Name: Borrelia burgdorferi Sensu Lato Kompleksi ve Tekrarlayan Ateş Borreliadan Spiroketlerin Yetiştirme Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Öğrenin Borrelia burgdorferi ve Borrelia miyamotoi gibi spiroket bakterilerinin in vitro kültür yöntemlerini. Bu protokol, Lyme hastalığı ve tekrarlayan ateş patojenlerinin canlılığını doğrulamak için altın standart teknikleri sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma kısmen Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendisliği Araştırma Konseyi ve Kanada Lyme hastalığı Vakfı (AB ve VL), İsveç Araştırma Konseyi (SB, M-LF ve IN), TAČR GAMA 2 projesi - "Biyoloji Merkezi CAS'ta uygulama potansiyeli doğrulama 2.0 desteği" (TP01010022) (MG ve NR) ve Çek Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı NV19-05-00191 (MG ve NR) tarafından desteklenmiştir. Şekil 4'teki görüntü için S. Vranjes'e (2021, Rudenko laboratuvarı) ve Şekil 5'teki görüntüler için J. Thomas-Ebbett'e (2021, Lloyd laboratuvarı) teşekkür ederiz. Alanında emeği geçen tüm araştırmacılara teşekkür ediyor, alan kısıtlılığı nedeniyle çalışmalarına atıf yapamadığımız araştırmacılardan özür diliyoruz.

Hiçbir çıkar çatışması ilan edilmedi.

Bakterilerin laboratuvar kültürü, araştırma için sıçrama tahtasıdır. Kültür yeteneğinin sağladığı derin avantaj, bir yüzyıldan fazla bir süredir ancak son zamanlarda başarı ile sonuçlanan, sifilizin etiyolojik ajanı olan Treponema pallidum'un kültürüne verilen mücadeleyle örneklenmektedir44. Borrelia spiroketleri de kültüre meydan okuyor, ancak kültür mümkün 23,24,34,44,45,46,47,48,49.<s...

Borrelia, üç ana kladeyi kapsayan bir spiroket bakteri cinsidir: Lyme borreliosis (LB) grubu, tekrarlayan ateş (RF) grubu ve görünüşte sürüngenlerle sınırlı olan daha az iyi karakterize edilmiş bir grup. Borrelia taksonomisi, diğer birçok taksonomik grup 1,2,3,4,5,6,7 için geçerli olduğu gibi, genom ve proteom karşılaştırmalarına izin veren moleküler metodolojilerin ortaya çıkmasıyla uyum içindedir. LB grubu (Lyme hastalığı grubu olarak da adlandırılır) geleneksel olarak en iyi karakterize edilen üyesi Borrelia burgdorferi sensu stricto'dan sonra Borrelia burgdorferi sensu lato olarak adlandırılmıştır.  Bu makale şu anda en yaygın kullanılan terminolojiyi kullanmaktadır: LB, RF ve sürüngenle ilişkili grup, LB ve RF grupları için kültür protokollerini açıklamaktadır.
Spirochaetaceae familyasının bir üyesi için beklendiği gibi, Borrelia, tipik olarak 20-30 μm uzunluğunda ve 0.2-0.3 μm genişliğinde, belirgin şekilde uzun ve ince spiral şeklini benimseyebilir. Bununla birlikte, Borrelia hücreleri oldukça pleomorfiktir ve karmaşık hücresel ve genetik yapılarının bir sonucu olarak hem kültürde hem de in vivo 1,8'de birçok başka şekli benimseyebilir. Spiroketal formunda, düzlemsel sinüs dalgası morfolojisi, iç ve dış zarlar arasındaki periplazmik boşlukta dönen eksenel endoflagellasından kaynaklanır. Bu yapı, hücrelerin konakçı dokularla etkileşime girmesini sağlayan proteinler içeren dış zar ile hücrelerin oldukça hareketli olmasını sağlar 9,10. Dış zar proteinlerinin ekspresyonu sıkı bir şekilde düzenlenir ve sadece konakçı doku invazyonunu değil, aynı zamanda konakçı bağışıklık sistemi ile etkileşimi de etkiler11. Bu karmaşık gen ekspresyonu, Borrelia hücrelerinin omurgalı konakçıların ve omurgasız vektörlerin çok farklı ortamları arasında mekik dokumasına izin verir. Borrelia'nın genomu, dairesel bir kromozomdan ziyade doğrusal bir kromozomdan oluşan prokaryotlar arasında olağandışıdır. Doğrusal kromozoma ek olarak, Borrelia türleri bazıları doğrusal ve bazıları dairesel olmak üzere 7-21 plazmid içerir. Plazmidler, konakçı adaptasyonu ve virülans için gerekli genlerin çoğunu barındırır ve profajlardan türetilen dairesel plazmidlerin, spiroketal hücreler arasındaki yatay gen akışının çoğunluğundan sorumlu olduğu düşünülmektedir12,13. Konakçı adaptasyonundaki rolüyle tutarlı olarak, Lyme borreliosis grubunun bazıları, muhtemelen çoğu veya tümü, kültür14'te plazmidleri kaybeder. B. burgdorferi'nin en iyi çalışılmış "laboratuvara uyarlanmış" suşu olan B31, bu türün vahşi izolatlarında bulunan dokuz plazmidden sadece yedisine sahiptir15. Benzer şekilde, B. garinii kültür16'da plazmidleri kaybeder. Bazı çalışmalar, RF türlerinin ve B. miyamotoi'nin kültürlendiğinde plazmidleri koruduğunu göstermiştir14,17, ancak son çalışmalar uzun süreli in vitro ekim ile değişmiş plazmidleri ve bulaşıcılık göstermektedir 18.
Kültüre dayalı yöntemler, hem araştırma hem de klinik çalışmalar için bakteriyel enfeksiyonların laboratuvar tespitinde altın standart olmaya devam etmektedir14,17. Vücut sıvılarından veya dokularından patojenlerin kültürü, çoğalan patojenleri doğrudan tespit eder ve araştırma için kaynak materyal sağlar14,17. Bu protokol, LB grubunun spiroketlerinin yanı sıra RF Borrelia ve B. miyamotoi'nin spiroşetlerini başarılı bir şekilde kültürlemek için gereken metodolojiyi ve tarifleri göstermektedir. Borrelia spiroketlerinin yetiştirilmesi için temel ortam, kirletici prokaryotların büyümesini azaltmak için antibiyotikli veya antibiyotiksiz Barbour-Stoenner-Kelly ortamıdır (BSK-II veya ticari olarak temin edilebilen BSK-H). Bu ortam, başlangıçta RF Borrelia19'u desteklemek için kullanılan bir ortamdan uyarlandı, Stoenner20 ve daha sonra Barbour21 tarafından daha da değiştirildi. O zamandan beri, her biri büyümeyi, bulaşıcılığı ve patojeniteyi etkileyebilecek bakteriyel fizyoloji üzerinde etkileri olan birçok modifikasyon geliştirilmiştir22. Bu ortam, yerleşik kültürlerde spiroketlerin büyümesini güvenilir bir şekilde destekler ve spiroketleri kene, memeli ve klinik örneklerden izole etmek için kullanılmıştır23. Daha yakın zamanda geliştirilen varyasyon, modifiye Kelly-Pettenkofer (MKP) ortamı, yeni Borrelia izolatlarını çevresel örneklerden izole ederken, kültürü tohumlamak için mevcut numunede bulunan spiroket sayısı düşük olduğunda daha iyi izolasyon başarısı, morfoloji ve motilite, 23,24 sağlayabilir. Her durumda, yetiştiriciliğin başarısı kritik olarak taze hazırlanmış ortama ve uygun bileşenlerin kullanımına bağlıdır; Tüm ticari bileşenler yüksek kaliteli ortam üretmez. Aşılanmış kültürler, az miktarda artık ortam oksijeni varlığında geleneksel bir 32-34 ° C inkübatörde sallanmadan rahatça inkübe edilebilir. Borrelia spiroketleri anaeroblardır, ancak doğada oksijen ve karbondioksit konsantrasyonlarındaki dalgalanmalara maruz kalırlar ve gen ekspresyonundaki değişikliklerle yanıt verirler26,27,28,29. Bu nedenle, gen ekspresyonu, büyüme ve diğer metabolik çalışmalar, oksijen kontrollü bir inkübatör veya anaerobik oda kullanılarak oksijen ve karbondioksit seviyelerini kontrol etmelidir. Kültürde, kültürler haftalık olarak veya daha sık, karanlık alan mikroskobu veya faz kontrast mikroskobu ile spiroketlerin varlığı açısından kontrol edilir. Kültür yaymaları gümüş lekeleri, immünohistokimya veya floresan etiketli suşların kullanımı ileboyanabilir 29,30. PCR'yi takiben DNA dizilimi, Borrelia türlerini30,31,32,33 tespit etmek ve genetik olarak tanımlamak veya doğrulamak için hassas ve spesifik bir yöntemdir.
BSK-II üzerinde birçok küçük varyasyon mevcuttur ve bazıları ticari olarak temin edilebilir. Burada bölüm 1'de açıklanan protokol Barbour (1984)21'den uyarlanmıştır. Sıvı MKP ortamı daha yeni geliştirilmiş bir ortamdır ve bölüm 2'de açıklanmıştır. BSK ortamına benzer şekilde iki adımdan oluşan daha önce bildirilen bir protokol33,34'e göre hazırlanır: temel ortamın hazırlanması ve tam ortamın hazırlanması. Borrelia kültür ortamı, bölüm 3'te açıklandığı gibi antibiyotikli veya antibiyotiksiz olarak hazırlanabilir; Antibiyotikler, bölüm 4'te açıklandığı gibi, klinik veya çevresel örneklerle aşılama sırasında ortaya çıkan kirletici bakterileri azaltmak için hareket eder; saf Borrelia sp. kültürü ile aşılanırsa, antibiyotiklere ihtiyaç duyulmayabilir. Uzun vadeli Borrelia stokları yapmak genellikle önemlidir ve bunu yapmak için bir protokol bölüm 5'te açıklanmıştır. Bölüm 6, saf Borrelia sensu lato klonlarını klinik veya çevresel örneklerden izole etmek için bu ortamların kullanılmasını açıklamaktadır. Olası bir dizi yaklaşım vardır36; Aşağıda etkili olduğu tespit edilen bir tanesi verilmiştir. Bu protokolde kullanılan kaplama ortamı, BSK-II kaplama ortamı 37 ve MKP ortamı34'ün bir modifikasyonudur (tavşan serumu% 10'a yükseltilmiş) 38).

<table><tbody><tr><td>1.7 mL tüpler</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>0.2 & nbsp yapacak; &mikro; m Steril şırınga filtresi&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>10 & mikro yapacak; L bariyer pipet ucu</td><td>Neptün</td><td>BT10XLS3</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>10 mL Serolojik pipetler</td> yapacaktır.<td>Celltreat</td><td>229011B</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>1000 & L bariyer pipet ucu</td><td>Neptün</td><td>BT1000.96</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>15 mL tüp</td><td>Celltreat</td><td>188261</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>20 & yapacak; L bariyer pipet ucu</td><td>Neptün</td><td>BT20</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>20 mL Steril şırınga yapacak&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>200 & mikro; L bariyerli pipet ucu</td><td>Neptune</td><td>BT200</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>25 mL Vidalı Kapaklı Kültür Tüpleri</td><td>yapacak Fisher Scientific</td><td>14-933C</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>25 mL yapacak Serolojik pipetler</td><td>Celltreat</td><td>229025B</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>3 mL yapacak Steril şırınga</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>%35 BSA yapacaktır&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-7409</td><td>Kaynak önemlidir - not</td></tr><tr><td>5 mL'ye bakın Serolojik pipetler&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229006B</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>50 mL tüp</td><td>Celltreat</td><td>229421</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>6.5 ml MKP cam tüpler yapacak&nbsp;</td><td>Schott</td><td>Schott Nr. 26 135 115</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Amikasin</td><td>Sigma</td><td>PHR1654</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Sigma</td><td>A9528-100MG</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Bactrim / rimethoprim / sülfametoksazol</td><td>Sigma</td><td>PHR1126-1G</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>BBL Brucella suyu yapacak&nbsp;</td><td>BD</td><td>211088</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi Biyogüvenlik</td></tr><tr><td>Kabini</td><td>Labconco</td><td>302419100</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Kan alma tüpleri yapacak (sarı üst - ACD)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Asit Sitrat Dekstroz (ACD) ile Vacutainer Cam Kan Alma TüpleriStandart</td> <td>ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>BSK-H Medium [w% 6 Tavşan serumu]&nbsp;</td><td>Darlynn biologicals</td><td>BB83-500</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>santrifüj yapacak&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>model 5430</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi Sitrik</td></tr><tr><td>asit TrisodyumSaltDihidrat</td><td>Sigma</td><td>C-8532 100 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>CMRL</td><td>Gibco BRL</td><td>21540 500 mL</td><td>yapacak Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>yapacak CMRL-1066</td><td>Gibco</td><td>21-510-018</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Kriyojenik Tüpler (Nalgene)</td> <td>Fisher yapacak Scientific</td><td>5000-0020</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi,</td></tr><tr><td>100 mm ve kez istifleme halkalı Derin Petri yapacaktır; 25 mm</td><td>Sigma</td><td>P7741</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr><tr><td>Dijital İnkübatör</td><td>VWR</td><td>model 1545</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ThermoFisher</td><td>D12345</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr><tr><td>Filtre sterilizasyonu</td> <td>için filtrelerKırlangıç 0.22&mu; m GPExpressPLUS Membran</td><td>SCGPU05RE</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Jelatin</td><td>Difco BD</td><td>214340 500 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr><tr><td>Cam Kültür Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>99449-20</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G-7021 1 kg</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Glycerol Sigma</td><td></td><td>G5516</td> <td>yapacaktırStandart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Hemafuge yapacak (Hematokrit & İmmünohematoloji santrifüjü</td>) <td>Labwissen</td><td>Model 3220</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma yapacaktır&nbsp;</td><td>H-3784 100 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>N-asetilglukozasamin</td><td>Sigma yapacaktır &nbsp;</td><td>A-3286 25 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Neopeptone</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>211681 500 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Neubauer Hematositometre</td><td>Sigma yapacak&nbsp;</td><td>Z359629</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Faz kontrast mikroskobu yapacak&nbsp;</td><td>Leitz</td><td></td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Fosfomisin</td><td>Sigma</td><td>P5396-1G</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Fosfomisin</td><td>Sigma</td><td>P5396</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td></td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Hassas Standart Terazi</td><td>OHAUS</td><td>model TS200S</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi biri tedarikçi</td></tr><tr><td>yapacak Pirüvik asit (Na tuzu)</td><td>Sigma</td><td>P-8574 25 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Tavşan Serumu&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>16-120-032</td><td>Kaynak önemlidir&nbsp;</td></tr><tr><td>Tavşan Serumu&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>R-4505&nbsp; 100 mL</td><td>Kaynak önemlidir&nbsp;</td></tr><tr><td>Rifampicin</td><td>Sigma</td><td>R3501-1G</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S-5761 & nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 500 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Sufametaxazole&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>PHR1126</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>TC Yeastolate</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>255752 100 g</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr><tr><td>Transfer Pipetleri</td><td>VWR</td><td>470225-044</td><td>Standart ürün - herhangi bir tedarikçi</td></tr><tr><td>Trimethoprim</td><td>Sigma</td><td>PHR1056</td><td>Standart ürün yapacak - herhangi bir tedarikçi yapacak</td></tr></tbody></table>

borrelia burgdorferi sensu lato kompleksi ve tekrarlayan ateş borrelia'dan spiroketlerin yetiştirme yöntemleri

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

Borrelia, B. burgdorferi sensu lato (s.l.) olarak da bilinen ve yakın zamanda Borreliella, tekrarlayan ateş (RF) grubu Borrelia ve üçüncü bir sürüngen ilişkili spiroket grubu olarak yeniden sınıflandırılan Lyme borreliosis (LB) grubundan oluşan üç tür grubundan oluşur. Kültüre dayalı yöntemler, hem araştırma hem de klinik çalışmalar için bakteriyel enfeksiyonların laboratuvar tespiti için altın standart olmaya devam etmektedir, çünkü vücut sıvılarından veya dokularından patojenlerin kültürü, çoğalan patojenleri doğrudan tespit eder ve araştırma için kaynak materyal sağlar. Borrelia ve Borreliella spiroketleri titiz ve yavaş büyür ve bu nedenle klinik amaçlar için yaygın olarak kültürlenmezler; Ancak, araştırma için kültür gereklidir. Bu protokol, B. afzelii, B. americana, B. andersonii, B. bavariensis, B. bissettii/bissettiae, B. burgdorferi sensu stricto (s.s.), B. californiensis, B. carolinensis, B. chilensis, B. finlandensis, B. garinii, B. japonica, B. kurtenbachii, B. lanei, B. lusitaniae, B. maritima, B. mayonii, B. spielmanii, B. tanukii, B. turdi, B. sinica, B. valaisiana, B. yangtzensis ve RFspiroketleri, B. anserina, B. coriaceae, B. crocidurae, B. duttonii, B. hermsii, B. hispanica, B. persica, B. recurrentis ve B. miyamotoi. LB ve RF spiroketlerinin yetiştirilmesi için temel ortam, yerleşik kültürlerde spiroketlerin büyümesini güvenilir bir şekilde destekleyen Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II veya BSK-H) ortamıdır. İnokulumda başlangıç spiroket sayısının düşük olduğu kene veya konakçı kaynaklı örneklerden yeni izole edilmiş Borrelia izolatlarını yetiştirebilmek için, modifiye Kelly-Pettenkofer (MKP) ortamı tercih edilir. Bu ortam aynı zamanda B. miyamotoi'nin büyümesini de destekler.RF spiroketlerin yetiştiriciliğinin başarısı da kritik olarak bileşenlerin kalitesine bağlıdır.

Borrelia kültür ortamı BSK ve MKP ve varyantları, sırayla hazırlanması ve sterilize edilmesi gereken bileşenlere sahip zengin kültür ortamlarıdır. Doğru hazırlandığında, BSK ortamı kırmızı-turuncu ve berrak olmalıdır (Şekil 1). Isınmadan sonra devam eden bulanıklık ve yağış, sorunlu içerikleri, orta üretimi veya kontaminasyonu gösterir; Böyle bir ortam en iyi şekilde atılır. BSK'ya ve MKP'ye jelatin eklenirse, ortam soğutulduğunda jelatinli olacaktır; Isınma üzerine, hafif viskoz ol...

İn vitro kültür, canlı bakterilerin varlığı için doğrudan bir tespit yöntemidir. Bu protokol, Borrelia burgdorferi sensu lato kompleksi, tekrarlayan ateş Borrelia türleri ve Borrelia miyamotoi dahil olmak üzere çeşitli Borrelia spiroketlerinin kültürü için yöntemleri açıklamaktadır. Bu türler titiz ve yavaş büyür, ancak kültürlenebilir.

Borrelia burgdorferi Sensu Lato Kompleksi ve Tekrarlayan Ateş Borrelia'dan Spiroketlerin Yetiştirme Yöntemleri

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

Borrelia, üç ana türü kapsayan bir spiroket bakteri cinsidir. Lyme Borreliosis grubu, Relapsing Fever grubu ve sürüngenlerde bulunan daha az iyi karakterize edilmiş grup. Birçok Borrelia türü patojeniktir.Bakteri kültürü, enfeksiyonun tespiti için altın standarttır. Bu hem araştırma hem de klinik çalışmalar için geçerlidir. Vücut sıvısından ve dokularından alınan bakteri kültürü, bakterilerin hem canlı hem de çoğaldığını doğrular.Bu protokol, Lyme Borreliosis spiroket grubunu, Relapsing Fever Borrelia ve Borrelia miyamotoi'yi başarılı bir şekilde kültürlemek ve korumak için gereken metodolojiyi ve tarifleri göstermektedir. Daha önce izole edilmiş türlerin ve suşların yanı sıra çevresel veya memeli kaynaklarından yeni izolatlar ve monoklonal izolatların kültürü için yöntemler sağlanmıştır. Prosedürü gösteren, doktora sonrası araştırmacı Marie-Line Faucillion ve Bergstrom Laboratuvarı'ndan teknisyen Ingela Nilsson, Lloyd Laboratuvarı'ndan araştırma görevlisi Anne Berthold ve Rudenko Laboratuvarı'ndan araştırma görevlisi Maryna Golovchenko olacak.Başlamak için, bir litre Barbara-Stoner-Kelly veya BSK-II ortamı hazırlamak için gereken reaktifleri edinin. BSA'yı suyu karıştırarak bir be

cultivation-methods-spirochetes-from-borrelia-burgdorferi-sensu-lato

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Lyme hastalığı araştırma çalışmaları, genellikle bir süreç genellikle birkaç hafta sürer patojen Borrelia burgdorferi ile enfekte kenelerin nesil gerektirir. Burada saat içinde yapılabilir mikroenjeksiyon tabanlı bir kene enfeksiyonu prosedürü göstermektedir. Ayrıca keneler içinde B. burgdorferi in situ lokalizasyonu için immünofloresan yöntemi göstermektedir.

Hızlı Aktarım ve Lyme Hastalığı Patojenler lokalizasyonu için işaretleyin Gut içinde Yöntemleri

Kaynak: Eggers, C. H. Lyme hastalığı spiroketi Borrelia burgdorferi'nin faj aracılı genetik manipülasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, bir antibiyotik direnç geni taşıyan uyuyan bakteriyofaj DNA'sı ile tasarlanmış genetiği değiştirilmiş bir Borrelia burgdorferi kültürünün hazırlanmasını göstermektedir. Antibiyotik seçimi ve inkübasyonunu takiben, kimyasal bir indükleyici DNA hasarını tetikleyerek direnç genini içeren yeni viryonların eksizyonuna, replikasyonuna ve montajına yol açar. İkinci...

Viral Partikül Üretimi için Borrelia burgdorferi Kültürlerinin Hazırlanması ve İndüksiyonu

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

Lyme hastalığı Kuzey Amerika'daki en sık bildirilen vektör kaynaklı bir hastalıktır. Etkeni, Borrelia burgdorferi keneler kene ile bulaşan bir spioket bakteridir. Hayvan modellerinde enfeksiyonun İletim ve saptama burada açıklandığı kene besleme, kullanılmasıyla optimize edilir.

Lyme Hastalığı Araştırma İletim ve Xenodiagnosis için Hayvanlar Keneler besleme

İç içe geçmiş PCR DNA Borrelia burgdorferiiçin hastalığının Lyme hastalığı araştırma ayıklar kene için uygulanan hassas, belirli ve basit bir tekniktir. İlk PCR deney gene özgü astar iç primerler kullanılarak bir sonraki tepki için şablonlar haline uzun amplicons oluşturmak için kullanılır.

İç içe geçmiş PCR kullanarak keneler Lyme hastalığı Sfilis, Borrelia Burgdorferi, algılama

İn vitro transkripsiyon testleri, Borreliella burgdorferi'deki transkripsiyonel düzenleme mekanizmalarını deşifre edebilir. Bu protokol, B. burgdorferi RNA polimerazını saflaştırma ve in vitro transkripsiyon reaksiyonlarını gerçekleştirme adımlarını açıklar. İn vitro transkripsiyon testlerini kullanan deneysel yaklaşımlar, aktif RNA polimerazın güvenilir saflaştırılmasını ve depolanmasını gerektirir.

Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transkripsiyon Tahlillerinin Temel Bileşenleri

Bakteriyofajın DNA'yı bakteri hücreleri arasında hareket ettirme yeteneği, onları bakteriyel konakçılarının genetik manipülasyonu için etkili araçlar haline getirir. Burada, Borrelia burgdorferi'nin bir bakteriyofajı olan φBB-1'i, Lyme hastalığı spiroketinin farklı suşları arasında heterolog DNA'yı dönüştürmek için indüklemek, iyileştirmek ve kullanmak için bir metodoloji sunulmaktadır.

Lyme Hastalığının Faj Aracılı Genetik Manipülasyonu Spiroket Borrelia burgdorferi

Avrupa ve Kuzey Amerika'da Lyme borreliosis'e neden olan farklı Borrelia türlerinin çoklu antijenlerine karşı ortaya çıkan IgG ve IgM için serum örneklerini aynı anda değerlendiren boncuk bazlı bir multipleks immünolojik test geliştirmek için üç kanallı bir çift raportör floresan akış analiz sistemi kullanıldı.

Çoğullanmış Serolojik Testte Farklı Antikor Sınıflarının Eş Zamanlı Tespiti

Bu makale, klinik araştırmalar için insanları larva Ixodes scapularis'e maruz bırakma metodolojisini sunmaktadır. Teknik nispeten basittir, araştırma gönüllüleri tarafından tolere edilebilir ve deneysel ihtiyaçlara göre değiştirilebilir. İnsan denekleri içeren bu tür araştırmalar, uygun düzenleyici makamlar tarafından onaylanan klinik çalışma protokolleri kapsamında yürütülmelidir.

İnsanların Larva Ixodes scapularis Kenelerine Deneysel Maruziyeti İçin Bir Model

Sinovyumda akut iltihap, bulaşıcı ve yapısal değişiklikleri değerlendirebilen insan ex vivo transwell sistemi geliştirdik.

Korunmuş fonksiyon ve mimariyle ex vivo insan sinovyal dokusu kullanılarak sinovitin klinik öncesi modeli

Öğrenin Borrelia burgdorferi ve Borrelia miyamotoi gibi spiroket bakterilerinin in vitro kültür yöntemlerini. Bu protokol, Lyme hastalığı ve tekrarlayan ateş patojenlerinin canlılığını doğrulamak için altın standart teknikleri sunar.

Borrelia burgdorferi Sensu Lato Kompleksi ve Tekrarlayan Ateş Borrelia'dan Spiroketlerin Yetiştirme Yöntemleri

Daha fazla video keşfet