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Güçlü preklinik verilere dayanarak kardiyovasküler varlıkların riskle uyumlu önceliklendirilmesini sağlar.
Uygulama Hususları
- Küçük hayvan cerrahisi ve kardiyovasküler fizyoloji konusunda uzmanlık gerektirir.
- Temel cerrahi aletlere ve damar manipülasyonu için özel yapım bir retraktöre ihtiyaç duyulur.
- Cerrahi ve ameliyat sonrası izleme protokollerinin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Çeşitli fare suşlarına uyarlanabilir ancak spesifik genetik arka planlar için optimizasyon gerektirebilir.
- Potansiyel kısıtlamalar arasında damar daralması ve son nokta ölçümündeki teknik değişkenlik yer almaktadır.
