Hücre Dışı Trakea Greftleri için Düşük Doz Gama Radyasyonu Sterilizasyonu

Bu protokol, steril olmayan herhangi bir organ için özelliklerini etkilemeden eksiksiz bir sterilizasyon işlemi sağlar. Bu tekniğin temel amacı, özelliklerini etkilemeden bir organı sterilize etme olasılığını içerir. Bu teknik trakealara odaklanmış olsa da, düşük gama radyasyon dozlarının biyolojik materyalleri etkili bir şekilde sterilize edebileceğini göstermiştir.

Bir birey, farklı organ tipleri için en düşük etkili dozu tanımlayarak sorunla karşı karşıya kalabilir. Daha sonra, daha düşük bir dozajla başlamanız ve sterilizasyon sağlanana kadar bunları arttırmanız önerilir. Ötanazi yapılmış Yeni Zelanda beyaz tavşanlarından veya Oryctolagus cuniculus'tan disseke edilen trakeayı iki santimetrelik parçalara ayırarak başlayın.

Makasla, çevredeki bağ dokusunu ve iç mukozal tabakayı çıkarın. Örnekleri SDS,% 5 penisilin streptomisin ve% 5 amfoterisin içeren 12 mililitre PBS çözeltisine batırın. Trakeaları oda sıcaklığında beş hafta boyunca 400 RPM'de manyetik bir karıştırıcı ile sürekli karıştırmaya maruz bırakın.

Haftalık, ortamı değiştirmeden önce trakeaları damıtılmış suya batırarak iki saatlik ozmotik şok verin. Beş hafta sonra, trakea örneklerini eksi 80 santigrat derecede bir dondurma kabında% 80 FBS ve% 20 DMSO'nun 12 mililitrelik bir karışımını kullanarak kriyojenize edin. 13 ila 15 gün sonra, trakeaları 37 santigrat derecede bir su banyosunda çözün.

Ardından, PBS ile yıkayın. Numuneyi ışınlamak için, kabarcık oluşumunu önlerken, metakrilat T25 kültür şişelerinde 20 mililitre PBS'ye dört trakeal parça yerleştirin. Işınlamayı, filtresiz ışınları düzleştiren 10 megavoltluk nominal enerjili fotonlarla doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak gerçekleştirin.

Dakikada 2.400 monitör ünitesi doz hızı uygulayın ve makalede açıklandığı gibi diğer parametreleri ayarlayın. Bir kez yapıldıktan sonra, numuneyi 30 mililitre DMEM içinde kültürleyin, antibiyotik veya antifungaller olmadan% 10 inaktive FBS ile desteklenmiştir. Kültürü iki hafta boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte standart bir doku inkübatöründe inkübe edin ve orta pH, renk ve bulanıklık değişiklikleri gibi kontaminasyon parametreleri için her 24 saatte bir kontrol edin.

Kuvvet ve konum sensörleri ve özel olarak tasarlanmış yazılıma sahip bir bilgisayar ile donatılmış bir çekiş masaüstü üniversal test makinesinde veya UTM yer değiştirme kontrolünde çekme testleri gerçekleştirin. Verileri her 0,4 saniyede bir kaydedin ve bir e-tabloya aktarın. Tavşan trakealarının ortalama kalibresine uyarlanmış çekme çenelerini, saf tek katmanlı toksik olmayan kristal polivinil klorürden veya PVC içi boş tüplerden inşa edin.

Bölüm, üç santimetre uzunluğundaki bölümlere ayırır. Termino-terminal sütürünü önyargısız olarak gerçekleştirmek için, çenelerin kenarından iki milimetre uzakta, 2,5 milimetre ile ayrılmış 12 önceden oluşturulmuş delik açın. Daha sonra, PVC cam tüpleri, trakeanın kenarından iki milimetre uzakta bulunan alternatif olarak gerçekleştirilen beş milimetrelik deliklerden sürekli 6-0 naylon monofilament sütür ile termino-terminal anastomoz ile tavşan trakeasına tutturun.

Tüm parçaları dakikada 5,0 milimetre yer değiştirme hızında gerin. Ardından, maksimum gerilim ve gerinim, trakea hacmi birimi başına depolanan enerji ve Young modülü gibi değişkenleri kaydedin. Kuvvet verilerini, konumu ve zamanı elde etmek için 15 newtonluk bir yük hücresiyle donatılmış bir sıkıştırma masaüstü UTM'sinde radyal sıkıştırma testleri gerçekleştirin.

Verileri kaydedin ve 0,5 saniyelik aralıklarla elektronik tablolara aktarın. Trakeaları, plakanın kademeli olarak üst plakaya doğru dakikada beş milimetrelik sabit bir hızda yükselmesinden önce alt plakaya dayanan membranöz alan ile yerleştirin. Numunenin uzunluk birimi başına her değişkeni, sertliği ve trakeayı tamamen tıkamak için gereken yüzey alanının birimi başına enerjiyi hesaplayın.

Her iki ucunda üç ila dört milimetrelik bir kenar boşluğu sağlayan 14 boyutunda steril bir intraluminal PVC stent yerleştirin. Stenti, ilk kıkırdağın kıkırdak boşluğundan tek bir 6-0 naylon monofilament dikişle sabitleyin. Aseptik koşullar altında ve steril malzeme ile, uzunlamasına üç santimetrelik merkezi torasik insizyon yapın ve pektoral fasyadan ve kaslı bir bileşenden oluşan bilateral pediküllü flepleri toplayın.

Trakeaları fleple dört tavşana, her hemathoraksta bir trakeaya sarın. Ameliyat tamamlandıktan sonra, izofluran uygulamasını keserek anesteziyi tersine çevirin. 0.5 kilogray radyasyona maruz kalan sekiz parçadan ikisi, bir hafta içinde medya renginde bir değişiklik sergiledi.

Bununla birlikte, bir veya iki kilogride ışınlanan parçaların hiçbiri medya renginde herhangi bir değişiklik göstermedi. Kontrol ile karşılaştırıldığında, farklı radyasyon dozlarında ışınlanan analiz edilen örneklerde kollajen veya elastik lif dağılım paterni değişiklikleri tespit edilmemiştir. Işınlanmış trakealar üzerindeki çekme testinde elde edilen veriler burada gösterilmiştir.

Hücresizleştirilmiş ve ışınlanmış trakealar için stres gerinim eğrileri, sterilize edilmemiş trakealara kıyasla hiçbir değişiklik göstermedi. Doğal trakea veya kontroller üzerinde yapılan kompresyon testleri ve desellülarize, kriyoprezerve ve ışınlanmış trakealar gösterilmiştir. İlgili grafikler, ışınlamanın doğal trakeaya kıyasla oklüzyon yüzdesini değiştirmediğini göstermiştir.

Gama ışınlaması, radyo-biyomekanik özelliklerde ve birim uzunluk başına değişken kuvvette klinik olarak minimal ancak istatistiksel olarak anlamlı bir azalmaya neden olmuştur. Histolojik inceleme, doğal trakeanın perikondriyumu şeklinde yüksek oranda organize bağ dokusunu gösterdi. Kıkırdak sağlamdı ve nekroz belirtisi göstermedi.

Radyolojik elemanı bir canlıya implante ederken, implantın sterilitesi ve steril süreç, enfeksiyonu ve doku reddini önlemek için çok önemlidir. Doku üretildikten sonra implante edilecek çok çeşitli organlar vardır ve steril olmaları gerekir. Bu işlemi takiben, organın temel özelliklerini etkilemeden tam bir sterilizasyon elde edebilirsiniz.