Name: Hücre Dışı Trakea Greftleri için Düşük Doz Gama Radyasyonu Sterilizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Öğrenin, hücre dışı trakea greftleri için düşük doz gama radyasyonu sterilizasyon protokolünü. New Zealand beyaz tavşanlarından elde edilen trakeaların biyomekanik özelliklerini koruyarak etkili sterilizasyon sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu makale, 2018 İspanyol Göğüs Cerrahisi Derneği Ulusal Çok Merkezli Çalışmaya Hibe [Sayı 180101 Néstor J.Martínez-Hernández'e verildi] ve PI16-01315 [Manuel Mata-Roig'e verildi] tarafından Instituto de Salud Carlos III tarafından desteklendi. CIBERER, Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu'nun yardımıyla VI Ulusal Ar-Ge ve I Planı 2018-2011, Iniciativa Ingenio 2010, Consolider Programı, CIBER Eylemleri ve Instituto de Salud Carlos III tarafından finanse edilmektedir.

Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için 20170/63/EU sayılı Avrupa direktifine uyulmuş ve çalışma protokolü Valencia Üniversitesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (Yasa 86/609/EEC ve 214/1997 ve Kod 2018/VSC/PEA/0122 Tip 2 Valencia, İspanya).
1. Trakeal desellülarizasyon
NOT: Hücre sökümsüzleştirme yöntemi başka bir yerde bildirilmiştir20.
<ol><li>Ötenazi donör erkek yetişkin Yeni Zelanda beyaz tavşanları (Oryctolagus cuniculus), marjinal kulak damarından 200 mg / mL enjeksiyon kullanılarak, 133 mg / kg pentobarbital sodyum ile 3.5-4.1 kg ağırlığındadır.</li>
	<li>Aseptik koşulları sağlarken, merkezi uzunlamasına servikotomi yapın, servikal kasları diseke edin ve trakeaya yaklaşın. Organı çevresel ve boyuna olarak diseke edin. Son olarak, ilk halkanın altında ve karinanın hemen üstünde transekt yapın.</li>
	<li>Bir neşterle, trakeaları 2 cm'lik parçalara ayırın. Makasla, çevredeki bağ dokusunu ve iç mukoza tabakasınıçıkarın 6.</li>
	<li>Numuneleri% 2 sodyum dodesil sülfat (SDS),% 5 penisilin-streptomisin ve% 5 amfoterisin B içeren 12 mL fosfat tamponlu salin (PBS) çözeltisine daldırın.</li>
	<li>Trakeaları oda sıcaklığında 5 hafta boyunca 400 rpm'de manyetik bir karıştırıcı ile sürekli karıştırmaya maruz bırakın. Desellülarizasyon çözeltisini, trakeanın damıtılmış suya daldırılması yoluyla, 2 saatlik bir ozmotik şoktan sonra haftalık olarak değiştirin.</li>
	<li>-80 ° C'de bir dondurma kabında% 80 fetal sığır serumu (FBS) ve% 20 dimetil sülfoksit (DMSO) 12 mL'lik bir karışım kullanarak numuneleri kriyojenize edin.</li>
	<li>Trakealar kullanılacaksa (13-15 gün sonra), 37 ° C'de bir su banyosunda çözün ve çözülme tamamlandıktan sonra PBS'ye batırarak yıkayın.</li>
</ol>2. Sterilizasyon
<ol><li>Işınlama<ol><li>PBS ile doldurulmuş T25 kültür şişesine her biri 2 cm büyüklüğünde dört trakea parçasından oluşan partileri, toplam 30 mL hacme ulaşana kadar 20 mL'lik bir metakrilat içine yerleştirin. Hava-sıvı arayüzünde enerji difüzyonuna neden olabilecek kabarcıkların oluşmasını önlemeye dikkat edin.</li>
		<li>10 MV düzleştirici filtresiz ışınların nominal enerjisine sahip fotonlarla doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak ışınlama yapın. İzomerkezde dakikada 2.400 monitör ünitesi doz hızı uygulayın, trakeaları ışınlanacak 100 cm'lik bir kaynak-yüzey mesafesine, 10 cm x 10 cm'lik bir radyasyon alanı için 2,5 cm'lik bir alan derinliğine yerleştirin, böylece tüm kabı kaplayacak şekilde - 24 Gy / dak'lık bir doza karşılık gelir.</li>
		<li>Her dört parçalı parti ile dozları yükseltin; sterilizasyona ulaşılana kadar dört parça 0,5 kGy, dört ila 1 kGy, dört ila 2 kG, vb.</li>
	</ol></li>
	<li>Kültür<ol><li>Parçaları, antibiyotik veya antifungaller olmadan inaktive edilmiş% 10 FBS ile Dulbecco'nun modifiye Eagle's medium'unun (DMEM) 30 mL'sine yerleştirin.</li>
		<li>Onları 2 hafta boyunca 37 ° C'de ve% 5 CO2'de standart bir doku inkübatöründe kültürleyin ve her 24 saatte bir kontrol edin. NOT: Kontaminasyon parametreleri, kültür ortamının pH'ındaki değişiklikler ve buna bağlı olarak ortamın rengindeki ve bulanıklığındaki değişikliklerdir. Trakealar, hasta olmayan ve bu nedenle trakealarında anaerobik bakterilerden yoksun olması beklenen mikropsuz lagomorflardan toplandı.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Histolojik analiz
NOT: Hematoksilin ve eozin21, Masson'un trikromu ve orcein22 kullanarak parçaları lekeleyin.
<ol><li>DAPI boyama<ol><li>DAPI (4′,6-diamidino-2-fenilindol) kullanarak doku canlılığını belirleyin. Bu mavi-floresan leke, DNA dizilerindeki adenin ve timin bakımından zengin bölgelere güçlü bir şekilde bağlanır ve bu nedenle DNA'nın floresan mikroskobu ile görüntülenmesine izin verir.</li>
		<li>Doku numunelerini optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiğine gömün.</li>
		<li>Numuneleri bir kriyostat kullanarak kesin.</li>
		<li>OCT'yi çıkarmak için boyanacak numuneyi damıtılmış suda üç kez yıkayın. 30 nM DAPI çözeltisi içeren montaj ortamına yerleştirin.</li>
		<li>Floresan mikroskobu kullanarak floresanı görselleştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>DNA içerik analizi<ol><li>Bir neşter kullanarak yaklaşık 3 mm uzunluğundaki trakea segmentlerini kesin.</li>
		<li>Proteinaz K'da 2 saat inkübe edin (Malzeme Tablosu).</li>
		<li>Üreticinin talimatlarını izleyerek DNA'yı bir DNA ekstraksiyon kiti ile çıkarın.</li>
		<li>Spektrofotometri sayesinde, bir spektrofotometre kullanarak 260/280'de absorbansı ölçerek DNA konsantrasyonunu belirleyin.</li>
		<li>Bir biyoanalizör ile kılcal kromatografi kullanarak ekstrakte edilen DNA örneklerinin boyutunu ölçün.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Biyomekanik çalışma
NOT: Uzunlamasına ve enine kuvvetlere karşı trakeal direnç, eksenel çekme ve radyal sıkıştırma testleri ile ölçülür23.
<ol><li>Trakea ölçümü<ol><li>Bir Vernier kaliperi kullanarak trakea uzunluğunu, duvar kalınlığını ve dış çapı ölçün.</li>
		<li>Değişkenlerin her birinin üç rastgele ölçümünden ortalama değerleri hesaplayın.</li>
		<li>Radyal sıkıştırma testlerinde, plakanın numune ile temas ettiği noktayı tespit ederek anteroposterior çapı hesaplayın.</li>
		<li>Tüm testleri oda sıcaklığında gerçekleştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Çekme testleri<ol><li>100 N yük (0,1 N kuvvet çözünürlüğü, 0,001 mm konum ve 0,1 sn) ile donatılmış bir çekiş masaüstü üniversal test cihazı (UTM) deplasman kontrolünde çekme testleri gerçekleştirin. Test makinesi kuvvet ve konum sensörleri ile donatılmıştır ve üretici23 tarafından özel olarak tasarlanmış yazılıma sahip bir bilgisayara bağlanır.</li>
		<li>Verileri her 0,4 saniyede bir kaydedin ve bir elektronik tabloya aktarın.</li>
		<li>Dış çapı 1 cm ve duvar kalınlığı 1,5 mm olan saf tek katmanlı, toksik olmayan kristal polivinil klorür (PVC) içi boş tüplerden tavşan trakealarının ortalama kalibresine uyarlanmış çekme çeneleri oluşturun.</li>
		<li>Bölümler 3 cm uzunluğunda bölümlere ayrılır.</li>
		<li>Dikişlerden kaynaklanan sapmayı önlemek için termino-terminal sütür için, çenelerin kenarından 2 mm uzakta ve 2,5 mm'lik bir mesafe ile ayrılmış 12 önceden oluşturulmuş delik açın.</li>
		<li>PVC cam tüpleri, termino-terminal anastomoz ile tavşan trakeasına, alternatif önceden oluşturulmuş deliklerden (her 5 mm'de bir), trakeanın kenarından 2 mm uzakta ve 6-0 naylon monofilament sütürle sürekli bir sütür ile tutturun.</li>
		<li>Tüm parçaları 5,0 mm/dak deplasman hızında gerin.</li>
		<li>Maksimum gerilim (σ maksimum, N/mm2 cinsinden) ve gerinim (εmaksimum, birim olmadan) değişkenlerini, trakea hacmi birimi başına depolanan enerji (W/Vol, mJ/mm cinsinden) ve Young modülü (E, MPa cinsinden) ile birlikte kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Radyal basma testleri<ol><li>Kuvvet verileri (N), konum (mm) ve zaman (lar) elde etmek için 15 N yük hücresi (kuvvet çözünürlüğü 0,001 N, konum 0,001 mm ve zaman 0,1 s) ile donatılmış bir sıkıştırma masaüstü UTM'sinde radyal sıkıştırma testleri gerçekleştirin. Verileri kaydedin ve 0,5 s aralıklarla elektronik tabloya aktarın.</li>
		<li>Trakeaları membranöz alan alt plakaya dayanacak şekilde yerleştirin. Plaka kademeli olarak üst plakaya doğru 5 mm/dak sabit bir hızla yükselir.</li>
		<li>Trakeayı tamamen tıkamak için gereken numunenin uzunluk birimi başına her birimi (N / mm cinsinden f), sertliği (Mpa · mm'de R) ve yüzey alanı birimi başına enerjiyi (mJ /mm2'de W / S) hesaplayın.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Cerrahi teknik
NOT: Cerrahi teknik20 başka yerde yaygın olarak bildirilmiştir.
<ol><li>Her iki ucunda 3-4 mm'lik bir kenar boşluğu olan 14 Fr boyutunda (duvarları sıkıştırmadan serbestçe kaymasını sağlayan) steril bir intraluminal PVC stent yerleştirin.</li>
	<li>Stenti, ilk kıkırdağın kıkırdak boşluğundan tek bir 6-0 naylon monofilament dikişle sabitleyin.</li>
	<li>Tavşanları uyuşturmaya devam edin.<ol><li>Deneklere (3.65-4.05 kg erkek Yeni Zelanda beyaz tavşanları) kas içi analjeziklerle (35 mg / kg ketamin) yatıştırıcı, kas gevşetici ve analjezik (2.5 mg / kg ksilazin) ile ön ilaç verin.</li>
		<li>Kesi bölgesini ameliyat bölgesinden tıraş edin ve saçları çıkarmak için cerrahi bölgeyi temizleyin.</li>
		<li>Analjezikler artı antibiyotik profilaksisi uygulayın: 0.05 mg / kg kas içi buprenorfin ve 10 mg / kg enrofloksasin.</li>
		<li>Her tavşanın marjinal kulak damarına bir venöz kateter koyun.</li>
		<li>İntravenöz 10 mg/kg bolus propofol ile indüksiyon anestezisi.</li>
		<li>Üç uçlu elektrokardiyogram, nabız oksimetresi ve invaziv olmayan basınç ölçümü kullanarak hayvanın hayati belirtilerini izleyin. Her 30 dakikada bir, anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere fizyolojik serum uygulayın.</li>
		<li>Ayak parmağı çimdikleme yöntemini kullanarak anestezik düzlemi doğrulayın.</li>
		<li>Spontan ventilasyonu kaybetmeden minimum alveoler konsantrasyonun% 1.5 -% 2'sinde inhale izofluran ile anesteziyi sürdürün ve tavşana bir ısıtma yastığı ile termal destek sağlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Kesi bölgesini iyot bazlı bir ovma ile dairesel bir hareketle birkaç kez dezenfekte edin. Her zaman aseptik koşullar altında ve steril malzeme ile, uzunlamasına 3 cm'lik merkezi torasik insizyon yapın ve pektoral fasyadan ve kaslı bir bileşenden oluşan bilateral pediküllü flepleri toplayın.</li>
	<li>Trakeaları fleple birlikte dört tavşanda, her hemitoraksta bir tane olmak üzere sarın (böylece toplam sekiz trakea).</li>
	<li>Ameliyat tamamlandığında, izofluran uygulamasını keserek anesteziyi tersine çevirin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası dönem<ol><li>Hayvanları anesteziden tamamen iyileşene kadar ameliyathanede tutun. Tamamen iyileştiklerinde, onları diğer tavşanlarla birlikte çevrelerine geri getirin.</li>
		<li>Tavşanlara 5 gün boyunca her 24 saatte bir antibiyotik (0.5 mL / kg% 2.5 enrofloksasin) ve analjezikler (5 mg / mL meloksikam; 0.05 mL / kg metacam) uygulayın.</li>
		<li>İmplantları istediğiniz süre boyunca yerinde bırakın.</li>
		<li>Ötanaziden önce, tavşanlara kas içi analjezikler (35 mg / kg ketamin) ve yatıştırıcı, kas gevşetici ve analjezik (2.5 mg / kg ksilazin) ile ön ilaç verin. Daha sonra marjinal kulak damarından 200 mg / mL enjeksiyon kullanarak tavşanları 133 mg / kg pentobarbital sodyum ile ötenazi yapın ve trakeaları toplayın.</li>
		<li>Trakealarda biyomekanik ve histolojik testler yapın.</li>
	</ol></li>
</ol>6. İstatistiksel analiz
<ol><li>Tüm modelleri R yazılımı, Sürüm 3.5.3 R Core (R Foundation for Statistical Computing. 2019) üzerindeki Bayes yöntemiyle ayarlayın.</li>
	<li>Birden fazla doğrusal regresyon modeli kullanarak f ve R dışındaki etüt değişkenlerini analiz edin.</li>
	<li>f ve R değişkenleri için karışık doğrusal regresyon modelleri uygulayın. Bu modellerde, her trakeanın tedavisi ve durumu ile ilgili ilgi değişkenlerine ek olarak, tıkanıklık yüzdesini monotonik bir etki olarak ve trakea başına bağımsız bir terimi rastgele bir faktör olarak tanıtmaktadır.</li>
</ol>

<ol><li>Ch'ng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+the+%28Crico%29trachea+for+malignancy+in+the+virgin+and+irradiated+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive+%26+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of the (Crico)trachea for malignancy in the virgin and irradiated neck.</a> Journal of Plastic, Reconstructive & Aesthetic Surgery. 65 (12), 1645-1653 (2012).</li>
<li>Johnson, C. M., Guo, D. H., Ryals, S., Postma, G. N., Weinberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+feasibility+of+gamma+radiation+sterilization+for+decellularized+tracheal+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">The feasibility of gamma radiation sterilization for decellularized tracheal grafts.</a> Laryngoscope. 127 (8), 258-264 (2017).</li>
<li>de Donato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prosthesis+infection%3A+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Prosthesis infection: prevention and treatment.</a> The Journal of Cardiovascular Surgery. 55 (6), 779-792 (2014).</li>
<li>Vangsness, C. T., Dellamaggiora, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+safety+sterilization+and+tissue+banking+issues+for+soft+tissue+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Current safety sterilization and tissue banking issues for soft tissue allografts.</a> Clinics in Sports Medicine. 28 (2), 183-189 (2009).</li>
<li>Den Hondt, M., Vanaudenaerde, B. M., Delaere, P., Vranckx, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty+years+of+experience+with+the+rabbit+model%2C+a+versatile+model+for+tracheal+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Aesthetic+Research%22%5BJournal%5D)">Twenty years of experience with the rabbit model, a versatile model for tracheal transplantation research.</a> Plastic and Aesthetic Research. 3 (7), 223-230 (2016).</li>
<li>Hysi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+orthotopic+transplantation+of+short+tracheal+segments+without+immunosuppressive+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardiothoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Successful orthotopic transplantation of short tracheal segments without immunosuppressive therapy.</a> European Journal of Cardiothoracic Surgery. 47 (2), 54-61 (2015).</li>
<li>Wurtz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+reconstruction+with+a+composite+graft%3A+Fascial+flap-wrapped+allogenic+aorta+with+external+cartilage-ring+support%5BTitle%5D)+AND+%22Interactive+Cardiovascular+and+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tracheal reconstruction with a composite graft: Fascial flap-wrapped allogenic aorta with external cartilage-ring support.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 16 (1), 37-43 (2013).</li>
<li>White, A., Burns, D., Christensen, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+terminal+sterilization+using+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effective terminal sterilization using supercritical carbon dioxide.</a> Journal of Biotechnology. 123 (4), 504-515 (2006).</li>
<li>Qiu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+bacterial+spores+and+viruses+in+biological+material+using+supercritical+carbon+dioxide+with+sterilant%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+B%2C+Applied+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inactivation of bacterial spores and viruses in biological material using supercritical carbon dioxide with sterilant.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 91 (2), 572-578 (2009).</li>
<li>Lange, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pilot+study+of+a+novel+vacuum-assisted+method+for+decellularization+of+tracheae+for+clinical+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pilot study of a novel vacuum-assisted method for decellularization of tracheae for clinical tissue engineering applications.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 800-811 (2017).</li>
<li>Wedum, A. G., Hanel, E., Phillips, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraviolet+sterilization+in+microbiological+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Ultraviolet sterilization in microbiological laboratories.</a> Public Health Reports. 71 (4), 331-336 (1956).</li>
<li>Hennessy, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supercritical+carbon+dioxide-based+sterilization+of+decellularized+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22JACC.+Basic+to+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Supercritical carbon dioxide-based sterilization of decellularized heart valves.</a> JACC. Basic to Translational Science. 2 (1), 71-84 (2017).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Balestrini, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterilization+of+lung+matrices+by+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Sterilization of lung matrices by supercritical carbon dioxide.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 22 (3), 260-269 (2016).</li>
<li>AENOR. UNE-EN. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ISO+11737-1%3A2006.+Esterilizaci%C3%B3n+de+productos+sanitarios.+M%C3%A9todos+biol%C3%B3gicos.+Parte+1%3A+Determinaci%C3%B3n+de+la+poblaci%C3%B3n+de+microorganismos+en+los+productos%5BTitle%5D)+AND+%22AENOR.+UNE-EN%22%5BJournal%5D)">ISO 11737-1:2006. Esterilización de productos sanitarios. Métodos biológicos. Parte 1: Determinación de la población de microorganismos en los productos.</a> AENOR. UNE-EN. , Published online 2006 (2006).</li>
<li>Uriarte, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+acellular+mouse+lungs+after+sterilization+by+gamma+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of acellular mouse lungs after sterilization by gamma irradiation.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 40, 168-177 (2014).</li>
<li>Sun, W. Q., Leung, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorimetric+study+of+extracellular+tissue+matrix+degradation+and+instability+after+gamma+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Calorimetric study of extracellular tissue matrix degradation and instability after gamma irradiation.</a> Acta Biomaterialia. 4 (4), 817-826 (2008).</li>
<li>Nguyen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+the+radiation+sterilization+dose+improves+mechanical+and+biological+quality+while+retaining+sterility+assurance+levels+of+bone+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Reducing the radiation sterilization dose improves mechanical and biological quality while retaining sterility assurance levels of bone allografts.</a> Bone. 57 (1), 194-200 (2013).</li>
<li>Helder, M. R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+gamma+irradiation+of+decellularized+heart+valves+results+in+tissue+injury+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Low-dose gamma irradiation of decellularized heart valves results in tissue injury in vitro and in vivo.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 101 (2), 667-674 (2016).</li>
<li>Martínez-Hernández, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+tracheal+prelamination+implant%3A+A+proposed+bilateral+double+organ+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Decellularized tracheal prelamination implant: A proposed bilateral double organ technique.</a> Artificial Organs. 45 (12), 1491-1500 (2021).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>López Caballero, J., Peña, M., De Federico, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coloraciones+para+fibras+col%C3%A1genas+y+el%C3%A1sticas+del+tejido+conjuntivo.+Coloraciones+para+sustancia+amiloidea%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratorio+de+Anatom%C3%ADa+Patologica%22%5BJournal%5D)">Coloraciones para fibras colágenas y elásticas del tejido conjuntivo. Coloraciones para sustancia amiloidea.</a> Laboratorio de Anatomía Patologica. , McGraw-Hill. 175-195 (1993).</li>
<li>Martínez-Hernández, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardised+approach+to+the+biomechanical+evaluation+of+tracheal+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">A standardised approach to the biomechanical evaluation of tracheal grafts.</a> Biomolecules. 11 (10), 1461(2021).</li>
<li>Kajbafzadeh, A. M., Javan-Farazmand, N., Monajemzadeh, M., Baghayee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+the+optimal+decellularization+and+sterilization+protocol+for+preparing+a+tissue+scaffold+of+a+human-sized+liver+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determining the optimal decellularization and sterilization protocol for preparing a tissue scaffold of a human-sized liver tissue.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 19 (8), 642-651 (2013).</li>
<li>Wehmeyer, J. L., Natesan, S., Christy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+sterile+amniotic+membrane+tissue+graft+using+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a sterile amniotic membrane tissue graft using supercritical carbon dioxide.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 21 (7), 649-659 (2015).</li>
<li>Ross, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+stem+cells+seeded+into+decellularized+rat+kidney+scaffolds+endothelialize+and+remodel+basement+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Mouse stem cells seeded into decellularized rat kidney scaffolds endothelialize and remodel basement membranes.</a> Organogenesis. 8 (2), 49-55 (2012).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinde çıkar çatışması yoktur.

Var olan birkaç sterilizasyon stratejisi vardır. Süperkritik CO2, dokulara tamamen nüfuz eder, ortamı asitleştirir ve implantın basınçsızlaştırılması yoluyla basit eliminasyonla hücresel fosfolipid çift katmanını dekonstrüksiyona uğratır 8,14,25. Ultraviyole radyasyon da kullanılmıştır ve literatürde sadece birkaç rapor olmasına rağmen, kemirgen trakeasındaki etkinliği yayınlanmıştır10. Kullanı...

Bir implantın sterilizasyonu, yaşayabilirliği için temel bir gerekliliktir; Aslında başarılı olduğu kanıtlanmış protezler steril bölgelere (kan damarları, kalp, kemik vb.) implante edilen protezlerdir. 1. Trakeanın iki yüzeyi vardır: dış ortamla temas halinde olan, bu nedenle steril olmayan bir yüzey ve steril olan mediastene doğru bir yüzey. Bu nedenle, trakea çıkarıldığı andan itibaren steril bir organ değildir. Daha sonraki hücre desellülarizasyon işleminin maksimum steril koşullarda gerçekleştirilmesine rağmen, sterilizasyon adımı2 değildir. Yabancı maddenin kendi içine implantasyonu, ürettiği probakteriyel mikro çevre nedeniyle enfeksiyon riski taşır3ve materyal sterilize edilmiş olsa bile, donörden alıcıya% 0.014'e kadar hastalık bulaşma riski taşır4. Trakeanın doğru vaskülarizasyonunu sağlamak için, hemen hemen tüm deneysel nakil protokollerinde, önce steril bir alana (kas, fasya, omentum, deri altı, vb.) heterotopik implant 5,6,7 uygulanır; Bunun nedeni, steril olmayan bir elementin bu ortama implante edilmesinin, 3. alanın enfeksiyonuna yol açmasıdır.
Steril bir implant elde etmek için bir dizi olası strateji vardır. Süperkritik CO2kullanımı, terminal sterilizasyonu 8,9'u sağlamıştır. Ultraviyole radyasyon veya perasetik asit, etanol, oksijen peroksit ve elektrolize su gibi maddelerle tedavi gibi diğer yöntemler, sterilizasyonda, neredeyse her zaman dozajlarına bağlı olarak farklı başarı oranları elde etmişlerdir, ancak implantların biyomekanik özelliklerini etkiledikleri gösterilmiştir. Gerçekten de, etilen oksit gibi bazı maddeler, implante edilen matrisin yapısını önemli ölçüde değiştirebilir ve hatta istenmeyen immünojenik etkilere neden olabilir. Bu nedenle, bu stratejilerin birçoğu biyolojik modellere uygulanamaz 2,10,11,12,13.
En çok çalışılan ve kabul gören sterilizasyon stratejisi, insanlara implante edilen tıbbi cihazların sterilizasyonu için ISO 11737-1: 2006 standardı tarafından 25 kGy'lik bir gama radyasyon dozu ile oluşturulan stratejidir. Bununla birlikte, bu düzenleme sadece inert, biyolojik olmayan elementlerin sterilizasyonuna odaklanmaktadır14,15. Ek olarak, karsinomun radikal tedavisinde radyoterapi dozları, tıbbi cihazları sterilize etmek için kullanılanlardan üç kat daha düşüktür1. Bunu akılda tutarak, söz konusu dozun sadece mikrobiyotayı öldürmekle kalmayıp aynı zamanda implantın biyolojik yapısını tahrip edeceği ve radikal bir şekilde değiştireceği sonucuna varabiliriz. Ayrıca, 1.9 kGy kadar düşük dozlar kullanıldığında ve17 alınan radyasyon dozuyla doğru orantılı hasar olsa bile, potansiyel olarak sitotoksik olabilen ve iskele 13,14,15,16,17'nin enzimatik bozunmasını hızlandırabilen bozunma üzerine artık lipitler üretme olasılığı da vardır.
Bu nedenle, bu makalenin amacı, ışınlamanın neden olduğu minimum zararlı etkiyle steril bir implantın elde edilmesini sağlayan radyasyon dozunu tanımlamaya çalışmaktır 2,18,19. İzlediğimiz strateji, negatif bir kültür elde edene kadar bir dizi kilogray (0.5, 1, 2, 3 kGy, vb.) içinde farklı dozlarda desellülarize edilmiş ve ışınlanmış trakeaların ışınlanmasını içeriyordu. Sterilizasyonu doğrulamak için negatif kültürlere ulaşan dozlar için ek testler yapılmıştır. Sterilizasyon elde etmek için minimum doz belirlendikten sonra, ışınlamanın trakea üzerindeki yapısal ve biyomekanik etkisi kontrol edildi. Tüm metrikler kontrol yerli tavşan trakeası ile karşılaştırıldı. Yapının sterilizasyonu daha sonra trakeaları Yeni Zelanda beyaz tavşanlarına implante ederek in vivo olarak test edildi.

<table><tbody><tr><td>6-0 Naylon Monofilament Sütür&nbsp;</td><td>Tek yumuşak. Covidien; Mansfield, MA, ABD</td><td>SN-5698G</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B% 5</td> <td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA ABD</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Biyoanalizör</td><td>Agilent, Santa Clara, CA, ABD</td><td>G2939BA</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Buprex. Reckitt Benckiser Sağlık Hizmetleri; Gövde, Reino Unido</td><td>N02AE01</td><td></td></tr><tr><td>Sıkıştırma masaüstü UTM</td><td>Microtest, Madrid, İspanya</td><td>EM1/10/FR</td><td></td></tr><tr><td>Cryostate</td><td>Leyca CM3059, Leyca Biosystems, Wetzlar, Alemania</td><td>CM3059</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma-Aldrich; MO, ABD</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel; Waltham, MA, ABD</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>DNA ekstraksiyon kiti</td><td>DNeasy ekstraksiyon kiti Quiagen, Hilden, Almanya</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>Enrofloksasin, %2.5</td> <td>Boehringer Ingelheim, Ingelheim Rhein, Almanya</td><td>0035-0002</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>GE Healthcare Hyclone; Madrid, İspanya</td><td>SH20898.03IR</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Leyca DM2500 (Leica, Wetzlar, Almanya)</td> <td>DM2500??</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma Kabı&nbsp;</td><td>Bay Frosty. Termo Balıkçı; Madrid, İspanya</td><td>&nbsp; 5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>İzofloran</td><td>İzoflo; Proyma Ganadera; Ciudad Real, İspanya&nbsp;</td><td>8.43603E+12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Imalgene. Merial; Toulouse, Francia</td><td>BOE127823</td><td></td></tr><tr><td>Lineer hızlandırıcı&nbsp;</td><td>"Gerçek Işın". Varian, Palo Alto, California, ABD</td><td>H191001</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik karıştırıcı</td><td>Orbital Çalkalayıcı PSU-10i. Biyosan; Riga, Letonia</td><td>BS-010144-AAN</td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam 5 mg / ml</td><td>Boehringer Ingelheim, Ingelheim Rhein, Almanya</td><td>6283-MV</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin% 5</td> <td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA ABD</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sodyum</td><td>Dolethal. Vetokinol; Madrid, Espa&ntilde; </td><td>3.60587E+12</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td> <td>Sigma-Aldrich; MO, ABD</td><td>P2272</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Propofol Lipuro. B. Braun Melsungen AG; Melsungen, Alemania</td><td>G 151030</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, Massachussetts, ABD</td><td>S3020</td><td></td></tr><tr><td>PVC içi boş borular</td><td>Cristallo Extra; FITT, Sandrigo, İtalya</td><td>hhdddyyZ</td><td></td></tr><tr><td>PVC stent&nbsp;</td><td>ArgyleTM Medtronic; İstanbul, Türkiye</td><td>019 5305 1</td><td></td></tr><tr><td>R yazılımı, Sürüm 3.5.3 R Core</td><td>R İstatistiksel Hesaplama Vakfı</td><td>R 3.5.3</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum dodesil sülfat (SDS)</td><td>Sigma-Aldrich; MO, ABD</td><td>8,17,034</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>Nanodrop, Yaşam Teknolojileri; İzojen Yaşam Bilimi. Utrech, Hollanda</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik Tablo</td><td>Mac için Microsoft Excel, Sürüm 16.23, Redmond, WA, ABD</td><td>2864993241</td><td></td></tr><tr><td>Çekiş Üniversal Test Cihazı&nbsp;</td><td>Test Makineleri, Veenendaal, Hollanda</td><td>84-01</td><td></td></tr><tr><td>UTM Yazılım</td><td>TestWorks 4, MTS Systems Corporation, Eden Prairie, MN, ABD&nbsp;</td><td>100-093-627 F</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Montaj Ortamı&nbsp;</td><td>Vektör Laboratuvarları, Burlingame; CA; ABD</td><td>H-1000-10</td><td></td></tr><tr><td>Ksilosin</td><td>Ksilagesik. Kalient; Barselona, Espa&ntilde; Bir</td><td>20102-003</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre dışı trakea greftleri için düşük doz gama radyasyonu sterilizasyonu

Low-Dose Gamma Radiation Sterilization for Decellularized Tracheal Grafts

Bir naklin doğru şekilde gelişmesini sağlamanın ana kilit yönlerinden biri, ortamın sterilitesidir. Desellülarize trakea transplantasyonu, başlangıçta çevre ile temas halinde olan ve böylece başlangıçtan itibaren steril olmayan bir organın implante edilmesini içerir. Desellülarizasyon protokolü (deterjan sunumu [% 2 sodyum dodesil sülfat], sürekli karıştırma ve ozmotik şoklar yoluyla) aseptik önlemlere uygun olarak gerçekleştirilirken, sterilizasyon sağlamaz. Bu nedenle, ana zorluklardan biri, in vivo implantasyondan önce sterilitenin sağlanmasıdır. İnorganik malzemeler için belirlenmiş gama radyasyonu sterilizasyon protokolleri olmasına rağmen, organik malzemeler için böyle bir önlem yoktur. Ek olarak, inorganik malzemeler için yürürlükte olan protokoller organik malzemelere uygulanamaz, çünkü belirlenen radyasyon dozu (25 kGy) implantı tamamen tahrip eder. Bu makale, desellülarize bir tavşan trakeasında artmış bir radyasyon dozunun etkisini incelemektedir. Doz aralığını (kGy) koruduk ve sterilizasyonun sağlandığı minimum dozu bulana kadar yükseltilmiş dozları test ettik. Dozu belirledikten sonra, hem histolojik hem de biyomekanik olarak organ üzerindeki etkilerini inceledik. 0.5 kGy'nin kısırlığa ulaşmamasına rağmen, hem 1 kGy hem de 2 kGy'lik dozların, 1 kGy ile sterilizasyon elde etmek için gerekli minimum doz olduğunu belirledik. Mikroskobik çalışmalar, sterilize edilmemiş organlara kıyasla ilgili bir değişiklik göstermedi. Eksenel biyomekanik özellikler hiç değişmedi ve organın radyal olarak tolere edebileceği birim uzunluk başına kuvvette sadece hafif bir azalma gözlendi. Bu nedenle, 1 kGy'nin, hücre dışı hale getirilmiş tavşan trakeasının organ üzerinde minimum düzeyde bir etkiye sahip olarak tam sterilizasyonunu sağladığı sonucuna varabiliriz.

Hücre Giderimciliği DAPI boyaması, DNA'nın yokluğunu gösterir ve trakeaların hiçbirinde elektroforez ile 50 ng'den yüksek DNA değerleri tespit edilmemiştir, tüm fragmanlar 200 bp20'den küçüktür.
Mikrobiyal kültür 0.5 kGy'ye maruz bırakılan sekiz parçadan ikisi, 1 haftadan kısa sürede renk değişikliği gösterdi. 1 kGy ve 2 kGy'de ışınlanan parçaların hiçbirinde renk değişikliği görülmedi (Şekil 1).
...

Trakea doku nakli için sterilizasyonun sağlanması şarttır. Burada, organlar tarafından tamamen tolere edilen düşük doz gama ışınlaması kullanan bir sterilizasyon protokolü sunuyoruz.

Hücre Dışı Trakea Greftleri için Düşük Doz Gama Radyasyonu Sterilizasyonu

One of the main key aspects in ensuring that a transplant evolves correctly is the sterility of the medium. Decellularized tracheal transplantation ...

Bu protokol, steril olmayan herhangi bir organ için özelliklerini etkilemeden eksiksiz bir sterilizasyon işlemi sağlar. Bu tekniğin temel amacı, özelliklerini etkilemeden bir organı sterilize etme olasılığını içerir. Bu teknik trakealara odaklanmış olsa da, düşük gama radyasyon dozlarının biyolojik materyalleri etkili bir şekilde sterilize edebileceğini göstermiştir.Bir birey, farklı organ tipleri için en düşük etkili dozu tanımlayarak sorunla karşı karşıya kalabilir. Daha sonra, daha düşük bir dozajla başlamanız ve sterilizasyon sağlanana kadar bunları arttırmanız önerilir. Ötanazi yapılmış Yeni Zelanda beyaz tavşanlarından veya Oryctolagus cuniculus'tan disseke edilen trakeayı iki santimetrelik parçalara ayırarak başlayın.Makasla, çevredeki bağ dokusunu ve iç mukozal tabakayı çıkarın. Örnekleri SDS,% 5 penisilin streptomisin ve% 5 amfoterisin içeren 12 mililitre PBS çözeltisine batırın. Trakeaları oda sıcaklığında beş hafta boyunca 400 RPM'de manyetik bir karıştırıcı ile sürekli karıştırmaya maruz bırakın.Haftalık, ortamı değiştirmeden önce trakeaları damıtılmış suya batırarak iki saatlik ozmotik şok verin. Beş hafta sonra, trakea örneklerini eksi 80 santigrat derecede bir dondurma kabında% 80 FBS ve% 20 DMSO'nun 12 mililitrelik bir karışımını kullanarak kriyojenize edin. 13 ila 15 gün sonra, trakeaları 37 santigrat derecede bir su banyosunda çözün.Ardından, PBS ile yıkayın. Numuneyi ışınlamak için, kabarcık oluşumunu önlerken, metakrilat T25 kültür şişelerinde 20 mililitre PBS'ye dört trakeal parça yerleştirin. Işınlamayı, filtresiz ışınları düzleştiren 10 megavoltluk nominal enerjili fotonlarla doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak gerçekleştirin.Dakikada 2.400 monitör ünitesi doz hızı uygulayın ve makalede açıklandığı gibi diğer parametreleri ayarlayın. Bir kez yapıldıktan sonra, numuneyi 30 mililitre DMEM içinde kültürleyin, antibiyotik veya antifungaller olmadan% 10 inaktive FBS ile desteklenmiştir. Kültürü iki hafta boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte standart bir doku inkübatöründe inkübe edin ve orta pH, renk ve bulanıklık değişiklikleri gibi kontaminasyon parametreleri için her 24 saatte bir kontrol edin.Kuvvet ve konum sensörleri ve özel olarak tasarlanmış yazılıma sahip bir bilgisayar ile donatılmış bir çekiş masaüstü üniversal test makinesinde veya UTM yer değiştirme kontrolünde çekme testleri gerçekleştirin. Verileri her 0,4 saniyede bir kaydedin ve bir e-tabloya aktarın. Tavşan trakealarının ortalama kalibresine uyarlanmış çekme çenelerini, saf tek katmanlı toksik olmayan kristal polivinil klorürden veya PVC içi boş tüplerden inşa edin.Bölüm, üç santimetre uzunluğundaki bölümlere ayırır. Termino-terminal sütürünü önyargısız olarak gerçekleştirmek için, çenelerin kenarından iki milimetre uzakta, 2,5 milimetre ile ayrılmış 12 önceden oluşturulmuş delik açın. Daha sonra, PVC cam tüpleri, trakeanın kenarından iki milimetre uzakta bulunan alternatif olarak gerçekleştirilen beş milimetrelik deliklerden sürekli 6-0 naylon monofilament sütür ile termino-terminal anastomoz ile tavşan trakeasına tutturun.Tüm parçaları dakikada 5,0 milimetre yer değiştirme hızında gerin. Ardından, maksimum gerilim ve gerinim, trakea hacmi birimi başına depolanan enerji ve Young modülü gibi değişkenleri kaydedin. Kuvvet verilerini, konumu ve zamanı elde etmek için 15 newtonluk bir yük hücresiyle donatılmış bir sıkıştırma masaüstü UTM'sinde radyal sıkıştırma testleri gerçekleştirin.Verileri kaydedin ve 0,5 saniyelik aralıklarla elektronik tablolara aktarın. Trakeaları, plakanın kademeli olarak üst plakaya doğru dakikada beş milimetrelik sabit bir hızda yükselmesinden önce alt plakaya dayanan membranöz alan ile yerleştirin. Numunenin uzunluk birimi başına her değişkeni, sertliği ve trakeayı tamamen tıkamak için gereken yüzey alanının birimi başına enerjiyi hesaplayın.Her iki ucunda üç ila dört milimetrelik bir kenar boşluğu sağlayan 14 boyutunda steril bir intraluminal PVC stent yerleştirin. Stenti, ilk kıkırdağın kıkırdak boşluğundan tek bir 6-0 naylon monofilament dikişle sabitleyin. Aseptik koşullar altında ve steril malzeme ile, uzunlamasına üç santimetrelik merkezi torasik insizyon yapın ve pektoral fasyadan ve kaslı bir bileşenden oluşan bilateral pediküllü flepleri toplayın.Trakeaları fleple dört tavşana, her hemathoraksta bir trakeaya sarın. Ameliyat tamamlandıktan sonra, izofluran uygulamasını keserek anesteziyi tersine çevirin. 0.5 kilogray radyasyona maruz kalan sekiz parçadan ikisi, bir hafta içinde medya renginde bir değişiklik sergiledi.Bununla birlikte, bir veya iki kilogride ışınlanan parçaların hiçbiri medya renginde herhangi bir değişiklik göstermedi. Kontrol ile karşılaştırıldığında, farklı radyasyon dozlarında ışınlanan analiz edilen örneklerde kollajen veya elastik lif dağılım paterni değişiklikleri tespit edilmemiştir. Işınlanmış trakealar üzerindeki çekme testinde elde edilen veriler burada gösterilmiştir.Hücresizleştirilmiş ve ışınlanmış trakealar için stres gerinim eğrileri, sterilize edilmemiş trakealara kıyasla hiçbir değişiklik göstermedi. Doğal trakea veya kontroller üzerinde yapılan kompresyon testleri ve desellülarize, kriyoprezerve ve ışınlanmış trakealar gösterilmiştir. İlgili grafikler, ışınlamanın doğal trakeaya kıyasla oklüzyon yüzdesini değiştirmediğini göstermiştir.Gama ışınlaması, radyo-biyomekanik özelliklerde ve birim uzunluk başına değişken kuvvette klinik olarak minimal ancak istatistiksel olarak anlamlı bir azalmaya neden olmuştur. Histolojik inceleme, doğal trakeanın perikondriyumu şeklinde yüksek oranda organize bağ dokusunu gösterdi. Kıkırdak sağlamdı ve nekroz belirtisi göstermedi.Radyolojik elemanı bir canlıya implante ederken, implantın sterilitesi ve steril süreç, enfeksiyonu ve doku reddini önlemek için çok önemlidir. Doku üretildikten sonra implante edilecek çok çeşitli organlar vardır ve steril olmaları gerekir. Bu işlemi takiben, organın temel özelliklerini etkilemeden tam bir sterilizasyon elde edebilirsiniz.

low-dose-gamma-radiation-sterilization-for-decellularized-tracheal

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Kök hücre tanımlama önemli atılımlar sürekli yapılmaktadır. Ancak bu keşifler çevirmek için, hücresel teslimat için yeni yöntemler icat olmalıdır. İşte ben, hava yolları, kök hücre nakli için akciğerlere için güvenli bir rota verdiğiniz rapor.

Trakeotomi: Akciğer Kök Hücre Nakli Bir Yöntem

Bu videoda, deterjanların damar sistemi boyunca antegrad perfüzyonu uygulanarak hücreden arındırılmış hücre dışı matris veya ECM iskeleleri üretme yöntemi gösterilmektedir. Yapısal ECM iskeleleri daha sonra kardiyopulmoner hastalıkla ilişkili ECM yeniden modellemesini analiz etmek için kullanılabilir.

Kardiyopulmoner Kompleks Decellularizasyon: Murin Modelinden Kalp ve Akciğerleri Hücreden Arındırma Tekniği

Makalede, sıçan bağırsaktan bir hücresel olmayan matrisinin üretimi için bir yöntem anlatılmaktadır. Bağırsak iskelelerinin türetme hücre biyolojisi ve uyuşturucu testi kök, doku mühendisliği gelecekteki uygulamalar için önemlidir.

Doğal Aselüler Bağırsak Matrix&#39;in üretimi için bir Decellularization Metodoloji

Tüm organ hücresizleştirme, rejeneratif tıp için kullanılabilecek doğal biyolojik iskeleler üretir. Tüm akciğerlerin hücrelerden arındırıldığı ve daha sonra vasküler dolaşımı ve sıvı ortam ventilasyonunu kolaylaştıran bir biyoreaktörde yetişkin kök hücreler ve endotel hücreleri ile tohumlandığı insan dışı bir primat akciğer rejenerasyonu modelinin tanımı sunulmaktadır.

Özel Bir Büyük Organ Biyoreaktörü Kullanılarak İnsan Dışı Primat Akciğerinin Hücreden Arındırılması ve Yeniden Hücreselleştirilmesi

Bu protokol verimli hava yolu epitel hücreleri olgun fare embriyonik kök hücre kaynaklı kesin endoderm yönlendirir. Bu farklılaşma tekniği tanımlanmış bir serum içermeyen kültür ortamında, akciğer soy özellikleri doğrudan 3 boyutlu hücresizleştirilmiş akciğer iskeleleri kullanır.

Decellularized Akciğer Yapı iskeleleri kullanarak ESC türetilmiş Fare Havayolu Epitel Hücreleri Üretimi

Greft stenoz mühendislik doku hava yolu değiştirme kritik bir engel teşkil etmektedir. Stenoz temel hücresel mekanizmaları araştırmak için bir fare modeli doku Mühendisliği trakeal değiştirme numaralı seribaşı kemik iliği mononükleer hücreler (BM-MNC) kullanmaktadır. Burada, iskele imalatı, BM-MNC yalıtım, greft tohum ve implantasyon dahil olmak üzere bizim Protokolü ayrıntılı.

Tohum ve bir biyosentetik doku Mühendisliği trakeal greft bir fare modeli implantasyonu

Laringotracheal stenoz, trakeal hava yolunu kritik derecede daraltan ve etkili tıbbi tedavilerden yoksun patolojik skar birikiminden kaynaklanır. PlLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve %30 polikaprolakon) stent kullanılarak lokal ilaç dağıtım sistemi olarak, trakeada skar proliferünü azaltmaya yönelik potansiyel tedaviler incelenebilir.

Laringotracheal Stenozlu Farelerde Biyouyumlu İlaç Eluting Trakeal Stent Tasarımı

Bu protokol, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak bir iskele geliştirmek için bir yöntem sunar. Protokol, biyoyararlanıcılığı doğrulamak için hücreden arındırma ve yeniden hücreleştirme süreçlerini içerir. Desellülerizasyon Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Protokol, endojen epitelin sıçan trakeasından seçici olarak çıkarılmasına ve lümen yüzeyindeki eksojen hücrelerin homojen dağılımına izin veren, ardından hücre dokusu yapısının uzun süreli in vitro kültürüne izin veren görüntüleme özellikli bir biyoreaktörü tanımlar.

Biyomühendislik hava yolu dokusu üretmek için görüntüleme kılavuzlu biyoreaktör

Murin intrapulmoner trakeal transplantasyon (IPTT) modeli, akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığını (OAD) incelemek için değerlidir. Allotransplantasyon sonrası hava yolu obliterasyonunda akciğere özgü immünolojik ve anjiyojenik davranış hakkında yüksek tekrarlanabilirlik ile bilgi sunar. Burada, IPTT prosedürünü ve beklenen sonuçlarını açıklıyoruz.

Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model

Bu makale, hücreden arındırma ve yeniden hücreselleştirme yöntemleri kullanılarak biyomühendislik ürünü fare akciğerlerinin nasıl oluşturulacağını açıklamaktadır. Ayrıca sonraki ortotopik akciğer naklini de detaylandırır.

Hücreden Arındırılmış Fare Akciğerleri ve Primer İnsan Endotel Hücreleri Kullanılarak Biyomühendislik Ürünü Akciğerin Transplantasyonu

Öğrenin, hücre dışı trakea greftleri için düşük doz gama radyasyonu sterilizasyon protokolünü. New Zealand beyaz tavşanlarından elde edilen trakeaların biyomekanik özelliklerini koruyarak etkili sterilizasyon sağlar.

Hücre Dışı Trakea Greftleri için Düşük Doz Gama Radyasyonu Sterilizasyonu

Daha fazla video keşfet